中药牛蒡子主要活性成分微生物转化研究进展

牛蒡子为菊科草本植物牛蒡的干燥成熟果实,具有抗炎、抗病毒、抗糖尿病等多种药理功能。目前已知,牛蒡苷和牛蒡苷元是中药牛蒡子的主要活性成分,摄入体内的牛蒡苷或牛蒡苷元可进一步被肠道菌群转化为去甲基牛蒡苷元、肠二醇、肠内酯等多种代谢产物。现有研究表明,牛蒡苷或牛蒡苷元的微生物转化产物具有比牛蒡苷元更高、更广的生物学活性。综述不同产地牛蒡子主要活性成分含量、药代动力学及肠道菌群代谢差异,旨在为牛蒡子主要活性成分微生物转化产物的研究与开发提供参考。     

正交实验优化牛蒡子的提取工艺

目的:优选牛蒡子乙醇提取的最佳工艺.方法:采用L9(34)正交试验筛选醇提工艺条件,用HPLC法测定牛蒡苷的含量.结果:牛蒡子的最佳醇提条件为:乙醇浓度70%,加8倍溶剂量,回流3次,回流时间1h.结论:采用本工艺牛蒡子的活性成分牛蒡苷提取率达95.43%,工艺可行.     

牛蒡子苷元与顺铂联合对人肺癌H460细胞系增殖和凋亡的影响

目的研究牛蒡子苷元与顺铂联合对人肺癌H460细胞系增殖和凋亡的影响。方法将不同浓度的牛蒡子苷元作用于肺癌H460细胞,应用MTT法测定牛蒡子苷元单独或联合顺铂对H460细胞的影响。应用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。应用蛋白免疫印迹法检测切割型Caspase-3和切割型PARP的表达水平。结果与对照细胞相比较,牛蒡子苷元处理可显著抑制H460细胞增殖,并且这种抑制作用具有剂量依赖性。牛蒡子苷元在10μM时可增强顺铂介导的抑制H460细胞增殖(P<0.05)。牛蒡子苷元处理后显著诱导H460细胞凋亡发生,较对照细胞,牛蒡子苷元处理H460细胞具有更高水平的切割型caspase-3和PARP表达(P<0.05)。2和10μM顺铂处理H460细胞48h后分别诱导(8.4±1.9)%和(15.6±2.3)%细胞发生凋亡。当2μM顺铂和10μM牛蒡子苷元联合后,H460细胞发生凋亡的比率增加为(27.2±3.1)%,这表明牛蒡子苷元可增强顺铂对H460细胞凋亡的诱导作用(P<0.05)。结论牛蒡子苷元通过增强切割型caspase-3和PARP的表达,剂量依赖性地抑制H460细胞增殖和促进其凋亡。与顺铂联合后,牛蒡子苷元增强H460细胞对顺铂诱导的细胞增殖抑制和凋亡促进作用。因而,牛蒡子苷元可能在基于铂制剂抗NSCLC治疗中有临床应用价值。     

日本榧树中的双苄基丁内酯木脂素类成分的肝保护作用

从日本榧树Torreya nucifera Sieb. et Zucc.树皮中分得的双苄基丁内酯木脂素类成分(-)-牛蒡苷元[1，(-)-arctigenin]、紫花络石苷元[2，(-)-traxillagenin]和(-)-4’-脱甲基紫花络石苷元(3)有多种药理活性。作者研究了这3个成分对CCl。致原代培养大鼠肝细胞损伤的抑制作用。     

牛蒡子化学成分的分离与鉴定

目的:分离与鉴定牛蒡子中的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、SephadexLH-20等手段对牛蒡子进行分离纯化,通过理化性质鉴别与各种波谱学方法鉴定其结构。结果:从牛蒡子中分离鉴定出10个化学成分,分别为β-谷甾醇(1)、牛蒡子苷元(2)、罗汉松脂素(3)、牛蒡酚B(4)、牛蒡酚A(5)、牛蒡酚F(6)、牛蒡子苷(7)、8-hydroxypinoresino(l8)、(+)-Fraxiresino(l9)、胡萝卜苷(10)。其中,化合物8、9为首次从牛蒡子中获得。结论:本试验结果可为牛蒡子的进一步研究提供依据。     

牛蒡子及其伪品的鉴别

牛蒡子在《中药大辞典》(1995年版)中收载为菊科植物牛蒡Arctium lappa L.的干燥成熟果实,全国各地均产,主产于东北,以浙江产质量较优。近几年曾发现有以同科其它植物的干燥成熟果实,冒充牛蒡子销售。如山东济南、泰安等地大面积栽培菊科大鳍蓟Onopordum acanthium L.的果实充当牛蒡子;在北京、河南等地发现用菊科云木香Aucklandia     

牛蒡子苷元对免疫性血小板减少模型的药效及机理

目的考察牛蒡子苷元对免疫性血小板减少疾病(immune thrombocytopenic purpura,ITP)动物模型的药效学,并初步研究其作用机制。方法采用SD大鼠腹腔注射兔抗大鼠血小板(platelet,PLT)抗体血清制备被动型ITP动物模型,Balb/c小鼠腹腔注射大鼠血小板抗原制备小鼠交叉免疫反应型ITP模型,SD大鼠皮下注射环磷酰胺制备大鼠药物诱导型血小板减少模型,通过血细胞计数仪检测以上3种动物模型全血PLT数量,并研究牛蒡子苷元对ITP模型的药效作用;正常Balb/c小鼠给予牛蒡子苷元1.0 mg·kg-1·d-1后,利用流式技术检测脾脏淋巴细胞Treg细胞比率,研究牛蒡子苷元药理作用机制。结果成功构建3种ITP模型,牛蒡子苷元能显著性提高被动型ITP模型与交叉免疫反应型ITP模型的PLT数量,与模型组相比有显著性差异(P<0.05);对环磷酰胺造成的模型作用不明显(P>0.05);牛蒡子苷元能显著性提高正常小鼠脾脏淋巴细胞Treg细胞比率(P<0.05)。结论牛蒡子苷元对免疫性血小板减少动物模型取得较好的治疗效果,这可能与其升高Treg细胞比率有关。     

牛蒡子对运动训练大鼠主要血液生化指标的影响

目的研究牛蒡子对运动训练大鼠某些生化指标的影响。方法通过建立大鼠运动训练模型,测定运动训练大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性和血液中血尿素氮(BUN)、血糖(Gluc)、血红蛋白(Hb)的含量。结果牛蒡子可保护重要器官免受运动损伤,有利于维持运动过程中血红蛋白和血糖水平的稳定。结论牛蒡子可明显延缓大鼠运动疲劳的发生,提高其运动能力提高。     

牛蒡子饮片与粉末煎煮过程中牛蒡苷含量变化的比较研究

目的:比较牛蒡子饮片与粉末在煎煮过程中牛蒡苷含量的变化.方法:采用HPLC法,测定牛蒡子饮片和粉末在不同煎煮时间煎液中牛蒡苷含量.结果:从2～60 min煎煮过程中,不同时间点牛蒡子粉末煎液中的牛蒡苷含量及煎出率均高于牛蒡子饮片煎液,均有极显著性差异(P＜0.01).结论:从化学成分层次,验证了中药煮散省材省时之优点,为中药传统饮片应用形式的创新提供了新思路.     

牛蒡子苷对高糖诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨牛蒡子苷对高糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用及其机制.方法 用高糖诱导HUVECs,建立内皮细胞损伤模型,经牛蒡子苷处理后,用MTT法、划痕试验及Matrigel法分别检测牛蒡子苷对内皮细胞增殖、迁移及血管腔形成能力的影响;用Western blotting法检测牛蒡子苷对低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子A(VEGF-A)及Akt蛋白表达的影响.结果 与模型组比较,牛蒡子苷组HUVECs的增殖、迁移及血管腔形成能力明显降低;HIF-1α、VEGF-A和Akt蛋白的表达亦显著下调.结论 牛蒡子苷可能通过阻断Akt-HIF-1α-VEGF-A信号通路来抑制高糖诱导的HUVECs的增殖、迁移及血管新生.     

毛兰素诱导人白血病HL—60细胞的凋亡

目的：研究毛兰素对HL－60细胞增殖的抑制作用,探讨其诱导细胞凋亡的机制。方法：用MTT比色法测定了毛兰素对HL－60细胞增殖的抑制作用：应用荧光显微镜、透射电镜、DNA电泳及流式细胞仪观察了药物对细胞凋亡的诱导作用,并用免疫组化的方法从基因水平阐述了凋亡的发生。结果：毛兰素20－81．9nmol/L在72h内显著抑制HL－60细胞增殖,作用24h后,对HL－60细胞的IC50为38nmol/L,而阳性对照药长春新碱对HL－60细胞的IC50为101nmol/L,前者明显优于后者;形态学观察可见凋亡的特征性改变;琼脂糖电泳出现典型的DNA“ladder”;流式细胞仪结果表明细胞被阻滞于G2／M期;免疫组化可见bcl-2表达下降,bax表达升高。结论：毛兰素显著抑制HL－60细胞的生长,该抑制作用可能是通过诱导细胞凋亡和改变HL－60细胞bcl-2和bax基因的表达而实现的。     

中华眼镜蛇毒诱导HL-60细胞凋亡及其机制探讨

目的　观察中华眼镜蛇毒体外对白血病细胞凋亡的影响 ,并探讨其可能的作用机制。方法　本研究采用血清药理学方法 ,以人白血病细胞HL 60细胞为靶细胞 ,通过流式细胞仪分析、DNA片段凝胶电泳、免疫组织化学 (S P法 )观察中华眼镜蛇毒兔血清体外对细胞凋亡的诱导作用及癌基因表达的影响。结果　经DNA电泳、流式细胞仪分析显示 :中华眼镜蛇毒兔血清与HL 60细胞共同培养 48h可诱导其细胞凋亡增加 ,bcl 2、c myc基因蛋白表达下调。结论　中华眼镜蛇毒兔血清体外抑制HL 60细胞增殖可能与其诱导细胞凋亡及使细胞bcl 2、c myc基因蛋白表达下调密切相关     

土贝母皂苷诱导人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞凋亡的研究

目的　研究土贝母皂苷 (下称皂苷 )对人鼻咽癌细胞株CNE 2Z细胞凋亡的影响。方法　MTT法检测皂苷对CNE 2Z细胞生长的影响 ;形态学方法 (荧光显微镜和透射电镜 )、流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳观察和分析在皂苷作用下CNE 2Z细胞形态、DNA含量的变化和DNA断裂的情况 ;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关基因bcl 2、bax和cas pase 3表达的变化。 结果　皂苷抑制CNE 2Z细胞的生长 ,其效果与皂苷的浓度和作用时间相关 ;诱导CNE 2Z细胞发生典型程序性死亡 ;凋亡抑制基因bcl 2表达逐渐减少 ;而凋亡诱导基因bax和caspase 3在 1、3、5h表达增高。 结论　诱导细胞凋亡是皂苷发挥抗瘤效果的一种重要机制 ;皂苷诱导的CNE 2Z细胞凋亡与bcl 2、bax和caspase 3基因有关     

异十三基二乙胺诱导HL-60细胞凋亡及其作用机制

目的探讨异十三基二乙胺(D-108)体外诱导人早幼粒白血病HL-60细胞凋亡及其作用机制。方法应用生长曲线法检测D-108对HL-60细胞生长抑制作用;相差显微镜观察药物对HL-60细胞促凋亡形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期改变;DNA琼脂糖凝胶电泳法检测凋亡"梯状"DNA;比色法测定caspase-3,8,9酶活性:结果D-108显著抑制HL-60细胞生长,作用呈浓度及时间依赖性。HL-60细胞经D-108处理后,呈典型凋亡形态学改变,出现亚二倍体细胞峰及DNA梯状条带。caspase-3,9酶活性显著升高(P<0.01),而对caspase-8酶活性无明显影响。结论D-108在体外能有效诱导HL-60细胞凋亡,其作用机制可能通过线粒体凋亡途径。     

Riccardin D, a novel macrocyclic bisbibenzyl, induces apoptosis of human leukemia cells by targeting DNA topoisomerase II

We studied the effect of riccardin D, a macrocyclic bisbibenzyl, which was isolated from the Chinese liverwort plant, on human leukemia cells and the underlying molecular mechanism. Riccardin D had a significant antiproliferative effect on human leukemia cell lines HL-60, K562 and its multidrug resistant (MDR) counterpart K562/A02 cells, but showed no effect on the topoisomerase-II-deficient HL-60/MX2 cells, as measured by the 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. The pBR322 DNA relaxation assay revealed that riccardin D selectively inhibited the activity of topoisomerase II (topo II). The suppression of topo II activity by riccardin D was stronger than that of etoposide, a known topo II inhibitor. After treatment with riccardin D, nuclear extracts of leukemia K562 and K562/A02 cells left the majority of pBR322 DNA in a supercoiled form. Further examination showed that riccardin D effectively induced HL-60, K562 and K562/A02 apoptosis as evidenced by externalization of phosphatidylserine and formation of DNA ladder fragments. The activation of cytochrome c, caspase-9, caspase-3 and cleaved poly ADP-ribose polymerase (PARP) was also enhanced, as estimated by Western blot analysis. By contrast, riccardin D was unable to induce apoptosis in the topoisomerase-II-deficient HL-60/MX2 cells, indicating that the induction of apoptosis by riccardin D was due to the inhibition of topo II activity. In addition, riccardin D was able to significantly decrease P-glycoprotein (P-gp) expression in K562/A02 cells. Taken together, our data demonstrate that riccardin D is a novel DNA topo II inhibitor which can induce apoptosis of human leukemia cells and that it has therapeutic potential for both regular and MDR strains of leukemia cells.     

硒酸酯多糖诱导白血病多药耐药细胞凋亡的作用机制

目的:观察硒酸酯多糖(Kappaselenocarrageenan,KSC)对K562ADM耐药细胞的诱导凋亡效应,并探讨其作用机制。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法、WrightGiemsa染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(Flowcytometry,FCM)观察K562ADM细胞凋亡;FCM测定K562ADM细胞Fas、P53和Bcl2蛋白表达水平;RTPCR检测Caspase3mRNA的表达。结果:50～500mg·L-1KSC抑制K562ADM细胞增殖,并诱导K562ADM细胞凋亡,细胞出现呈典型凋亡形态改变,DNA电泳可见DNA梯状条带(DNAladder);FCM分析出现亚G1期细胞群,S期细胞比例增高。Fas蛋白表达上调,Bcl2蛋白表达下调,Caspase3mRNA表达显著增强,但P53蛋白表达无明显改变。结论:KSC通过Fas依赖性Caspase3激活途径诱导K562ADM细胞凋亡。     

Baicalein induced in vitro apoptosis undergo caspases activity in human promyelocytic leukemia HL-60 cells.

In this study, we evaluated the potential apoptosis effects of baicalein on human promyelocytic leukemia HL-60 cells in vitro. Apoptosis induction, cell viability, morphology and caspase-3 activity were then performed to determine by flow cytometric assay, DNA gel electrophoresis, anti-ADP-ribose stain and determination of caspase-3 activity. There is a significant difference in cell death of HL-60 cells that was detected between baicalein-treated and untreated groups. Furthermore, there was a further significant increase in apoptosis induction when cells were treated with baicalein compared to without baicalein treated groups. Flow cytometric assays and DNA fragmentation gel electrophoresis also confirmed baicalein induced apoptosis in HL-60 cells. Baicalein also promoted caspase-3 activity then leading to cleavage of poly-ADP-ribose polymerase finally leading to DNA fragmentation occurrence. Furthermore, the baicalein-induced apoptosis was markedly blocked by the broad-spectrum caspase inhibitor, z-VAD-fmk. Taken together, these results suggest that treatment of human leukemia HL-60 cells with baicalein induced apoptosis through activation of caspase-3 activity.     

2,3-吲哚醌对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡和端粒酶表达的影响

目的研究2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline,ISA)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡和端粒酶表达的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞,将SH-SY5Y细胞随机分为对照组和ISA不同浓度(0、100、200、400μmol·L-1)处理组,采用Hochest33258荧光染色和琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡;采用Western blot检测凋亡抑制基因bcl-2、凋亡基因bax蛋白表达的变化;采用RT-PCR检测加药后SH-SY5Y bcl-2,bax及端粒酶逆转录酶(hTERT) mRNA表达水平的变化。结果100、200、400μmol·L-1ISA处理SH-SY5Y细胞48h后,荧光染色可观察到明显的细胞凋亡的核浓缩、核碎裂形态;bcl-2 mRNA及蛋白表达逐渐减少(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义;bax mR-NA及蛋白表达水平未见变化(P>0.05);hTERT mRNA表达水平降低(P<0.05),各组间差异比较有统计学意义;200、400μmol·L-1ISA处理SH-SY5Y细胞48h,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯带。结论2,3-吲哚醌可能通过下调bcl-2和hTERT表达诱导SH-SY5Y细胞凋亡,并在一定浓度范围内呈浓度依赖关系。     

榄香烯诱导人白血病K562细胞凋亡及调控bcl—2蛋白的表达

目的：研究榄香烯的抗肿瘤作用机制。方法：抑制细胞增殖采用ＭＴＴ法,用荧光显微镜观察细胞的形态学变化,ＤＮＡ电泳,流式细胞仪技术检测ＤＮＡ断裂,用流式细胞仪检测ｂｃｌ－２蛋白的表达,结果：榄香烯６５－５２０μｍｏｌ．Ｌ＾－１明显抑制Ｋ５６２细胞增殖,ＩＣ５０（９５％可信区间）为２２０（１５２－３１９）μｍｏｌ．Ｌ＾－１电泳可见ＤＮＡ断裂形成的阶梯状条带,形态学上表现为染色体聚集,核固缩,断裂,而ｂｃ