雷帕霉素逆转急性淋巴细胞白血病CEM-C1细胞对糖皮质激素耐药的研究

目的探讨雷帕霉素是否可以逆转地塞米松(DEX)耐药的急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株CEM-C1细胞的GC耐药性。方法以儿童T-ALL GC耐药株CEM-C1和GC敏感株CEM-C7为研究对象,MTT法检测不同浓度(1 000 ng/ml、100 ng/ml、10 ng/ml、1 ng/ml和0.1 ng/ml)雷帕霉素及其联合1μmol/L地塞米松(DEX)作用后对细胞增殖的影响;细胞离心甩片瑞氏染色法观察细胞形态学变化;Annexin V/PI染色法检测对细胞凋亡的影响;PI染色法检测细胞周期改变。结果①不同浓度雷帕霉素作用于CEM-C1和CEM-C7细胞,对细胞生长的抑制作用均呈时间和浓度依赖性,联合应用1μmol/L DEX后,这一生长抑制作用显著增强,24 h IC50约为100 ng/ml。②以终浓度100 ng/ml雷帕霉素作用于CEM-C1和CEM-C7细胞18、24及48 h,细胞形态学与对照相比均无明显变化;Annexin V-PI双染流式细胞术检测均未见明显凋亡;细胞周期测定发现两种细胞均阻滞于G1期,S期细胞比例均明显降低。③以终浓度100 ng/ml雷帕霉素联合1μmol/L DEX作用于CEM-C1细胞后,瑞氏染色发现CEM-C1细胞于24 h出现细胞核改变,48 h出现明显凋亡;Annexin V/PI双染细胞凋亡检测显示细胞凋亡率较单用雷帕霉素及DEX时显著增加,18 h时早期凋亡细胞开始增多,24 h时最为明显;细胞周期测定显示S期细胞比率较单用雷帕霉素时显著降低,而G1期细胞显著增多。结论雷帕霉素能够逆转CEM-C1细胞对GC的耐药性,其机制有待进一步深入研究。     

雷帕霉素逆转T-ALL Jurkat细胞对糖皮质激素耐药(英文)

目的探讨雷帕霉素能否有效逆转T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞对糖皮质激素(GC)的耐药。方法用10 nmol/L雷帕霉素(Rap组)、1μmol/L地塞米松(Dex组)、10 nmol/L雷帕霉素联合1μmol/L地塞米松(Rap+Dex组)和0.05%DMSO和0.01%乙醇(对照组)分别处理Jurkat细胞。MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot法分析mTOR及细胞周期、凋亡相关蛋白表达情况。结果10 nmol/L雷帕霉素能有效抑制mTOR信号通路,逆转Jurkat细胞对GC耐药。雷帕霉素和地塞米松协同作用可有效上调细胞周期抑制蛋白p21和p27的表达,并协同下调细胞周期素D1的表达,从而阻抑细胞在G1期。雷帕霉素协同地塞米松,通过上调Bim表达,活化caspase-3,促进Jurkat细胞凋亡。结论雷帕霉素可有效逆转T-ALL Jurkat细胞对GC耐药。包含雷帕霉素和地塞米松的化疗方案有望成为治疗耐药T-ALL的有效方案。     

RNA干扰对人神经母细胞瘤VEGF-A表达的抑制作用

目的 构建VEGF-A的短发夹RNA真核表达载体,并通过其介导的RNA干扰抑制人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y VEGF-A的表达.方法 根据VEGF-A的cDNA序列合成两对寡核苷酸片段,退火后分别插入真核表达载体组成重组质粒psc001、psc002,对重组质粒进行PCR、测序鉴定验证并经Western Blot筛选,然后将筛选所得的质粒转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y.转染48h后行Annexin V和PI双重标记流式细胞仪检测转染细胞凋亡情况,ELISA检测VEGF-A蛋白的表达水平.结果 PCR和测序证实寡核苷酸片段已成功插入质粒psc001、psc002中,流式细胞仪检测结果 显示转染的外源基因未引起显著的神经母细胞瘤细胞凋亡,ELISA结果 显示转染后细胞株SH-SYSY的VEGF-A蛋白表达受到显著抑制(P<0.05).结论 成功构建人VEGF-A的短发卡RNA真核表达载体,转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞后能显著抑制VEGF-A的表达,但没有引起显著的细胞凋亡(P0.05).     

RNA干扰对人神经母细胞瘤VEGF-A表达的抑制作用

目的 构建VEGF-A的短发夹RNA真核表达载体,并通过其介导的RNA干扰抑制人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y VEGF-A的表达.方法 根据VEGF-A的cDNA序列合成两对寡核苷酸片段,退火后分别插入真核表达载体组成重组质粒psc001、psc002,对重组质粒进行PCR、测序鉴定验证并经Western Blot筛选,然后将筛选所得的质粒转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y.转染48h后行Annexin V和PI双重标记流式细胞仪检测转染细胞凋亡情况,ELISA检测VEGF-A蛋白的表达水平.结果 PCR和测序证实寡核苷酸片段已成功插入质粒psc001、psc002中,流式细胞仪检测结果 显示转染的外源基因未引起显著的神经母细胞瘤细胞凋亡,ELISA结果 显示转染后细胞株SH-SYSY的VEGF-A蛋白表达受到显著抑制(P<0.05).结论 成功构建人VEGF-A的短发卡RNA真核表达载体,转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞后能显著抑制VEGF-A的表达,但没有引起显著的细胞凋亡(P0.05).     

RNA干扰对人神经母细胞瘤VEGF-A表达的抑制作用

目的 构建VEGF-A的短发夹RNA真核表达载体,并通过其介导的RNA干扰抑制人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y VEGF-A的表达.方法 根据VEGF-A的cDNA序列合成两对寡核苷酸片段,退火后分别插入真核表达载体组成重组质粒psc001、psc002,对重组质粒进行PCR、测序鉴定验证并经Western Blot筛选,然后将筛选所得的质粒转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y.转染48h后行Annexin V和PI双重标记流式细胞仪检测转染细胞凋亡情况,ELISA检测VEGF-A蛋白的表达水平.结果 PCR和测序证实寡核苷酸片段已成功插入质粒psc001、psc002中,流式细胞仪检测结果 显示转染的外源基因未引起显著的神经母细胞瘤细胞凋亡,ELISA结果 显示转染后细胞株SH-SYSY的VEGF-A蛋白表达受到显著抑制(P<0.05).结论 成功构建人VEGF-A的短发卡RNA真核表达载体,转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞后能显著抑制VEGF-A的表达,但没有引起显著的细胞凋亡(P0.05).     

RNA干扰对人神经母细胞瘤VEGF-A表达的抑制作用

目的 构建VEGF-A的短发夹RNA真核表达载体,并通过其介导的RNA干扰抑制人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y VEGF-A的表达.方法 根据VEGF-A的cDNA序列合成两对寡核苷酸片段,退火后分别插入真核表达载体组成重组质粒psc001、psc002,对重组质粒进行PCR、测序鉴定验证并经Western Blot筛选,然后将筛选所得的质粒转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y.转染48h后行Annexin V和PI双重标记流式细胞仪检测转染细胞凋亡情况,ELISA检测VEGF-A蛋白的表达水平.结果 PCR和测序证实寡核苷酸片段已成功插入质粒psc001、psc002中,流式细胞仪检测结果 显示转染的外源基因未引起显著的神经母细胞瘤细胞凋亡,ELISA结果 显示转染后细胞株SH-SYSY的VEGF-A蛋白表达受到显著抑制(P<0.05).结论 成功构建人VEGF-A的短发卡RNA真核表达载体,转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞后能显著抑制VEGF-A的表达,但没有引起显著的细胞凋亡(P0.05).     

RNA干扰对人神经母细胞瘤VEGF-A表达的抑制作用

目的 构建VEGF-A的短发夹RNA真核表达载体,并通过其介导的RNA干扰抑制人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y VEGF-A的表达.方法 根据VEGF-A的cDNA序列合成两对寡核苷酸片段,退火后分别插入真核表达载体组成重组质粒psc001、psc002,对重组质粒进行PCR、测序鉴定验证并经Western Blot筛选,然后将筛选所得的质粒转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y.转染48h后行Annexin V和PI双重标记流式细胞仪检测转染细胞凋亡情况,ELISA检测VEGF-A蛋白的表达水平.结果 PCR和测序证实寡核苷酸片段已成功插入质粒psc001、psc002中,流式细胞仪检测结果 显示转染的外源基因未引起显著的神经母细胞瘤细胞凋亡,ELISA结果 显示转染后细胞株SH-SYSY的VEGF-A蛋白表达受到显著抑制(P<0.05).结论 成功构建人VEGF-A的短发卡RNA真核表达载体,转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞后能显著抑制VEGF-A的表达,但没有引起显著的细胞凋亡(P0.05).     

RNA干扰对人神经母细胞瘤VEGF-A表达的抑制作用

目的 构建VEGF-A的短发夹RNA真核表达载体,并通过其介导的RNA干扰抑制人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y VEGF-A的表达.方法 根据VEGF-A的cDNA序列合成两对寡核苷酸片段,退火后分别插入真核表达载体组成重组质粒psc001、psc002,对重组质粒进行PCR、测序鉴定验证并经Western Blot筛选,然后将筛选所得的质粒转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y.转染48h后行Annexin V和PI双重标记流式细胞仪检测转染细胞凋亡情况,ELISA检测VEGF-A蛋白的表达水平.结果 PCR和测序证实寡核苷酸片段已成功插入质粒psc001、psc002中,流式细胞仪检测结果 显示转染的外源基因未引起显著的神经母细胞瘤细胞凋亡,ELISA结果 显示转染后细胞株SH-SYSY的VEGF-A蛋白表达受到显著抑制(P<0.05).结论 成功构建人VEGF-A的短发卡RNA真核表达载体,转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞后能显著抑制VEGF-A的表达,但没有引起显著的细胞凋亡(P0.05).     

RNA干扰对人神经母细胞瘤VEGF-A表达的抑制作用

目的 构建VEGF-A的短发夹RNA真核表达载体,并通过其介导的RNA干扰抑制人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y VEGF-A的表达.方法 根据VEGF-A的cDNA序列合成两对寡核苷酸片段,退火后分别插入真核表达载体组成重组质粒psc001、psc002,对重组质粒进行PCR、测序鉴定验证并经Western Blot筛选,然后将筛选所得的质粒转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y.转染48h后行Annexin V和PI双重标记流式细胞仪检测转染细胞凋亡情况,ELISA检测VEGF-A蛋白的表达水平.结果 PCR和测序证实寡核苷酸片段已成功插入质粒psc001、psc002中,流式细胞仪检测结果 显示转染的外源基因未引起显著的神经母细胞瘤细胞凋亡,ELISA结果 显示转染后细胞株SH-SYSY的VEGF-A蛋白表达受到显著抑制(P<0.05).结论 成功构建人VEGF-A的短发卡RNA真核表达载体,转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞后能显著抑制VEGF-A的表达,但没有引起显著的细胞凋亡(P0.05).     

RNA干扰对人神经母细胞瘤VEGF-A表达的抑制作用

目的 构建VEGF-A的短发夹RNA真核表达载体,并通过其介导的RNA干扰抑制人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y VEGF-A的表达.方法 根据VEGF-A的cDNA序列合成两对寡核苷酸片段,退火后分别插入真核表达载体组成重组质粒psc001、psc002,对重组质粒进行PCR、测序鉴定验证并经Western Blot筛选,然后将筛选所得的质粒转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y.转染48h后行Annexin V和PI双重标记流式细胞仪检测转染细胞凋亡情况,ELISA检测VEGF-A蛋白的表达水平.结果 PCR和测序证实寡核苷酸片段已成功插入质粒psc001、psc002中,流式细胞仪检测结果 显示转染的外源基因未引起显著的神经母细胞瘤细胞凋亡,ELISA结果 显示转染后细胞株SH-SYSY的VEGF-A蛋白表达受到显著抑制(P<0.05).结论 成功构建人VEGF-A的短发卡RNA真核表达载体,转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞后能显著抑制VEGF-A的表达,但没有引起显著的细胞凋亡(P0.05).     

三氧化二砷联合长春瑞滨、多西他赛对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系杀伤作用和细胞周期的影响

目的观察三氧化二砷(As_2O_3)、长春瑞滨(vinorelbine)、多西他赛(docetaxel)对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系的杀伤作用和细胞周期的影响,为临床寻找新的治疗手段及合理用药提供依据。方法采用流式细胞术检测经过As_2O_3、vinorelbine或docetaxel作用后SK-N-SH细胞的凋亡率和细胞周期分布的变化,探讨它们对SK-N-SH细胞的杀伤作用和细胞周期的影响。结果As_2O_3作用48h、72h、96h和120h时SK-N-SH细胞的凋亡率分别为(10.91±2.27)%、(23.85±5.52)%、(36.61±14.75)%、(52.93±2.47)%;As_2O_3可使SK-N-SH细胞周期阻滞在G2/M,作用48h时处于G2/M期阻滞的细胞比例最高(26.54%±5.67%);Vinorelbine和docetaxel对SK-N-SH细胞具有杀伤作用,它们各自作用于SK-N-SH细胞的IC50分别为35nmol/L和90nmol/L;以不同浓度的vinorelbine或docetaxel作用于SK-N-SHI细胞48h,随着G2/M期阻滞的比例增高,SK-N-SH细胞的凋亡率随之升高。结论 As_2O_3对SK-N-SH细胞的杀伤作用具有时间依赖性,As_2O_3可使SK-N-SH细胞周期阻滞在G2/M期。Vinorelbine和docetaxel对SK-N-SH细胞的杀伤作用和G2/M期阻滞有关,属于G2/M期特异性杀伤药物。     

Avastin对神经母细胞瘤株SK-N-SH增殖影响的体外研究

目的 以人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株为研究对象探讨Avastin对其增殖的影响及可能机制.方法测定不同 Avastin浓度对SK-N-SH细胞上清液VEGF水平的影响,对该株细胞的细胞毒作用及对其细胞周期及凋亡的影响.结果 随着Avastin浓度升高,细胞上清液中游离VEGF水平逐渐下降;在一定剂量范围内,Avastin对该株细胞无明显细胞毒性作用;不同浓度Avastin作用于该株细胞,呈时间依赖性,影响细胞周期分布.结论 Avastin可中和SK-N-SH细胞分泌的VEGF,无明显细胞毒性作用,但可影响细胞周期分布,提示Avastin与化疗药物联合应用可能有协同作用.     

苦参碱对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用机制

目的 探讨苦参碱对人神经母细胞瘤( NB) SH-SY5Y细胞的作用机制.方法 取对数生长期的细胞,分为对照组(含细胞、无苦参碱)及药物处理组(苦参碱质量浓度为2.0g·L-1,对细胞的作用时间分别为16 h、24 h、32 h)共4组,每组5个复孔.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测NB SH-SY5Y细胞增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率;比色法检测Caspase-8的相对活性.采用SPSS 16.0统计软件进行单因素方差分析.结果 MTT检测对照组及各时间点药物处理组增殖抑制率分别为(4.98±1.20)％、(11.01±0.85)％、(15.22±0.71)％和(22.31±1.45)％;FCM法检测对照组及各时间点药物处理组细胞的凋亡率分别为(5.23±1.19)％、(10.74±1.65)％、(14.00±0.98)％和(17.81±1.06)％;比色法测定各组Caspase-8的相对活性分别为(4.25±1.00)％、(10.69±1.10)％、(14.80±1.44)％和(19.80±0.97)％;以上检测各组间比较差异均有统计学意义(Pa＜0.05).结论 苦参碱可抑制人NB SH-SY5Y细胞增殖,并可通过上调Caspase-8的活性诱导NB SH-SY5Y细胞凋亡,其作用随时间的延长逐渐增强.     

苦参碱对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用及机制

目的 探讨苦参碱(matrine,Ma)对人神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB) SH-SY5Y细胞的作用及机制。方法 取对数生长期的细胞,分为对照组(含细胞无Ma)及4个浓度组（Ma的作用浓度）分别为0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml和3.0mg/ml,每组5个复孔。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测凋亡率;RT-PCR方法检测TrkA mRNA的表达。最后采用SPSS 16.(0统计软件进行单因素方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义。结果 MTT比色法检测对照组及各浓度组增殖抑制率分别为(7.25±1.55)％、(12.56±1.94)％、(17.22±0.90)％、(22.39±0.78)％和(25.35±1.38)％;流式细胞仪检测对照组及各浓度组凋亡率分别为(5.30±0.60)％、(10.04±1.18)％、(14.34±1.79)％、(21.36±0.96)％和(24.80±1.53)％;RT-PCR方法检测TrkA mRNA的表达,对照组及各浓度组的灰度值分别为：0.502±0.043、0.584±0.032、0.644±0.052、0.836±0.056和0.948±0.030。以上检测各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 苦参碱在体外环境下作用神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、诱导调亡并促进TrkA mRNA的表达,这为临床上神经母细胞瘤的治疗开拓了新的思路。     

多重基因转染对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖和免疫原性的影响

目的 观察多重基因转染对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖、凋亡及免疫原性的影响.方法 以空病毒质粒(SH/Ad组)、携带肿瘤抑制基因人野生型p53(wt-p53)的腺病毒质粒(SH/p53组)及携带wt-D53、免疫相关基因B7-1和粒-巨噬细胞集落刺激因子(CM-CSF)基因的腺病毒质粒(SH/BB-102组)转染SH-SY5Y细胞,并以未转染的肿瘤细胞为空白对照(SH组).分别采用免疫印迹法、流式细胞术和酶联免疫吸附法检测p53蛋白、B-1分子和GM-CSF的表达.观察转染前后细胞生长及凋亡情况.用混合淋巴细胞培养法检测瘤苗对T细胞增殖和细胞因子分泌的诱导作用.结果 腺病毒转染SH-SY5Y细胞后,目的基因得到了高效表达.与SH和SH/Ad组相比,SH/p63和SH/BB-102组细胞生长速度减慢,凋亡增加(P<0.05).SH/BB-102组与其他组比较,能够促进T细胞增殖,增加γ干扰素和白细胞介素-2的分泌(P<0.05).结论 wt-p53、E7-1和GM-CSF基因联合转染可以抑制SH-SY5Y细胞的生长、诱导细胞凋亡,并且可以增强肿瘤细胞的免疫原性.     

肿瘤细胞来源的外泌体对神经母细胞瘤细胞增殖和转移的影响

目的探讨肿瘤细胞来源的外泌体对神经母细胞瘤细胞增殖和转移的影响。方法使用外泌体提取纯化试剂盒对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞培养上清液中的外泌体进行提取和纯化,通过透射电子显微镜、蛋白免疫印记法对外泌体的形态、大小和标志蛋白进行鉴定。根据细胞培养基中是否加入外泌体,分为外泌体组和对照组,利用CCK-8法和Transwell实验检测外泌体对SH-SY5Y增殖活力和转移能力的影响。结果在透射电子显微镜下可见外泌体为茶托样形状,并被一层磷脂膜所包被,直径在30~150 nm之间;蛋白免疫印记法显示,位于外泌体内、外的标志蛋白TSG101和CD63均有富集。细胞增殖实验结果表明在共培养48 h后外泌体组的细胞存活率为(0.95±0.02)与对照组(0.88±0.05)比较,差异无统计学意义(t=2.317,P=0.0814);但是在共培养72 h后外泌体组的细胞存活率为(1.09±0.09)较对照组(0.92±0.03)明显提高,且组间差异有统计学意义(t=3.027,P=0.0389)。细胞转移实验结果显示,外泌体组SH-SY5Y细胞的迁移数量为(28.8±5.02)个较对照组(14.8±4.76)个明显增加,且组间差异有统计学意义(t=4.523,P=0.0019)。结论神经母细胞瘤细胞来源的外泌体能促进肿瘤细胞的增殖和转移,表明肿瘤来源的外泌体能成为交叉信号传递的平台,在促进肿瘤细胞生长方面发挥自分泌的作用。     

虎杖苷对THP-1细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制研究北大核心CSCD

目的探讨虎杖苷对急性单核细胞白血病细胞株THP-1增殖及凋亡的影响及可能的作用机制。方法以不同梯度浓度的虎杖苷处理THP-1细胞24 h、48 h,CCK-8法检测细胞增殖活力,并计算半数抑制浓度。取对数生长期的THP-1细胞,分为虎杖苷处理组(处理浓度为半数抑制浓度)和空白对照组(细胞中未施加虎杖苷溶液处理),培养48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Western blot法检测PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、p70 S6K、p-p70 S6K蛋白的表达。结果虎杖苷可有效抑制THP-1细胞的增殖,48 h的半数抑制浓度为1800μmol/L。经1800μmol/L的虎杖苷溶液作用48 h后,THP-1细胞的凋亡率较空白对照组显著增加(P<0.05);细胞周期出现G0/G1期至S期的阻滞,表现为G0/G1期的细胞比例较空白对照组明显上升,S期的细胞比例较空白对照组显著下降(P<0.05);PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、p70 S6K、p-p70 S6K蛋白表达较空白对照组显著降低(P<0.05)。结论虎杖苷可有效抑制THP-1细胞的增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT/mTOR信号通路的抑制表达有关。     

Experimental study of thymidine kinase gene therapy of neuroblastoma in vitro and in vivo

Neuroblastoma arises as a direct result of genetic disorder; therefore, it should be well treated and conquered by gene therapy in future. In this study, neuroblastoma cell line SH-SY5Y experiments, in vitro and in nude mice in vivo, were subjected to research thymidine kinase suicide gene to treat neuroblastoma. The plasmid LXpsp-hytk and a plasmid LXSH were transduced separately by lipofectin into human neuroblastoma cell line SH-SY5Y. SH-SY5Y-hy and SH-SY5Y-hytk were selected by hygromycin B. Different ganciclovir (GCV) concentration was given to SH-SY5Y-hytk to determine optimal GCV concentration. The cytotoxic effect of GCV on SH-SY5Y-hytk, SH-SY5Y-hy, and SH-SY5Y cells was determined. Scapular subcutaneous tumors were established in nude mice by inoculating 2.5×10⁶ SH-SY5Y-hytk on their left sides and 2.5×10⁶ SH-SY5Y-hy cells on their right sides for every mouse of treatment group and control group, respectively. After 1 week, mass grew in both sides of all the mice, and from the eighth day on, every mouse in treatment group received daily intraperitoneal injection of GCV 50 mg/kg body weight for 14 days; every mouse in control group received daily intraperitoneal injection of 1 ml saline for 14 days. On day 22 tumors were excised and weighed on the left and right sides, respectively, and apoptosis was detected by TUNEL method. Apoptotic index was calculated on the left and on the right sides, respectively, for every mouse in treatment group and control group. The lowest concentration of hygromycin B was 60 g/ml. The cytotoxic effect of GCV on SH-SY5Y-hytk cells was obvious (IC₅₀=0.03 M), whereas GCV showed almost no cytotoxic effect on SH-SY5Y and SH-SY5Y-hy cells (IC₅₀>400 M). SH-SY5Y-hytk was killed by concentrations of 30 M GCV effectively and it obviously showed the bystander effect, when SH-SY5Y-hytk remained at least 18% in the mixture culture cells. The tumor on the left side was much smaller than that of the right side in control group (p<0.05), and apoptotic index of the left was higher than that of the right in control group (p<0.01). SH-SY5Y-hytk has the bystander effect over 18% SH-SY5Y-hytk of the mixture culture cells at the concentration of 30 M GCV. The HSV-tk/GCV system was effective in treating SH-SY5Y neuroblastoma cell line in vivo as well. Our findings suggest that thymidine kinase gene therapy could be a potential method for treating neuroblastoma in the future.     

Effects of retinoic acid on proliferation,apoptosis, cytotoxicity,migration, and invasion of neuroblastoma cells

BACKGROUND: Because of the known property of less aggressiveness of differentiated cells compared to immatured cells all attempts are made to elucidate whether differentiation inducers possibly could be applied for neuroblastoma therapy. We are interested in examining the influence of retinoic acid (RA) on proliferation, apoptosis, cytotoxicity, migration, and invasion in dependence of the differentiation of neuroblastoma cells classified into N-type (SK-N-FI, SH-SY5Y), I-type (SK-PN-DW), and S-type (SK-N-LO, SK-N-MC) cells. PROCEDURE: Neuroblastoma cells were exposed to 10(-5) M RA and 200 ng/ml camptothecin (CAM) (control substance for apoptosis). Proliferation, apoptosis, and cytotoxicity were quantified by photometric assays. The influence on migration and invasion of neuroblastoma cells was examined by a scratch-test and by the measurement of the invasion through matrigel coated chamber inserts. RESULTS: In general, RA treatment induced proliferation inhibition predominantly in the cell lines SK-PN-DW (16%, P < 0.05) and SK-N-MC (8%, (P < 0.001), respectively. In the N-type cell lines SK-N-FI (P > 0.05) and SH-SY5Y (P < 0.001) no proliferation inhibition was determined conforming with no detection of apoptosis. CAM confirmed its capability to induce apoptosis in the cell lines SH-SY5Y (43.6%, P < 0.05), SK-PN-DW (54.8%, P > 0.05), and SK-N-MC (28.9%, P < 0.0 01) except for SK-N-FI with only 9.3% (P > 0.05), but after 24 hr of treatment. Minor signs of restricted migration were observed, while RA treatment reduced significantly the invasion rate through Matrigel of SK-N-FI to 13.3% (P < 0.01), SH-SY5Y to 19.2% (P < 0.05), SK-N-MC to 27.8% (P < 0.05), and SK-N-LO to 17.7% (P < 0.01). CONCLUSIONS: It is demonstrated that RA treatment can interfere with cell growth and in invasion by inducing neuronal differentiation in N-type and apoptosis in S-type neuroblastoma cell lines.