丹参酮IIA通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路对食管癌细胞放疗敏感性的影响

目的 研究丹参酮II_A对人食管癌细胞放疗敏感性的影响，并基于磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路探讨其潜在机制。方法 以人食管癌Eca-109细胞为受试细胞，分别采用不同浓度丹参酮II_A和不同放射剂量处理Eca-109细胞，48 h后MTT法检测细胞增殖活力，计算丹参酮II_A半数抑制浓度（IC₅₀）和放射的IC₅₀，分别作为后续实验丹参酮II_A浓度和放射剂量。取对数生长期Eca-109细胞，设对照组、丹参酮II_A组、放射组、丹参酮II_A＋放射组、丹参酮II_A＋放射＋PI3K抑制剂（LY294002）组。通过平板克隆实验、MTT法、流式细胞术、荧光质粒转染法检测细胞克隆形成能力、增殖活力、凋亡率和自噬状况，RT-PCR、Western blotting法检测细胞中PI3K/Akt/mTOR信号通路相关mRNA和蛋白表达。结果 丹参酮Ⅱ_A和放射对人食管癌Eca-109细胞增殖活力的抑制作用均呈现剂量相关性，丹参酮II_A IC₅₀为8.75 mmol/L，放射量IC₅₀为4.63 Gy。与对照组相比，丹参酮II_A组、放射组、丹参酮II_A＋放射组、丹参酮II_A＋放射＋LY294002组细胞克隆形成能力和增殖活力明显降低，凋亡率和自噬体数量明显升高（P＜0.05）；PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白表达量明显降低（P＜0.05）；Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、LC3-I、LC3-II蛋白表达量及Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3/Caspase-3、LC3-II/LC3-I明显升高（P＜0.05）。与丹参酮II_A组或放射组相比，丹参酮II_A＋放射组和丹参酮II_A＋放射＋LY294002组对各检测指标的调控作用明显增强（P＜0.05）。与丹参酮II_A＋放射组相比，丹参酮II_A＋放射＋LY294002组对各指标的调控作用明显增强（P＜0.05）。结论 丹参酮II_A可能通过下调PI3K/Akt/mTOR信号通路，抑制细胞增殖并促进其凋亡与自噬，进而增强人食管癌细胞放疗敏感性。     

基于HGF/c-Met通路探究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷改善高糖高脂诱导胰岛β细胞损伤的机制

目的 探究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及机制。方法 使用不同浓度（10、20、30、40、50 μmol/L）矢车菊素-3-O-葡萄糖苷处理胰岛β细胞，CCK-8法检测细胞活力；将胰岛β细胞分为对照组、模型组及矢车菊素-3-O-葡萄糖苷10、50 μmol/L组，CCK-8法检测各组细胞活力，酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组细胞胰岛素分泌量，DCFH-DA荧光探针法检测各处理组细胞活性氧（ROS）水平，比色法检测各处理组细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性与丙二醛（MDA）含量，蛋白质免疫印迹（Western blotting）法检测各处理组细胞肝细胞生长因子（HGF）/间质表皮转化因子受体（c-Met）通路相关蛋白表达水平。使用c-Met抑制剂SU11274进行干预，实验将胰岛β细胞分为对照组、模型组、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷组、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷＋SU11274组，再通过CCK-8法检测各处理组细胞活力，ELISA法测定各组细胞胰岛素分泌量。结果 与对照组比较，不同浓度矢车菊素-3-O-葡萄糖苷作用均显著提高了胰岛β细胞活力（P＜0.05）。与模型组比较，矢车菊素-3-O-葡萄糖苷10、50 μmol/L组的细胞活力显著升高，胰岛素分泌水平显著增加，细胞内ROS水平和MDA含量显著降低，SOD活性显著升高，HGF、p-c-Met/c-Met蛋白水平显著上调（P＜0.05），且矢车菊素-3-O-葡萄糖苷50 μmol/L组改善更显著（P＜0.05）。使用c-Met抑制剂SU11274干预后，与矢车菊素-3-O-葡萄糖苷组比较，矢车菊素-3-O-葡萄糖苷＋SU11274组细胞活力则显著降低，胰岛素分泌水平显著减少（P＜0.05）。结论 矢车菊素-3-O-葡萄糖苷能够提高高糖高脂诱导下胰岛β细胞的活力，增加其胰岛素分泌量，并抑制氧化应激损伤，该作用与激活HGF/c-Met通路有关。     

基于实时细胞分析系统的速效救心丸抗心律失常作用研究

目的 利用实时细胞分析（RTCA）Cardio系统,通过体外细胞实验及整体动物实验评价速效救心丸抗心律失常作用。方法 培养原代大鼠乳鼠心肌细胞,接种于E-Plate Cardio 96,分析3 600/孔、20 000/孔以及90 000/孔接种浓度心肌细胞的细胞指数（CI）和搏动图形;MTT法检测速效救心丸（10、20、40、80、160 μg/mL）对原代心肌细胞活力的影响;考察速效救心丸（160 μg/mL）对乌头碱（8 μmol/L）诱发心律失常的心肌细胞搏动频率、搏动幅度的影响;舌下iv乌头碱50 μg/kg制备大鼠心律失常模型,利用八导生理记录仪观察速效救心丸（54、270 mg/kg）对Ⅱ导联心电图的影响。结果 20 000/孔为最佳接种浓度,CI值在观察时间内成对数生长,细胞形成同步搏动,波形正常且持续时间长;在10～160μg/mL浓度范围内,速效救心丸对心肌细胞活力均没有明显影响。RTCA Cardio系统检测结果显示,与模型组比较,速效救心丸能显著降低心肌细胞搏动速率（P<0.01）、显著增加心肌细胞的搏动幅度（P<0.01）。动物实验发现,速效救心丸能有效对抗乌头碱诱导的心律失常、改善乌头碱对实验动物RR间期的抑制作用和对心率的促进作用、降低乌头碱诱导的室颤发生率（P<0.01、0.001）。结论 RTCA Cardio系统能实现对心肌细胞的实时监测,可以检测心肌细胞的搏动情况;速效救心丸能有效对抗乌头碱诱导的心律失常。     

丹参酮ⅡA通过抑制PI3K/Akt通路逆转人喉癌细胞顺铂耐药的机制研究

目的 研究丹参酮Ⅱ_A对人喉癌细胞顺铂耐药的影响作用及机制。方法 以不同质量浓度（0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 mg/L）顺铂干预对数生长期人喉癌Hep-2细胞和人喉癌顺铂耐药细胞（Hep-2/DDP）48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算半数抑制浓度（IC₅₀）和耐药指数（RI）。以不同质量浓度（0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 mg/L）丹参酮Ⅱ_A干预对数生长期Hep-2细胞48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算IC₅₀;采用丹参酮Ⅱ_A（IC₅₀5.32 mg/L）＋不同质量浓度（0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 mg/L）顺铂干预对数生长期Hep-2/DDP细胞48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算2种药物联用的IC₅₀和逆转倍数（RF）。取对数生长期Hep-2/DDP细胞,设置对照组、顺铂组、丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组、丹参酮Ⅱ_A＋顺铂＋胰岛素样生长因子-1（IGF-1）组。各组分别给药干预48 h后,采用CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞增殖抑制率和凋亡率,Western blotting法检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）、激活型半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、cleaved Caspase-9、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B（Akt）蛋白表达情况。结果 顺铂对Hep-2细胞的IC₅₀为4.58 mg/L,对Hep-2/DDP细胞的IC₅₀为14.09 mg/L,RI为3.08;丹参酮Ⅱ_A对Hep-2细胞的IC₅₀为5.32 mg/L;丹参酮Ⅱ_A联合顺铂对Hep-2/DDP细胞的IC₅₀为3.34 mg/L,RF为4.22。与对照组比较,顺铂组Hep-2/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高（P<0.01）;与顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组Hep-2/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高（P<0.05）;与丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂＋IGF-1组Hep-2/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率显著降低（P<0.05）。与对照组相比,顺铂组Hep-2/DDP细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达量和Bax/Bcl-2值显著升高（P<0.05）。与顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组Hep-2/DDP细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达量和Bax/Bcl-2值显著升高（P<0.05）。与丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂＋IGF-1组Hep-2/DDP细胞Bcl-2表达量显著升高,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达量和Bax/Bcl-2值显著降低（P<0.05）。与对照组相比,顺铂组Hep-2/DDP细胞p-PI3K、p-Akt表达量及PI3K、Akt磷酸化（p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt）水平显著降低（P<0.05）。与顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组Hep-2/DDP细胞p-PI3K、p-Akt表达量及PI3K、Akt磷酸化水平显著降低（P<0.05）。与丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂＋IGF-1组Hep-2/DDP细胞p-PI3K、p-Akt表达量及PI3K、Akt磷酸化水平显著升高（P<0.05）。结论 丹参酮Ⅱ_A可逆转人喉癌细胞顺铂耐药,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt通路活化而促进喉癌细胞凋亡有关。     

纳米氧化铁颗粒tk及hprt基因突变试验比较研究

目的 使用L5178Y细胞分别开展tk基因突变试验和hprt基因突变试验评价纳米氧化铁颗粒（iron oxidenanoparticle, IONP）的潜在基因突变风险,比较两种方法的灵敏性。方法 不同质量浓度的PEG-IONP（31.25、62.5、125、250、500 μg/mL）分别与细胞作用3 h,于给药后第0、2、6天将细胞接种于96孔板继续培养9～10 d,用于计算平板接种效率。分别在给药后第2天或第6天加入三氟胸苷（TFT）和6-硫鸟嘌呤（6-TG）作为tk基因和hprt基因选择剂,继续培养14 d后分析基因突变频率。试验平行设置灭菌注射用水溶媒对照组和甲基甲烷磺酸酯（MMS,10 μg/mL）阳性对照组。结果 溶媒对照组和阳性对照组的hprt基因突变率均低于tk基因突变率,且统计学结果提示hprt基因突变试验数据获得显著性差异的起始浓度（250 μg/mL）高于tk基因突变试验（125 μg/mL）。但整体而言两种试验方法对PEG-IONP的评价结果一致。结论 PEG-IONP可引起小鼠淋巴瘤L5178Y细胞tk基因及hprt基因突变率显著性升高。该研究结果可为纳米材料基因突变风险评价的选择提供借鉴与参考。     

天麻多糖对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

摘 要 目的:研究天麻多糖（polysaccharides from gastrodia elata blume,GEP）对皮质酮(corticosterone, CORT)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法: 采用水提醇沉法提取,经Sevag法脱蛋白及透析处理制得GEP。将培养好的细胞分为正常对照组、模型组（200 μmol·L^-1 CORT）和GEP高（1 000 μg·ml^-1）、中（500 μg·ml^-1）、低（250 μg·ml^-1）剂量组。GEP与CORT共孵PC12细胞48 h后,采用MTT比色法判断细胞损伤的程度;化学比色法测定乳酸脱氢酶的释放量;倒置显微镜和DAPI荧光染色法观察PC12细胞凋亡形态。结果:与正常对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01),LDH释放量增加,且凋亡细胞增多。当给予GEP后,各剂量组均能显著降低LDH释放量,细胞存活率增加,凋亡细胞显著减少(P<0.01)。结论:GEP对皮质酮诱导PC12细胞损伤具有一定的保护作用,为GEP的临床应用提供试验依据。     

HPLC法测定肌瘤化消颗粒中淫羊藿苷和丹参酮ⅡA

目的 建立测定肌瘤化消颗粒中淫羊藿苷和丹参酮II_A的HPLC法。方法 采用高效液相色谱法,Diamonsil^TM C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相：乙腈-水,梯度洗脱;检测波长为270 nm;柱温为40℃;体积流量为1.0 mL/min;进样量10 μL。结果 淫羊藿苷在7.5～50 μg、丹参酮II_A在3～20 μg与峰面积的线性良好（r=0.999 9）。平均回收率分别为100.2%、100.1%,RSD值分别为0.9%、1.3%（n=9）。结论 本法操作简便,重现性好,可有效控制肌瘤化消颗粒的质量。     

子宫内膜异位症患者与健康女性的经血源间充质干细胞自噬功能比较研究

目的 比较子宫内膜异位症（EMT）患者与健康女性的经血源间充质干细胞（MenSCs）的自噬功能。方法 分别从EMT患者及健康女性的月经血中提取EMT MenSCs（E-MenSCs）和正常MenSCs（H-MenSCs）,并借助成脂、成骨诱导分化鉴定其干细胞属性。通过CCK-8法比较E-MenSCs和H-MenSCs在12、24、48、72、96、120 h时刻于波长450 nm的吸光度（A）值,并绘制细胞增殖曲线,比较2组细胞的细胞活力;运用透射电镜观察E-MenSCs与H-MenSCs的细胞形态,检测比较其中自噬体和自噬溶酶体的数量;采用Western blotting法检测E-MenSCs和H-MenSCs中自噬标志物微管相关蛋白轻链3-II（LC3-II）和Beclin1的蛋白表达。结果 E-MenSCs和H-MenSCs均为长梭形,呈辐射状扩散,且经成脂、成骨诱导分化后均有脂滴、钙结节形成。与H-MenSCs比较,E-MenSCs在72、96、120 h的细胞活力均显著升高（P<0.01、0.001）,自噬体和自噬溶酶体数量显著减少（P<0.05、0.01）,且LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达量也显著降低（P<0.05）。结论 与H-MenSCs比较,E-MenSCs的自噬功能减弱,这可能是EMT发病进展的潜在机制。     

1,2,3,4,6-O-五没食子酰基葡萄糖对MPP+诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的 考察1,2,3,4,6-O-五没食子酰基葡萄糖(1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-β-D-glucose,β-PGG)对MPP⁺诱导的帕金森病细胞模型中PC12细胞凋亡的保护作用及其机制研究。方法 PC12细胞孵育于高糖DMEM培养基中,在药物处理前1周,将神经生长因子(NGF)加入培养基中,使培养基中NGF的终质量浓度为50 ng/mL。将细胞分为对照组、MPP⁺组以及50 μmol/L β-PGG预处理7、12、20、30 h组,观察预处理不同时间对MPP⁺中PC12细胞存活影响。采用台盼蓝染色法检测细胞死亡情况,MTT法检测细胞活力,免疫印迹法检测Bcl-2、Bax、Fas、FasL、procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9蛋白表达情况,并检测caspase-3、caspase-8、caspase-9活力。结果 对照组PC12细胞死亡率最低,MPP⁺组PC12细胞死亡率最高,从β-PGG预处理12 h起PC12细胞死亡率较MPP⁺组均明显降低(P< 0.01)。MPP⁺组PC12细胞活力最低,50 μmol/L β-PGG预处理12 h时PC12细胞活力进一步增高,预处理20 h时细胞活力最高。β-PGG预处理5 h后即可见Bcl-2、procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9蛋白含量增加,至15 h时增加达到高峰;与之相反的是,β-PGG预处理5 h后即可见Bax、Fas、FasL蛋白含量减少,至30 h时达最少。50 μmol/L β-PGG预处理PC12细胞15 h后caspase-3、caspase-8、caspase-9的活力分别为MPP⁺组的36.5%、40.2%、42.2%。结论 β-PGG对MPP⁺诱导PC12细胞凋亡具有保护作用,其机制是通过增强Bcl-2的表达、抑制Bax、Fas、FasL的表达以及降低caspase-3、caspase-8、caspase-9的活力实现了抑制MPP⁺引起的PC12细胞凋亡,促进PC12细胞的存活。     

延龄草苷对脂多糖刺激的小胶质细胞炎症抑制作用

目的 探讨延龄草苷（trillin）对小胶质细胞（BV-2）的炎性激活的抑制作用。方法 不同浓度的延龄草苷孵育0.5 h,然后用脂多糖进行刺激,培养24 h后收集上清,Greiss法检测NO浓度;CCK-8检测延龄草苷对小胶质细胞活力的影响;Elisa检测肿瘤坏死因子（TNF-α）的浓度;实时定量PCR（RT-PCR）检测TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS、COX-1、COX-2基因的表达。结果 在不影响细胞活力的前提下,延龄草苷能明显抑制NO的释放,同时能抑制激活诱导细胞死亡,能明显抑制TNF-α的产生,能明显抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS、COX-2 mRNA的表达,但是不能抑制COX-1 mRNA的表达。结论 延龄草苷可以抑制LPS诱导的小胶质细胞的炎性激活,抑制炎性基因的表达。     

Bhas 42细胞转化试验高通量检测方法的建立

目的 建立基于96孔板的Bhas 42细胞转化试验高通量检测方法，并探讨此方法用于药物非临床阶段体外致癌性评价的前景。方法 建立Bhas 42细胞转化试验96孔板高通量检测方法，使用已知阳性诱癌物苯并芘（Benzoapyrene，BaP）和环磷酰胺（Cyclophosphamide，CP）为对照品，比较转化灶人工计数法和过氧化氢高通量96孔板法对结果判定的影响。进行试验的细胞在接种后第19天以一定浓度的过氧化氢处理细胞24 h。24 h后，洗去含过氧化氢的培养基，加入新鲜培养基并加入CCK-8染色孵育2~4 h后测定450 nm波长吸光度以确定细胞转化率。同时，转化灶人工计数法细胞在第21天经甲醇固定，吉姆萨染液染色后计数每孔克隆数，对比两种方法的差异性。结果 转化灶人工计数法中，与阴性对照组比较，BaP和CP在启动试验中均被评价为阳性；过氧化氢高通量法得到与转化灶人工计数法相同的结果。结论 成功建立了基于96孔板的Bhas 42细胞转化试验的过氧化氢高通量检测方法，该方法相比于传统方法可简单、快速地检测化合物诱导Bhas42细胞的转化效率，并提高了结果评判的客观性。     

消癌平注射液联合紫杉醇对人卵巢癌SK-OV-3细胞增殖及裸鼠异位移植瘤生长的作用

目的 研究消癌平（XAP）注射液和紫杉醇（PTX）联合应用对人卵巢癌SK-OV-3细胞增殖及裸鼠异位移植瘤的抑制作用。方法 将生长至对数期的人卵巢癌SK-OV-3细胞分为6组：对照组、紫杉醇组（10 nmol/L）、消癌平注射液低、高剂量组（20、80 μl/ml）、消癌平注射液低、高剂量联合组（PTX 10 nmol/L+XAP 20 μl/ml、PTX 10 nmol/L+XAP 80 μl/ml）,各组分别加入药物干预24 h或48 h后,MTT法测定并计算细胞存活率。将36只雌性荷人卵巢癌细胞SK-OV-3的异位移植瘤裸鼠随机分为6组,包括对照组（G1：生理盐水）、紫杉醇组（G2：PTX 10 mg/kg）、消癌平注射液低、高剂量组（G3：XAP 20 ml/kg、G4：XAP 50 ml/kg）、低剂量联合组（G5：PTX 10 mg/kg+XAP 20 ml/kg）以及高剂量联合组（G6：PTX 10 mg/kg+XAP 50 ml/kg）,每组6只。各治疗组予相应药物治疗18 d,观察记录小鼠一般情况、体重、肿瘤体积,并计算抑瘤率。结果 SK-OV-3细胞体外实验结果显示,与对照组相比,消癌平注射液、低剂量联合组和高剂量联合组的SK-OV-3细胞存活率均显著降低（P<0.05或P<0.01）,且联合用药组与紫杉醇组相比,也有显著差异（P<0.05）,并呈现剂量和时间依赖性。裸鼠异位移植瘤实验结果显示,高剂量联合组的抑瘤率明显高于对照组和紫杉醇组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 消癌平注射液和紫杉醇联用对人卵巢癌细胞SK-OV-3裸鼠异位移植瘤的抑制具有协同作用（P<0.05）。     

基于人肝癌细胞系SMMC-7721的三维培养条件研究

目的 基于人肝癌细胞系SMMC-7721考察合适的海藻酸钠、氯化钙浓度,形成良好的海藻酸钙凝胶,优选三维条件下肿瘤细胞的培养条件。方法 在96孔板中培养SMMC-7721细胞,基于L₉（3⁴）正交表设计实验,以MTT法检测并计算氯化钙溶液、柠檬酸钠溶液不同浓度与作用时间下的细胞存活率;结合正交优选结果,考察适宜的海藻酸钠浓度,筛选适合的成胶、溶胶条件,并在三维培养模式下进行细胞活力确证。结果 最佳凝胶应用条件为1%氯化钙溶液与1%海藻酸钠溶液作用15 min内用于成胶,10%柠檬酸钠溶液作用凝胶10 min内用于溶胶,MTT法检测细胞存活率为94.97%。该三维培养条件下的肝癌细胞72 h内生长状态良好,存活率可达92.10%,细胞堆积紧密,出现肿瘤细胞球样聚集体。结论 本实验筛选出适合肿瘤细胞三维培养的成胶、溶胶条件。在该条件下培养肝癌细胞SMMC-7721,细胞生长状态良好,且细胞生长与聚集形态与传统二维培养存在差异,更接近细胞体内生存环境。基于该方法进行肿瘤细胞三维培养,可为深入研究肿瘤细胞生长状态,为抗肿瘤药物筛选提供更有利的方式。     

Cytotoxicity of alkaloids isolated from Argemone mexicana on SW480 human colon cancer cell line

Context: Argemone mexicana Linn. (Papaveraceae) has been used as traditional medicine in India and Taiwan for the treatment of skin diseases, inflammations, bilious, fever, etc. Some alkaloids of A. mexicana have been screened for their cytotoxicity on different cancer cell lines.

Objective: The study investigates potential cytotoxic effects of alkaloids isolated from aerial part of A. mexicana on SW480 human colon cancer cell line.

Materials and methods: Six alkaloids, 13-oxoprotopine, protomexicine, 8-methoxydihydrosanguinarine, dehydrocorydalmine, jatrorrhizine, and 8-oxyberberine were isolated from the methanol extract of A. mexicana. Cytotoxicity of these alkaloids was studied on SW480 human colon cancer cell line at 1, 25, 50, 75, 100, 125, 150, and 200?µg/mL for 24 and 48?h. Cells were seeded in a 96-well micro-plate at a concentration of 2?×?10⁴ cells per well and MTS assay was performed to assess cytotoxicity in terms of cell viability.

Results: At 200?µg/mL, protomexicine and 13-oxoprotopine showed mild cytotoxicity (～24–28%) whereas dehydrocorydalmine exhibited moderate cytotoxicity (～48%). 8-Oxyberberine was mildly cytotoxic (～27%) at 24?h but was more potent (～76%) at 48?h. Jatrorrhizine and 8-methoxydihydrosanguinarine were most potent (～95–100%) in inhibiting the human colon cancer cell proliferation showing complete reduction in cell viability.

Discussion and conclusion: This is the first study on the effect of these alkaloids on SW480 human colon cancer cell line. This study indicates that some alkaloids of A. mexicana strongly inhibit the cell proliferation in human colon cancer cells, and it might be a basis for future development of a potent chemotherapeutic drug.     

Cytotoxicity of zinc oxide (ZnO) nanoparticles is influenced by cell density and culture format

A parameter that has often been overlooked in cytotoxicity assays is the density and confluency of mammalian cell monolayers utilized for toxicology screening. Hence, this study investigated how different cell seeding densities influenced their response to cytotoxic challenge with ZnO nanoparticles. Utilizing the same volume (1 ml per well) and concentration range (5–40 μg/ml) of ZnO nanoparticles, contradictory results were observed with higher-density cell monolayers (BEAS-2B cells) obtained either by increasing the number of seeded cells per well (50,000 vs. 200,000 cells per well of 12-well plate) or by seeding the same numbers of cells (50,000) within a smaller surface area (12-well vs. 48-well plate, 4.8 vs. 1.2 cm², respectively). Further experiments demonstrated that the data may be skewed by inconsistency in the mass/number of nanoparticles per unit area of culture surface, as well as by inconsistent nanoparticle to cell ratio. To keep these parameters constant, the same number of cells (50,000 per well) were seeded on 12-well plates, but with the cells being seeded at the edge of the well for the experimental group (by tilting the plate) to form a dense confluent monolayer, as opposed to a sparse monolayer for the control group seeded in the conventional manner. Utilizing such an experimental set-up for the comparative evaluation of four different cell lines (BEAS-2B, L-929, CRL-2922 and C2C12), it was observed that the high cell density monolayer was consistently more resistant to the cytotoxic effects of ZnO nanoparticles compared to the sparse monolayer for all four different cell types, with the greatest differences being observed above a ZnO concentration of 10 μg/ml. Hence, the results of this study demonstrate the need for the standardization of cell culture protocols utilized for toxicology screening of nanoparticles, with respect to cell density and mass/number of nanoparticles per unit area of culture surface.     

Investigation of the role of alginate containing high guluronic acid on osteogenic differentiation capacity of human umbilical cord Wharton’s jelly mesenchymal stem cells

Background and aim: Cell encapsulation using biodegradable material has promising results for tissue engineering. Since pressure is an effective factor on stem cell behaviour and various concentrations of alginate create different pressures on the cells, therefore our goal was to evaluate the mechanical effect of 1/2% (w/v) and 1/8% (w/v) alginate containing high guluronic acid on viability and osteogenic capacity of HUCWJ cells.

Methods: Cell viability was evaluated by MTT assay after 1, 7 and 14 days. Alkaline phosphatase activity was evaluated by alkaline phosphatase assay kit after 14 and 21 days. Alizarin red S staining was performed for calcium deposition among histological section.

Results: MTT assay showed significant difference in the mean of viability rates between groups in day 14 (p 相似文献   

3种常用抗癌药物对人肝癌细胞HepG2抑制作用的研究

目的：研究3种常用抗癌药物对于HepG2细胞的抑制情况。方法：细胞铺96孔板,3种抗癌药物以不同浓度给药,每浓度设3复孔,不加药组做空白对照,MTT法测定,以抑制率对药物浓度作图。结果：在1～420μg／mL浓度范围内,5-氟尿嘧啶抑制效果最差;20～300μg/mL丝裂霉素C抑制效果好于长春新碱;1～20μg／mL和300—420μg／mL浓度范围内,长春新碱抑制效果好于丝裂霉素C。结论：该方法评价对比了3种常用的抗癌药物对于人肝癌细胞的抑制效果,为药物筛选中阳性药物的选择提供一定借鉴。     

五味子提取工艺优化及乙醇提取物的皮肤细胞抗氧化作用研究

目的 探究五味子提取物对人皮肤细胞氧化损伤的保护作用,开发其在皮肤抗氧化方面的应用。方法 分别采用热水蒸煮和水蒸气蒸馏的方法进行脱色和除味;另外,采用叔丁基过氧化氢（tBHP）诱导的HaCaT细胞氧化应激模型评价五味子提取物对人皮肤细胞氧化损伤的保护作用,采用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡率,2,7-二氯荧光黄双乙酸盐法检测细胞内活性氧的水平。结果 采用优化后的提取工艺得到了气味变淡且颜色明显变浅的五味子提取物;用北五味子提取物预处理HaCaT细胞6 h后,可有效降低tBHP引起的细胞凋亡,提高细胞存活率,降低细胞内ROS水平。结论 优化后的乙醇提取工艺显著改善了五味子提取物的颜色和气味,并保持了提取物的抗氧化活性,因而有望成为一种应对皮肤氧化损伤的外用保护剂。     

Wound healing activity of Pluchea indica leaf extract in oral mucosal cell line and oral spray formulation containing nanoparticles of the extract

Context: Pluchea indica (L.) Less (Asteraceae) is an herb used as a traditional medicine for wound healing. The chemical compounds found in Pluchea indica leaves are phenolic acids, flavonoids, anthocyanins and carotenoids.

Objective: This study investigates the effect of Pluchea indica leaf ethanol extract and its nanoparticles (NPs) on cytotoxicity, cell survival and migration of human oral squamous carcinoma cell line.

Materials and methods: Cell viability was measured using MTT assay to assess the effect of Pluchea indica leaf extract and NPs (1–500?μg/mL) on cytotoxicity and cell survival. The effect of Pluchea indica leaf extract and NPs on cell migration was determined by scratch assay. The % relative migration was calculated after 24, 48 and 72?h of treatment.

Results: The sizes of Pluchea indica leaf extract NPs were in a range of nanometers. NPs possessed negative charge with the polydispersity index (PDI) smaller than 0.3. After the treatment for 24, 48 and 72?h, Pluchea indica leaf extract had IC₅₀ value of 443.2, 350.9 and 580.5?μg/mL, respectively, whereas the IC₅₀ value of NPs after the treatment for 24, 48 and 72?h were 177.4, 149.2 and 185.1?μg/mL, respectively. The % relative migration of cells was significantly increased when the cells were treated with 62.5 and 125?μg/mL of the extract and 62.5?μg/mL of NPs.

Discussion and Conclusions: NPs increased cytotoxicity of the Pluchea indica leaf extract, increased the migration of cells at low concentration and increased colloidal stability of the extract in an oral spray formulation.