系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞Caspase-1和Caspase-3mRNA的表达

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞Caspase-1和Caspase-3的表达水平及其与淋巴细胞凋亡的关系。方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测34例活动期SLE患者和30例正常人外周血单一核细胞(PBMC)中Caspase-1和Caspase-3mRNA的表达水平。结果 活动期SLE患者PBMC中Caspase-1mRNA的平均表达水平(1.20±0.33)明显高于正常人对照组(0.79±0.25),差异有非常显着性(P<0.01);Caspase-3mRNA的平均表达水平(0.87±0.16)高于正常人对照组(0.66±0.10),差异有显着性(P<0.05).活动期SLE患者PBMC中Caspase-1和Cas-pase-3的阳性表达率与正常人对照组相比差异无显着性(P>0.05).结论 活动期SLE患者外周血淋巴细胞Caspase-1和Caspase-3mRNA表达水平增高,Caspase级联反应可能参与了SLE患者淋巴细胞的凋亡过程。     

多发性肌炎/皮肌炎患者外周血单一核细胞中糖皮质激素受体及热休克蛋白90 mRNA的表达

我们应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对多发性肌炎/皮肌炎(PMDM)患者外周血单一核细胞(PBMC)中糖皮质激素受体与HSP90mRNA的表达水平进行检测,以探讨其表达水平同糖皮质激素疗效的相关性^[1-3]。     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞白介素6受体水平的研究

目的 探讨白介素6(IL-6)及其受体(IL-6R)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法 应用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检测89例SLE患者和30例正常人外周血单一核细胞(PBMC)中IL-6RmRNA的表达水平,用ELISA法检测血清中IL-6水平。结果 ①活动期SLE患者和非活动期SLE患者及正常人IL-6R阳性表达率为100%。②PBMC中,IL-6RmRNA表达水平:活动期SLE患者为0.902±0.273,非活动期SLE患者为0.519±0.11,正常人为0.573±0.24。活动期组和非活动期组和对照组比较,差异均有统计学意义(P=0.00),非活动期组和对照组比较差异无统计学意义(P=0.289)。③血清中IL-6水平:活动期组为71.89±20.02pg/mL,非活动期组为17.96±6.93pg/mL,对照组为0.035±0.035pg/mL。活动组显著高于非活动组和对照组(P=0.00),非活动组显著高于对照组(P=0.00)。活动期SLE患者和非活动期SLE患者血清中的IL-6水平与PBMC上的IL-6R的表达水平呈正相关(r=0.887和r=0.615,P<0.05)。结论 IL-6及其受体的异常表达可能在SLE疾病活动和发展过程中起重要作用。检测SLE患者PBMC中IL-6受体的表达水平可作为评估疾病活动性的参考指标之一。     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞CD80/CD86和CTLA-4mRNA的表达

目的 探讨CD80/CD86和CTLA-4在系统性红斑狼疮(SLE)发病机制中的作用及临床意义。方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测32例SLE患者外周血单一核细胞(PBMC)中CD80、CD86、CTLA-4mRNA的表达水平。结果 活动期SLE患者PBMC中CD86的阳性表达率为90.63%,正常人对照组为60%,两组差异有非常显著性(P<0.01)。CD86的mRNA表达的平均水平(0.6410±0.0174)亦明显高于正常人对照组(0.4510±0.0402),差异有非常显著性(P<0.001);活动期SLE患者PBMC中CTLA-4的阳性表达率为81.25%,其mRNA表达的平均水平为1.0020±0.0624,均明显高于正常人对照组,差异有显著性(P<0.01);活动期SLE患者PBMC中CD80的阳性表达率和CD80mRNA的表达水平与正常人对照组差异均无显著性(P>0.05)。结论 CD86和CTLA-4的异常表达可能在SLE疾病活动和发展过程中起重要作用。     

糖皮质激素对SLE患者Th1/Th2类细胞因子mRNA表达及产生的影响

目的 探讨糖皮质激素治疗对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)中Th1/Th2类细胞因子mRNA表达及产生的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验检测糖皮质激素治疗前后SLE患者PBMC中Th1类细胞因子干扰素γ(IFN-γ)和Th2类细胞因子白介素4(IL-4)、白介素10(IL-10)mRNA表达和产生的变化.结果 经糖皮质激素治疗后SLE患者PBMC产生IFN-γ,IL-4和IL-10水平分别为(74.08±15.85)pg/mL,(246.43±45.25)pg/mL,(549.52±67.00)pg/mL;mRNA平均表达水平分别为0.3298±0.2181,0.4951±0.2938,0.8671±0.6620.治疗前IFN-γ,IL-4和IL-10水平分别为(113.5±27.6)pg/mL,(272.97±33.78)pg/mL,(625.32±104.61)pg/mL;mRNA平均表达水平分别为1.4094±0.6317,0.6872±0.4713,1.1758±0.6255;治疗后各细胞因子水平均较治疗前显著降低(P<0.01);但IFN-γ较IL-4,IL-10降低更为显著.结论 糖皮质激素可通过影响SLE患者细胞因子mRNA表达和产生,调节Th1/Th2类细胞因子网络平衡,可能为糖皮质激素治疗SLE的机制之一.     

系统性红斑狼疮患者血清催乳素水平和外周血单一核细胞催乳素受体的表达

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清催乳素(PRL)水平和外周血淋巴细胞的催乳素受体(PRLR)的表达与SLE活动性的关系。方法 应用时间分辨免疫发光试验(TrFIA)测定血清PRL,用SLEDAI指数评估了113例SLE患者的病情活动性,并用Logistic多元回归研究临床表现、免疫学指标与高PRL血症的关系;采用放射性受体配基结合试验(RLBA)及RT-PCR研究外周血淋巴细胞PRLR变化。结果 ①63例SLE活动期患者血清PRL水平(14.45±7.25μg/L)显著高于50例静止期患者(11.79±8.08μg/L)和28例正常人对照组(7.08±6.26μg/L);②79.37%的活动期患者血清PRL水平在9~51.2μg/L;③113例SLE患者血清PRL水平与dsDNA抗体、SLEDAI活动指数呈线性正相关;④Logistic多元回归研究发现蛋白尿、低C3和高dsDNA抗体滴度与高PRL血症相关;⑤24例SLE活动期患者外周血单一核细胞(PBMC)的PRLR的特异性结合率(SB,5.03%±2.51%)、总结合率(TB,15.34%±6.98%)和mRNA的表达水平(0.85±0.45)均显著高于22例静止期患者(SB4.18±2.26,TB14.03±6.54%,mRNA0.58±0.43)和15例正常人对照组(SB1.62%±1.05%,TB8.19%±1.47%,mRNA0.20±0.13)。结论 SLE患者血清PRL轻度升高,PBMC的PRLRmRNA高表达以及相应特异性结合率的增加与SLE的病情活动性相关。     

人纤维介素在系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞中的表达及意义

目的 探讨人纤维蛋白原样蛋白/人纤维介素(HFGL2)与SLE中存在的凝血功能障碍之间的关系。方法 采用免疫组化方法检测32例SLE患者和15例正常人外周血单一核细胞(PBMC)中HFGL2蛋白的表达情况,并用高清晰度彩色医学图文分析系统对SLE患者PBMC中HFGL2的表达进行半定量分析。结果 与正常人对照组相比,活动期SLE患者PBMC中HFGL2的表达明显增高,并与疾病活动性呈正相关。结论 PBMC中HFGL2的表达可能与SLE的发病和疾病的活动有关。     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞中白介素18的表达

系统性红斑狼疮(SLE)是一种侵犯多系统的自身免疫性疾病。白介素(IL)18可诱导Th1反应,在各种过敏性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病及感染性疾病中起免疫调节作用^[1]。为了探索IL－18在SLE中的变化及临床意义,我们以β肌动蛋白为内参照,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT－PCR)法测定了SLE患者及正常人对照外周血单一核细胞(PBMC)中IL-18mRNA水平,观察IL－18与狼疮活动指数(SLEDAI)^[1]、血沉(ESR)的相关性。     

寻常型银屑病患者外周血单一核细胞增殖活性与尿新蝶呤关系

有学者认为银屑病是细胞免疫异常而导致表皮细胞过度增殖性疾病^[1]。新蝶呤是细胞免疫反应终产物^[2],是体内“淋巴细胞—巨噬细胞”轴所介导的免疫系统激活程度标志物^[3]。为了探讨银屑病患者外周血单一核细胞(PBMC)增殖活性与新蝶呤关系,我们采用³H-胸腺嘧啶脱氧核苷(³H-TdR)掺入法测定PBMC增殖活性,同时测定尿中新蝶呤浓度,观察新蝶呤与PBMC增殖活性的关系。     

凋亡调控分子BclGL表达与系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞凋亡的研究

【摘要】 目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单一核细胞（PBMC）中凋亡调控分子BclGL的表达及其意义。 方法 流式细胞仪检测20例活动期SLE患者（A-SLE）、18例非活动期SLE患者（I-SLE）以及30例健康对照者PBMC的细胞绝对数;用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）细胞凋亡双染试剂盒检测各组PBMC早期凋亡率;荧光定量PCR技术检测各组PBMC中BclGL mRNA的表达量;Western 印迹检测BclGL蛋白表达量;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组血清中干扰素（IFN）-α水平;采用SPSS13.0统计软件进行组间非参数Mann-Whitney或Kruskal-Wallis检验,并使用Pearson相关分析法分析SLE患者PBMC中BclGL表达量与细胞凋亡率及临床指标间的相关性。 结果 A-SLE患者外周血中PBMC细胞绝对数［（0.16 ± 0.06） × 109/L］低于I-SLE［（0.27 ± 0.14） × 109/L］及健康对照［（0.34 ± 0.23） × 109/L］（均P < 0.01）;A-SLE患者PBMC凋亡率（22.6% ± 1.1%）较I-SLE（16.4% ± 0.9%）及健康对照（10.1% ± 0.4%）升高,I-SLE患者也高于健康对照（均P < 0.01）;A-SLE患者PBMC中BclGL表达量高于I-SLE及健康对照（均P < 0.01）;SLE患者外周血血清IFN-α含量［（32.5 ± 2.2） μg/L］较健康对照［（15.5 ± 1.3） μg/L］增高（均P < 0.01）;SLE患者PBMC中上调的BclGL表达与PBMC凋亡率（r = 0.486,P < 0.01）及SLE疾病活动指数（SLEDAI）、抗核抗体（ANA）滴度、IFN-α水平呈正相关（r = 0.496,0.516,0.535,均P < 0.01）,与患者补体C3水平呈负相关（r = －0.515,P < 0.01）。结论 SLE患者PBMC中BclGL分子表达上调可能参与SLE患者PBMC的凋亡异常,从而在SLE发病中起作用。 【关键词】 红斑狼疮,系统性; 外周血单一核细胞; BclGL; 细胞凋亡     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞趋化因子受体2和3 mRNA的表达

目的探讨趋化因子受体(CCR)2及CCR3在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)中的表达及与疾病的相关性.方法对93例SLE患者和30名健康对照者,应用半定量逆转录(RT)-PCR方法检测其CCR2、CCR3 mRNA表达水平,并应用SLE疾病活动性指数评分标准(SLEDAI)对SLE患者进行评分.结果①9例SLE患者活动期、非活动期及对照组PBMC CCR2与CCR3 mRNA表达水平分别为2.989±1.595与2.847±2.400、0.388±0.213与0.585±0.219、0.263±0.157与0.602±0.124,活动期与非活动期、对照组相比差异均有显著性(P值分别为0.013,0.004;0.000,0.007);非活动期与对照组相比差异无显著性(P＞0.01).②SLE患者PBMC中CCR2、CCR3 mRNA表达水平与SLEDAI分别作直线相关性分析,CCR2 mRNA、CCR3mRNA水平与SLEDAI均呈正相关.③具有肌炎临床表现的SLE患者其PBMC CCR2、CCR3表达水平较无肌炎表现时降低.血小板减少的SLE患者比不具有相应症状者CCR2 mRNA表达降低.结论SLE患者PBMC CCR2、CCR3表达均增加,且与疾病活动性呈正相关,而CCR2、CCR3为表达于Th2细胞的趋化因子受体,提示SLE患者Th2细胞占优势.CCR2可能参与SLE患者肌炎及血小板减少的发生,CCR3参与肌炎发生.     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞CD40/CD40配体mRNA的表达

目的探讨CD40及其配体(CD40L)在系统性红斑狼疮(SLE)发病机制中的作用及临床意义。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测34例SLE患者外周血单一核细胞(PBMC)中CD40和CD40配体mRNA的表达水平。结果活动期SLE患者PBMC中CD40配体的阳性表达率为88.24％(30/34),明显高于正常人对照组(50.00％,15/30),差异有非常显著性(P<0.01);活动期SLE患者PBMC中CD40配体mRNA表达的平均水平(0.6970±0.1214)亦明显高于正常人对照组(0.2684±0.0795),差异有非常显著性(P<0.01)。活动期SLE患者PBMC中CD40的阳性表达率和CD40mRNA的表达水平与对照组相比差异均无显著性(P>0.05)。结论CD40配体的异常表达可能在SLE疾病活动和发展过程中起重要作用,检测SLE患者PBMC中CD40配体的表达水平可作为疾病的活动性指标之一。     

系统性红斑狼疮患者血清可溶性Fas检测

系统性红斑狼疮(SLE)是自身免疫性疾病的重要代表,众多的研究表明^[1～6],SLE的发生、发展及其免疫学改变与自身反应性T淋巴细胞或B淋巴细胞的细胞凋亡缺陷有关,狼疮患者血清中可溶性Fas(sFas)水平明显升高^[3].因此,我们测定了63例SLE患者血清的sFas水平,并对其意义作了初步讨论.     

SLE患者血清过氧化脂质和维生素E与磷脂酶A2活性的检测

系统性红斑狼疮(SLE)是一种多系统、多器官受累的自身免疫性疾病。近年来,自由基的致病作用普遍受到人们的重视。抗氧化剂维生素E可阻断脂质过氧化的链式反应。磷脂酶A₂(PLA₂)参与自身免疫病的病理损伤过程,它又与自由基的产生密切相关^[1]。国内外文献报道SLE患者体内氧自由基水平较正常增高^[2,3];在自身免疫性疾病如类风湿性关节炎患者关节液及血清中PLA₂活性明显升高^[4],但在SLE患者体内PLA2活性及其与自由基的相关性报道较少。我们通过检测SLE患者血清过氧化脂质(LPO)、维生素E水平及PLA2活性,分析他们间的相关性,探讨其在SLE发病机理中的可能作用。     

SLE患者外周血单个核细胞ER和HSP90基因的表达

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中雌激素受体(ER)和热休克蛋白90(HSP90)基因的表达情况。方法分离58例SLE患者和28例正常人新鲜外周血单个核细胞,提取总RNA,利用半定量RT-PCR方法逆转录并扩增ER和HSP90,通过凝胶图像扫描系统对PCR产物的电泳条带进行扫描分析。结果 SLE患者组PBMC中ER和HSP90mRNA表达明显高于正常对照组(P均<0.05),且活动期患者的表达高于稳定期患者(P均<0.05)。结论 SLE患者中存在ER和HSP90基因的过度表达,并与疾病活动性有关。     

系统性红斑疮患者血清催乳素水平和外周血单一核细胞催乳素受体的表达

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清催乳素(PRL)水平和外周血淋巴细胞的催乳素受体(PRLR)的表达与SLE活动性的关系.方法应用时间分辨免疫发光试验(TrFIA)测定血清PRL,用SLEDAI指数评估了113例SLE患者的病情活动性,并用Logistic多元回归研究临床表现、免疫学指标与高PRL血症的关系;采用放射性受体配基结合试验(RLBA)及RT-PCR研究外周血淋巴细胞PRLR变化.结果①63例SLE活动期患者血清PRL水平(14.45±7.25 μg/L)显著高于50例静止期患者(11.79±8.08μg/L)和28例正常人对照组(7.08±6.26 μg/L);②79.37%的活动期患者血清PRL水平在9～51.2μg/L;③113例SLE患者血清PRL水平与dsDNA抗体、SLEDAI活动指数呈线性正相关④Logistic多元回归研究发现蛋白尿、低C3和高dsDNA抗体滴度与高PRL血症相关;⑤24例SLE活动期患者外周血单一核细胞(PBMC)的PRLR的特异性结合率(SB,5.03%±2.51%)、总结合率(TB,15.34%±6.98%)和mRNA的表达水平(0.85±0.45)均显著高于22例静止期患者(SB 4.18±2.26,TB14.03±6.54%,mRNA 0.58±0.43)和15例正常人对照组(SB 1.62%±1.05%,TB8.19%±1.47%,mRNA 0.20±0.13).结论SLE患者血清PRL轻度升高,PBMC的PRLR mRNA高表达以及相应特异性结合率的增加与SLE的病情活动性相关.     

系统性红斑狼疮患者转录因子T-bet和GATA3基因的表达

目的 观察转录因子T-bet和GATA3与系统性红斑狼疮(SLE)病情的关系,探讨T细胞在SLE中的发病机制.方法 利用半定量PCR及实时荧光定量PCR技术检测活动期SLE患者、稳定期SLE患者、正常人外周血单一核细胞(PBMC)中T-bet和GATA3mRNA表达状况.结果 GATA3实时荧光定量PCR△Ct值:活动期(8.92±1.29)明显低于稳定期(12.20±1.18)和正常人(11.80±0.80),所以活动期患者GATA3mRNA表达明显高于稳定期患者和正常人,差异具有非常显著性(P<0.01);半定量PCR显示活动期(0.15±0.15)也明显高于稳定期(0.04±0.05)和正常人(0.03±0.03),差异有显著性(P<0.05);两种方法均显示稳定期患者与正常人GATA3表达差异无显著性(P>0.05).T-bet实时荧光定量PCR△Ct值:活动期为10.52±0.82,稳定期为9.93±1.13,正常人为10.23±1.32;半定量PCR:活动期为0.30±0.23,稳定期为0.28±0.14,正常人为0.22±0.11,两种方法均显示活动期患者、稳定期患者、正常人T-bet表达差异无显著性(P>0.05).结论 调控Th2细胞的转录因子GATA3的升高可能与SLE活动有关,而调控Th1细胞的转录因子T-bet可能与SLE活动无关.     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞OX40/OX40配体mRNA的表达

OX40/OX40配体(OX40L)在许多自身免疫性疾病,如类风湿性关节炎、实验性过敏性脑髓炎和移植物抗宿主反应中的表达异常升高,阻断OX40/OX40L信号转导系统可使病情减轻^[1]。为探讨OX40/OX40L。在SLE发病中的作用及其与疾病活动性的关系,我们应用逆转录聚合酶链反应,对活动期SLE患者外周血单一核细胞(PBMC)中OX40/OX40L的表达水平进行了半定量分析,报道如下。     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞核小体释放水平及其临床意义

目的研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)释放核小体的水平变化及其与自身抗体、病情活动度的关系。方法应用ELISA方法检测SLE患者PBMC裂解上清液核小体及其血清自身抗体水平,用SLEDAI积分法评估SLE活动度。结果活动期SLE患者PBMC释放核小体的平均水平为(39.39±25.70)IU/mL,明显高于正常人对照组(11.73±7.87)IU/mL和静止期SLE患者(13.44±8.82)IU/mL,并且与其凋亡率呈显著正相关(r=0.83,P<0.001);SLE患者PBMC的核小体释放水平与SLEDAI积分数、ds鄄DNA抗体水平和补体C3降低水平均呈显著正相关(P值分别<0.01、0.01和0.05)。结论SLE患者PBMC凋亡产生的核小体水平变化与SLE临床病情活动程度密切相关,提示核小体可能是诱导SLE发病的重要抗原之一。     

外周血BAFF及Bregs水平与系统性红斑狼疮病情相关性研究

 目的:比较系统性红斑狼疮（SLE）患者与健康人血清BAFF水平的差异，探讨BAFF水平与调节性B细胞（Bregs）的相关性及二者的相互作用在疾病活动中的作用。方法：选取本院24例SLE患者及16例健康对照者为研究对象，收集SLE患者的基本信息和临床资料，采用ELISA检测血清中BAFF水平，流式细胞术检测外周血  CD19⁺、CD19⁺CD24^hiCD38^hi B细胞及  CD19⁺CD24^hiCD27⁺ B细胞水平。分析血清BAFF水平与SLE病情活动指标及外周血Bregs两个主要亚群的细胞数量及比例的相关性。结果：BAFF水平比较：活动期SLE患者明显高于非活动期患者（U=34.50,P<0.05）；BAFF水平与SLEDAI评分呈正相关（r=0.41,P<0.05）；抗双链DNA抗体阳性者明显高于阴性者（U=27.50,P<0.05）；ESR升高者明显高于ESR正常者（U=28.00,P<0.05）；补体C4下降者明显高于补体C4正常者（U=15.00，P<0.001）。SLE患者血清BAFF水平与CD19⁺B细胞比例明显正相关（r=0.52，P<0.05），与  CD19⁺CD24^hiCD38^hi B细胞数量明显正相关（r=0.56，P<0.01），与  CD19⁺CD24^hiCD27⁺ B细胞的比例负相关（r=-0.46，P<0.05）。SLE患者血清BAFF水平与皮疹、关节炎、血液系统损害、肾损害、血肌酐、尿素及24小时尿蛋白水平等临床表现均无明显相关性（P值均＞0.05）。结论：活动期SLE患者血清高水平的BAFF可以上调未成熟调节性B细胞数量，使成熟的Bregs亚群比例下调，影响成熟的Bregs免疫抑制作用，进而参与狼疮病情的活动。