糖皮质激素受体-α mRNA在健康鼻腔不同区域黏膜中定量表达的研究

目的检测糖皮质激素受体-α(GR-α)mRNA在健康鼻腔下鼻甲、中鼻甲、钩突黏膜中的定量表达,并探讨其在鼻息肉发生发展中的意义。方法采用荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)检测健康鼻腔下鼻甲、中鼻甲、钩突黏膜中GR-αmRNA的定量表达。结果GR-αmRNA表达在鼻腔正常下鼻甲黏膜为(135.4±5.2)×104拷贝/μg,高于中鼻甲、钩突黏膜(115.9±5.5)×104拷贝/μg,(113.4±6.7)×104拷贝/μg,前者与后两组之间有统计学意义(P<0.01)。结论中鼻甲、钩突黏膜中GR-αmRNA低表达,可能是窦口-鼻道复合体区易发生鼻息肉的机制之一。     

转化生长因子β受体Ⅰ型及Ⅱ型在慢性鼻-鼻窦炎和鼻息肉组织中的表达

目的:探讨转化生长因子β受体(TGFβR)Ⅰ型及Ⅱ型在慢性鼻-鼻窦炎、鼻息肉及正常下鼻甲组织中表达的差异性,以及Ⅰ、Ⅱ型受体在慢性鼻窦炎、鼻息肉发病机制中可能的作用。方法:采用免疫组织化学方法检测TGFβRⅠ、TGFβRⅡ在25例慢性鼻-鼻窦炎、21例鼻息肉、17例下鼻甲组织中的表达,并比较TGFβRⅠ、TGFβRⅡ在慢性鼻-鼻窦炎、鼻息肉、正常下鼻甲组织中表达的差异。结果:TGFβRⅠ、TGFβRⅡ表达的平均灰度值在正常下鼻甲黏膜分别为175.78±7.06、165.00±1.79;在慢性鼻-鼻窦炎组织中分别为147.33±8.15、147.77±4.62;而在鼻息肉组织中分别为125.91±11.26、129.82±1.46。慢性鼻-鼻窦炎及鼻息肉组织中TGFβRⅠ、TGFβRⅡ的表达均比正常下鼻甲黏膜中的表达高,均差异有统计学意义(均P<0.01);且TGFβRⅠ、TGFβRⅡ在鼻息肉组织中的表达比在慢性鼻-鼻窦炎病变黏膜中的表达高,均差异有统计学意义(均P<0.01)。结论:TGFβRⅠ、TGFβRⅡ在慢性鼻-鼻窦炎、鼻息肉组织中具有不同的表达水平及分布特点,提示其可能在慢性鼻-鼻窦炎、鼻息肉的发生发展过程中发挥不同的作用。     

Eotaxin-3在鼻息肉中的表达及作用

目的探讨嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin-3)mRNA在鼻息肉中的表达及作用。方法选取12例鼻息肉患者和8例单纯鼻中隔偏曲患者的下鼻甲黏膜作为对照,使用实时定量逆转录PCR进行检测,比较息肉和下鼻甲黏膜中的Eotaxin-3的表达情况。结果在所有鼻息肉及对照组中,均检测到Eotaxin-3 mRNA的表达。鼻息肉及对照组中Eotaxin-3 mRNA的相对表达量分别为22.91±6.66和1.3 7±0.4 8。鼻息肉组中Eotaxin-3的表达要远远高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.0 1)。结论 Eotaxin-3可能在鼻息肉的发生发展过程中起到重要作用,Eotaxin-3的高表达可能最终导致了息肉的形成和生长。     

地塞米松和组胺对人鼻息肉组织黏蛋白MUC5AC mRNA和蛋白表达的影响

目的:研究地塞米松和组胺对培养的人鼻息肉组织黏蛋白MUC5AC mRNA和蛋白表达的影响。方法:实验分为对照组、组胺刺激组和地塞米松干预组,采用RT-PCR和免疫组织化学技术分别检测鼻息肉组织中MUC5AC mRNA和蛋白的表达。结果:组胺刺激组鼻息肉组织MUC5AC mRNA和蛋白表达分别为0.6389±0.0526和0.1934±0.0137,均较对照组(分别为0.3495±0.0357和0.1172±0.0173)明显增加(均P<0.01),地塞米松抑制后两者均明显降低(分别为0.4988±0.0603和0.1444±0.0075)(均P<0.05)。结论:炎性递质组胺可上调黏蛋白表达;地塞米松可下调黏蛋白表达,这可能是它抑制鼻息肉黏液过度分泌的途径之一。     

鼻息肉组织嗜酸粒细胞中水通道蛋白-1和抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达及意义

目的 明确水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP-1)mRNA、抗凋亡基因Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织中的表达、分布及其相关性,探讨AQP-1 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞中表达的意义。方法 16例鼻息肉组织标本来源于鼻息肉切除的患者(女11例,男5例,年龄20-65岁);10例下鼻甲黏膜组织来源于有变应性鼻炎病史的鼻整形患者(女7例,男3例,平均年龄16-58岁)。上述标本取组织相邻切片,应用原位杂交方法检测AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA的表达;以麦格-姬姆萨(May-Griunwald-Giemsa,MGG)染色法鉴别嗜酸粒细胞。结果 16例鼻息肉组织嗜酸粒细胞中均有AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA表达,其阳性细胞表达率分别为(93.16±13.25)％;(84.74±12.10)％;而10例下鼻甲组织嗜酸粒细胞中均有Bcl-2 mRNA表达,但仅有4例表达AQP-1 mRNA;AQP-1mRNA和Bcl-2 mRNA在下鼻甲组织嗜酸粒细胞中阳性细胞表达率分别为(19.54±4.98)％和(16.45±3.12)％。AQP-1 mRNA与Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞的表达呈明显正相关(r=0.875,P<0.01)。结论 AQP-1能够平衡鼻息肉组织嗜酸粒细胞内外液体渗透压,维持其存活,在嗜酸粒细胞抗凋亡中具有重要的意义。     

CFTR蛋白在鼻息肉和正常下鼻甲黏膜中的表达

目的:探讨囊性纤维跨膜转运调节因子(CFTR)在鼻息肉发病机制中的作用。方法:采用免疫组织化学SP法检测28例慢性鼻窦炎患者鼻息肉组织(鼻息肉组)和7例正常下鼻甲黏膜(下鼻甲组)中CFTR蛋白的表达情况。结果:①CFTR在上述2组组织均有表达,主要表达于上皮细胞和分泌细胞,并且优势表达于鼻息肉。CFTR在正常下鼻甲黏膜呈较为单一的顶上膜表达,而在鼻息肉中呈顶上膜表达和细胞质表达并存;②鼻息肉组CFTR的黏膜上皮阳性细胞顶上膜表达的强度值(1.921±0.310)显著高于下鼻甲组(0.971±0.214)(P<0.05)。鼻息肉组CFTR的上皮阳性细胞质表达的强度值(2.036±0.439)亦显著高于下鼻甲组(0.550±0.366)(P<0.05)。结论:氯离子通道CFTR蛋白的过度表达和异常表达可能在鼻息肉的发病机制中起重要的作用。     

荧光定量RT-PCR检测糖皮质激素受体-α mRNA 在鼻息肉组织中的表达

目的:定量检测糖皮质激素受体-α(GR-α)mRNA在鼻息肉和鼻腔正常黏膜中的表达,并探讨其在鼻息肉发生发展中的意义。方法:采用荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)检测36例鼻息肉(息肉组)和31例鼻腔正常黏膜(对照组)中GR-αmRNA定量表达。结果:GR-α在对照组[(135.4±5.2)×1010copy/g]中比息肉组[(25.5±5.0)×1010copy/g]中表达高,两组之间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:GR-α在息肉组织中的低表达,可能是促进鼻息肉发生发展的一个重要因素。     

人鼻黏膜上皮细胞HIF-1α和VEGF的表达及意义

目的:在感染件因子、炎性因子及缺氧条件下观察人鼻黏膜上皮细胞缺氧诱导因子-1(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况及意义.方法:无血清原代培养人鼻息肉及下鼻甲黏膜上皮细胞,以脂多糖10、100、1000μg/L,IL-1β20μg/L以及缺氧作用于对数生长期的上皮细胞3、6、9 h后,采用免疫细胞化学方法和原位杂交方法检测HIF-1α、VEGF蛋白及mRNA的表达情况.结果:①缺氧条件下,促红细胞生成素在鼻息肉和下鼻甲黏膜上皮细胞中明显表达,且两者无明显差异,表明促红细胞生成素可作为组织缺氧标志;②鼻黏膜上皮细胞在感染性因子、炎性因子及缺氧作用下,HIF-1α、VEGF表达增加且具有时间和剂量依赖性,其中缺氧组表达最明显(P＜0.05);③各组因素作用下鼻息肉组HIF-1α、VEGF的表达明显高于下鼻甲黏膜组(P＜0.05);④HIF-1α、VEGF在鼻息肉黏膜上皮细胞中的表达呈明显正相关(r=0.870,P＜0.05).结论:感染性因子、炎性因子及缺氧作用下鼻黏膜上皮细胞表达HIF-1α增加,进而诱导VEGF大量表达,是鼻息肉发生、发展的重要原因之一.     

TNF-α和MMP-9在鼻息肉嗜酸粒细胞浸润过程中的作用

目的:研究鼻息肉组织中TNF-α、MMP-9的表达和意义,并探讨两者表达与嗜酸粒细胞(EOS)浸润的关系.方法:采用原位杂交和免疫组织化学技术,检测鼻息肉组30例息肉组织及对照组10例下鼻甲黏膜组织中TNF-α、MMP-9 mRNA和蛋白的表达;采用苏木精-伊红染色观察鼻息肉和下鼻甲黏膜组织中EOS的浸润情况,并比较分析三者之间的相关性.结果:鼻息肉组织中TNF-α表达的阳性细胞数、阳性血管数及MMP-9阳性细胞数与下鼻甲黏膜组织相比差异有统计学意义(P<0.05);且鼻息肉组织中TNF-α阳性细胞数和阳性血管数均与EOS数存在明显相关性(P<0.05),MMP-9阳性细胞数与EOS数明显相关(P<0.05),TNF-α阳性细胞数与MMP-9阳性细胞数存在相关性(P<0.05).结论:TNF-α、MMP-9在鼻息肉的发病机制中发挥着重要作用,TNF-α可能通过诱导MMP-9的产生促进EOS在鼻息肉中的浸润.     

分泌性中耳炎模型大鼠中耳黏膜中上皮钠通道mRNA的表达及其意义

目的探讨上皮钠通道(epithelial sodiumchannel,ENaC)mRNA在分泌性中耳炎模型大鼠中耳黏膜中的表达及其意义。方法 12只SD大鼠实验耳经鼓膜注入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)制造分泌性中耳炎(otitis media with effusion,OME)动物模型,在造模后第二天取中耳黏膜,采用实时定量-聚合酶链反应(real time-polymerase chain reaction,Red ti me PCR)检测中耳黏膜中ENaC-mRNA的表达,并与对照耳(注入等量生理盐水)相比较。结果实验耳α-、β-、γ-ENaC-mRNA的相对表达量分别为0.007 8、0.009 2、0.007 6,对照耳α-、β-、γ-ENaC-mRNA的相对表达量分别为0.012 1、0.012 6、0.011 7;实验耳相α-、β-、γ-ENaC-mRNA相对于对照组分别下调1.56倍(P<0.05)、1.37倍(P<0.05)、1.53倍(P<0.01)。结论 ENaC在分泌性中耳炎大鼠模型中耳黏膜中基因转录水平发生下调,这可能是导致OME早期积液形成的机制之一。     

鼻息肉中IL-15mRNA的表达及其作用

目的 观察IL-15mRNA在鼻息肉与下鼻甲中表达的差异及其与Bcl-2、Bcl-XL表达的关系,明确鼻息肉中IL-15的来源,探讨其在鼻息肉发病机制中的作用。方法 用原位杂交的方法测定24例鼻息肉与8例下鼻甲的IL-15mRNA的表达情况,同时用免疫组化法检测其组织中Bcl-2及Bcl-XL的表达情况。结果 鼻息肉组中IL-15mRNA在黏膜下固有层浸润的以EOS为主的炎症细胞有很强的表达,与下鼻甲组IL-15mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05)。IL-15mRNA在多数鼻息肉中的黏膜下腺体上皮细胞有表达,且强于在下鼻甲组的表达。黏膜下固有层炎症细胞IL-15mRNA的表达与Bcl-XL的表达有相关性(r＝0.592)。结论 IL-15通过旁分泌或自分泌的方式作用于位于黏膜下固有层中以嗜酸性粒细胞为主的炎症细胞,并通过Bcl-XL途径诱导的凋亡抑制在鼻息肉的发病中可能起重要作用。IL-15在鼻息肉中黏膜下腺体的表达强于在下鼻甲中的表达,可能参与了鼻息肉形成过程中黏膜下腺体分泌功能紊乱的病理过程。     

鼻息肉中血管内皮生长因子mRNA的检测与意义

目的 :检测鼻息肉组织和鼾症下鼻甲粘膜组织中的血管内皮生长因子 (VEGF) m RN A水平的表达 ,了解其在慢性炎症过程中的作用。方法 :取 6例行下鼻甲切除术的下鼻甲粘膜和 7例鼻息肉切除术的鼻息肉标本 ,用半定量的反转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)方法检测 VEGF的 m RNA表达。结果 :RT- PCR结果显示在鼻息肉组织中 V EGF的表达较鼾症患者下鼻甲粘膜组织明显升高。结论 :鼻息肉组织中 VEGF的表达显著升高 ,推测 VEGF在鼻息肉的形成、生长及复发过程中具有极其重要的作用。     

胰岛素样生长因子1在鼻息肉组织中的表达与IgE的相关性研究

目的探讨胰岛素样生长因子1(insulin-likegrowth factor 1,IGF-1)在鼻息肉组织中的表达及其与IgE的相关性。方法使用荧光定量PCR技术和免疫组织化学技术分别检测40例伴鼻息肉的慢性鼻及鼻窦炎(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)患者的鼻息肉组织(CRSwNP组)和20例鼻中隔偏曲患者的中鼻甲组织(对照组)中IGF-1 mRNA及其蛋白的表达、免疫组织化学技术检测所有标本的总IgE表达并进行统计学分析。结果 IGF-1蛋白在CRSwNP组及对照组的阳性率分别为75.3%和15.4%,IGF-1 mRNA在两组的表达分别为0.825±0.315和0.358±0.387,CRSwNP组IGF-1蛋白和IGF-1 mRNA的表达显著高于对照组(t=6.318,P<0.01;t=-5.014,P<0.05);CRSwNP组中合并变应性因素与无变应性因素亚组之间的IGF-1 mRNA表达无差异(t=0.856,P>0.05)。总IgE在两组阳性细胞数分别为14.65±3.34和3.40±1.27,CRSwNP组总IgE阳性细胞数显著高于对照组(t=-5.366,P<0.01)。IGF-1 mRNA与总IgE阳性细胞数呈正相关(r=0.319,P<0.05)。结论IGF-1参与CRSwNP的发病机制,局部变应性因素而非系统性变应性因素影响其表达,IGF-1可能通过促进细胞生长、抑制细胞凋亡以及促进IgE的生成参与局部免疫调控等途径发挥作用。     

Toll样受体mRNA在鼻息肉中的表达及意义

目的探讨Toll样受体-2(Toll-like receptor2,TLR-2)及Toll样受体-4(Toll-like receptor-4,TLR-4)mRNA在鼻息肉中的表达,分析TLR-2和TLR-4在鼻息肉发病中的作用。方法应用核酸分子原位杂交技术检测25例鼻息肉患者和20例鼾症患者下鼻甲中TLR-2和TLR-4 mRNA的表达。结果TLR-2和TLR-4 mRNA在25例鼻息肉中均有表达,且分别与对照组间差异有显著性意义。结论TLR-2和TLR-4在鼻息肉中高表达,表明感染性因素仍然是鼻息肉发病中的重要因素。     

NLRP3炎性小体在嗜酸粒细胞性鼻息肉发病及复发中的作用

目的 探讨NLRP3炎性小体在嗜酸粒细胞性鼻息肉(ENP)发病及复发中的可能作用及机制。 方法 根据HE染色,选取80例ENP(ENP组)、24例嗜酸粒细胞性复发鼻息肉(RENP)患者(RENP组)的鼻息肉组织及同期30例鼻中隔偏曲患者(对照组)的中鼻甲黏膜。所有患者嗜酸粒细胞(EOS)浸润数通过HE染色观察并计算,采用免疫组化法检测3组NLR含热蛋白结构域3(NLRP3)炎性小体、白细胞介素-1beta(IL-1β)、IL-18的表达情况,并分析ENP、RENP组中NLRP3炎性小体与EOS浸润数的相关性。 结果 IL-1β和IL-18在ENP及RENP组中的表达均高于对照组(P<0.05),但在ENP与RENP组中的表达无显著差异(P>0.05)。NLRP3炎性小体在RENP组中的表达明显高于ENP组和对照组(P<0.01),且EOS浸润数明显多于ENP组(P<0.05)和对照组(P<0.01)。NLRP3炎性小体在ENP及RENP组中的表达均与EOS浸润数呈正相关。 结论 NLRP3炎性小体、IL-1β和IL-18均与ENP发病密切相关,NLRP3炎性小体可能参与ENP的复发。     

鼻息肉中单核细胞趋化蛋白1和血管内皮生长因子的表达

目的明确单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemotactic protein 1，MCP-1）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在鼻息肉组织中的表达及其相关性，初步探讨MCP-1与鼻息肉发生的关系。方法取40例鼻息肉组织和25例下鼻甲组织，应用原位杂交和免疫组织化学等方法检测MCP-1和VEGF mRNA及蛋白质的表达。结果鼻息肉组织中MCP-1和VEGF mRNA及蛋白质的表达均高于对照组下鼻甲组织（P值均〈0．01）；鼻息肉组织中MCP-1和VEGF蛋白质的表达呈正相关（r=0．871，P〈0．05）。结论鼻息肉组织中MCP-1和VEGF表达增加，二者协同作用可能是鼻息肉形成的原因之一。     

鼻息肉中免疫球蛋白E白细胞介素5和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的表达

目的 :探讨鼻息肉组织中免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素 5 (IL 5 )和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM CSF)的表达对嗜酸性粒细胞 (EOS)浸润聚集的作用及IgE与IL 5和GM CSF的关系及其意义。 方法 :应用连续两步免疫酶法 (Sandwich)检测 31例鼻息肉标本 (鼻息肉组 )和 11例下鼻甲黏膜标本 (对照组 )组织匀浆中IgE水平 ;应用酶联免疫吸附测定法检测两组组织匀浆中IL 5和GM CSF水平 ,同时观测两组组织中EOS的浸润程度。结果 :鼻息肉组IgE、IL 5和GM CSF水平均明显高于对照组 (圴 P <0 .0 1) ,且三者水平分别与鼻息肉组织中EOS浸润数呈正相关 (r分别为 0 .73、0 .5 4和 0 .4 8,均P <0 .0 1) ,且鼻息肉中IgE与IL 5和GM CSF水平呈正相关 (r分别为 0 .6 5和 0 .4 2 ,分别P <0 .0 1和P <0 .0 5 )。结论 :IgE局部水平的上调提示鼻息肉中存在局部变态反应 ,其对鼻息肉中IL 5和GM CSF的表达上调和EOS的聚集具有重要作用 ;IL 5和GM CSF在鼻息肉中高表达 ,对EOS的浸润聚集具有重要作用。     

ERK5蛋白在鼻息肉细胞中的表达和意义

目的 探讨细胞外调节蛋白激酶5(ERK5)在鼻息肉细胞中的表达和意义。 方法 分析2013年1月至2014年12月接受治疗的慢性鼻-鼻窦炎(CRS)患者的临床资料,将其中37例慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)患者列为观察组(CRSwNP组),35例慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)患者作为对照组(CRSsNP组)。 结果 CRSwNP组患者血清中TNF-α(t=16.7,P<0.001)、IL-5(t=13.81,P<0.001)和IL-8(t=8.642,P<0.001)含量显著高于对照组,差异具有统计学意义(P>0.05);Western Boltting检测结果表明,在CRSwNP组中ERK5蛋白表达水平显著高于对照组中ERK5蛋白表达水平(灰度比1.21±0.16 vs 0.36±0.04,P<0.01,n=37);Pearson相关性检验分析结果表明,CRSwNP组患者ERK5蛋白表达与TNF-α(r=0.521,P=0.001)及IL-8(r=0.479,P=0.003)呈显著正相关。 结论 ERK5蛋白在CRSwNP患者中高水平表达,且与TNF-α及IL-8呈显著正相关关系。     

天然免疫蛋白PLUNC在鼻息肉中的表达及与鼻息肉临床特征的关联性

目的：探讨天然免疫蛋白腭、肺、鼻上皮克隆（PLUNC）在鼻息肉组织中的表达情况,分析PLUNC蛋白浓度与鼻息肉大小（鼻内镜记分）和手术后复发的关联性。方法：采用免疫组织化学和实时定量PCR检测鼻息肉组（28例鼻息肉患者,其中13例为术后复发患者）和对照组（16例钩突黏膜对照）PLUNC的组织染色定位和mRNA的表达情况,同时采用ELISA检测初发和复发鼻息肉组织中PLUNC的蛋白浓度差异,评估PLUNC蛋白浓度与息肉大小、鼻塞、流涕症状记分的相关性。结果：鼻息肉组织中PLUNC主要定位在黏膜上皮和腺体,染色强度记分显著低于对照的钩突组织（P〈0．01）;PLUNCmRNA表达水平也显著低于对照的钩突组织（P〈0．01）。初发和复发鼻息肉组织中PLUNC蛋白OD值分别为0．33±0．11和0．15±0．05,差异有统计学意义（P〈0．01）。小型和大型鼻息肉PLUNC蛋白OD值分别为0．32±0．14和0．19±0．07,差异有统计学意义（P〈0．05）。鼻息肉组织中PLUNC蛋白浓度与鼻塞和流涕记分存在显著负相关（r=-0．51和r=-0．57,P〈0．01）。结论：PLUNC的表达降低提示鼻息肉的发生可能与天然免疫反应的减弱有关,因此,上调天然免疫分子如PLUNC等的表达可作为干预鼻息肉发病的一个新策略。