血管活性肠肽在脾气虚大鼠小肠运动中的作用

目的研究血管活性肠肽(VIP)在脾气虚状态下小肠运动中的作用。方法 16只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组和脾气虚模型组(模型组),每组8只;小肠推进率评估小肠运动能力,ELISA方法检测小肠组织VIP、环磷酸腺苷(c AMP)、蛋白激酶A(PKA)的含量,免疫组化技术观察小肠组织VIP受体表达。结果与对照组比,模型组大鼠的小肠推进率显著降低,VIP的含量显著升高,VIP受体的表达、c AMP和PKA含量均明显降低。结论脾气虚状态下,VIP过度释放与小肠运动减慢有关,但这种效应可能并不持久。     

脾气虚证大鼠与鱼藤酮损伤大鼠之间下丘脑cAMP/PKA信号通路变化的研究

目的:探讨脾气虚证大鼠与鱼藤酮损伤大鼠之间下丘脑c AMP/PKA信号通路变化。方法:30只SPF级雄性大鼠,随机分为正常组,脾气虚组,鱼藤酮高剂量组(2.0 m L/kg),中剂量组(1.5 m L/kg),低剂量组(1.0 m L/kg),每组6只。采用ELISA法检测各组大鼠下丘脑组织c AMP活性,Real Time PCR法和Westernblot法检测蛋白激酶(cyclic-AMP-dependent protein kinase,PKA)、糖原磷酸化酶(glyeogenphospholase,Gp)、磷酸化酶激酶(phosphorylase kinase,PHK)的mRNA及其表达量。结果:与正常组大鼠比较,脾气虚证组及鱼藤酮3组大鼠的下丘脑组织c AMP活性及PKA、Gp、PHK mRNA和蛋白的表达均有不同程度的减弱,鱼藤酮中剂量组的结果与脾气虚证组最为相似。结论:脾气虚证大鼠与鱼藤酮损伤大鼠之间下丘脑c AMP/PKA信号通路的变化存在相关性,其中c AMP-PKA信号通路可能参与调控。     

脾虚证大鼠模型胃组织cAMP-PKA信号传导通路变化的研究

目的:探讨脾气虚证和脾阳虚证大鼠胃组织的改变与c AMP-PKA信号通路的相关性。方法:将24只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、脾气虚组、脾阳虚组,脾气虚采用饱食1 d、禁食2 d、游泳15 d,脾阳虚采用脾气虚证加灌服番泻叶造模,造模后检测大鼠胃组织c AMP活性及PKA、CREB mRNA和蛋白的表达。结果:脾气虚组和脾阳虚组胃组织c AMP活性及PKA、CREB mRNA和蛋白表达均减弱。结论:脾气虚证和脾阳虚证大鼠胃组织的改变与c AMP-PKA信号传导通路有一定的相关性。     

脾阳虚大鼠胃失通降的观察及其发生机制的初步研究

目的主要通过研究胃窦平滑肌M2和M3型胆碱能受体(muscariniccholinergic receptor 2 and 3,M2R/M3R)表达,探讨脾阳虚胃失通降的可能发生机制。方法 16只SD大鼠随机分为正常组和脾阳虚组(模型组),每组8只;炭末推进法观察胃残留率;ELISA法检测胃窦平滑肌乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)、环-磷酸腺苷(cycle monophosphate,cAMP)和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)含量;免疫组化法检测M2R和M3R表达。结果与正常组比较,模型组胃残留率和ACh水平上升,M2R和M3R表达及cAMP、PKA水平下降,均有统计学意义。结果胃窦平滑肌M2R和M3R表达下调所导致的胆碱能系统功能异常与脾阳虚胃失通降有关。     

益肺宣肺降浊方对血管性痴呆大鼠海马神经细胞凋亡及cAMP/PKA信号通路关键因子的影响

目的:探讨益肺宣肺降浊方对血管性痴呆大鼠海马神经细胞凋亡和关键因子c AMP、PKA表达的影响以及其部分作用机制。方法:80只健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组和对照组,每组20只。假手术组、模型组予盐水灌胃;治疗组予益肺宣肺降浊方,对照组予吡拉西坦。4组均采用Morris水迷宫实验检测大鼠记忆与空间探索能力,采用放射免疫法检测海马c AMP含量,westernblot法检测海马PKA表达。结果:与模型组比较,假手术组、治疗组及对照组逃避潜伏期缩短、跨越平台次数增多、目标象限停留时间延长(P0.05);c AMP含量和PKA表达增高(P0.05);与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:益肺宣肺降浊方可明显提高血管性痴呆大鼠学习记忆功能和空间探索能力,减少神经细胞凋亡及提高海马c AMP、PKA的表达水平,其作用机制之一可能是通过影响c AMP/PKA信号转导通路关键因子c AMP、PKA的表达来实现。     

脾虚痰浊证大鼠胃、心肌及下丘脑组织cAMP/PKA-Gp信号通路变化的研究

目的:通过分别观察脾虚痰浊证大鼠胃、心肌及下丘脑组织c AMP/PKA-Gp信号转导通路相关蛋白的变化,探讨脾虚痰浊证的改变与c AMP/PKA-Gp信号转导通路的相关性。方法:16只SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常组和脾虚痰浊组,每组各8只,脾虚痰浊证模型采用喂养高脂饲料,时间6个月。造模结束后,首先通过大鼠的一般状态和生理情况的改变进行模型评价,再分别取胃、心和下丘脑组织。分别采用ELISA法检测痰浊证大鼠不同组织c AMP活性,采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测PKA、CREB、PHK和Gp mRNA和蛋白的表达情况。结果:与正常组大鼠比较,脾虚痰浊证大鼠胃、心及下丘脑组织c AMP活性和PKA、CREB mRNA和蛋白的表达均有所减弱(P0.01或P0.05);并且脾虚痰浊证大鼠胃和心组织Gp mRNA和蛋白的表达也均有所减弱(P0.01或P0.05);此外,脾虚痰浊证大鼠心组织的PHK mRNA和蛋白的表达与正常组比较也存在显著性差异(P0.01)。结论:脾虚痰浊证大鼠模型成立后,其胃、心及下丘脑组织的改变均与c AMP/PKA-Gp信号转导通路存在一定的相关性。     

脾虚痰浊证大鼠主动脉cAMP/PKA信号通路变化的实验研究

目的:观察脾虚痰浊证大鼠主动脉c AMP/PKA信号通路变化,探讨其信号通路变化与脾虚痰浊证的关系。方法:16只SD大鼠,每组8只,随机分为空白对照组、脾虚痰浊组。全自动生化分析仪检测血清TC、TG、LDL-C、HDLC水平,ELISA法检测血浆中c AMP浓度,RT-PCR和Western blot检测肝脏GP、CREB、PKA和PHK蛋白表达水平。结果:与空白对照组相比,TG含量显著增高,主动脉c AMP活性显著降低,GP、CREB、PKA、PHK mRNA含量显著下降,GP、CREB、PKA、PHK蛋白表达显著下降。结论:脾虚痰浊证大鼠主动脉c AMP/PKA信号通路的改变可能与调控血脂代谢相关基因GP、CREB、PKA、PHK的表达有关。     

下丘脑cAMP/PKA/PhK/GP通路在脾气虚食少腹胀中的作用研究

目的:通过观察下丘脑环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)/蛋白激酶A(protein kinase, PKA)/磷酸化蛋白激酶(phosphorylase kinase, PhK)/糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase, GP)通路的变化,从中枢糖原分解方面探讨脾气虚食少腹胀发生机制。方法:16只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组和脾气虚组(模型组)各8只,代谢笼计量大鼠24 h进食水量,炭末推进法检测大鼠的胃残留率和小肠推进率,透射电镜观察下丘脑糖原颗粒情况,ELISA法检测下丘脑ATP、cAMP和PKA水平,Western blot法检测下丘脑PhK和GP表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠进食水量减少,胃残留率增加,小肠推进率下降,下丘脑ATP、cAMP和PKA水平下降,下丘脑PhK、GP表达降低,差异有统计学意义。结论:脾气虚食少腹胀与cAMP-PKA-PhK-GP通路抑制所导致的下丘脑能量供给不足有关。     

针刺“足三里”穴对脾气虚模型大鼠下丘脑及小肠组织CCK、CCK-AR表达的影响

目的:观察电针双侧"足三里"穴对脾气虚模型大鼠下丘脑及小肠组织胆囊收缩素(CCK)及其受体(CCK-AR)表达的影响。方法:随机将40只SD大鼠分为4组,即正常组、脾气虚组、足三里组和非经非穴组,每组10只。除正常组外,其余3组均采用力竭游泳和不规则饮食复合法建立脾气虚证大鼠模型。依据造模评定标准造模成功后,足三里组给予电针大鼠双侧"足三里"穴干预处理,采用疏密波,1次/天,20 min/次,连续6天;治疗结束后,10%水合氯醛腹腔麻醉,取下丘脑及小肠组织,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠小肠组织CCK含量变化,荧光定量PCR法检测大鼠小肠及下丘脑组织CCK及CCK-AR mRNA表达水平。结果:脾气虚组和非经非穴组下丘脑及小肠组织中CCK、CCKAR mRNA表达水平明显高于正常组(P0.05);足三里组下丘脑及小肠组织中CCK及CCK-AR mRNA表达水平相比于脾气虚组降低(P0.05),非经非穴组未见显著性差异(P0.05)。结论:针刺"足三里"穴可以调节脾气虚大鼠小肠及下丘脑组织CCK及CCK-AR的异常分泌,发挥其外周和中枢效应对脾气虚证起调控作用。     

M_2和M_3型胆碱能受体在脾气虚大鼠小肠运动中的作用

目的:研究M2、M3型胆碱能受体表达与脾气虚小肠运动的关系。方法:20只SD大鼠按随机数字表法分为对照组和脾气虚模型组(模型组)各10只,模型组大鼠复制饮食不节加劳疲型脾气虚模型;小肠运动采用小肠推进率评价;ELISA法检测小肠组织Ach和c AMP含量,免疫组化法观察M2、M3型受体表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠的小肠推进率显著下降,Ach含量无变化,M2受体表达明显上升,M3受体表达和c AMP水平显著下降。结论:脾气虚小肠运动减弱与M2、M3型受体表达异常有关。     

香砂六君子丸对脾虚痰浊大鼠小肠组织cAMP/PKA信号通路的影响

目的:通过观察香砂六君子丸对脾虚痰浊证大鼠小肠c AMP/PKA信号通路的影响,探讨香砂六君子丸治疗脾虚痰浊证大鼠可能机制。方法:24只SD大鼠,随机分为空白对照组、脾虚痰浊组、香砂六君子丸治疗组(以下简称治疗组),每组8只。采用高脂饲料喂养大鼠复制脾虚痰浊证动物模型,14 d后,治疗组采用香砂六君子丸灌胃治疗,空白对照组和脾虚痰浊模型组予等量生理盐水灌胃。灌胃60 d后采用ELISA法检测血浆中c AMP浓度,RT-PCR和Western blot检测大鼠小肠GP、PHK和PKA mRNA和蛋白表达水平。结果:与空白对照组相比,脾虚痰浊组小肠c AMP活性显著降低,与脾虚痰浊组相比,治疗组小肠c AMP活性显著升高;与空白对照组相比,脾虚痰浊组GP、PHK、PKA mRNA和蛋白含量显著下降,与脾虚痰浊组相比,治疗组GP、PHK、PKA mRNA和蛋白含量显著上升。结论:香砂六君子丸可能通过调控c AMP/PKA信号通路影响脾虚痰浊证大鼠。     

复心合剂对心力衰竭大鼠β-1-AR-cAMP-PKA通路的影响

目的观察复心合剂对心力衰竭大鼠β_1-肾上腺素能受体抗体(β_1-adrenergic receptor,β_1-AR)-环腺苷酸环化酶(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)-蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)通路的影响。方法将成年雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、卡托普利组、复心合剂(中药)低剂量组、高剂量组及模型组。建立心力衰竭大鼠模型,干预6周后,分离大鼠左室,分析左室质量指数(left ventricular mass index,LVMI),检测心肌组织β_1-AR mRNA表达,测定大鼠血浆c AMP水平和大鼠脾组织匀浆OD值及PKA含量。结果与空白对照组比较,模型组大鼠LVMI、血浆c AMP升高(P0.05),β_1-AR mRNA表达、脾组织匀浆OD值及PKA降低(P0.01)。与模型组比较,中药高剂量组、卡托普利组LVMI降低(P0.01),β_1-AR mRNA相对表达量升高(P0.05);各给药组大鼠血浆c AMP水平降低(P0.01),脾组织匀浆OD值、PKA表达升高(P0.01)。与卡托普利组比较,中药低剂量组β_1-AR mRNA相对表达量、脾组织匀浆OD值及PKA表达降低(P0.01),LVMI及c AMP水平升高(P0.05)。与中药低剂量组比较,中药高剂量组LVMI、cAMP水平降低(P0.05),β_1-AR mRNA相对表达、脾组织匀浆OD值及PKA表达升高(P0.01)。结论复心合剂通过调节β_1-AR-cAMP-PKA通路发挥抗心力衰竭作用。     

复方柴归方超临界CO_2提取物调控cAMP信号通路的抗抑郁作用机制研究

目的从环磷酸腺苷(c AMP)信号通路角度探讨复方柴归方超临界CO_2提取物的抗抑郁作用机制。方法采用慢性温和不可预知应激(CUMS)程序对大鼠进行造模,以高、中、低剂量复方柴归方超临界CO_2提取物及文拉法辛为干预药物,检测各组大鼠海马组织中c AMP、蛋白激酶A(PKA)、环磷酸腺苷反应原件结合蛋白(CREB)、脑源性神经生长因子(BDNF)水平及其相应m RNA水平。结果与对照组比较,模型组大鼠海马组织中c AMP、PKA、p-CREB、BDNF水平显著下降(P0.05、0.01),复方柴归方干预后,与模型组比较,各剂量组c AMP、PKA、p-CREB、BDNF水平均出现回调(P0.05、0.01);同时,模型组大鼠海马组织中酪氨酸激酶B(TrkB)、PKA、p-CREB、BDNF的m RNA水平显著下降(P0.05、0.01),复方柴归方干预后,与模型组相比,各剂量组Trk B、PKA、p-CREB、BDNF的m RNA水平均出现回调(P0.05、0.01)。结论复方柴归方超临界CO_2提取物可通过调控c AMP-PKA-CREB-BDNF信号通路发挥抗抑郁作用。     

益气健脾法对脾虚痰浊AS猪肾组织AQP的影响

目的:探讨脾虚痰浊动脉硬化(AS)巴马小型猪肾组织水通道蛋白的改变及益气健脾法的干预作用及机制。方法:将15只巴马小型猪随机分为正常组、模型组(脾虚痰浊AS模型)、益气健脾组各5只,以高脂饮食喂饲加跑步劳倦结合冠脉球囊拉伤建立脾虚痰浊AS模型。正常组巴马小型猪喂饲正常饲料,模型组球囊冠脉拉伤后高脂饲料结合跑步过劳制备脾虚痰浊AS模型,益气健脾组在模型组处理基础上于高脂饲料中添加益气健脾中药,观察48周后各组巴马小猪的肾脏组织病理形态学改变,肾组织环磷酸腺苷(c AMP)含量、水通道蛋白(AQP)1、2、3及磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)、磷酸化c AMP反应原件结合蛋白(pCREB)表达变化。结果:与正常组比较模型组肾组织病理形态学可见肾小球及肾小管损伤,肾组织AQP1、2、3下调,c AMP/PKA/CREB通路下调,与模型组比较益气健脾组可上调肾组织AQP1、2、3及c AMP/PKA通路。结论:脾虚痰浊AS模型可见肾组织病理损伤,肾组织AQP1、2、3下调,益气健脾法可改善肾组织病理损伤,上调脾虚痰浊AS模型肾脏水通道蛋白的异常,其机制可能与调节c AMP/PKA通路相关。     

人参皂苷Re对异丙肾上腺素诱导离体灌流大鼠心脏心律失常的调节作用

目的探究人参皂苷Re对异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导离体大鼠心脏心律失常的调节作用。方法提取原代乳鼠心肌细胞,通过CCK-8法检测人参皂苷Re对乳鼠心肌细胞存活率的影响。将雄性Wistar大鼠随机分为对照组、ISO组、人参皂苷Re+ISO组和人参皂苷Re组,通过Langendorff灌流系统对离体大鼠心脏进行给药,利用多电极阵列映射系统分析大鼠心肌电活动变化;通过苏木素-伊红(HE)染色观测离体大鼠心肌损伤情况;利用荧光共振能量转移成像系统实时监测心肌细胞内环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)的含量变化;通过ELISA法检测各组离体心脏组织上清液中炎性因子水平。结果人参皂苷Re(1～50μmol/L)均对原代乳鼠心肌细胞的存活率无明显影响;与对照组相比,ISO组心室肌传导速度明显加快,传导方向变化显著,心率显著增高(P0.05),心肌细胞脂肪变性严重程度增加,cAMP和PKA含量增加,趋化因子1(C-X-C motif chemokine 1,CXCL1)、CXCL2、CXCL3、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平均明显升高(P0.05);与ISO组相比,人参皂苷Re+ISO组心率明显下降(P0.05),心肌细胞脂肪变性严重程度减轻,c AMP和PKA含量降低,CXCL1、CXCL2、CXCL3、TNF-α和IL-6水平均显著降低(P0.05)。结论人参皂苷Re可通过调节c AMP/PKA通路并抑制炎性反应干预快速型心律失常的发生。     

芍药内酯苷和芍药苷对血虚肝郁证大鼠模型的影响及作用机制研究

目的:分析白芍"养血柔肝"功效物质基础与作用机制及血虚肝郁证证候实质。方法:选取健康雄性SD大鼠48只,随机数字表法将大鼠分成对照组、模型组、芍药内酯苷组及芍药苷组,每组12只,制备血虚肝郁大鼠模型,造模第1天开始给药,芍药内酯苷组灌胃30 mg/(kg·d)芍药内酯苷,芍药苷组灌胃30 mg/(kg·d)芍药苷,对照组和模型组灌胃等剂量生理盐水,共灌胃3周;观察大鼠一般活动情况,高效液相色谱-电化学检测系统检测大鼠海马内单胺类神经递质5-羟吲哚乙酸(5-hy-droxyindole acetic acid,5-HIAA)、去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)、肾生腺素(Epinephrine,E)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)及多巴胺(Dopaminem,DA)水平,蛋白免疫印迹法检测大鼠海马内脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、磷酸化元件结合蛋白(P-c AMP-response element binding protein,P-CREB)、环磷酸腺苷(Cydic adenosine monophosp hate,c AMP)及蛋白激酶A (Protein kinase A,PKA)蛋白表达状况。结果:与对照组比较,模型组大鼠5-HIAA、NE、E、5-HT、DA、PKA、BDNF、c AMP、PKA均显著降低,P-CREB显著升高,差异均有统计学意义(P 0.05);与模型组比较,芍药内酯苷组和芍药苷组大鼠5-HIAA、NE、E、5-HT、DA、PKA、BDNF及其大脑皮层内c AMP、PKA水平均升高,P-CREB蛋白显著降低,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论:芍药内酯苷和芍药苷可调节血虚肝郁大鼠神经递质含量,调控大鼠机体内c AMP/PKA信号路径内相关蛋白表达,起保护神经作用,它们都是白芍养血柔肝功效物质基础。     

Bcl-2和Bax在脾阳虚大鼠下丘脑组织中的表达和大建中汤的干预作用

目的 研究Bcl-2和Bax在脾阳虚大鼠下丘脑组织的表达变化和大建中汤对其表达变化的影响.方法 采用饮食失节伤脾气,劳倦过度伤脾气及苦寒泻下伤脾阳的方法,建立脾阳虚模型.实验分为正常对照组,模型组,大建中汤治疗组.采用免疫组织化学染色法对下丘脑Bcl-2和Bax进行染色,观察下丘脑组织Bcl-2和Bax表达的变化.结果 与正常对照组相比,脾阳虚模型组大鼠Bcl-2表达减少而Bax表达增加,差异具有统计学意义(P＜0.01);与模型组相比,大建中汤能显著增加脾阳虚大鼠下丘脑Bcl-2蛋白的表达(P＜0.01),减少Bax蛋白的表达(P＜0.01).结论 脾阳虚症能使下丘脑组织Bcl-2表达下降,Bax表达增加,大建中汤能上调脾阳虚症动物下丘脑Bcl-2的表达及下调Bax的表达,其作用机制可能涉及多方面因素.     

肾阳虚型围绝经模型大鼠构建及其下丘脑-垂体-性腺轴激素水平研究

目的:探讨氢化可的松诱导的肾阳虚型围绝经模型大鼠及其性腺轴相关性激素水平表现。方法:以氢化可的松肌注模型组构建肾阳虚型围绝经期模型大鼠,另行青年组、老年组及围绝经期模型大鼠造模。造模成功后随机选取各组大鼠各10只,检测血清c AMP、c GMP、Gn RH、LH、FSH、E2、P水平。结果:与青年对照组比较,模型组c AMP、c AMP/c GMP水平均较低(P0.01);Gn RH及E2水平均较高(P0.01、P0.05),P水平较低(P0.05)。与老年对照组比较,模型组Gn RH、LH、E2水平均较高(P0.05或P0.01)。与模型对照组比较,模型组c AMP、c AMP/c GMP水平均较低(P0.05);E2水平较高(P0.05)。结论:氢化可的松诱导的肾阳虚型围绝经期模型大鼠症状表现符合肾阳虚证,细胞调节第二信使c AMP、AMP/c GMP下降。下丘脑-垂体-卵巢生殖轴相关性激素均符合围绝经期表现。     

银杏叶提取物对阿尔茨海默病患者认知功能的效果及其对相关因子的影响

目的:观察银杏叶提取物对阿尔茨海默病患者认知功能的改善效果以及探讨其部分作用机制。方法:将本院2013年1月至2014年1月收治的80例阿尔茨海默病患者随机分为对照组和观察组各40例。2组患者均口服盐酸多奈哌齐,1次/d,10 mg/次。在此基础上观察组患者加用银杏叶提取物注射液,2组均连续治疗3个月,分别比较2组患者治疗前、治疗1个月及治疗3个月后简易精神状态量表(MMSE)、画钟试验积分(CDT)、日常生活能力积分(ADL)的变化,以及检测2组患者治疗前后外周血清c AMP-PKA-CREB信号通路上标志性蛋白c AMP、PKA及CREB浓度的变化。结果:1)2组患者治疗前MMSE、CDT及ADL的积分差异无统计学意义(P0.05),治疗1个月后2组患者MMSE、CDT及ADL积分较治疗前有所提升(P0.05),组间差异无统计学意义(P0.05);治疗3个月后2组患者MMSE、CDT及ADL积分进一步改善,其中观察组改善的幅度明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。2)使用Elisa法检测c AMP、PKA浓度,用Western blotting检测CREB浓度,治疗前2组患者c AMP、PKA、CREB蛋白水平差异无统计学意义(P0.05),治疗3个月后观察组患者外周血清c AMP、PKA、CREB蛋白浓度均明显高于对照组(P0.05)。结论:银杏叶提取物可改善阿尔茨海默病患者认知能力,其作用机制可能通过介导c AMP-PKA-CREB信号通路有关。     

硝菔通结方对功能性便秘大鼠结肠组织中VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路的影响

目的:探讨硝菔通结方对功能性便秘大鼠结肠组织中VIP-c AMP-PKA-AQP3信号通路的影响。方法:SD雄性大鼠150只,随机分为5组,分别为正常组、模型组、硝菔通结方高、中、低剂量组(380,190,95 g·kg-1),每组30只,除正常组外采用复方地芬诺酯ig法建立SD大鼠功能性便秘模型,给予不同剂量硝菔通结方ig,共给药4周。检测大鼠首粒黑边排出时间及粪便含水率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白质免疫印迹(Western blot)分别检测治疗1,2,3周不同时间点大鼠结肠组织中血管活性肠肽(VIP),环磷酸腺苷(c AMP),蛋白激酶A(PKA),水通道蛋白3(AQP3)mRNA及蛋白质的表达变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠首粒黑便排出时间显著延长,粪便含水率显著降低(P0.01),结肠组织中VIP,c AMP,PKA,AQP3的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,硝菔通结方各剂量组大鼠首粒黑便排出时间显著缩短,粪便含水率明显增加(P0.05,P0.01),结肠组织中VIP,c AMP,PKA,AQP3的mRNA和蛋白表达水平均有升高趋势,且高、中剂量组较低剂量组升高更显著,给药后第2,3周较第1周的指标变化更显著(P0.05,P0.01)。结论:硝菔通结方能够调节胃肠动力和改善肠道水液代谢治疗功能性便秘,其机制可能是通过干预VIP-c AMP-PKAAQP3通路来实现,并且具有一定的时间和剂量依赖性。