不同剂量祛风通络方对UUO大鼠胃、肾组织AQP4的影响

目的:观察不同剂量祛风通络方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠胃、肾组织水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)表达的影响。方法:单侧输尿管结扎建立肾病大鼠模型,实验大鼠分空白对照组、UUO模型组、祛风通络方大、中、小剂量组和缬沙坦组。采用Masson三色染色法,观察UUO大鼠肾间质纤维化的程度,免疫组织化学法、免疫荧光技术及RT-PCR法检测AQP4在UUO大鼠胃、肾组织的分布及表达情况。结果:与空白组相比,模型组AQP4表达明显降低(P 0. 01);与模型组相比,祛风通络方组与缬沙坦组AQP4表达均有显著升高(P 0. 01),且祛风通络方大剂量组升高最为明显(P 0. 05)。结论:祛风通络方可以通过上调胃、肾组织AQP4的表达,调节水液代谢,从而达到防治慢性肾脏病的目的。     

连黄降浊颗粒对自发性高血压大鼠肾组织TGF-β_1/smads信号传导通路的影响

目的:观察连黄降浊颗粒对自发性高血压大鼠(spontaneous hypertension rat,SHR)肾组织转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β_1/smads信号传导通路的影响。方法:雄性10周龄SHR40只,按体重随机分为4组:模型组、苯那普利对照组(对照组)、连黄降浊颗粒低剂量组(低剂量组)、连黄降浊颗粒高剂量组(高剂量组)各10只,采取切除所有大鼠右肾的方法制备高血压性肾损害模型。另取10只同周龄Wistar-Kyoto(WKY)大鼠同样切除右肾,作为正常血压对照组(WKY组)。造模1周后给予相应浓度和剂量的药物。给药第4周、8周末观察大鼠尿微量白蛋白(m Alb)、尿微量白蛋白与尿肌酐比值(m Alb/Ucr)和血清肌酐(Scr)。于第8周末处死所有动物,取其肾组织行HE染色、PAS染色和Masson染色,观察病理变化并半定量计算肾小管损伤指数(tubulointerstitial injury index,TII),免疫组化法检测骨形成蛋白-7(bone morphogenetic protein,BMP-7)、TGF-β_1、smad2、smad7在肾组织的表达。结果:造模1周以及给药第4周、第8周,4组SHRm Alb、m Alb/UCr、Scr随时间延长呈逐渐升高趋势,且差异均与WKY组差异有统计学意义(P0.01),而给药前4组SHR之间上述指标差异均无统计学意义(P0.05)。给药4周后,SHR中3个治疗组m Alb、m Alb/UCr、Scr显著低于模型组(P0.05),高剂量组明显低于对照组(P0.05)。8周时组间比较,低剂量组、高剂量组SHR上述指标明显低于对照组(P0.05),高剂量组低于低剂量组(P0.05)。HE染色、PAS染色显示WKY组大鼠肾组织形态大致正常。HE染色显示,3个治疗组SHR肾组织损害较模型组明显减轻,高剂量组病理改善更明显。PAS染色进行TII评分发现,3个治疗组大鼠TII显著低于模型组(P0.05),高剂量组明显低于模型组和低剂量组(P0.05)。TGF-β_1和Smad2在WKY组呈无或弱阳性,而BMP-7和Smad7呈强阳性表达。与模型组相比,TGF-β_1、Smad2在3个治疗组大鼠肾组织的表达下调(P0.05),2个中药治疗组大鼠肾组织的表达低于对照组(P0.05);3个治疗组BMP-7、smad7在肾脏组织的表达上调(P0.05),2个中药治疗组大鼠肾组织的表达高于对照组(P0.05)。结论:连黄降浊颗粒可能通过干预BMP-7/TGF-β_1/Smads信号转导通路抑制了TGF-β_1在肾组织的表达,而对SHR肾间质纤维化起到了治疗作用。     

芪地糖肾颗粒通过调节ERK信号通路减轻2型糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的作用研究

目的:观察芪地糖肾颗粒(QDTS)对2型糖尿病肾病(DN)大鼠蛋白尿的治疗作用,并通过对足细胞标志性蛋白nephrin、PCX的表达及细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路活化水平的检测探讨QDTS可能的作用机制。方法:建立2型DN大鼠模型,采用缬沙坦和QDTS干预4周,通过比较各组大鼠的尿微量白蛋白水平来判定疗效。采用WB法检测各组大鼠肾组织中足细胞标志性蛋白nephrin、PCX及ERK、p-ERK的表达水平。结果:与正常组相比,DN模型组的血糖及尿微量白蛋白水平均有显著升高(P 0. 01)。肾组织中nephrin、PCX的表达水平显著降低(P 0. 05),并伴有ERK磷酸化水平的升高(P 0. 01)。干预后,缬沙坦组及QDTS组大鼠的尿白蛋白水平明显降低(P 0. 05)。QDTS还能够提高DN大鼠肾组织中nephrin、PCX的表达(P 0. 05),并且降低ERK的磷酸化水平(P 0. 01)。结论:QDTS可以通过抑制ERK信号通路的过度活化来缓解DN足细胞损伤。     

真武汤对肾病综合征模型大鼠HMGB1/Beclin-1信号通路影响及机制研究

目的:探究真武汤对肾病综合征模型大鼠HMGB1/Beclin-1信号通路及炎性因子的影响。方法:将90只雄性Wistar大鼠随机分为6组,即空白对照组、模型对照组、阳性对照组、真武汤治疗高、中、低剂量组。除空白对照组注射等体积生理盐水外,其余各组均通过注射盐酸阿霉素制作肾病综合征大鼠模型。造模结束后第5天,肾病综合征高、中、低剂量组分别以真武汤12 g/kg、6 g/kg、3 g/kg剂量进行给药。阳性对照组给予泼尼松,剂量为0. 2 g/kg。空白对照组及模型对照组给予等容积蒸馏水5 ml灌胃,所有大鼠每天均给药1次,连续给药3周。末次给药24 h后,酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠外周血肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素4(interleukin-4,IL-4)、白介素8(interleukin-8,IL-8)表达水平; HE染色观察大鼠肾组织病理变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定各组大鼠肾组织中HMGB1/Beclin-1蛋白及相关蛋白的表达变化。结果:模型对照组大鼠外周血中TNF-α、IL-4、IL-8相比其他组,含量明显增长(P 0. 05);肾组织中HMGB1、LC3及Beclin-1蛋白表达水平显著高于其他各组(P 0. 05),肾明显充血,与周围结缔组织黏连不可分,细胞形态不规则,细胞表面微绒毛显著减少,胞核变形,染色质边集。与模型对照组相比,真武汤治疗组及阳性对照组大鼠肾组织微观病理损伤明显减轻,外周血中TNF-α、IL-4、IL-8含量降低(P 0. 05);肾组织中HMGB1、LC3及Beclin-1蛋白表达水平显著降低(P 0. 05),且真武汤治疗组具有剂量依赖性(P 0. 01)。结论:真武汤可通过有效抑制肾病综合征模型大鼠子肾组织炎性因子表达,调节HMGB1/Beclin-1信号通路,对肾病综合征模型大鼠肾组织起到保护作用。     

连黄降浊颗粒对SHR肾组织VEGF和足细胞podocalyxin表达的影响

目的:观察连黄降浊颗粒对单侧肾切除SHR肾组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)和足细胞podocalyxin(PCX)表达的影响。方法:40只SHR随机分为模型组(SHR组)、西药对照组(西药组)、中药对照组(中药组)、连黄降浊颗粒低剂量组(低剂量组)、连黄降浊颗粒高剂量组(高剂量组),6只同周龄WKY作为正常血压对照组(WKY组)。右肾切除法建立高血压性肾损害动物模型。造模后各组给予相应药物,给药8周末测量血压,收集尿液观察尿微量白蛋白(m Alb)、β2-微球蛋白(β2-MG)、α1-微球蛋白(α1-MG)、尿微量白蛋白/尿肌酐(m Alb/Ucr);取血检测血肌酐(Scr)、血清胱抑素C(Cys-C)。8周后处死所有大鼠,肾组织行HE、PAS和Masson染色,光镜观察肾小球和肾小管-间质病理变化;电镜观察肾脏毛细血管基底膜(GBM)及足细胞的变化;免疫组化、Western blotting和RT-PCR检测VEGF、PCX及PCX-mRNA表达水平。结果:给药第8周WKY组和4个治疗组血压显著低于SHR组(P0.05~0.01),且4个治疗组血压差异亦有统计学意义(P0.05)。SHR组尿m Alb、β2-MG、α1-MG、m Alb/Ucr,血Scr、Cys-C明显高于WKY组(P0.01),高剂量组显著低于其他治疗组(P0.05~0.01)。光镜下PAS染色显示SHR组肾小球病变明显,肾小球硬化指数(GSI)显著高于WKY组(P0.01),高剂量组GSI明显降低(P0.05~0.01);HE染色、Masson染色显示SHR组肾小管间质轻度纤维化,肾间质纤维化指数(IF)显著高于WKY组(P0.01),高剂量组IF显著降低(P0.05~0.01)。透射电镜下SHR组足细胞及GBM形态结构明显改变,高剂量组足细胞、GBM均无显著改变。免疫组化、RT-PCR、Western blotting结果显示4个治疗组VEGF均低于SHR组,高剂量组VEGF表达显著降低;SHR组PCX及其m-RNA表达显著低于WKY组,高剂量组表达明显高于中、西药组和低剂量组。结论:连黄降浊颗粒能够有效缓解足突融合、减少尿蛋白,降低VEGF表达、上调PCX表达水平,减轻肾小球及肾小管-间质病理改变。     

补肾活血方通过调节MGP、BMP-7因子对慢性肾脏病大鼠血管钙化的抑制作用

目的:观察补肾活血方通过调节基质Gla蛋白(matrix Gla protein,MGP)、骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)因子对慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)大鼠血管钙化(vascular calcification,VC)的抑制作用,探讨补肾活血方抑制CKD大鼠VC的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为正常组、模型组及中药组,每组20只,模型组与中药组大鼠实验第1~4周给予250 mg·kg-1·d-1腺嘌呤混悬液灌胃及含1. 8%高磷饲料喂养,第5~8周腺嘌呤改为隔日灌胃。中药组同时按55 g·kg-1·d-1剂量给予补肾活血方灌胃治疗,每日1次。正常组灌胃等量生理盐水。给药8周后,HE染色观察肾组织变化,茜素红染色观察主动脉钙化结节情况,检测主动脉钙含量及ALP活性,腹主动脉取血检测血清钙(Ca2+)、磷(P3-)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、全段甲状旁腺激素(i PTH),Western blot法检测主动脉α-平滑肌蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)蛋白的表达,Real-time PCR法检测主动脉MGP、BMP-7mRNA表达。结果:HE染色观察提示:中药组较模型组正常肾小球数目增多,肾小管扩张程度降低,炎性细胞数量下降,腺嘌呤结晶减少。茜素红染色观察提示:与正常组比较,模型组主动脉出现钙化结节,广泛红色颗粒物沉着;与模型组比较,中药组钙化结节减少。与正常组比较,模型组主动脉钙含量及ALP活性升高,血P3-、Scr、BUN、i PTH水平升高,血Ca水平下降(P 0. 01),主动脉ALP蛋白表达明显升高、α-SMA蛋白表达明显下降(P 0. 01),模型组主动脉MGP、BMP-7 mRNA表达下调(P 0. 01);与模型组比较,中药组主动脉钙含量及ALP活性明显降低(P 0. 05),血P3-、Scr、BUN、i PTH水平均下降(P 0. 01,P 0. 05),血Ca2+水平升高(P 0. 01),中药组主动脉ALP蛋白表达降低、α-SMA蛋白表达升高(P 0. 01),且中药组MGP、BMP-7 mRNA表达上调(P 0. 01)。结论:补肾活血方能够改善CKD大鼠肾脏组织学、肾功能、改善钙磷代谢,上调MGP、BMP-7因子表达,这可能是其抑制CKD大鼠VC的作用机制。     

清肝益肾祛风复方抗高血压肾损伤作用及机制研究

目的:探究清肝益肾祛风方对自发性高血压大鼠的降压、抗高血压肾损伤作用及其可能的作用机制,以期为临床治疗高血压肾损伤提供科学依据。方法:采用4周龄雄性SHR大鼠作为高血压模式动物,适应性饲养一周后随机分为SHR模型组、坎地沙坦治疗组,清肝益肾祛风方(QYQ)治疗组。正常对照组选用同周龄雄性WKY大鼠。从6周龄开始,QYQ治疗组和坎地沙坦治疗组每天分别给予2 ml的清肝益肾祛风方水煎液和坎地沙坦悬液灌胃。SHR组和WKY组采用同等体积的纯水做为对照,连续灌胃至20周龄。采用小动物无创血压计每2周测量一次血压;连续给药至20周龄后,10%水合氯醛腹1腔注射麻醉、腹主动脉取血后处死动物。留取双侧肾脏、采用离心机分离血清。左肾脱水固定包埋后做石蜡切片,Masson’s trichrome染色观察左侧肾脏组织病理变化;采用全自动生化检测仪检测大鼠血清中尿素、肌酐、尿酸水平; Realtime PCR方法检测右侧肾脏组织氧化应激标志物相关基因的mRNA表达水平、炎症因子基因的mRNA表达水平及胶原相关基因的mRNA表达水平。结果:与WKY组相比,SHR组大鼠血压从6周龄开始显著升高(P0.05),从12周龄开始达到稳定;与SHR组相比较,清肝益肾祛风方与坎地沙坦均能显著降低SHR大鼠血压(P0.05); Masson’s trichrome染色结果:WKY组肾脏组织未见病理损伤,SHR组大鼠肾脏组织出现较大面积纤维化。与SHR组相比,QYQ治疗组与坎地沙坦治疗组肾脏组织纤维化面积均显著降低(P0.05);生化检测结果提示:与WKY组相比,SHR组血清中尿酸、尿素含量显著升高(P0.05)。与SHR相比较,QYQ治疗组血清尿酸含量显著降低(P0.05)。Real-time PCR结果:与WKY组相比,SHR组肾脏组织氧化应激相关基因mRNA表达水平显著升高(P0.05),IL-23,TNF-α及TGF-β1等炎症因子相关基因的mRNA表达水平显著升高(P0.05),IL-10基因的mRNA表达水平显著降低(P0.05),胶原相关基因的mRNA表达水平显著上升(P0.05)。与SHR组相比,QYQ组肾脏组织氧化应激相关基因mRNA表达水平显著降低(P0.05),IL-23,TNF-α等炎症因子相关基因的mRNA表达水平显著降低(P0.05),IL-10的mRNA表达水平显著升高(P0.05),Col5a2及α-SMA基因的mRNA表达水平显著降低(P0.05)。结论:清肝益肾祛风方能显著降低SHR大鼠血压、显著减轻SHR大鼠肾脏组织纤维化,具有降压、抗高血压肾损伤的作用,其作用机制可能与减轻肾脏组织氧化应激反应、炎症反应及减少肾组织胶原纤维合成相关。     

积芎解毒方对糖尿病肾病大鼠肾组织MCP-1、C5b-9、AngⅡ表达的影响

目的:观察复方积雪草颗粒积芎解毒方对糖尿病肾病大鼠模型血液生化指标及对肾组织单核细胞趋化因子(MCP-1)、补体C5b-9、血管紧张素-Ⅱ(AngⅡ)水平的影响,探讨积芎解毒方对糖尿病肾病大鼠的肾保护作用和可能机制。方法:60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、福辛普利组。每组10只,除正常对照组外采用高脂饲料喂养加STZ腹腔注射制作糖尿病肾病大鼠模型,治疗8周后,检测大鼠24 h尿蛋白定量(UTP),血清总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的变化;Real time PCR法检测各组大鼠肾组织MCP-1、C5b-9、AngⅡ的表达情况。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠肾组织MCP-1、C5b-9、AngⅡmRNA水平显著升高(P 0. 01);与模型对照组比较,各治疗组24 h尿蛋白定量(UTP)明显下降;TP、Alb均明显升高; MCP-1、C5b-9、AngⅡmRNA水平均明显降低,其中中药高剂量组小于低剂量组(P 0. 05),与福辛普利组相似(P 0. 05),中药低剂量组与中剂量组结果差异无统计学意义(P 0. 05),高剂量组与中剂量组差异有统计学意义(P 0. 05)。各组ALT、AST、BUN、Scr变化不明显。结论:积芎解毒方高剂量对糖尿病肾病大鼠的肾保护作用可能与通过降低炎症反应从而延缓肾功能发展有关。     

高盐饮食对自发性高血压大鼠肾髓质环氧化酶2表达的影响

目的观察自发性高血压大鼠（SHR）肾髓质环氧化酶2（COX2）的表达以及不同盐负荷状态下COX2的变化。方法6周龄SHR大鼠及其对照Wistar-Kyoto（WKY）大鼠各12只，随机分为低盐组和高盐组（WKY-LS组，WKY-HS组，SHR-LS组，SHR-HS组），分别给予高盐（含8％NaCl）或低盐（含O．04％NaCl）饮食3d。观察基础状态及不同盐负荷前后大鼠尾动脉血压、24h尿量（UV）、尿钠（UNa）以及COX2代谢物6k．PGFlα排泄情况。应用免疫组化和Western印迹的方法检测肾髓质COX2蛋白表达。结果给予不同盐负荷3d后，SHR-Hs组血压显著升高[（12．59±5．13）比（11．94±3．76）mmHg，P〈0．05]。基础状态及不同盐负荷状态下，SHR大鼠24hUV、UNa排泄与WKY大鼠相比均显著下降（P均〈O．05）。与各自基础状态相比，低盐饮食后两种大鼠的UV和UNa排泄显著降低；高盐饮食后则显著增加（P均〈O．05）。SHR和WKY大鼠尿COX2代谢物6k-PGFlα的排泄对盐负荷的反应也类似，高盐组均较低盐组显著增加（P〈0．05），但同样盐负荷状态下两组之间差异无统计学意义。基础状态下及低盐饮食SHR与WKY大鼠肾髓质COX2表达差异无统计学意义；给予高盐饮食后WKY大鼠肾髓质COX2表达增加2．06倍，SHR大鼠增加1．87倍，但两种大鼠之间差异无统计学意义。结论SHR大鼠肾脏水盐排泄功能受损，高盐饮食后血压进一步升高，水钠潴留，同时伴有肾髓质COX2表达升高，但不同盐负荷对SHR大鼠肾髓质COX2表达的影响与WKY大鼠相同。提示肾髓质COX2参与了水盐代谢的调节，且在SHR大鼠中表达正常，但并非该动物模型高血压形成及水钠潴留的关键因素。     

七氟醚对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响及Na+-2Cl--K+协同转运蛋白1和水通道蛋白2在其中的作用

目的 探讨七氟醚对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响及Na+-2Cl--K+协同转运蛋白1(BSC1)和水通道蛋白2(AQP2)在其中的作用.方法 健康雄性SD大鼠24只,8～12周龄,体重125 ～145 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=8)∶假手术组(S组)、肾缺血再灌注组(I/R组)和七氟醚组(Sev组).采用夹闭肾动脉45 min再灌注24 h的方法制备双侧肾脏缺血再灌注损伤模型.Sev组吸入1 MAC(2.2％)七氟醚,意识消失后开始制备模型,并吸入1 MAC(2.2％)七氟醚3h.于模型制备前24 h(T1)和再灌注24 h(T2)时采集尿样,记录尿量,测定尿比重、肌酐(Cr)水平,计算内生肌酐清除率(Ccr);T2时采集下腔静脉血样,测定血清BUN和Cr、MDA浓度、SOD和髓过氧化物酶(MPO)活性浓度;取血后取左侧肾脏,观察肾组织病理学结果,进行肾小管损伤程度评分,测定肾组织SOD和MPO活性、MDA含量,分别采用免疫组化法和Western blot法测定AQP2和BSC1的表达.结果 与S组比较,I/R组和Sev组T2时尿量增加,血清BUN和Cr浓度升高,尿比重和Ccr降低,血清和肾组织MPO、MDA水平升高,SOD活性降低,肾小管损伤评分升高,肾组织AQP2和BSC1表达水平下调(P＜0.05);与I/R组比较,Sev组Ccr升高,血清BUN和Cr浓度降低,血清和肾组织MPO、MDA水平降低,SOD活性升高,肾小管损伤评分降低,肾组织AQP2和BSC1表达水平上调(P＜0.05),尿量和尿比重差异无统计学意义(P＞0.05),肾组织病理学损伤减轻.结论 七氟醚可减轻大鼠肾缺血再灌注损伤,其机制与上调BSC1和AQP2的表达有关.     

猪苓汤对阿霉素肾病大鼠肾脏AQP2表达的影响

目的:探讨猪苓汤对阿霉素肾病大鼠水通道蛋白2表达的影响。方法:110只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组,尾静脉注射阿霉素14 d后,24 h尿蛋白定量≥100 mg提示模型复制成功,将模型大鼠再次随机分为模型组、猪苓汤组、呋塞米组,分别于灌胃2、4、6、8周处死部分大鼠,留取血液、尿液、肾脏标本,半自动生化仪检测尿蛋白含量、肾功能等生化指标,HE染色观察肾脏病理改变,RT-PCR法检测AQP2 mRNA表达,Western Blot法检测AQP2蛋白表达。结果:(1)生化指标:灌胃8周,猪苓汤组平均尿量高于模型组(P<0.05),其他生化指标比较,各造模组之间差异无统计学意义;(2)AQP2 mRNA:注射后14 d,模型组平均表达量高于空白组,差异具有统计学意义(P<0.05),猪苓汤组在灌胃2、4、6、8周时AQP2 mRNA平均表达量均低于模型组(P<0.05);(3)AQP2蛋白:注射后14 d,模型组平均表达量高于空白组,差异具有统计学意义(P<0.05),猪苓汤组在灌胃4、6、8周时AQP2蛋白平均表达量均低于模型组(P<0.05)。结论:猪苓汤的利尿作用可能通过下调AQP2 mRNA和蛋白表达而实现。     

HIF-VEGF-Notch信号通路相关因子在阿霉素肾病大鼠肾小球硬化过程中的表达研究

目的:探讨HIF-VEGF-Notch信号通路相关因子在阿霉素肾病大鼠肾小球硬化过程中的表达。方法:SD大鼠随机分为对照组和模型组(实验组),建立阿霉素肾病大鼠模型,第4、8、12、16周检测大鼠24 h尿蛋白、血清白蛋白(Alb)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),光镜下观察肾组织病理改变,采用RT-PCR检测肾组织HIF-1 mRNA、VEGF mRNA、Notch1 mRNA表达水平,并采用Western blot法检测肾组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、Notch1蛋白表达水平。结果:实验组大鼠肾脏呈典型的肾小球硬化改变。与对照组相比,第4、8、12、16周实验组大鼠尿蛋白明显升高(P 0. 01); Alb均明显下降(P 0. 01); BUN、Scr持续升高,有显著性差异;实验组大鼠肾组织第4、8、12、16周HIF-1 mRNA、VEGF mRNA、Notch1 mRNA均表达升高(P 0. 01);肾组织HIF-1α、VEGF、Notch1蛋白水平也明显升高(P 0. 01)。结论:HIF-VEGF-Notch信号通路相关因子的高表达可能与阿霉素肾病肾小球硬化进展有关。     

连黄降浊颗粒对自发性高血压大鼠肾动脉重构的影响

目的:观察连黄降浊颗粒对自发性高血压大鼠(SHR)肾动脉重构的影响,并探讨其作用机理。方法:40只SHR随机分为模型组、益肾化湿颗粒对照组(中药对照组)、盐酸贝那普利对照组(西药对照组)、连黄降浊颗粒低剂量组(低剂量组)、连黄降浊颗粒高剂量组(高剂量组),8只WKY大鼠作为正常血压对照组(WKY组),给予相应浓度和剂量药物。给药8周后,测定大鼠血压、尿微量白蛋白(m Alb)、尿微量白蛋白/尿肌酐(Um Alb/Ucr)、血浆血管内皮生长因子(VEGF)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ);计算肾小管损伤指数(TII)和肾小球硬化指数(GSI),测量肾动脉中膜厚度(MT)、管腔内径(LD),检测VEGF表达,观察其中膜超微结构。结果:8周后,模型组SHR血压、m Alb、Um Alb/Ucr、血浆VEGF和AngⅡ显著升高(P<0.01),肾组织病变严重,肾动脉重构明显。低剂量组和高剂量组SHR血压、m Alb、Um Alb/Ucr、血浆VEGF、AngⅡ、TII和GSI显著下降(P<0.01);肾动脉MT、MT/LD下降和VEGF表达减弱(P<0.01);肾动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增生、肥厚,内皮细胞脱落,中膜断裂改善,且高剂量组优于低剂量组。西药对照组SHR血压和m Alb、Um Alb/Ucr显著降低(P<0.01);TII、GSI,肾动脉VEGF表达和MT/LD有所下降(P<0.05),效果均不如高剂量组。结论:连黄降浊颗粒能够降低SHR血压、减少尿蛋白、保护肾功能、改善肾组织病变,并抑制SHR肾动脉VEGF过度表达、AngⅡ分泌,逆转其肾动脉重构。     

加味六味地黄汤对UUO大鼠肾组织Wnt4/β-catenin信号通路介导调控FGF-23的影响

目的:观察加味六味地黄汤对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组Wnt4、β-catenin及FGF-23蛋白表达的影响。方法:健康成年SD大鼠120只,随机分为4组:假手术组、模型组、中药组、缬沙坦组,各组组内分为1周、2周、4周3个时间点。假手术组和模型组予以生理盐水(2 ml/只/d)灌胃;中药组予以加味六味地黄汤组灌胃(2 ml/d);缬沙坦组在造模后给予缬沙坦(30 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃。HE染色和Masson染色观察肾脏病理改变,免疫组化和Western blot观察大鼠肾组织Wnt4、β-catenin及FGF-23蛋白的表达。结果:假手术组大鼠肾组织结构正常,模型组大鼠出现肾间质纤维化,中药组和缬沙坦组大鼠小管间质病变减轻。与假手术组相同时间点相比较,大鼠模型组肾功能(BUN、Scr)、小管间质半定量评分、Wnt4、β-catenin及FGF-23蛋白表达均显著增高,差异均有统计学意义(P 0. 01);与模型组大鼠相同时间点相比较,加味六味地黄汤和缬沙坦均能改善肾脏病理,显著降低BUN和Scr水平、小管间质半定量评分,下调肾组织Wnt4、β-catenin及FGF-23蛋白的表达(P 0. 05或P 0. 01)。结论:UUO大鼠肾组织Wnt4/β-catenin信号通路活化,并可能介导了FGF-23的转录,而加味六味地黄汤可能通过阻断Wnt4/β-catenin信号通路的活化,下调FGF-23的表达,发挥抗肾间质纤维化作用。     

可溶性细胞间粘附分子-1在自发性高血压大鼠肾间质纤维化作用的研究

目的研究可溶性细胞间粘附分子-1（Intercellular adhesion mol ecule—1，ICAM—1）在自发性高血压大鼠（Spontaneously hypertertensive rat，SHR）肾小管的表达及其与肾间质纤维化的关系。方法以同龄雄性正常血压（Wistar Kyoto，WKY）和自发性高血压大鼠为研究对象，分别于12周龄和24周龄时检测两种大鼠尾动脉血压、肾功能及β2微球蛋白（β2-MG），并采用免疫组织化学的方法检测ICAM—1在肾小管中的表达。结果同WKY组比较，SHR组24周时β2-MG显著增高（P〈0．01）；而且尾动脉收缩压（SBP）显著性增高；而尿素氮和血肌酐的差异无显著性（P〉0．01）。ICAM—1在WKY组肾小管的表达无或极微量；在SHR组的肾小球有少量表达，但在肾小管的表达显著，且随高血压病程的进展，ICAM—1的表达显著性增加（P〈0．01）。结论ICAM—1在自发性高血压大鼠肾小管的表达显著增加，与肾间质纤维化密切相关。     

益肾活血方抑制足细胞转分化减缓FSGS模型大鼠疾病进展的实验研究

目的:通过观察益肾活血方对局灶节段性肾小球硬化模型大鼠尿蛋白,肾组织结构,足细胞特异性蛋白WT1、nephrin,转分化相关指标α-SMA的影响。探讨益肾活血方对局灶节段性肾小球硬化的调控机制。方法:7～8周龄雄性Sprague Dawley大鼠,尾静脉注射多柔比星(4 mg·kg~(-1)·次~(-1)) 2次,制备FSGS模型。成模后,按24 h尿蛋白定量随机分为模型组、贝那普利组(5 mg/kg)、益肾活血方高剂量组(2 g/kg)、益肾活血方低剂量组(1 g/kg),每组9只;选择另外10只同周龄大鼠为正常组。连续给药8周。在实验结束时,检测体重、24 h尿蛋白定量(24 h U-Pr)、血肌酐、尿素氮;行肾脏组织HE、PAS染色; Western blot法检测WT1、nephrin、α-SMA蛋白表达。结果:与模型组相比,高剂量组24 h U-Pr显著降低(P 0. 05),体重显著升高(P 0. 05),肾小球硬化程度显著改善(P 0. 05); WT1蛋白在高低剂量组肾组织中的表达显著升高(P 0. 05); nephrin在治疗后有增加趋势;α-SMA模型组中表达增加(P 0. 01),益肾活血方治疗后表达下调(P 0. 05)。结论:益肾活血方能够减少尿蛋白排泄,减轻肾组织病理损害,降低肾小球硬化程度;其作用机制可能与抑制足细胞转分化,保护足细胞结构和数量(nephrin、WT1),减少足细胞损伤有关。     

前列腺素El、厄贝沙坦对肾小球硬化大鼠肾组织肝细胞生长因子的调节

目的 探讨前列腺素E1(PGEl)、厄贝沙坦对单侧肾切除加重复阿霉素注射的方法复制的肾小球硬化模型大鼠肾组织肝细胞生长因子(HGF)的调节。方法将肾小球硬化大鼠分为对照组、治疗组分PGE1组和厄贝沙坦组，设假手术组为正常对照。检测PGEl、厄贝沙坦治疗8周后，各组大鼠肾功能和组织病理改变，用免疫组化方法检测肾小球和肾小管—间质中HGF的表达，并用酶联免疫吸附(ELISA)法比较各组大鼠肾组织分泌的HGF。结果 PGEl治疗组和厄贝沙坦治疗组较对照组肾组织HGF的表达增加(P＜0．01)，肾组织分泌的HGF含量增加(P＜0．01)，但两治疗组间无显著差异(P＞0．05)。结论 PGE1、厄贝沙坦均可以上调肾组织HGF的分泌，加强HGF的肾保护作用，延缓肾小球硬化，减轻肾小管—间质纤维化。     

免疫源性IgAN大鼠模型的建立与评价

目的:免疫原牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,BSA)免疫诱导IgA肾病大鼠模型是国内常用模型,本实验对以往的制作方法加以改良,观察模型效果。方法:雄性SD大鼠20只,质量180～200 g,按随机数字表随机分为正常组、模型组。模型组造模方法:BSA,600 mg/kg,隔天1次灌胃,皮下注射蓖麻油0. 3 ml+CCL40. 10 ml,每周1次持续8周,第6周、第8周脂多糖(lypopolysaccharide,LPS) 0. 05 mg尾静脉注射。对照组用注射用水等剂量刺激。第8周末大鼠,留取血、尿、肾组织标本检测。观察大鼠一般情况、蛋白尿、血尿以及肾组织病理。结果:型组与正常组相比,大鼠24 h尿蛋白定量、尿红细胞计数明显增多(P 0. 01),病理形态学改变明显,肾组织IgA免疫荧光染色增强,荧光阳性面积和平均光密度值升高(P 0. 01)。结论:运用改良的造模方法 BSA+LPS+CCl4建立IgA肾病模型效果良好,病理、临床指标均与人类IgA肾病较为相似。     

大黄总蒽醌对大鼠肾脏水通道蛋白2和水通道蛋白4表达的影响

目的 研究大黄总蒽醌对大鼠肾脏水通道蛋白（AQP）2、AQP4表达的影响及探讨大黄利尿机制。 方法 32只SD大鼠随机分为正常对照组，大黄总蒽醌低、中、高剂量组，每组8只，分别给予不同剂量大黄总蒽醌灌胃，每天1次，共灌5 d。第4天测定大鼠24 h尿量，尿液Na+水平及尿渗透浓度。5 d后处死大鼠，腹主动脉取血，进行血液生化指标检测；并留取肾脏，用免疫组化、Western印迹和RT-PCR法检测肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达变化。 结果 与正常对照组比较，大黄总蒽醌中、高剂量组大鼠24 h尿量显著增加[(16.21±1.96) ml、(18.16±1.80) ml比（13.85±1.25）ml, P均＜ 0.05]，低剂量组大鼠尿量变化不明显；中、高剂量组大鼠肾脏AQP2蛋白及mRNA表达均显著下降（P均＜ 0.01），高剂量组大鼠肾脏AQP4蛋白及mRNA表达显著下降（P ＜ 0.01）；中剂量组大鼠AQP4蛋白表达下降（P ＜ 0.01），但mRNA表达无显著降低；低剂量组大鼠AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达无显著变化。 结论 大黄总蒽醌能降低大鼠肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达水平，这可能是大黄产生利尿的机制之一。     

自发性高血压大鼠阴茎海绵体组织nNOS变化的实验研究

目的：研究高血压对大鼠阴茎海绵体组织nNOS神经纤维的影响。方法：自发性高血压大鼠(SHR)和同系WKY鼠各12只，都随机分为4周观察组(6只)和12周观察组(6只)。第4周和第12周末时，观察阴茎勃起功能，并检测阴茎组织nNOS神经纤维数目。结果：4周组和12周组中，SHR和WKY鼠在阴茎勃起次数和阴茎组织nNOS神经纤维数目上，都有显著差异(P＜0．01)。SHR4周组和SHR12周组，在阴茎组织nNOS神经纤维数目上，差异也有显著性(P＜0．05)，阴茎勃起次数和勃起率差异无显著性(P＞0．05)，但有减少的趋势。结论：高血压使阴茎组织中nNOS神经纤维数目减少，这可能是高血压引起勃起功能障碍的发病机理之一。