普伐他汀对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响

目的:探讨普伐他汀对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞株,分对照组、高糖组和普伐他汀组,采用CCK-8细胞计数法测定系膜细胞增殖,比色法检测细胞培养液中的超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量的变化.结果:与对照组比较,高糖组出现系膜细胞增殖增加,上清液中SOD活性、GSH含量下降,MDA含量增加;与高糖组相比,普伐他汀组系膜细胞增殖减少,GSH含量、SOD活性上调,MDA含量下降.结论:普伐他汀能抑制高糖环境下的系膜细胞增殖,并显著减少高糖诱导的氧化应激水平.     

缓激肽对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的观察缓激肽(BK)对高糖浓度下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响。方法采用体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测系膜细胞增殖,酶联免疫(ELISA)法测细胞外基质分泌。结果高糖(30.0 mmol/L)环境可促进肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。BK、ACEI(贝那普利)均抑制高糖环境下肾小球系膜细胞的增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。结论高糖可促使肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌。ACEI抑制肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的作用机制可能与减少BK的降解有关。     

霉酚酸对高糖环境下肾小球系膜细胞炎症反应和增殖的影响

目的:观察霉酚酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症反应及增殖的影响。方法:大鼠肾小球系膜细胞分为低糖组、高糖组、高糖加不同浓度霉酚酸组培养,测定细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及神经生长因子(NGF)的表达,及细胞增殖的情况。结果:①低浓度(0.1μmol/L)霉酚酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞ICAM-1、MCP-1和NGF的高表达有显著的抑制作用,但霉酚酸浓度的成倍增加(0.1-10μmol/L)对于以上效果并无明显的加强作用。②霉酚酸有浓度依赖性抑制高糖所致的系膜细胞增殖的作用。结论:体外霉酚酸对高糖环境下肾小球系膜细胞炎性因子ICAM-1、MCP-1和NGF的高表达和高增殖有显著的抑制作用。     

细胞内活性氧在晚期糖基化终产物促肾小球系膜细胞合成纤维连接蛋白中的作用

目的 观察晚期糖基化终末产物(AGEs)对大鼠肾小球系膜细胞合成和分泌纤维连接蛋白的影响及细胞内活性氧(ROS)在其中的作用.方法 在体外制备AGEs,分别用不同浓度的(0,100,500,1000 μg/mL)AGEs及抗氧化剂N-酰-L-半胱氨酸(NAC 30 mmol/L)作用于肾小球系膜细胞,以氧化敏感的荧光染料2、7-二氢二氯荧光素(DCFH)染色,流式细胞仪测定细胞内ROS强度;再用RT-PCR和ELISA方法测定系膜细胞中纤维连接蛋白的表达.结果 AGEs能使细胞内ROS水平明显升高(P<0. 05),呈现浓度依赖效应;AGEs同时以时效和量效方式促进肾小球系膜细胞中纤维连接蛋白基因和蛋白的表达(P<0.05);而NAC能够明显抑制AGEs所致的细胞内ROS升高,同时抑制肾小球系膜细胞中纤维连接蛋白的合成和分泌(P<0. 05).结论 AGEs可能部分通过诱导细胞内ROS,促进肾小球系膜细胞表达分泌纤维连接蛋白,从而引起肾小球系膜基质增生,最终导致肾小球纤维化,而抗氧化治疗可能有助于阻止糖尿病肾病的氧化应激损害和肾小球纤维化的发展进程.     

益肾化浊注射液对高糖培养肾小球系膜细胞表达FN及PAI-1 mRNA的影响

观察高糖对体外培养肾小球系膜细胞表达纤维连接蛋自 (FN)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI 1)mRNA以及细胞增殖、分泌FN的影响 ,同时观察益肾化浊注射液对高糖引起上述各指标变化的影响。采用体外培养肾小球系膜细胞方法 ,用高糖及益肾化浊注射液作为刺激物 ,四甲基偶氮唑盐微量酶比色法 (MTT)检测细胞增殖 ,酶联免疫吸附测定法 (ELISA)测定细胞上清FN含量 ,Northem杂交检测FN、PAI 1mRNA表达水平。结果表明 ,高糖可促进分泌FN ,上调PAI 1mRNA的表达 ,明显抑制系膜细胞的增殖 ;而益肾化浊注射液可缓解高糖所引起的上述指标的改变 ,并可下调FNmRNA的表达。     

渴络欣含药血清萃取物抑制高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及ERK1/2磷酸化的研究

目的 探讨在高糖环境下,渴络欣对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响及其作用机制.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞株HBZY-1,用高糖(30 mmol/L葡萄糖)刺激细胞不同时间,Western blot检测磷酸化胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)的表达,不同浓度的渴络欣含药血清萃取物预处理后,给予高糖处理细胞适当时间,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测HBZY-1细胞增殖的变化,Western blot法对HBZY-1细胞中p-ERK1/2的表达进行半定量分析.结果 与正常对照相比,高糖组的细胞增殖率增加(P<0.01),经渴络欣含药血清萃取物预处理后,细胞增殖率降低(P<0.05).高糖刺激后,HBZY-1细胞ERK1/2磷酸化水平逐渐增加,呈一定时间依赖性(P<0.01);而渴络欣含药血清萃取物预处理后,HBZY-1细胞ERK 1/2磷酸化水平明显下降(P<0.01).结论 渴络欣可抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖,其作用机制可能与抑制ERK1/2途径有关.     

重组人红细胞生成素对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌MCP-1的影响

目的 研究重组人红细胞生成素(rHuEPO)对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(MC)增殖和表达MCP-1的影响.方法 以大鼠MC为研究对象,高糖组浓度为30 mmol/L,分别以不同浓度rHuEPO(1,10,50,100 IU/ml)分别干预24,48,72 h,CCK-8比色法检测细胞增殖情况.用ELISA法和reahime PCR法测定干预24,48,72h时细胞MCP-1表达水平.结果 rHuEPO能促进高糖诱导的MCs增生,呈剂量和时间依赖性.正常培养的系膜细胞MCP-1蛋白和mRNA有低水平的表达,高糖组刺激24,48,72h均有高水平的表达,rHuEPO在1,10,50,100 IU/ml时,作用于高糖培养的MCs,细胞MCP-1的表达均显著降低.结论 rHuEPO能刺激高糖培养的系膜细胞增殖,抑制高糖培养的系膜细胞表达MCP-1.     

川芎嗪对转化生长因子β1诱导的人肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原分泌的影响

目的观察川芎嗪对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原分泌的影响。方法采用TGF-β1诱导肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原表达以模拟肾脏疾病中的细胞纤维化,实验分为5组:空白组,对照组,川芎嗪高、中、低剂量(终浓度分别为100、30、10μg/ml)组。MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖抑制率,ELISA法检测肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原的表达。结果川芎嗪高剂量(100μg/ml)能够抑制TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞增殖(P<0.01);川芎嗪可抑制TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞中Ⅳ型胶原的表达,以高剂量组(100μg/ml)效果最为显著(P<0.01)。结论川芎嗪可抑制TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原分泌。     

己酮可可碱对高糖时人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的 探讨高糖对人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白1(nonocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)表达的影响及己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对其干预作用.方法 将培养的人肾小球系膜细胞分为6组:正常对照组、高糖组、甘露醇组、PTX甲组、PTX乙组、PTX丙组,分别在24、48和72 h采用RT-PCR法和ELISA法检测PTX对高糖条件下系膜细胞内MCP-1mRNA及蛋白、细胞外基质纤维连接蛋白(fi-bronectin,FN)表达的影响.结果 高糖组人肾小球系膜细胞MCP-1mRNA及蛋白、FN的表达较正常对照组明显增加(P<0.01);己酮可可碱各组比高糖组有明显下降(P<0.01);不同浓度的己酮可可碱对高糖诱导的系膜细胞MCP-1的表达抑制程度不同(P<0.05).结论 己酮可可碱可抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞MCP-1的表达以及FN的分泌,呈时间、剂量依赖关系,己酮可可碱可能对糖尿病肾病的防治起到有益的作用.     

消渴颗粒剂对大鼠系膜细胞增殖和TGF-β1表达的影响

目的观察消渴颗粒剂对高糖刺激后系膜细胞增殖和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法培养正常大鼠系膜细胞,高浓度葡萄糖刺激系膜细胞,加入中药含药血清后,用MTT法和激光共聚焦显微镜分别观察系膜细胞增殖和TGF-β1的表达。结果消渴颗粒剂含药血清在48h可抑制高糖对大鼠系膜细胞的促增殖作用,在72、96 h可对抗高糖对系膜细胞增殖的抑制作用,96 h最为明显(P<0.05)。高糖刺激后TGF-β1在肾小球系膜细胞内表达增多,消渴颗粒剂明显减少系膜细胞内TGF-β1表达(P<0.05)。结论消渴颗粒剂可降低高糖致系膜细胞增殖,抑制高糖引起的TGF-β1过度表达,这可能是其防治糖尿病肾病的作用机制。