探究山柰酚对肺癌细胞阿霉素耐药敏感性的作用机制

目的 基于转化生长因子β₁/Ras相关C3肉毒素底物1(transforming growth factor β₁/rasrelated C3 botulinum toxin substrate,TGF-β₁/Rac1)信号通路,探究山柰酚对肺癌细胞阿霉素耐药敏感性的作用机制。方法 将H1299/R细胞分为空白组(control group,NC)、山柰酚低、中、高剂量组、TGF-β₁抑制剂组、Rac1抑制剂组、山柰酚高剂量+TGF-β₁抑制剂组、山柰酚高剂量+Rac1抑制剂组以及山柰酚高剂量+TGF-β₁抑制剂+Rac1抑制剂组。MTT检测细胞生长抑制率和细胞耐药敏感性;采用流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell小室检测细胞侵袭;免疫印迹检测细胞中TGF-β₁和Rac1蛋白表达。结果 和NC组相比,山柰酚低、中、高剂量组、TGF-β₁抑制剂组及Rac1抑制剂组的H1299/R细胞半数抑制浓度(half in...     

裂果薯皂苷单体Ⅰ通过TGF-β1调控上皮间质转化对人肝癌细胞SMMC-7721侵袭和转移的影响

目的探究裂果薯皂苷单体Ⅰ通过转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人肝癌细胞SMMC-7721侵袭和转移的影响。方法MTT法检测SMMC-7721细胞的增殖活性;用TGF-β1刺激细胞24 h,以TGF-β1/Smad信号通路抑制剂SIS3作阴性对照。细胞划痕实验和Tran-swell小室侵袭实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测Smad7、Smad2/3、p-Smad2/3、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果SSPHⅠ能抑制SMMC-7721细胞的增殖,其24 h的IC50为1.72μmol·L^-1;与TGF-β1组相比,TGF-β1+SSPHⅠ组细胞迁移率和侵袭细胞数显著降低;Western blot实验结果显示,TGF-β1+SSPHⅠ组的Smad2/3,p-Smad2/3,N-cadherin和Vimentin蛋白的表达降低,Smad7和E-cadherin表达升高,结果与TGF-β1+SIS3组相同(P均<0.05)。结论SSPHⅠ能抑制SMMC-7721细胞侵袭和转移,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad信号通路,阻断EMT发生有关。     

紫草素调控转化生长因子β1/Smad信号通路抑制人非小细胞肺癌A549细胞上皮-间充质转化和迁移能力

目的 探讨紫草素对转化生长因子β₁(TGF-β₁)诱导的人非小细胞肺癌A549细胞迁移、上皮-间充质转化(EMT)的影响及机制。方法 (1)紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L^-1作用A549细胞24 h,ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β₁水平。(2)设细胞对照组、TGF-β₁9 pmol·L^-1组、TGF-β₁+紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L^-1组,作用A549细胞24 h,分别采用划痕和Transwell实验检测细胞划痕愈合百分率和迁移细胞数,Western印迹法检测N-钙黏蛋白、锌指转录因子Snail、E-钙黏蛋白、Smad4、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)蛋白水平及Smad2和Smad3蛋白磷酸化水平。结果 (1)与细胞对照组比较,紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L^-1作用于A549细胞24 h后均未显著改变细胞培养上清液中TGF...     

小檗碱通过TGF-β/Smad通路抑制TGF-β1诱导的人肝癌HepG2细胞上皮间质转化的研究

目的探讨小檗碱(berberine)对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人肝癌HepG2细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用及其机制。方法MTT法检测小檗碱对HepG2细胞增殖活性;采用10 ng·L-1 TGF-β1诱导HepG2细胞EMT模型形成,并加入小檗碱处理;克隆形成实验、细胞划痕和Transwell小室实验分别检测HepG2细胞的克隆形成能力、迁移和侵袭能力;免疫荧光法检测EMT间质标志物Vimentin的表达;Western blot法检测EMT标志物蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Snail)、基质金属蛋白酶(MMP-2)、TGF-β/Smad通路蛋白(Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3)的表达。结果小檗碱呈浓度时间依赖性抑制HepG2细胞活性;与TGF-β1组比较,小檗碱可以明显抑制HepG2细胞的克隆形成能力、迁移和侵袭能力;并且小檗碱可以抑制TGF-β1上调的E-cadherin蛋白表达,和TGF-β1下调的N-cadherin、Vimentin、Snail、MMP-2、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达。结论小檗碱可能通过抑制TGF-β/Smad信号通路,干预TGF-β1诱导HepG2细胞的EMT进程,抑制HepG2细胞的迁移和侵袭能力。     

田蓟苷对动脉粥样硬化模型小鼠的改善作用及机制研究

目的研究田蓟苷对动脉粥样硬化(AS)模型小鼠的改善作用及可能机制。方法以8只C57BL/6J小鼠作为正常组;将40只载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠随机分为模型组,田蓟苷低、中、高剂量组[2.1、3.5、7.0 mg/(kg·d)]和辛伐他汀组[阳性对照药物,3.5 mg/(kg·d)],每组8只。正常组小鼠饲以普通饲料,其余各组小鼠饲以高脂饲料建立AS模型。同时,正常组和模型组小鼠灌胃生理盐水,各给药组小鼠灌胃相应药液,每天1次,连续12周。测定小鼠血浆中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;观察小鼠主动脉病理形态学变化;测定小鼠主动脉中细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞间黏附分子1(VCAM-1)和增殖细胞核抗原(PCNA)的阳性率;测定小鼠主动脉中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、转化生长因子(TGF-β₁)、Smad2、Smad3 mRNA的表达水平以及TGF-β₁、Smad2/3、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)蛋白的表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠血浆中TC、TG、LDL-C、Ox-LDL、IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α水平均显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01);主动脉有脂质斑块生成,且斑块面积较大并致使管腔严重狭窄;主动脉中MMP-2、MMP-9、TGF-β₁、Smad2和Smad3 mRNA的表达水平,ICAM-1、VCAM-1、PCNA蛋白表达阳性率以及TGF-β₁、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白的表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组上述指标水平大部分均显著回调(P<0.05或P<0.01)。结论田蓟苷可能是通过抑制TGF-β₁/Smads信号通路的激活,进而抑制血管平滑肌细胞增殖、减轻炎症反应、调节脂质代谢来抑制AS的形成。     

白芷提取物介导转化生长因子-β/Smad2通路对糖尿病大鼠感染性溃疡性愈合效果的影响及相关机制

目的 探究白芷提取物介导转化生长因子-β(TGF-β)/Smad2通路对糖尿病大鼠感染性溃疡愈合效果的影响及相关机制。方法 100只雄性SD大鼠采用随机数字表法分成对照组、模型组和白芷提取物低、中、高剂量组(3.8、7.5、15 mg/kg),每组20只。制备糖尿病大鼠感染性溃疡模型,观测各组创面情况(创面温度、红肿范围、溃疡面积和病理变化),对大鼠创面组织进行菌落计数,采用免疫组织化学法检测创面组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和血管内皮生长因子(VEGF)表达,蛋白质免疫印迹法检测创面组织中TGF-β₁、Smad2和磷酸化Smad2(p-Smad2)蛋白表达。结果 与模型组比较,白芷提取物中剂量组给药14、21 d(t_14d=4.377,t_21d=3.513,P<0.05)、高剂量组给药3、7、14、21 d(t_3d=3.049,t_7d=5.166,t_14d=6.175,t_21d=5.270,P<0.05)创面温度降低...     

舒芬太尼减轻大鼠肝缺血再灌注损伤的机制研究

目的 探讨舒芬太尼预处理减轻大鼠肝缺血再灌注损伤（HIRI）的作用机制。方法 48只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为：假手术组（S组）、HIRI组（IR组）、舒芬太尼预处理+HIRI组（SF组）、转化生长因子β₁（TGF-β₁）抑制剂+舒芬太尼预处理+HIRI组（SB组）、TGF-β₁激动剂+舒芬太尼预处理+HIRI组（SRI组）和二甲基亚砜（DMSO）+HIRI组（DMSO组）,每组8只,于造模完成后4 h取材。HE染色观察肝组织的形态变化;收集腹主动脉血测定各组丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平;制备10%肝组织匀浆,测定各组丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）水平;TUNEL法检测肝细胞凋亡率;Western blot法检测肝组织TGF-β₁及Smad2/3、p-Smad2/3、p38、p-p38蛋白表达水平。结果 与S组相比,其余各组损伤程度加重,ALT、AST、MDA水平及肝细胞凋亡率升高（P<0.05）,SOD水平降低（P<0.05）,IR组、SF组、SRI组中TGF-β₁、p-Smad2/3、p-p38蛋白表达水平升高（P<0.05）,SB组中TGF-β₁、p-p38蛋白表达水平升高（P<0.05）。与IR组比较,SF组及SRI组损伤程度减轻,ALT、AST、MDA水平降低,肝细胞凋亡率降低,p-p38蛋白表达水平均降低（P<0.05）,SOD水平升高,TGF-β₁、p-Smad2/3蛋白表达水平均升高（P<0.05）;SB组损伤程度加重,ALT、AST、MDA水平,肝细胞凋亡率,p-p38蛋白表达水平均升高（P<0.05）,SOD水平和TGF-β₁、p-Smad2/3蛋白表达水平均降低（P<0.05）。与SF组比较,SB组损伤程度加重,ALT、AST、MDA、肝细胞凋亡率及p-p38蛋白表达水均升高（P<0.05）,SOD、TGF-β₁、p-Smad2/3蛋白表达水平均降低（P<0.05）;而SRI组损伤程度减轻,ALT、AST、肝细胞凋亡率、p-p38蛋白表达水均降低（P<0.05）,SOD、TGF-β₁、p-Smad2/3蛋白表达水平均升高（P<0.05）。结论 舒芬太尼预处理可能通过激活TGF-β/Smad信号通路和抑制p38 MAPK磷酸化,减轻肝细胞凋亡和氧化应激,从而发挥对大鼠HIRI的保护作用。     

贝那普利对氧化低密度脂蛋白诱导的肾小管上皮细胞间质转化及转化生长因子-β/Smad通路的影响

目的探讨贝那普利对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化(EMT)及转化生长因子-β(TGF-β)/Smad通路的影响。方法体外培养NRK-52E细胞,分为对照组、ox-LDL组(50μg/mL ox-LDL)、贝那普利组(50μg/mL ox-LDL+10μmol/L贝那普利)、TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1)、贝那普利+TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1+10μmol/L贝那普利)。高倍光学显微镜观察各组NRK-52E细胞表型变化;免疫荧光染色法检测EMT标志性蛋白α-SMA、E-cadherin荧光强度;免疫印迹法检测各组NRK-52E细胞中α-SMA、E-cadherin蛋白及TGF-β/Smad通路蛋白表达水平。结果与对照组比较,ox-LDL组梭形或不规则形细胞增多,α-SMA荧光强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05);E-cadherin荧光表达强度减弱,蛋白量明显降低(P0.05)。与ox-LDL组比较,贝那普利组细胞表型改变明显减轻,α-SMA荧光表达强度明显减弱,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P0.05);TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05),Ecadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P0.05)。与贝那普利组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度明显增强,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P0.05)。与TGF-β1组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、pSmad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P0.05)。结论贝那普利可逆转ox-LDL诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化的发生,机制可能是通过抑制TGF-β/Smad通路活化而发挥作用。     

miR-144通过TGF-β/Smad通路抑制前列腺癌细胞的增殖侵袭

摘要：目的:观察微小RNA（miR）-144对前列腺癌细胞增殖侵袭的影响及其对转化生长因子-β（TGF-β）/Smad信号通路的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测LNCaP、PC-3、SW1990人前列腺癌细胞和RWPE-1人正常前列腺上皮细胞中miR-144的表达水平;以miR-144表达量最低的PC-3细胞和表达量最高的LNCaP细胞作为研究对象,转染miR-144 mimics-NC序列为NC组,转染miR-144 mimics序列为miR-144过表达（mimics）组,荧光显微镜观察转染情况; qRTPCR检测转染后miR-144的表达水平,细胞活力检测试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭能力,生物信息学预测及荧光素酶报告基因检验miR-144的潜在靶基因,蛋白免疫吸附法（Western Blot）检测TGF-β/Smad通路蛋白表达水平。结果:与正常前列腺上皮细胞RWPE-1比较,LNCaP、PC-3、SW1990前列腺癌细胞中miR-144的表达水平均显著降低（P<0.05）,miR-144 mimics转染后细胞转染效率均达到90%以上。与NC组比较,mimics组细胞中miR-144的相对表达水平显著升高,细胞的增殖活性和侵袭能力显著降低（P<0.05或P<0.01）。与TGF-β-Wt+miR-144 mimics-NC共转染组比较,TGF-β-Wt+miR-144 mimics转染组荧光素酶活性显著降低（P<0.05）。TGF-β转录本3’UTR区域具有miR-144的潜在靶点,miR-144潜在靶基因为TGF-β,在24～120 h,与miR-144 mimics-NC组相比,miR-144 mimics、miR-144 mimics+TGF-β组细胞活性显著降低（P<0.05）;与miR-144 mimics组相比,miR-144 mimics+TGF-β组细胞活性显著升高（P<0.05）。与NC组比较,mimics组细胞中p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3水平及TGF-β、TGF-βR蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。结论:miR-144可能通过TGF-β/Smad信号通路抑制前列腺癌细胞的增殖及侵袭。     

玉夏胶囊对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响

目的:观察玉夏胶囊对自发性高血压（SHR）大鼠心肌纤维化的影响及可能机制。方法:SHR 28只,随机分为模型组（0.5%CMC-Na5 m L/kg）、玉夏胶囊高（0.6 g/kg）、中（0.3 g/kg）、低（0.15 g/kg）剂量组,每组7只。另设Wistar-Kyoto（WKY）正常对照组（0.5%CMC-Na 5 m L/kg）大鼠7只。每天灌胃一次,连续10周。VG染色观察心肌胶原纤维变化;检测心肌羟脯氨酸（Hyp）、血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）含量;免疫组化法检测转化生长因子β₁（TGF-β₁）蛋白的表达;Western blot检测心肌Ⅰ型胶原纤维（Col Ⅰ）、Ⅲ型胶原纤维（Col Ⅲ）和结缔组织生长因子（CTGF）蛋白的表达。结果:玉夏胶囊能减轻SHR心肌组织胶原纤维沉积,降低Hyp和Ang Ⅱ的含量,减少TGF-β₁、CTGF、Col Ⅰ和ColⅢ的蛋白表达。结论:玉夏胶囊可改善SHR的心肌纤维化,其机制可能与降低Ang Ⅱ含量,下调TGF-β₁和CTGF表达,减少Hyp、Col Ⅰ和Col Ⅲ产生有关。     

血清TGF-β1、FOXM1 m RNA表达水平与支气管哮喘患儿气道重塑的影响研究

目的 探讨血清转化生长因子-β₁(TGF-β₁)、叉头框蛋白M1(FOXM1)mRNA表达水平与支气管哮喘(BA)患儿气道重塑的影响。方法 选取2020年8月至2021年9月我院收治的110例BA患儿作为本次研究对象,依据《儿童支气管哮喘诊断与防治指南(2016年版)》将110例BA患儿分为急性发作组(n=56)和临床缓解组(n=54)。对两组的血清TGF-β₁、FOXM1 mRNA、气道重塑相关指标(T/D、WA)、肺功能相关指标(FEV₁、FEV₁/FVC)水平进行检测并比较。采用Pearson分析急性发作期BA患儿血清TGF-β₁、FOXM1 mRNA水平和肺功能及气道重塑指标的相关性。通过多因素Logistic回归分析方法分析影响BA患儿急性发作的因素,建立风险评估模型,经受试者工作特征曲线(ROC)评估模型诊断效能。结果 与临床缓解组相比较,急性发作组血清TGF-β₁、FOXM1 mRNA水平和T/D、WA水平较高,FEV<...     

血清TGF-β1、INF-ε及microRNA-21在宫颈癌及癌前病变中的表达变化及与HPV感染的相关性

目的 分析血清转化生长因子-β₁(TGF-β₁)、人干扰素epsilon(INF-ε)及microRNA-21在宫颈癌及癌前病变中的表达变化及与高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染负荷量的相关性。方法 选择医院2020年1月～2021年1月诊治的宫颈癌和宫颈癌前病变患者各80例,将其分别纳入宫颈癌组、癌前病变组。按照1∶1原则在同期选择体检健康的女性80例,将其纳入对照组。检测血清TGF-β₁、INF-ε及microRNA-21水平及HPV感染情况。比较三组血清TGF-β₁、INF-ε及microRNA-21水平及不同HPV阳性情况。分析血清TGF-β₁、INF-ε及microRNA-21水平与HPV负荷量相关性。结果 对照组、宫颈癌前病变组、宫颈癌组血清TGF-β₁、INF-ε及microRNA-21水平比较差异均有统计学意义(P<0.05);其中宫颈癌患者血清TGF-β₁、microRNA-21水平分别高于宫颈癌前病变组、...     

大蒜素通过TGF-β1/Smads通路抑制2型糖尿病大鼠肝纤维化的研究

摘要：目的:探讨大蒜素对2型糖尿病大鼠肝脏纤维化和转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smads信号通路的影响。方法:60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、二甲双胍组(阳性对照,200 mg·kg-1)和大蒜素低、中、高剂量组(5,10,20 mg·kg-1)。正常对照组大鼠常规饲养,其余各组通过高糖高脂饲料喂养加腹腔注射链尿佐菌素（STZ）制备2型糖尿病大鼠模型。造模完成后,各组均1次/d灌胃给药（正常对照组和模型组灌胃给予生理盐水）。4周后,测定空腹血糖（FBG）水平;生化分析法检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）、白蛋白（Alb）水平;化学发光法检测血清透明质酸（HA）、层黏连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）水平;HE染色观察肝组织病理学改变,Masson染色观察肝组织纤维化状况并计算胶原容积分数（CVF）;Western blotting法检测肝组织转化生长因子β1（TGF-β1）、磷酸化Smad2（p-Smad2）、p-Smad3、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白（CollagenⅠ、CollagenⅢ）表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠FBG水平和血清ALT、AST、TBIL、HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平显著升高（P<0.01）,Alb水平显著降低（P<0.01）;肝组织呈现脂肪变性,肝索排列紊乱,肝细胞肿胀,炎性细胞浸润等病理学改变;肝组织中央静脉周围及汇管区可见胶原纤维增粗并形成纤维隔,CVF显著升高（P<0.01）;肝组织TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3、CollagenⅠ、CollagenⅢ表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,大蒜素中、高剂量组和二甲双胍组FBG水平和血清ALT、AST、TBIL、HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平显著降低（P<0.01）,Alb水平显著升高（P<0.01）;肝组织病理学改变和纤维化状况均明显改善,CVF显著降低（P<0.01）;肝组织TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3、CollagenⅠ、CollagenⅢ表达显著降低（P<0.01）。结论:大蒜素对2型糖尿病大鼠肝纤维化具有抑制作用,其机制可能与抑制TGF-β1/Smads通路进而抑制细胞外基质生成有关。     

芒果苷通过调节miRNA-483-3p减轻良性前列腺增生腺体纤维化

目的 研究芒果苷对良性前列腺增生(BPH)腺体纤维化的改善作用和调节微小RNA(miRNA)-483-3p的作用机制。方法 雄性小鼠随机分为5组：正常对照组、BPH模型对照组、非那雄胺组、芒果苷组和芒果苷+miRNA-483-3p拮抗剂组。通过摘除睾丸和皮下注射丙酸睾酮建立BPH模型。30 d后通过前列腺组织切片行masson和天狼猩红染色,以及检测组织中羟脯氨酸含量评价胶原沉积,实时荧光定量PCR检测前列腺转化生长因子-β₁(TGF-β₁)、丝裂原活化蛋白激酶2(MK2)和丝裂原活化蛋白激酶6(MKK6)的mRNA水平以及miRNA-483-3p的水平,Western blotting检测前列腺TGF-β₁、MK2、磷酸化MK2(p-MK2)、MKK6和磷酸化MKK6(p-MKK6)的蛋白水平,并采用荧光素酶报告评估miRNA-483-3p与MK2的靶向结合能力。结果 与正常对照组比较,BPH模型对照组小鼠的前列腺胶原沉积明显,且TGF-β₁、MK2和MKK6的mRNA水平,以及TGF-β     

红花黄色素通过活性氧影响TGF-β1诱导的卵巢癌SKOV-3细胞生物学特性的机制学研究

摘要：目的:探讨红花黄色素对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的卵巢癌SKOV-3细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法:采用噻唑蓝法检测不同浓度(0.15,0.25,0.50,1.00 mg·L-1)红花黄色素对SKOV-3细胞增殖活力的影响,并根据红花黄色素抑制作用结果将SKOV-3细胞分为对照组、红花黄色素组(0.25 mg·L-1)、TGF-β1组(10 ng·ml-1)和红花黄色素+TGF-β1组(0.25 mg·L-1+10 ng·ml-1),采用噻唑蓝法、Transwell小室实验和划痕实验分别检测各组细胞增殖、侵袭和迁移能力,免疫印迹法检测各组细胞中E-钙黏素、N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达,活性氧检测试剂盒检测各组细胞内活性氧水平。结果:红花黄色素可呈浓度依赖性抑制SKVO3细胞增殖。与对照组相比,10 ng·ml-1TGF-β1处理后SKVO3细胞增殖、侵袭、迁移能力和细胞中N-钙黏蛋白、波形蛋白表达水平以及细胞内活性氧水平明显增强（P<0.05）,且细胞中E-钙黏素蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;而0.25 mg·L-1红花黄色素处理后SKVO3细胞则与TGF-β1处理后的结果相反（P<0.05）;与TGF-β1组相比,红花黄色素联合TGF-β1可明显降低TGF-β1对SKVO3细胞的影响（P<0.05）。结论:红花黄色素可抑制TGF-β1诱导的卵巢癌SKOV-3细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制细胞内活性氧水平,减弱其介导的上皮间质转化有关。     

蛇床子素通过抑制小鼠心肌成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路降低胶原表达的研究

目的 研究蛇床子素降低真核载体pcDNA3.1(+)-TGF-β1转染的小鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts，CFs)胶原的表达是否与抑制TGF-β1/Smad信号通路相关。方法 用真核表达载体pcDNA3.1(+)-TGF-β1转染小鼠CFs，然后在TGF-β1受体抑制剂SB431542预处理或不预处理的情况下，用不同浓度的蛇床子素处理CFs 24 h。ELISA检测上清TGF-β1水平，Western blotting检测细胞内α-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad4和Smad7的蛋白表达。结果 真核表达载体pcDNA3.1(+)-TGF-β1转染CFs后，TGF-β1释放量增加，提示建立了TGF-β1过表达的细胞模型。TGF-β1过表达的CFs经蛇床子素(5~20 μmol·L^-1)处理24 h后，TGF-β1、α-SMA、collagenⅠ、collagenⅢ、p-Smad2/3和Smad4蛋白表达降低，Smad7蛋白表达上升。TGF-β1受体抑制剂SB431542预处理2 h后，蛇床子素对α-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、Smad2/3、p-Smad2/3和Smad4蛋白表达的抑制作用进一步增强。结论 蛇床子素可以通过直接抑制TGF-β1的产生和Smad通路下调α-SMA和胶原蛋白的表达，这可能是其抗纤维化的机制之一。     

槲皮素抑制TGF-β1诱导SMMC-7721人肝癌细胞发生EMT的效果研究CSCD

目的旨在研究槲皮素抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导SMMC-7721人肝癌细胞发生上皮-间质转化(EMT)的效果。方法将肝癌细胞分为对照组(10 ng/ml TGF-β1)、低剂量组(50 nmol/l槲皮素+10 ng/ml TGF-β1)、高剂量组(10 ng/ml TGF-β1+100 nmol/l槲皮素),分别处理6 h,光学显微镜观察肝癌细胞形态学变化。6、12和24 h后,观察肝癌细胞迁移及侵袭能力。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定肝癌细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)mRNA表达。Western blot法测定肝癌细胞E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白。结果经TGF-β1诱导后,肝癌细胞发生明显EMT。划痕实验结果显示,12和24 h时,高剂量组和低剂量组肝癌细胞迁移划痕空隙长度明显低于对照组(P<0.05)。侵袭实验中,与对照组比较,低和高剂量组每视野穿膜肝癌细胞数明显降低,且高剂量组穿膜高于低剂量组(P<0.05)。RT-PCR实验结果显示,对照组E-cadherin mRNA表达明显低于高剂量组和低剂量组(P<0.01),N-cadherin和Vimentin mRNA表达明显高于高剂量组和低剂量组(P<0.01)。低剂量E-cadherin mRNA表达明显低于高剂量组(P<0.01),N-cadherin和Vimentin mRNA表达明显高于高剂量组(P<0.01)。Western blot实验结果显示,对照组E-cadherin蛋白表达明显低于高剂量组和低剂量组(P<0.01),N-cadherin、Vimentin蛋白明显高于高剂量组和低剂量组(P<0.01)。高剂量组E-cadherin蛋白表达明显高于低剂量组(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显低于低剂量组(P<0.01)。结论槲皮素通过增加E-cadherin蛋白表达表达,降低N-cadherin、Vimentin蛋白表达,使得TGF-β1诱导的肝癌细胞EMT得到明显抑制。     

长链非编码RNA PCGEM1通过转化生长因子β2/果蝇母源抗皮肤生长因子蛋白2信号通路调控膀胱尿路上皮癌细胞侵袭和转移的研究

目的 探讨长链非编码RNA PCGEM1（LncRNA PCGEM1）通过转化生长因子β2/果蝇母源抗皮肤生长因子蛋白2（TGF-β2/Smad2）信号通路调控膀胱尿路上皮癌（BUCC）细胞侵袭和转移。方法 将BUCC细胞分为空白对照组、T24-siNC组和T24-siPCGEM1组。空白对照组置于10%胎牛血清的DMEM培养基中进行培养;T24-siPCGEM1组和T24-siNC组分别用Lipofectamine 2000将10μmol·L^-1的siPCGEM1和阴性对照siNC转染至细胞,然后置于10%胎牛血清的DMEM培养基中进行培养。用实时荧光定量聚合酶链反应检测LncRNA PCGEM1的表达水平,用平板克隆实验检测细胞增殖情况,用蛋白质印迹法检测TGF-β2和Smad2的表达情况。结果 T24-siPCGEM1组、T24-siNC组和空白对照组的细胞克隆数分别为（192.83±15.59）,（419.00±52.15）和（432.83±57.74）个,TGF-β2相对表达量分别为0.08±0.01,0.39±0.05和0.41±0.05,Smad 2...     

SERPINB7对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂B7(SERPINB7)对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用及其可能机制。方法 将人乳腺癌细胞系MCF-7分为sh-SERPINB7组、空白对照组(BC组)和阴性对照组(NC组);其中,sh-SERPINB7组和NC组分别转染SERPINB7 RNA干扰慢病毒和阴性对照慢病毒。采用qRT-PCR法检测SERPINB7 mRNA表达,CCK-8法、流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭,Western blot法检测SERPINB7、Bax、Bcl-2、Snail、Slug、转化生长因子β(TGF-β)、Smad3和磷酸化Smad3(p-Smad3)的蛋白表达。结果 MCF-7细胞中SERPINB7蛋白表达高于人正常乳腺上皮细胞系MCF-10A(P<0.05)。与BC组和NC组相比,sh-SERPINB7组MCF-7细胞中SERPINB7 mRNA表达以及Bcl-2、Snail、Slug、TGF-β、p-Smad3蛋白表达降低,细胞凋亡率升高,细胞划痕愈合率和侵袭细胞数减少,Bax蛋白表达增加(P<0...     

基于TGF-β1/Smads信号通路观察异丙托溴铵雾化液对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺功能、气道重塑的影响

目的：异丙托溴铵雾化液对慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease, COPD）大鼠肺功能、气道重塑的影响以及其对于转化生长因子β1(transforming?growth?factor-β1，TGF-β1)/母体抗生物皮肤生长因子同源物2/3（mothers?against?decapentaplegic?homolog 2/3，Smad2/3）通路信号通路的调控机制。方法：将SD大鼠按照随机数字表法将大鼠分为正常组、模型组、实验组、对照组，每组15只；其中模型组、实验组、对照组中的大鼠以泰山茉莉香烟烟熏法复制COPD大鼠模型：将大鼠放入烟熏箱内，点燃15只泰山茉莉香烟，持续1h，每日3次，连续90天，正常组大鼠不进行烟熏操作，常规喂养。成功复制COPD模型后，实验组大鼠每日在自制微小动物密闭箱内以雾化器吸入用异丙托溴铵溶液1mg/4mL，每日一次，每次2h，对照组大鼠皮下注射TGF-β1 抑制剂LY2157299（20 mg/kg），每日一次，正常组、模型组大鼠分别皮下注射等剂量的生理盐水。在给药28天后，使用小微动物肺功能测定仪依次检测各组大鼠的肺功能。TUNEL染色各组大鼠肺组织中的细胞凋亡，免疫荧光检测各组大鼠肺组织中气道重塑标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表达，Western blot检测各组大鼠肺组织中TGF-β1、p-Smad2/3的表达。结果：与正常组相比，模型组、实验组、对照组大鼠的呼吸频率、肺组织的细胞凋亡率、α-SMA的荧光强度、TGF-β1、p-Smad2/3的表达出现了明显升高，大鼠的通气量和潮气量出现了明显下降（均P＜0.05），与模型组相比，实验组和对照组大鼠的呼吸频率、肺组织的细胞凋亡率、α-SMA的荧光强度、TGF-β1、p-Smad2/3的表达出现了明显下降，大鼠的通气量和潮气量出现了明显升高（均P＜0.05）。结论：异丙托溴铵能抑制肺组织的细胞凋亡，缓解COPD大鼠的气道重塑，改善其肺功能，这可能与抑制TGF-β1/Smads通路有关。