高糖对体外培养的人脐静脉内皮细胞中c-fos的影响研究

目的观察高糖作用人脐静脉内皮细胞时c—fos基因mRNA和蛋白的表达的变化。方法提取并体外培养人脐静脉内皮细胞,分别加入不同浓度葡萄糖（5．5mmol/L、11mmol/L、22mmol/L、44mmol/L）并分别作用不同时间,应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测c—fos基因mRNA的表达,免疫细胞化学检测c—fos蛋白表达。结果经高糖处理的人脐静脉内皮细胞中,c—fos基因mRNA的转录水平明显高于对照组（P〈0．05或P〈0．01）。但是脐静脉内皮细胞经22mmol/L葡萄糖作用1h,c—fos基因的mRNA水平不再升高,而呈下降趋势（P〈0．05）。经22mmol/L葡萄糖作用2h后,c—fns蛋白表达达到最高峰。结论高糖能引起脐静脉内皮细胞c—fosmRNA和蛋白表达增高。     

褪黑素对小鼠视交叉上核c-fos基因表达的影响

目的　观察褪黑素对幼龄、老龄及光制颠倒条件下小鼠视交叉上核内c fos基因蛋白和mRNA水平的影响。方法　采用冰冻切片免疫组织化学染色法 ,观察褪黑素对小鼠视交叉上核c fos蛋白水平的影响 ;采用RT PCR法 ,扩增视交叉上核内c fosmRNA ,用琼脂糖凝胶电泳法检测扩增产物。结果　幼龄鼠c fos蛋白水平及mRNA水平均高于老龄鼠 ;光制颠倒条件下 ,c fos蛋白及mRNA水平均受抑制 ;给予褪黑素 ,c fos蛋白及c fosmRNA水平均提高。结论　c fos基因表达水平随年龄增加而降低 ;光制颠倒可抑制c fos基因的表达 ;施用褪黑素 ,c fos基因表达水平提高 ,说明褪黑素可对抗增龄及光制颠倒对c fos表达的抑制作用 ,从而发挥抗衰老作用。     

氯胺酮麻醉引起c—fos基因在大鼠大脑皮质的表达与行为时间的相关性

为探讨氯胺酮对中枢神经系统副作用的分子基因机制．检测了氯胺酮对大鼠大脑皮质c—fos基因表达的影响。将42只Wistar大鼠随机分为6组各7只。腹腔注射氯胺酮100mg／kg后，分别于给药前和给药后15、30、60、120、180min提取大脑皮质总RNA。经过逆转录多聚酶链反应，扩增出cDNA产物。用成像分析系统计算曲线下面积，与内参照比较表示各时点的c—fos mRNA水平。结果表明，氯胺酮注射后引起大脑皮质c—fos mRNA表达增高。其高峰在30～60min。3h后回至基线水平，且与行为呈时间相关性。结论：c-fos基因参与了氯胺酮引起精神症状的分子基因机制。     

癫痫发作过程中细胞内钙、一氧化氮合酶与细胞凋亡的关系

目的 探讨癫痫发作过程中神经细胞内钙、一氧化氮合酶(NOS)与细胞凋亡的关系.方法 采用戊四氮(PTZ)致痫大鼠模型,分为对照组,致痫后30 min、1、3、6、12、24、48 h组,每组8只.流式细胞术检测细胞内钙和细胞凋亡,紫外分光光度计检测NOS.结果 对照组钙水平较低,癫痫发作后钙迅速升高,1 h达高峰,之后下降;NOS在癫痫发作后1、24 h有2个分泌高峰,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡在癫痫发作后6 h开始升高,24 h达高峰,与对照组比较有显著性差异(P<0.05).结论 钙超载和NOS过度表达可能与癫痫后的细胞凋亡有关.     

脂多糖对小鼠子宫平滑肌细胞中T型钙通道Cav3.1及Cav3.2表达的影响

目的检测脂多糖(LPS)对小鼠子宫平滑肌细胞中T型钙通道Cav3.1、Cav3.2表达的影响,探讨LPS与T型钙通道在早产发动过程中的相关性。方法取孕鼠的子宫平滑肌组织进行细胞原代培养,予LPS干预细胞,检测干预前后T型钙通道Cav 3.1、Cav3.2mRNA及蛋白的表达情况。结果 LPS干预孕鼠子宫平滑肌细胞6h后Cav3.1及Cav3.2 mRNA表达开始升高,12h后表达升高最明显,24h后升高略有下降。而0.9%氯化钠注射液组及正常对照组,Cav3.1及Cav3.2mRNA表达无明显变化。蛋白印迹法结果显示,LPS干预6h后Cav3.1及Cav3.2蛋白表达也同时升高,12h后升高较明显,Cav3.1表达在干预后12h达高峰,Cav3.2的表达在LPS干预24h后最高。结论 LPS能够上调T型钙通道的表达,证明了T型钙通道的表达变化可能参与了LPS诱导的小鼠早产的发生。     

兔心肌缺血再灌注对其交界区细胞凋亡的影响及意义

目的探讨心肌缺血再灌注对交界区细胞凋亡的影响及意义。方法心肌缺血再灌注动物模型建立,采用HE常规及半定量RT-PCR技术,观察家兔心肌缺血/再灌注模型缺血交界区caspase-3mRNA、bcl-2mRNA动态表达与心肌细胞凋亡的内在联系。结果交界区caspase-3mRNA与心肌细胞凋亡在缺血再灌注损伤4 h后开始升高,12 h达高峰,二者之间存在着明显的正相关性(r=0.9286,P<0.001)。bcl-2mRNA在缺血再灌注损伤12 h之前呈现低表达状态,24 h时开始显著性升高,一直持续到48 h。而凋亡细胞在12 h后开始减少并一直持续到48 h,二者表达之间存在着明显的负相关性(r=-0.9648,P<0.001)。结论 caspase-3和bcl-2基因二者之间的平衡失调是导致心肌交界区细胞调亡的重要的原因,它将影响心室的重构。     

癫痫大鼠血清和脑脊液中S100B水平及其在海马组织的表达

目的探讨S100B与癫痫的关系。方法采用侧脑室注射红藻氨酸建立SD大鼠颞叶癫痫动物模型(癫痫组,40只),在痫性发作后6、12、24、72h和1周,用ELISA方法测定血清和脑脊液中S100B的含量,用免疫组化染色法观察各组大鼠海马组织中S100B蛋白的表达。其结果与正常SD大鼠(对照组,8只)比较。结果血清和脑脊液中S100B含量在癫痫发作后6h逐渐增加,24h达高峰;海马CA3和齿状回区S100B免疫阳性胶质细胞致痫后24、72h显著增高。结论 S100B蛋白在癫痫后的海马组织中大量表达,提示S100B蛋白参与了癫痫早期的病理过程;血清和脑脊液中S100B水平可作为判断癫痫所致脑损伤的早期生化指标。     

血糖水平对大鼠脑挫裂伤后伤灶周围神经细胞中Bcl-2和Bax mRNA表达水平的影响

目的 研究大鼠脑挫裂伤后不同血糖水平对伤灶周围神经细胞中凋亡相关基因Bcl- 2和Bax mRNA表达水平的影响.方法 将60只健康雄性SD大鼠随机分成对照组和实验组,以自由落体法制造大鼠脑挫裂伤模型后,颈静脉置管输入50%葡萄糖溶液建立高血糖动物模型,对照组以相同方法输入等量生理盐水溶液.在伤后即刻、6、12、24、48h 5个时间点,抽提大鼠伤灶周围组织总RNA,RT-PCR方法分析两组大鼠伤灶周围的脑组织中Bcl-2和Bax mRNA表达水平.结果 正常脑组织中Bcl-2 mRNA表达几乎为阴性;脑挫裂伤后早期伤灶周围神经细胞Bcl-2 mRNA表达明显增加,在伤后24h达到高峰,之后渐下降.而正常脑组织中有Bax mRNA表达,脑挫裂伤后早期伤灶周围脑细胞Bax mRNA表达亦有明显增加,伤后12h达到高峰,之后渐下降.伤后各时间点实验组大鼠Bcl-2 mRNA的表达水平较对照组大鼠明显减低,而Bax mRNA表达则明显升高.结论 脑挫裂伤后高血糖水平对挫裂伤灶周围神经细胞中Bcl- 2基因的表达有抑制作用,而对Bax基因的表达则有促进作用.脑挫裂伤后高血糖水平会加重伤灶周围神经细胞的凋亡.     

Levels of S100B in serum and cerebrospinal fluid and its expression in hippocampal tissues of epileptic rats

目的 探讨S100B与癫痫的关系.方法 采用侧脑室注射红藻氨酸建立SD大鼠颞叶癫痫动物模型(癫痫组,40只),在痫性发作后6、12、24、72 h和1周,用ELISA方法测定血清和脑脊液中S100B的含量,用免疫组化染色法观察各组大鼠海马组织中S100B蛋白的表达.其结果与正常SD大鼠(对照组,8只)比较.结果 血清和脑脊液中S100B含量在癫痫发作后6h逐渐增加,24 h达高峰;海马CA3和齿状回区S100B免疫阳性胶质细胞致痫后24、72 h显著增高.结论 S100B蛋白在癫痫后的海马组织中大量表达,提示S100B蛋白参与了癫痫早期的病理过程;血清和脑脊液中S100B水平可作为判断癫痫所致脑损伤的早期生化指标.     

大鼠心肌缺血再灌注损伤组织中MMP-2、9/TIMP-1、2mRNA表达比值的变化及意义

目的探讨心肌缺血再灌注损伤(MIRI)组织中基质金属蛋白酶-2、9(MMP-2、9)和组织金属蛋白酶抑制因子-1、2(TIMP-1、2)基因mRNA表达的变化规律及其临床意义。方法建立大鼠MIRI模型,采用HE、RTPCR、免疫组化、酶谱分析等方法,检测MIRI不同时相中MMP-2、9和TIMP-1、2 mRNA表达变化。结果在MIRI过程中MMP-2、9的mRNA和蛋白相对表达量呈升高趋势,二者在MIRI 8 h时表达量达高峰,与对照组(sham组)相比具有非常显著性差异(P<0.01)。TIMP-1、2的mRNA相对表达量在整个再灌注过程中增高,与sham组相比有显著性差异(P<0.05),而蛋白水平的相对表达量与sham组相比无统计学差异(P>0.05)。MMP-2、9/TIMP-1、2 mRNA表达比值趋于失衡。酶活性MMP-2在MIRI 4 h达高峰(16832.67±727.40),MMP-9在MIRI 12 h达高峰(6534.85±421.50),与sham组和MIRI 30 min组相比,二者均有非常显著性差异(P<0.01)。结论 MMP-2、9/TIMP-1、2mRNA表达比值失衡是MIRI的重要指标之一。     

氯化锂一匹罗卡品诱发大鼠癫痫持续状态脑内cox-2表达的动态观察

目的:在氯化锂—匹罗卡品诱发癫痫持续状态模型中观察环氧化本酶-2(cox-2)表达的动态变化。方法:采用氯化锂—匹罗卡品诱发癫痫持续状态大鼠模型,观察大鼠的行为改变,并用免疫组化方法观察癫痫持续状态后不同时间点脑内cox-2表达的变化。结果:匹罗卡品诱发癫痫持续状态后12 h、24 h时脑内cox-2表达最高,72 h时表达次之,7 d时极少数表达并接近对照组表达水平。结论:癫痫持续状态后脑内cox-2表达明显增加并且持续很长时间,在此时期如果给予干预措施可以起到减轻癫痫发作和保护神经元的作用。     

氯化锂-匹罗卡品诱发大鼠癫痫持续状态脑内cox-2表达的动态观察

目的:在氯化锂-匹罗卡品诱发癫痫持续状态模型中观察环氧化本酶-2(cox-2)表达的动态变化.方法:采用氯化锂-匹罗卡品诱发癫痫持续状态大鼠模型,观察大鼠的行为改变,并用免疫组化方法观察癫痫持续状态后不同时间点脑内cox-2表达的变化.结果:匹罗卡品诱发癫痫持续状态后12 h、24 h时脑内cox-2表达最高,72 h时表达次之,7d时极少数表达并接近对照组表达水平.结论:癫痫持续状态后脑内cox-2表达明显增加并且持续很长时间,在此时期如果给予干预措施可以起到减轻癫痫发作和保护神经元的作用.     

金雀异黄素对脑缺血／再灌注诱导大鼠海马组织STAT3激活的抑制作用

目的：观察脑缺血／再灌注(I／R)后海马组织信号转导与转录激活子-3(STAT3)的激活及金雀异黄素对其的影响．方法：免疫印迹测定STAT3蛋白表达及磷酸化水平,电泳迁移率改变分析STAT3的DNA结合活性．结果：I／R3h后胞浆STAT3持续磷酸化激活,再灌注3h和72h达两高峰(1．7和2．5倍);而STAT3蛋白表达I／R24h开始升高,72h达高峰(1.7倍);核内STAT3的磷酸化水平及DNA结合活性缺血后即显著增高,再灌注3h和72h达两高峰(分别为2.6、3.1及3.6、4.4倍）。金雀异黄素呈剂量依赖方式明显抑制I/R 72h诱导STAT3的磷酸化及DNA结合活性的升高,但不影响STAT3蛋白表达。结论：脑缺血/再灌注导致STAT3的磷酸化激活及DNA结合活性的增加,蛋白酪氨酸激酶参与STAT3的激活调控。     

大鼠脑创伤后ERK通路对皮质神经细胞c-fos蛋白表达及凋亡的影响

目的:探讨细胞外调节激酶(ERK)信号转导机制在颅脑创伤中的作用。方法:建立大鼠重型弥漫性颅脑创伤(TBI)模型,92只雄性SD大鼠分为创伤组和对照组,其中创伤组又分为伤后10min、30min、3h、6h、24h、48h和72h7个时相组,采用免疫组化、蛋白印迹方法分别定性、定量检测以上两组ERK的表达,用免疫组化法检测c-fos蛋白表达,用原位末端标记法检测凋亡细胞。结果:创伤组p-ERK1/2和c-fos的表达及TUNEL阳性细胞在不同时间大多高于对照组:创伤组p-ERK1/2蛋白表达在伤后10min已较对照组明显升高(P<0.05),伤后6h达高峰,24h仍有大量表达,仍明显高于对照组(P<0.01),至伤后48h降至对照组水平(P>0.05);创伤组c-fos免疫反应性在伤后10min开始升高(P<0.01),伤后6h达高峰(P<0.01),48h以后明显减弱,但仍高于对照组(P<0.01);镜下对照组未见TUNEL阳性细胞,创伤组伤后3h偶见TUNEL阳性细胞,6h明显增多,48h达高峰,均显著高于对照组(P<0.01)。结论:大鼠脑创伤后ERK通路过度激活,可能通过诱导c-fos蛋白表达,进而导致神经细胞凋亡。     

聚酯型儿茶素对HL-60细胞的诱导分化作用及其机制研究

目的　研究聚酯型儿茶素对人急性早幼粒白血病HL 6 0细胞的分化作用并探讨其作用机制。方法　应用电镜、NBT还原试验、同位素掺入试验、细胞内cAMP/cGMP浓度测定、原位杂交和免疫细胞化学等方法研究细胞分化及机制。结果　聚酯型儿茶素作用于HL 6 0细胞后 ,扫描电镜和透射电镜观察显示分化细胞的特征 ;NBT还原能力明显增强 ;[3H] TdR ,[3H] Leu掺入试验证明聚酯型儿茶素可明显抑制细胞DNA和蛋白质合成 ;聚酯型儿茶素作用后 ,细胞内cAMP浓度及cAMP/cGMP比值明显增加 ,HL 6 0细胞的c myc基因mRNA和蛋白产物的表达均明显降低 ,而c fos基因mRNA和蛋白产物的表达均明显升高。结论　聚酯型儿茶素可诱导HL 6 0细胞向成熟细胞分化 ,其分化作用可能与其升高细胞内cAMP/cGMP比值和抑制c myc基因表达、增强c fos基因表达有关。本研究为聚酯型儿茶素在肿瘤防治领域的开发应用提供了充分的理论依据     

NS-398对高糖诱导的系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响

［摘要］目的研究选择性环氧化酶 2抑制药NS 398对高糖诱导的系膜细胞刺激结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。 方法20 μmol&#8226;L-1 NS 398加入30 mmol&#8226;L-1高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中，分别培养0，12，24，48，72 h，应用逆转录聚合酶链反应的方法评价CTGF mRNA的表达改变，应用免疫细胞化学方法评价CTGF蛋白的表达水平。结果未加高糖刺激的肾小球系膜细胞CTGF mRNA和蛋白表达水平较低，高糖刺激后肾小球系膜细胞CTGF mRNA和蛋白表达水平增加，6 h活性已渐增高，12 h达高峰，18 h开始下降，24 h降至较低水平。用NS 398干预30 min后再用30 mmol&#8226;L-1高糖刺激，未见 CTGF mRNA和蛋白表达水平增加（P＞0.05）。 结论高糖能上调肾小球系膜细胞CTGF mRNA和蛋白的表达，NS 398能抑制高糖诱导系膜细胞CTGF的表达。     

TGF-β1在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨转化生长因子（TGF-β1）在脊髓缺血再灌注损伤中的作用。方法本研究采用脊髓缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、脊髓缺血再灌注损伤组及TGF-β1抗体封闭组,每组32只,分别在术后6、12、24、48h后处死动物。用免疫组化检测TGF-β1、NGF、CD68蛋白表达。结果免疫组化结果显示缺血再灌注损伤后6hTGF-β1的表达开始增加（18．65±3．43）,损伤后24h表达强度达高峰（39．18±0．34）。NGF蛋白表达与TGF-β1相似,6h开始增加（6．52±0．31）,损伤后24h表达强度达高峰（20．08±4．34）。CD68蛋白的表达6h达到高峰（59．18±3．08）,随后减低。TGF-β1抗体封闭后,TGF—β1蛋白的表达6h开始缓慢上调,NGF蛋白的表达12h开始增加以后表达平稳,CD68蛋白6h表达上调并持续高表达。结论上述结果提示脊髓缺血再灌注导致TGFβ1表达增多,可抑制炎性反应和促进NGF表达,从而有利于脊髓损伤修复。     

吸入氢气对脓毒症小鼠海马组织 DNA甲基化的影响

目的 评价吸入氢气对脓毒症小鼠海马组织的 DNA甲基化状态的影响。方法 54只健康雄性 C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为 3组：假手术组（Sham组）、脓毒症组（Sepsis组）和氢气治疗组（Sepsis+H2组）,每组 18只。Sepsis组和 Sepsis+H2组采用盲肠结扎穿孔法（CLP）制备小鼠脓毒症模型,Sepsis+H2组小鼠于手术后 1 h和 6 h吸入用空气混合的 2%氢气 1 h,Sham组只开腹不进行盲肠结扎和穿孔。3组小鼠于假手术或 CLP后 1、3、7 d取小鼠海马组织,比色法测定全基因组 DNA甲基化水平;实时定量 PCR法检测 DNA甲基化转移酶（DNMTs,包括 DNMT1、DNMT3a和 DNMT3b）的 mRNA水平;Western blot法检测 DNMT1、DNMT3a和 DNMT3b蛋白表达水平。结果 与 Sham组比较,Sepsis组小鼠在建模后 1、3、7 d海马组织全基因组甲基化水平明显下降（P＜0.05）,DNMT1和 DNMT3a的 mRNA和蛋白表达水平升高,DNMT3b的 mRNA和蛋白表达水平降低（P＜0.05）;与 Sepsis组比较,Sepsis+H2组全基因组甲基化水平升高（P＜0.05）,DNMT1和 DNMT3a的 mRNA和蛋白表达水平下降,DNMT3b的 mRNA和蛋白表达水平升高（P＜0.05）。结论 吸入氢气可纠正脓毒症小鼠海马组织的 DNA甲基化紊乱状态,改善 DNA甲基化紊乱状态是氢气治疗脓毒症相关性脑病的重要机制之一。     

银杏内酯B调控PAX6基因表达对人骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化能力的影响

摘要：目的:探讨银杏内酯B（GB）对人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）增殖和成骨分化的影响及可能机制。方法:不同浓度(10,20,40 mg·L-1)的GB作用hBMSCs细胞后,四甲基噻唑蓝染色法（MTT）检测细胞增殖,实时定量聚合酶链式反应PCR（RT-qPCR）检测细胞中配对盒基因6（PAX6）的mRNA表达,蛋白印迹（Western Blot）法检测细胞中PAX6蛋白表达。不同浓度(10,20,40 mg·L-1)的GB作用成骨诱导的hBMSCs细胞14 d后,RT-qPCR检测细胞中碱性磷酸酶（AKP）、骨钙素（OCN）和骨桥蛋白（OPN）的mRNA表达,Western Blot法检测细胞中AKP、OCN和OPN的蛋白表达。转染PAX6过表达载体至hBMSCs,上述相同方法观察过表达PAX6对hBMSCs增殖及AKP、OCN和OPN的mRNA和蛋白表达的影响。结果:GB作用hBMSCs后,细胞活性显著升高（P<0.05）,PAX6的mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）。GB作用成骨诱导的hBMSCs细胞14 d后,细胞中AKP、OCN和OPN的mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）。过表达PAX6后,hBMSCs活性显著升高（P<0.05）,成骨诱导的细胞中AKP、OCN和OPN的mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）。抑制PAX6表达且同时使用GB作用时（GB+si-PAX6）,hBMSCs活性及成骨诱导后细胞中AKP、OCN和OPN的mRNA和蛋白表达水平均显著低于只使用GB作用（GB+si-NC）（P<0.05）。结论:GB可促进hBMSCs增殖和成骨分化,其作用机制与上调PAX6表达有关。     

脑康灵口服液对大鼠脑外伤后脑组织C—fos基因表达的影响

目的 探讨脑康灵口服液(Nao Kang Ling Oral Liquid,NKL)对创伤性脑损伤后脑组织c—fos基因表达的影响。方法 制作自由落体脑挫裂伤大鼠动物模型；设立对照组、外伤组和NKL治疗组，使用免疫组化方法检测c—fos基因在脑组织的表达情况。结果 伤后24h外伤组及NKL治疗组均检测到高水平表达的Fos蛋白，但NKL治疗组Fos蛋白表达水平明显低于外伤组。结论 服比对创伤性脑损伤后脑组织c—fos的表达具有显著的抑制作用。NKL对创伤性脑损伤的治疗作用可能通过抑制细胞凋亡的机制。