二氧化硫对大鼠肝和肺细胞色素P4502B1和2E1 mRNA表达及活性的影响

目的探讨二氧化硫(SO2)对肝、肺微粒体细胞色素P450两种亚型CYP2B1和CYP2E1mRNA表达及活性的影响。方法采用SO2动式染毒技术使雄性Wistar大鼠染毒7天,每天6h,SO2的染毒剂量分别为14、28和56mg/m3。采用分光光度法测定大鼠肝、肺微粒体CYP2E1活性,采用荧光分光光度法测定肝、肺微粒体CYP2B1活性,采用RT-PCR方法测定各组大鼠肝、肺组织中CYP2B1和CYP2E1mRNA表达水平。结果在肝中,较高剂量的SO2(28和56mg/m3)可使CYP2B1活性及mRNA水平降低,肝微粒体CYP2E1活性及mRNA在各剂量组均未发生显著改变。肺组织中CYP2B1活性在56mg/m3剂量组显著降低,但其mRNA水平在28及56mg/m3剂量组均显著降低;肺微粒体CYP2E1活性及mRNA水平在28及56mg/m3SO2处理组均降低显著。结论SO2可降低大鼠肝中CYP2B1和2E1及肺中CYP2B1和CYP2E1的活性及mRNA水平。     

三氯乙烯对肝细胞凋亡基因和肝代谢酶基因表达水平的影响

目的研究三氯乙烯（TCE）对人肝细胞凋亡基因（Caspase-3、Caspase-8、BAX、Bcl-2）和肝代谢酶基因(CYP1A2、CYP2E1、CYP3A4) mRNA表达水平的影响。方法用含10%胎牛血清的RPMI-1640 培养肝细胞,DMSO作为溶剂对照,采用不同浓度TCE（0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mmol/L）染毒L02肝细胞24 h,另外用TCE 1.0 mmol/L染毒细胞不同时间（2 h, 4h, 8h, 16h, 32h）,采用Real-time 荧光定量PCR技术检测肝细胞中凋亡基因和CYP基因mRNA表达水平。结果不同剂量TCE染毒后,凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、BAX表达水平比对照组升高21%~145%,差异有统计学意义（P<0.05 或P<0.01）, Bcl-2表达水平下降20%~35%。TCE染毒引起CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1的 mRNA表达明显上升,比对照组升高30%~550%,差异有统计学意义（P<0.05 或P<0.01）。用TCE 1.0 mmol/L染毒2 h~32 h,同样发现凋亡基因和肝代谢酶基因表达增加,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05,或P<0.01）。结论TCE可引起肝细胞凋亡基因和肝代谢酶基因表达变化,凋亡基因和肝代谢酶基因可能在TCE对肝细胞毒性效应中发挥重要作用。     

乌司他丁对庆大霉素损伤的大鼠肾小管上皮细胞的保护作用

摘要:目的　观察乌司他丁对庆大霉素损伤的大鼠肾小管上皮细胞表达内皮素-1（ET-1）和一氧化氮（NO）的影响。方法　传代培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）,分为对照组、损伤组（2 mg/ml庆大霉素）、治疗组A（2 mg/ml庆大霉素+160 U/ml乌司他丁）、B（2 mg/ml庆大霉素+320 U/ml乌司他丁）和C（2 mg/ml庆大霉素+640 U/ml乌司他丁）,观察各组细胞增殖能力、乳酸脱氢酶（LDH）水平、细胞凋亡率、ET-1和NO含量、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和诱生型一氧化氮合酶（iNOS）活性以及ET-1、eNOS和iNOS mRNA表达情况。结果　与对照组相比,损伤组细胞增殖能力下降,LDH、细胞凋亡率、ET-1、ET-1 mRNA、NO、iNOS和iNOS mRNA表达均增多（P均＜0.05）。与损伤组相比,治疗组细胞增殖能力增高,LDH、细胞凋亡率、ET-1、ET-1 mRNA、NO、iNOS和iNOS mRNA表达均减少;这些改变随剂量增加而明显（P均＜0.05）。eNOS活性和mRNA表达在5组间的差异无统计学意义（P均＞0.05）。结论　乌司他丁通过抑制ET-1、NO和iNOS减轻庆大霉素损伤大鼠肾小管上皮细胞,这些作用在一定范围具有剂量依赖性。     

氯乙烯染毒对大鼠肝细胞色素P4502E1活力和mRNA表达的影响

目的　研究氯乙烯染毒大鼠肝微粒细胞色素P4502E1(CYP2E1)活力和mRNA表达随染毒时间和剂量的变化, 探讨两者可能的关系。方法　大鼠染毒12 周, 低、中、高剂量组的染毒剂量分别为5,10, 20 mg/kg, 分别在第3, 6, 9 和12 周处死动物, 代谢酶CYP2E1 活力测定采用分光光度法, 其mRNA表达用一步法RT PCR测定。结果　低剂量组CYP2E1活力随染毒时间增加而增强(P<0 05);中、高剂量组CYP2E1活力出现先升高后降低的趋势。染毒结束时,中、高剂量组大鼠肝细胞mRNA表达明显高于对照组(P<0 01)和低剂量组(P<0 05)。结论　低剂量组CYP2E1 的活力随染毒时间增加而增强, 而CYP2E1 mRNA的相对表达在本次实验中未出现时间趋势, 但在染毒结束时有明显的剂量-效应关系, 两者变化水平不一致。     

CYP2E1基因启动子区组蛋白高乙酰化作用促进异烟肼诱导的肝细胞凋亡

目的:探讨异烟肼(INH)诱导肝细胞CYP2E1启动子区组蛋白乙酰化对肝细胞凋亡的影响。方法:INH浓度1000μg/mL,Garcinol为5μmol/L,药物作用6h。ELISA检测乙酰化酶HAT与去乙酰化酶HDAC活性。Chip检测H3K56、H4K5水平。RT-PCR检测CYP2E1、JNK、Bax、Bcl2表达。结果:INH组与对照比,HAT活性降低,HDAC及CYP2E1启动子区acH3K56和acH4K5水平升高,JNK、Bax的mRNA增加,Bcl2下降。与INH组比,INH+Garcinol组HAT活性、acH3K56、acH4K5表达及JNK、Bax降低,Bcl2升高。结论:抑制肝细胞CYP2E1基因启动子乙酰化可减少INH诱导的肝细胞凋亡。     

葡多酚对N-亚硝基化合物诱发的肝细胞SSTR-2 mRNA表达的抑制

目的　研究葡多酚 (GPC)对N 亚硝基化合物诱发的大鼠肝细胞生长抑素受体 - 2mRNA(SSTR 2mRNA)表达的影响作用。方法　将大鼠经口灌胃 0 5 %的亚硝酸钠诱发肝细胞突变 ,2个GPC实验组同时经口给予GPC 1 0 0mg kg和 1 0mg kg,用原位杂交技术检测肝细胞SSTR 2mRNA的表达水平。结果　诱变损伤组和高GPC组SSTR 2mRNA表达的阳性细胞率分别为 1 9 89%和 7 83% ,两组之间的差别有显著性意义 (P<0 0 5 )。结论　葡多酚对N 亚硝基化合物诱发的大鼠肝细胞SSTR 2mRNA异常表达有抑制作用     

不同浓度甘草甜素对肝星状细胞增殖的影响及其调控机制的研究

目的探讨不同浓度甘草甜素对肝星状细胞增殖的影响及其调控机制的研究。方法用MTY法检测三组不同浓度甘草甜素对肝星状细胞增殖的抑制率,用免疫细胞化学法检测细胞周期素cyclinE的表达情况。结果MTT法检测不同药物浓度组：空白对照组、0．8mg／L甘草甜素组、1．2mg／L甘草甜素组、1．6mg／L甘草甜素组细胞增殖抑制率分别为0,2．73％,14．75％,25．96％,差异有统计学意义（P〈0．05）;不同浓度甘草甜素组中cyclinE阳性表达细胞数与对照组比较明显减少,且呈浓度依赖性,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论甘草甜素能够浓度依赖性的抑制大鼠肝星状细胞增殖;甘草甜素可通过降低细胞周期素cyclinE的表达从而抑制大鼠肝星状细胞增殖。’     

葡多酚对大鼠肝脏TNF-α与TGF-β_1mRNA异常表达的抑制作用

目的: 研究葡多酚(GPC)对N-亚硝基化合物引发的大鼠肝细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA与转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA异常表达的抑制作用。 方法:将大鼠随机分为正常对照组、阳性对照组和2个GPC实验组,每组10只,雌雄各半。后3组给口服50 mg/kg bw亚硝酸钠诱发突变,2个GPC实验组经口分别给予GPC100 mg/kg bw和10 mg/kg bw,喂养8 w,体内灌注固定肝组织,用原位杂交技术检测肝细胞TNF-αmRNA与TGF-β1 mRNA的表达水平。 结果: 阳性对照组TNF-αmRNA与TGF-β1 mRNA表达的阳性细胞率分别为30.23%和19.47 %,高剂量GPC组则为11.94 %和6.96 %,低剂量GPC组分别为18.16%和14.03%,与阳性对照组之间的差别均有显著性意义(P<0.05)。结论: 葡多酚对N-亚硝基化合物引发的大鼠肝细胞TNF-αmRNA与TGF-β1 mRNA的异常表达均有抑制作用。     

慢性炎症因子在多囊卵巢综合征发病中的作用

目的:探讨慢性炎症因子白细胞介素18(IL-18)在多囊卵巢综合征(PCOS)发病过程中的作用。方法:采用不同浓度的IL-18(0、100、200、500、1 000 pg/ml)对体外培养的大鼠颗粒细胞甾体激素分泌、雄激素活性及芳香化酶活性的影响。结果:与对照组(0 pg/ml)相比,IL-18能够抑制颗粒细胞孕酮的分泌(P<0.05),增加Western blot中雄激素受体蛋白的表达,并降低芳香化酶CYP19蛋白的表达;通过qPCR实验发现,在IL-18作用下,颗粒细胞的ARmRNA表达明显增加(P<0.05);CYP19mRNA在500、1 000 pg/ml的IL-18作用下表达呈下降趋势(P<0.05)。结论:IL-18能够抑制颗粒细胞孕酮的分泌,抑制CYP19蛋白及mRNA的表达,抑制芳香化酶活性;并促进AR蛋白及mRNA的表达,间接增加雄激素的活性,可能与慢性炎症参与PCOS的发病有关。     

二氧化硫对大鼠细胞色素P4501A的抑制作用

目的探讨二氧化硫（sch）对肝、肺微粒体细胞色素P4501A1及1A2的影响。方法采用动式染毒技术给予雄性Wistar大鼠不同浓度SO2，染毒。采用荧光分光光度法和荧光实时定量RT—PCR方法测定各组大鼠肝、肺微粒体CYP1A1和CYP1A2活性及mRNA表达水平。结果随着SO2吸入浓度增加，大鼠肝肺CYP1A1和1A2mRNA表达水平，肝微粒体CYP1A1活性、肺微粒体CYP1A1和1A2活性逐渐降低，且存在明显的剂量一效应关系；肝微粒体CYP1A2活性在56mg／mosch处理组降低显著。结论SO2可降低大鼠肝、肺微粒体CYP1A1和1A2活性和mRNA水平，吸入SO2后肝、肺对外源化合物及药物的代谢可能会受到影响。     

溴氰菊酯对大鼠脑中苄氧基试卤灵O-脱烷基化酶活力及CYP2B1/2B2蛋白水平的影响

目的　研究溴氰菊酯 (deltamethrin ,DM)对大鼠脑组织中苄氧基试卤灵O 脱烷基化酶(benzyloxyresorufinO dealkylatase,BROD)活力及CYP2B1 / 2B2蛋白水平的影响。方法　采用荧光分光光度法 ,在体内、体外研究了DM对大鼠脑组织中BROD活力的影响 ,并用Western blot法检测了DM对CYP2B1 / 2B2蛋白水平的影响。结果　大鼠连续 5d腹腔注射DM 1 2 .5mg·kg- 1 ·d- 1 染毒后 ,其全脑、大脑皮层及小脑BROD活力明显被抑制 ,其抑制率分别是 2 6 .7%、2 3 .8%和 33 .3 % ,差异均有显著性(P <0 .0 5) ;在体外 ,DM浓度在 2× 1 0 - 8～ 2× 1 0 - 4mol/L范围内对BROD活力无明显影响 ;DM在体内明显降低小脑中CYP2B1 / 2B2蛋白水平 ,其酶蛋白合成抑制率为 42 .6 %。结论　DM在体内能明显抑制脑内BROD活力 ,其机制与抑制该酶蛋白合成有关     

微囊藻毒素-LR对活性氧产生及细胞色素P450各亚型表达的影响

[目的]探讨低剂量微囊藻毒素-LR（MCLR）诱导细胞内活性氧（ROS）产生的潜在来源。[方法]采用转染有机阴离子转运多肽OATP1B3的人胚肾细胞株HEK293-OATPIB3,设3个浓度的MCLR处理组（10、20、50nmol／L）和未处理对照组（0．1％二甲基亚砜）。染毒4、24h后,测定乳酸脱氢酶（LDH）漏出率,用荧光探针法检测细胞内ROS水平,采用实时荧光定量聚合酯链反应检测细胞色素P4501A1（CYP1A1）、1A2、2E1 mRNA的表达水平。[结果]低浓度（10-50nmol／L）的MCLR作用HEK293-OATP1B3细胞4h未产生明显细胞毒性;24h后,LDH漏出率随着处理浓度的增加而增加。50nmol／LMCLR处理细胞4h后引起ROS水平明显升高（P〈0．01）。同时,MCLR还上调了CYP2E1的mRNA表达水平（P〈0．01）;但未影响CYP1A1 mRNA的表达;对照组和MCLR处理组的CYP1A2 mRNA表达水平均非常低。[结论]低剂量MCLR可诱导细胞内ROS产生和上调CYP2E1 mRNA表达,提示CYP2E1可能是MCLR诱导ROS产生的一个潜在来源。     

维生素Ｅ对1，2-二氯乙烷中毒性脑水肿保护作用的研究

目的探讨维生素E (vitamin E,Vit E)对1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane,1,2-DCE)中毒性脑水肿的保护作用。方法将雌性昆明种小鼠随机分为空白对照组、Vit E对照组、1,2-DCE单纯染毒组及Vit E低、中和高剂量干预组。连续给予药物灌胃4 d后,采取静式吸入方式染毒3. 5 h/d,持续3 d。结果与空白对照组相比,单纯染毒组小鼠脑组织呈现明显脑水肿病理改变,脑含水量、脑组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及细胞色素P450 2E1 (cytochrome P450 2E1,CYP2E1)蛋白和mRNA表达水平显著升高,脑组织中还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase assay kit,CAT)活性、Occludin蛋白和mRNA及Claudin 5蛋白表达水平显著降低。与单纯染毒组相比,各干预组小鼠的脑含水量、脑组织MDA含量、CYP2E1蛋白和mRNA表达水平显著降低,GSH含量、Occludin蛋白及mRNA水平显著升高;中和高剂量干预组的小鼠脑组织中SOD和CAT活性及Claudin 5蛋白表达水平亦显著升高(P0. 05)。结论单纯1,2-DCE染毒可引起小鼠脑水肿,诱导脑组织中CYP2E1的表达,诱发脑组织氧化损伤,破坏紧密连接蛋白,并抑制Occludin和Claudin 5的表达;而Vit E干预可显著抑制CYP2E1的表达,缓解CYP2E1介导的氧化损伤,有效预防1,2-DCE引起的中毒性脑水肿。     

Induction of blood lymphocyte cytochrome P450 2E1 in early stage alcoholic liver cirrhosis

To validate the induction of blood lymphocyte cytochrome P450 2E1 (CYP2E1) expression in alcoholic liver cirrhosis and mRNA and protein expression of CYP2E1 in freshly prepared blood lymphocytes of alcoholic liver cirrhotic (ACP), nonalcoholic cirrhotic patients (NACP), alcoholic controls (ACs), and nonalcoholic controls (NACs) were investigated. Registered ACP and NACP patients at Sanjay Gandhi Postgraduate Institute of Medical Science, Lucknow, India along with NACs and ACs were included in the study. Real time polymerase chain reaction, enzyme-linked immunosorbent assay, and CYP2E1-dependent enzyme activity were determined in blood lymphocytes isolated from cases and controls. Significant increases in CYP2E1 mRNA and protein expression were observed in freshly prepared blood lymphocytes isolated from ACs and ACP patients as compared with respective NACs or NACP patients. A concomitant increase in N-nitrosodimethyamine demethylase activity was evident in the blood lymphocytes of ACs and ACP patients. Interestingly, the comparative increase observed in CYP2E1 expression was of greater magnitude in the blood lymphocytes isolated from ACP patients, although they abstained from alcohol drinking. Findings suggest that significant increase in the CYP2E1 mRNA and protein expression in the blood lymphocytes, isolated from early stage ACP patients, can be used to predict alcohol-induced toxicity.     

CYP2E1基因多态性和DNA损伤修复酶表达对肺癌易感性的影响

[目的]研究CYP2E1基因型与不同肺组织中切除修复鼠缺陷交叉互补基因2蛋白(ERCC2)、尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)、细胞增殖核抗原(PCNA)的表达水平的关系，探讨CYP2E1基因多态性对DNA稳定性和肺癌易感性的影响。[方法]通过免疫组织化学和原位杂交方法研究3种生物标志物在不同肺组织中蛋白质和mRNA的表达水平，同时采用PER-RFLP方法进行CYP2E1分型。[结果]在3种CYP2E1基因型(ww、mw、mm)中，ww和mm基因型对ERCC2的表达有明显影响，mw基因型对UDG的表达有明显影响，3种基因型均与PCNA的表达有关。交互分析结果显示CYP2E1多态性与UDG的表达存在交互作用。[结论]不同个体CYP2E1遗传多态性与DNA切除修复功能有关，并存在CYP2E1与UDG的交互作用，两者在肺癌易感性中均具有一定的作用。