Smad2和Smad4蛋白在成年大鼠睾丸的表达

目的 探讨转化生长因子－β超家族肽类的细胞内信号转导分子Smad2和Smad4蛋白在成年大鼠睾丸的表达及在精子发生中的作用机理。方法 用免疫组织化学ABC法结合葡萄糖氧化酶－DAB－硫酸镍铵增强技术,检测成年大鼠睾丸Smad2和Smad4蛋白的表达和定位。结果Smad2蛋白主要表达在大鼠睾丸生精小管的精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞、支持细胞和间质细胞中,免疫反应物质主要定位于细胞质,胞核为阴性;而Smad4蛋白同主要表达于间质细胞的胞质中,支持细胞呈弱阳性染色,结论 Smad2蛋白主要表达于睾丸生精小管各级生精细胞,Smad4蛋白表达于间质细胞,为揭示TGF－β超家族在精子发生中的分子机理提供了直接证据。     

转化生长因子-β1及其信号传导分子Smad2与Smad4在羊驼睾丸的表达

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2、Smad4在羊驼睾丸的表达与定位,探索TGF-β1在羊驼睾丸发育及精子发生中的作用.方法 以24月龄的羊驼睾丸为研究对象,采用Western blotting技术及免疫组织化学SABC法对TGF-β1、Smad2、Smad4在羊驼睾丸的表达进行研究.结果 Western blotting结果显示,羊驼睾丸组织粗蛋白提取物中存在分子量约为25kD、52kD、62kD,与多克隆兔抗TGF-β1、Smad2、Smad4抗体发生免疫阳性反应的蛋白条带;免疫组织化学结果显示,TGF-β1、Smad2、Smad4在24月龄羊驼睾丸的间质细胞、支持细胞和各级生精细胞均有不同程度的表达.结论 TGF-β1通过Smad2与Smad4传导途径参与性成熟羊驼睾丸组织的发育与精子发生的调控.     

锰诱导大鼠生精细胞凋亡过程中生殖激素和乳酸脱氢酶及PARP的作用

目的研究锰对大鼠体内生殖激素和乳酸脱氢酶(LDH)和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)表达的影响,探讨它们在生精细胞凋亡过程中的作用。方法雄性SD大鼠48只,随机分为空白对照组,低剂量组和高剂量组,腹腔注射Mn Cl24周和6周,TUNEL法检测生精细胞凋亡,放射免疫测定血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)含量,化学比色测定血清和睾丸LDH含量。免疫组织化学法检测生精细胞PARP表达。结果各染锰组生精细胞凋亡指数、血清FSH、LH及LDH含量升高,血清T、睾丸LDH含量及PARP表达降低。结论锰可使大鼠T和睾丸LDH降低,FSH、LH和血清LDH活性升高,抑制大鼠生精细胞PARP表达,导致生精细胞凋亡。     

Smad2和Smad4在家猫睾丸发育和精子发生中的表达与定位

目的 研究转化生长因子β(TGF-β)超家族的下游信号转导分子Smad2和Smad4蛋白,在不同发育阶段家猫睾丸中的表达和定位,探索Smad2和Smad4蛋白与家猫睾丸发育和精子发生的关系. 方法 应用免疫组织化学技术,研究Smad2和Smad4蛋白在幼年(n=3)、青春期(n=3)和性成熟(n=18)睾丸中的定位,并通过Western blotting技术对免疫组织化学中所用抗体的特异性进行了检测. 结果 免疫组织化学结果显示,Smad2和Smad4蛋白定位于各发育阶段家猫睾丸的生殖细胞、支持细胞和间质细胞的胞质中;Western blotting结果显示,多克隆兔抗Smad2和Smad4抗体与家猫睾丸蛋白提取物中分子量约为58kD、66kD的蛋白条带发生免疫阳性反应. 结论 Smad2和Smad4蛋白在家猫睾丸发育和精子发生的各个阶段均有表达,提示其参与睾丸发育和精子发生的调节.     

Smad2/Smad3蛋白在大鼠卵巢颗粒细胞中的表达及FSH对其活化的影响

目的 研究Smad2/Smad3蛋白在大鼠卵巢颗粒细胞中的表达及FSH对其活化的影响.方法 21d SD雌性大鼠,注射PMSG 20IU,48h后对卵巢颗粒细胞进行原代培养,用TGFβRⅡ抗体及不同浓度的FSH对细胞进行不同时间的处理,通过免疫细胞化学方法观察TGFβ信号通路中Smad2/Smad3和P-Smad2/P-Smad3(磷酸化Smad2/3)表达的变化.结果 1.Smad2/Smad3主要定位于卵巢颗粒细胞胞质,其活化形式P-Smad2/P-Smad3有少量表达;2.经FSH处理后, Smad2/Smad3向核内转移增多,P-Smad2/P-Smad3的表达增强,并与FSH的作用时间及剂量呈正相关性;3.TGFβRⅡ被抗体完全中和后再用FSH处理,Smad2/Smad3的核阳性率无显著增多, P-Smad2/P-Smad3的表达未见明显增强.结论 1.FSH促进Smad2/Smad3的磷酸化;2.FSH对 Smad2/Smad3的激活作用与TGFβ受体密切相关.     

营养性肥胖大鼠弓状核促性腺激素释放激素的表达变化以及对精子发生的影响

目的:探讨营养性肥胖大鼠弓状核神经肽Y(NPY)、瘦素受体(ob-R)及与生殖相关的促性腺激素释放激素(GnRH)表达变化以及对精子发生的影响.方法:免疫组织化学观察NPY、ob R及GnRH在肥胖模型组下丘脑弓状核的表达情况以及睾丸支持细胞雄激素结合蛋白(ABP)表达变化;流式细胞分析检测睾丸生精细胞周期的改变.并测定血清中瘦素、睾酮、卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)的水平.结果:肥胖大鼠血清中瘦素水平较对照组明显升高,睾酮、FSH、LH水平较对照组明显降低;下丘脑弓状核NPY表达较对照组增强,ob-R及GnRH表达较对照组减弱,ABP表达较对照组减弱;肥胖大鼠S期细胞显著下降,G2/M期细胞的百分数明显增多.结论:营养性肥胖大鼠由于神经内分泌代谢失调而引起GnRH水平降低,导致下丘脑垂体睾丸轴功能失调引起睾丸间质细胞及支持细胞功能降低,致使精子发生障碍,可能导致不育.     

卵泡刺激素调节大鼠卵巢颗粒细胞中Smad2/Smad3蛋白的表达及磷酸化

目的:研究卵泡刺激素(FSH)对大鼠卵巢颗粒细胞中Smad2/Smad3蛋白的调节。方法:21dSD雌鼠,腹腔注射孕马血清20IU,对颗粒细胞进行原代培养,用转化生长因子β受体Ⅱ(TβRⅡ)抗体中和卵巢颗粒细胞表面TβRⅡ,以阻断TGFβ/Smads信号通路,再以不同浓度的FSH对细胞进行不同时间的处理,免疫印迹法检测TGFβ信号通路中TβRⅡ、Smad2/Smad3及P-Smad2/P-Smad3蛋白的表达。结果:TβRⅡ、Smad2/Smad3、P-Smad2/P-Smad3蛋白的表达量与FSH的作用呈时间依赖性显著增强;TGFβ/Smads信号通路被阻断后再用FSH处理,Smad2/Smad3、P-Smad2/P-Smad3蛋白的表达量没有明显变化;细胞表面TβRⅡ恢复后,Smad2/Smad3、P-Smad2/P-Smad3蛋白的表达量有少量增加。结论:FSH刺激大鼠卵巢颗粒细胞中Smad2/Smad3的表达和磷酸化;FSH对Smad2/Smad3的激活作用在相当程度上依赖于TβRⅡ。     

贵州某白酒对大鼠睾丸间质细胞内类固醇激素急性调节蛋白表达及血清睾酮水平的影响

目的探讨摄入贵州某54°白酒后,不同时程及不同剂量对大鼠睾丸间质细胞内类固醇激素急性调节蛋白(St AR)表达及血清睾酮水平的变化,以期为科学饮酒提供基础资料。方法正常成年雄性SD大鼠69只,随机分为正常对照组(n=15)及实验组(n=54)。实验组分为低剂量组0.8ml/(kg·d)、中剂量组1.6ml/(kg·d)及高剂量组2.4ml/(kg·d),实验组大鼠每日灌胃2次。分别于第4周末、第8周末、第12周末采血清,取睾丸组织。采用免疫组织化学SABC法、图像分析、Western blotting检测睾丸组织St AR的表达,采用化学发光法检测大鼠血清睾酮水平。结果各实验组的血清睾酮水平与正常对照组比较未见明显异常,差异无统计学意义(P0.05)。St AR免疫组织化学阳性产物存在于睾丸间质细胞胞质内;与正常对照组比较,4周、8周、12周各剂量组St AR免疫染色及平均吸光度均有所增强(P0.05);Western blotting检测,4周、8周、12周各剂量组St AR蛋白表达水平增强(P0.05)。结论在本实验设定的剂量和时程内用该白酒灌胃后,大鼠睾丸间质细胞内St AR表达水平有所增强,血清睾酮水平并无明显变化。     

银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠睾酮水平、LHR和StAR mRNA表达的影响

目的： 探讨银杏叶提取物(EGB)在2型糖尿病大鼠睾酮合成中的作用及其对黄体生成素受体(LHR)、类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)基因表达的影响。方法: 雄性SD大鼠30只，随机均分成3组：正常对照组、2型糖尿病组、EGB 治疗组。后2组给以高脂饮食加小剂量(30 mg/kg)链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病大鼠模型，EGB治疗组予EGB50mg·kg^-1·d^-1灌胃12周，正常对照组及2型糖尿病组灌服等容积生理盐水。测定各组大鼠血葡萄糖、血胰岛素、血LDL-c含量；称各组大鼠睾丸重量，并用光镜和透射电镜观察大鼠睾丸组织的形态学改变； ELISA法检测血清黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平；RT－PCR检测睾丸组织中LHR、StAR mRNA表达水平。结果: 与正常组相比，糖尿病组大鼠血清T、LH含量及睾丸组织的StAR mRNA含量明显降低，血糖、血胰岛素、LDL-c及LHR mRNA含量显著升高，睾丸重量明显减轻；光镜下主要表现为睾丸曲细精管内生精细胞数量减少及生精阻滞，透射电镜下主要见到间质细胞(Leydig cell)及支持细胞内线粒体、内质网等细胞器空泡样变及扩张。EGB治疗组睾丸组织病理改变较轻，血清T 、LH含量及睾丸组织StAR mRNA含量明显高于糖尿病组，血糖、血胰岛素、LDL-c及睾丸组织LHR mRNA含量低于糖尿病组。结论: EGB可提高2型糖尿病大鼠T的合成，其机制可能与改善糖脂代谢紊乱，调节LHR、StAR mRNA表达有关。     

Smad4蛋白及mRNA在卵巢不同发育阶段的表达

目的：探讨Smad4在不同发育阶段大鼠卵巢中蛋白及mRNA的表达。 方法： 选择不同发育时期大鼠卵巢，运用免疫组化方法检测卵巢中Smad4蛋白表达，并进行图像分析；采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Smad4 mRNA在卵巢中的表达。 结果： 免疫组化结果显示Smad4主要表达在各级卵泡中，在卵巢发育早期，Smad4主要在原始卵泡和窦前卵泡中表达；随着卵巢的发育成熟，Smad4在窦状及成熟卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞的表达与间质细胞比较无显著差异（P>0.05）。Smad4在卵泡中的表达强度也发生了变化：随着卵泡的发育，Smad4在窦状及成熟卵泡卵母细胞的表达与窦前卵泡卵母细胞比较明显减弱（P<0.05，P<0.01）；在卵泡膜细胞的表达逐渐增强（P<0.01），而在各级卵泡颗粒细胞中的表达无显著差异（P>0.05）。RT-PCR结果显示各阶段卵巢均有mRNA的表达，从第3周起Smad4 mRNA的表达明显增强，与生后1 d比较差异显著（P<0.05）。 结论： 卵巢内存在Smad4，提示TGF-β家族对卵泡发育的调节很可能是通过Smad信号转导模式实现的。     

Smad2/3与Smad7在大鼠化疗性卵巢早衰卵泡中的表达和意义

目的 探讨顺铂对大鼠卵巢结构和功能损伤的影响及其可能的分子机制。方法 3月龄SD 雌性大鼠随机分为对照组（C组,5只）和化疗组（H组,5只）。H组给予每只大鼠腹腔注射顺铂2 mg/（kg.d）,C组给予腹腔注射等体积生理盐水,连续注射7 d后检测大鼠卵巢指数（卵巢湿重/体重）;酶联免疫吸附法检测血清雌二醇（E₂）和促卵泡刺激素（FSH）水平;苏木素-伊红染色观察卵泡发育并计数各级卵泡;免疫组织化学和Real-time PCR法检测各组Smad2、磷酸化Smad2（p-Smad2）、Smad3、磷酸化Smad3（p-Smad3）、Smad4和Smad7的蛋白和mRNA表达。结果 与C组相比,H组大鼠卵巢体积减小,生长卵泡数明显减少（P<0.05）,大鼠卵巢指数下降（P<0.05）,血清中E2水平降低和FSH水平上升（P<0.05）。免疫组织化学和Real-time PCR结果显示,Smad2（p-Smad2）、Smad3（p-Smad3）、Smad4和Smad7蛋白在卵巢各级卵泡均有表达,H组Smad2蛋白和mRNA表达增加（P<0.05）,Smad2磷酸化水平（p-Smad2）表达增高（P<0.05）;Smad3、Smad4和Smad7蛋白和mRNA表达减少（P<0.05）,p-Smad3 表达降低（P<0.05）。结论 顺铂诱导大鼠卵泡损伤并促进卵巢早衰,引起卵泡细胞内Smad2表达增加,Smad3、Smad7表达降低,Smad细胞内信号通路参与了化疗性卵巢损伤的过程。     

肝纤维化大鼠转化生长因子β1／Smad蛋白的动态表达及意义

目的探讨转化生长因子TGF—β1／Smad信号通路在实验性肝纤维化发生中的作用。方法50只健康雄性SD大鼠分为2组：正常组和模型组,模型组大鼠利用40％CCl4油剂诱导形成肝纤维化模型,于6周及9周观测肝标本的病理,免疫组化法检测肝组织TGF—β1／Smad蛋白表达。结果①肝组织病理：与正常组比较,模型组大鼠肝组织都有不同程度的炎症和纤维化产生。模型组纤维化程度较正常对照组明显,差异有统计学意义（P〈0．05）;②TGF—β1／Smad基因蛋白：免疫组织化学检测显示,与正常对照组相比,模型组大鼠肝脏中TGF—β1、转化生长因子βI型受体（TβR—I）、Smad2、3、Smad,蛋白表达均显著增强（P〈0．01）,模型组大鼠肝脏TGF—β1、TβR-I、Smad。和Smad,之间存在正相关关系（P〈0．05或0．01）;模型组大鼠肝脏纤维化分级与TGF—β1、TβR—I、Smad2/3和Smad,之间存在正相关关系（P〈0．05或0．01）。结论肝组织TGF—β1／Smad蛋白表达水平与肝纤维化程度相关,TGF-β1／Smad信号的增强可能促进了肝纤维化的进展。     

丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠肝脏Smads分子表达的影响

目的: 探讨丹芍化纤胶囊对大鼠实验性肝纤维化Smad2/3、Smad4和Smad7表达的影响,从而评价Smad分子作为抗纤维化靶点的应用价值。方法: 雄性Wistar大鼠48只分为正常组(n=16)、肝纤维化模型组(n=16)、丹芍化纤胶囊治疗组(n=16),除正常组外,其余采用CCl₄、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合病因刺激制备肝纤维化动物模型8周,然后治疗组予以丹芍化纤胶囊(1 g/kg)灌胃治疗8周。实验结束后测定肝脏指数、血清透明质酸(HA)及谷丙转氨酶(ALT),光镜下观察肝组织纤维化程度,检测尿羟脯氨酸(Hyp)排出量,同时用免疫组化SABC法、免疫印迹(Western blotting)和实时荧光定量PCR (qRT-PCR) 法检测肝组织中Smad2/3、Smad4和Smad7的蛋白及mRNA的表达。结果: 治疗组与肝纤维化模型组比较,肝脏指数、血清HA及ALT显著下降,肝纤维化程度显著减轻,尿Hyp排出明显增加。治疗组肝组织中Smad7的蛋白和mRNA的表达水平与肝纤维化模型组相比均显著增高,而Smad2/3、Smad4的蛋白表达与肝纤维化模型组相比则明显降低,但mRNA水平仅轻度下降,与肝纤维化模型组比较差异不显著。结论: 中药丹芍化纤胶囊治疗大鼠肝纤维化可能主要是通过调节Smad7的基因转录和蛋白质翻译,从而发挥其反馈性抑制TGF-β/Smad促纤维化信号转导作用,这可能是丹芍化纤胶囊抗肝纤维化的作用机制之一;Smad7可能是丹芍化纤胶囊作用的一个药物靶点。     

AGEs对肾小管上皮细胞转分化、1型胶原合成及smad信号通路的影响

目的:观察终末期糖基化终产物(AGEs)对正常大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E ）转分化、collagenⅠ合成及Smads信号通路的影响。 方法:应用自制的AGEs（AGE-BSA）刺激NRK52E细胞，采用免疫细胞化学方法检测pmad2/3核表达情况；ELISA方法检测细胞培养上清TGF-β₁的浓度；RT-PCR检测TGF-β₁、Smad2、Smad3和Smad7 mRNA的表达；Western印迹检测α-平滑肌肌动蛋白（SMA）、E-钙粘着糖蛋白（cadherin）和1型胶原（collagenⅠ）蛋白的表达。 结果: AGE-BSA刺激15 min后pSmad2/3核表达明显增加，于30 min（68%）和24 h（76%）出现两个高峰，与刺激前及时间匹配的BSA对照组比较均有显著差异（P<0.05）；AGE-BSA以时间依赖方式上调TGF-β₁、Smad2、Smad3和Smad7 mRNA的表达；NRK52E细胞α-SMA和collagenⅠ蛋白表达高于对照组（P<0.01），E-cadherin蛋白表达低于对照组（P<0.01），细胞上清液TGF-β₁的浓度高于对照组（P<0.01）。 结论:AGEs可诱导肾小管上皮细胞Smads信号通路活化，促进肾小管上皮细胞转分化和细胞外基质collagenⅠ的合成。     

Smad3基因敲除小鼠肾Smad2和p-Smad2表达的变化

目的:观察Smad3基因敲除小鼠肾Smad2和p-Smad2表达的变化,探讨Smad3基因敲除小鼠肾是否有Smad2和p-Smad2代偿性增加.方法:4只Smad3基因敲除小鼠,10只野生型小鼠,应用免疫组织化学显色技术,检测Smad2和p-Smad2蛋白的定位和表达情况,并用Motic病理图像分析系统对图像进行半定量分析.结果:野生型小鼠肾Smad2蛋白在肾远端小管和肾集合管细胞胞质中有广泛弱表达,p-Smad2蛋白在肾远端小管和肾集合管细胞胞质、胞核中也有弱表达,而Smad3基因敲除小鼠的Smad2和p-Smad2的表达比野生型小鼠有显著升高.结论:Smad3基因敲除能引起小鼠肾Smad2和p-Smad2表达的代偿性增加.     

Smad3基因促进大鼠卵巢颗粒细胞增殖

目的 探讨Smad3基因对大鼠卵巢颗粒细胞增殖功能的影响.方法 21d SD雌性大鼠,腹腔注射孕马血清20IU/只,48h后收集卵巢颗粒细胞进行原代培养,用Smad3 基因特异的siRNA基因沉默后,采用免疫细胞化学法检测颗粒细胞中Smad3蛋白表达的变化,以判定基因沉默效率,Smad3基因沉默后用免疫细胞化学法检测...     

肝纤维化大鼠转化生长因子β1/Smad蛋白的动态表达及意义

目的 探讨转化生长因子TGF-β1/Smad信号通路在实验性肝纤维化发生中的作用.方法 50只健康雄性SD大鼠分为2组:正常组和模型组,模型组大鼠利用40％ CCl4油剂诱导形成肝纤维化模型,于6周及9周观测肝标本的病理,免疫组化法检测肝组织TGF-β1/Smad蛋白表达.结果 ①肝组织病理:与正常组比较,模型组大鼠肝组织都有不同程度的炎症和纤维化产生.模型组纤维化程度较正常对照组明显,差异有统计学意义(P＜0.05);②TGF-β1/Smad基因蛋白:免疫组织化学检测显示,与正常对照组相比,模型组大鼠肝脏中TGF-β1、转化生长因子βⅠ型受体(TβR-Ⅰ)、Smad2/3、Smad7蛋白表达均显著增强(P＜0.01),模型组大鼠肝脏TGF-β1、TβR-Ⅰ、Smad2/3和Smad7之间存在正相关关系(P ＜0.05或0.01);模型组大鼠肝脏纤维化分级与TGF-β1、TβR-Ⅰ、Smad2/3和Smad7之间存在正相关关系(P＜0.05或0.01).结论 肝组织TGF-β1/Smad蛋白表达水平与肝纤维化程度相关,TGF-β1/Smad信号的增强可能促进了肝纤维化的进展.     

Expression and localization of Smad2 and Smad4 proteins in the porcine ovary

The objective of the present study was to investigate the temporal and spatial expression of Smad2 and Smad4 proteins, the downstream signaling molecules of the transforming growth factor beta (TGF-β) superfamily, in the porcine ovary. Cellular localization of Smad2 and Smad4 proteins was examined using immunohistochemistry. The specificity of the antibodies was examined using Western blot assay. Western blot analyses demonstrated that 52 kDa Smad2 and 60 kDa Smad4 proteins were expressed in the porcine ovary. Immunohistochemistry revealed that Smad2 and Smad4 were widely expressed in the porcine ovary, mainly localized in the oocyte, granulosa and thecal cells at different stages of folliculogenesis. Within the primordial and primary follicles, Smad2 and Smad4 showed strong staining in oocytes and follicular cells. In the antral follicle, strong staining was observed in oocytes, granulosa and theca cells. These findings suggest that Smad2 and Smad4 may be a key regulator of follicular development and growth of oocytes in the porcine ovary.