光动力作用对人乳腺癌细胞增殖的实验研究

目的：探讨光动力疗法（PDT）对人乳腺癌细胞增殖的影响。方法：以人乳腺癌细胞株MDA-MB-231为研究对象,以血卟啉衍生物（HpD）为光敏剂,630nm波长的激光为光源,MTT法绘制MDA-MB-231PDT后不同时间的生长曲线。流式细胞仪检测PDT对人乳腺癌细胞阻滞的细胞周期,免疫组化观察PDT对增殖细胞核抗原（PCNA）的影响。结果：生长曲线示PDT对人乳腺癌细胞增殖有明显的抑制作用;PDT作用后早期（12h）G0/G1期比例明显高于对照组（P〈0.05）,且呈时间依赖性变化;免疫组化示：实验组PDT后各时间段PCNA阳性细胞蛋白表达率较对照组阳性表达率明显下降（P〈0.01）。结论：光动力疗法可阻滞人乳腺癌细胞增殖,其机制可能与PDT阻滞细胞于G0/G1期和降低PCNA的表达有关。     

HpD—PDT对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制

目的:研究血卟啉衍生物(hematoporphrphyrin derivative,HpD)介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡的影响,探讨其可能的作用机制,为HpD-PDT治疗乳腺癌提供理论依据.方法:体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231分为4组:A组(空白对照)、B组(单纯激光)、C组(单纯光敏剂)、D组(激光+光敏剂).应用流式细胞术分析HpD-PDT对细胞周期的影响,免疫组织化学技术检测HpD-PDT对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.结果:HpD-PDT作用后,乳腺癌细胞内G0/G1期细胞比显著高于对照组(P<0.05);PCNA阳性表达率明显低于对照组(P<0.01);Bcl-2蛋白的阳性表达率明显下降(P<0.05);Bax蛋白阳性表达率各组间均无统计学差异;实验组HpD-PDT作用后Bax/Bcl-2比值增高,呈时间依赖性变化.结论:HpD-PDT的作用机制可能与抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡有关.     

RNA干扰抑制MTA 1的表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响

目的:探讨通过RNA干扰技术抑制MTA1的表达及对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和细胞周期的影响。方法:建立3种稳定表达靶向MTA1的shRNA的MDA-MB-231细胞系。通过反转录-聚合酶链反应(reverse transeription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫组化法验证基因表达的抑制效果;采用细胞计数法及噻唑蓝(thiazolylblue,MTT)法检测细胞的增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期。结果:MTA1基因被抑制后,其mRNA表达明显下降,RT-PCR结果显示,稳定转染3种重组质粒后,MTA1mRNA水平较对照组分别下调了70.07%、82.40%和63.44%;同时,MDA-MB-231细胞的生长明显受抑制,与对照组细胞相比,细胞计数示细胞数目明显减低;MTT分析示细胞增殖下降,流式细胞分析示细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:在MDA-MB-231细胞中,抑制MTA1的表达可有效抑制细胞生长并导致细胞周期的阻滞;利用RNA干扰技术抑制MTA1的表达可能会成为一种有效的乳腺癌基因治疗手段。     

光动力作用对人乳腺癌细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的实验研究

目的:探讨光动力作用(PDT)对人乳腺癌细胞Bax和 Bcl-2的影响.方法:体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231,分别在PDT作用不同时间后,用免疫组织化学法检测促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2 蛋白表达情况.结果:Bax蛋白表达在所有组无明显差异(P>0.05),Bcl-2蛋白表达自PDT后6h起显著下降(P<0.01);PDT后6h Bax/Bcl-2 比值依次递增,且有统计学义(P<0.05).结论:光动力作用可诱导人乳腺癌细胞发生凋亡,其机制可能与Bax和 Bcl-2 蛋白表达的比值有关.     

重组腺病毒载体CRT联合紫杉醇对乳腺癌细胞周期、增殖及凋亡的影响

目的:研究Ad-CRT联合紫杉醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞周期、细胞增殖及凋亡的影响.方法:MTT法检测细胞增殖,相差显微镜观察细胞形态学变化;PI单染流式细胞术检测细胞周期和凋亡.结果:Ad-CRT联合紫杉醇对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的抑制率明显高于单纯Ad-CRT组和单纯紫杉醇组,且抑制作用呈时间依赖关系(P<0.05),且细胞形态发生明显的改变.Ad-CRT联合紫杉醇将乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞周期明显的阻滞在G2/M期,并且促进细胞的凋亡.结论:Ad-CRT联合紫杉醇能增强乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制、阻滞细胞周期并且诱导细胞凋亡.     

5-氮杂脱氧胞苷对乳腺癌细胞MDA-MB-231雌激素受体α表达和增殖侵袭的影响

目的：检测5-氮杂脱氧胞苷（5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR）对乳腺癌细胞MDA-MB-231雌激素受体α（estrogen receptor alpha,ERα）的表达和增殖侵袭的影响。方法：利用细胞生长曲线、MTT法及FCM法检测使用去甲基化药物5-Aza-CdR处理MDA-MB-231细胞后,对MDA-MB-231细胞增殖和周期的影响。通过RT-PCR和免疫细胞化学检测5-Aza-CdR对ERα阴性的乳腺癌细胞MDA-MB-231ERα及基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）表达的影响。通过Boyden小室侵袭实验检测该细胞的浸润能力。结果：5-Aza-CdR能使MDA-MB-231细胞的生长速度明显减慢,细胞周期被阻滞在G0/G1期。5-Aza-CdR能部分恢复ERα阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的ERα表达,并能使MDA-MB-231细胞中MMP-2基因表达下降,细胞的侵袭能力降低。结论：5-Aza-CdR可有效抑制乳腺癌细胞生长并导致细胞周期的阻滞,明显降低乳腺癌细胞的侵袭能力。利用5-Aza-CdR可部分恢复ERα的表达及降低MMP-2的表达,这可能是其引起乳腺癌细胞MDA-MB-231生物学行为改变的机制之一。     

Ad-p53诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡作用

目的：观察重组人p53腺病毒（ p53-expressing adenovirus,Ad-p53）对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞生长、细胞周期、凋亡和p53表达的影响。方法：流式细胞仪检测Ad-p53作用于MDA-MB-231细胞72h后细胞凋亡率和细胞周期变化,Western blot法检测MDA-MB-231细胞p53蛋白表达。结果：经Ad-p53处理72h后倒置显微镜下MDA-MB-231细胞形态发生明显的变化。流式细胞术检测结果显示, Ad-p53作用MDA-MB-231后其细胞凋亡率与对照组相比明显增加,G0/G1期细胞比例逐渐升高,S期、G2/M期细胞比例相应减少（ P＜0.05）。Western blot证实了外源野生型p53基因能在MDA-MB-231细胞表达增加。结论：Ad-p53可以抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生长,促进其凋亡,其机制可能是通过阻滞细胞周期以及野生型p53蛋白表达增加实现的。     

维生素E琥珀酸酯诱导HER-2过表达乳腺癌细胞凋亡机制的研究

目的:探讨维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)对HER-2过表达乳腺癌细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法:MTT法测定VES对乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞增殖的抑制作用，应用Western blot法筛选HER-2过表达乳腺癌细胞系，同时检测VES处理后GSK-3、NF-κBp65、caspase 9蛋白在乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞中的表达水平，划痕实验与侵袭实验观察VES对乳腺癌细胞体外迁移能力的影响，流式细胞术检测VES对乳腺癌细胞凋亡的作用。结果:VES处理后GSK-3、NF-κBp65、caspase 9蛋白在乳腺癌MDA-MB-453细胞中的表达明显高于在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达，VES作用于HER-2低表达乳腺癌细胞使其迁移及侵袭能力明显增强，却能够抑制HER-2高表达乳腺癌细胞的迁移及侵袭。VES以直接杀伤方式作用MDA-MB-231细胞，而对MDA-MB-453则以诱导细胞凋亡方式杀伤，VES使HER-2高表达乳腺癌MDA-MB-453细胞发生G1/G0期阻滞。结论:VES促进乳腺癌细胞凋亡是通过影响多条信号传导途径完成的，VES作用于不同HER-2表达乳腺癌细胞其迁移及侵袭能力明显不同，其机制与细胞表面蛋白表达有关。     

Celecoxib下调NF-kB信号通路促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的体外研究

背景与目的:Celecoxib可以抑制多种肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡,但具体的作用机制尚不明确.本研究探讨Celecoxib是否通过阻断NF-kB信号途径诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡.方法:RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中COX-2 mRNA的表达.MTT法检测Celecoxib、PGE2与Celecoxib联合应用对MDA-MB-231细胞增殖的影响.流式细胞术检测细胞周期、凋亡的变化.Westernblot法检测0、40、80、120 μmol/L Celecoxib作用MDA-MB-231细胞24 h后细胞中Caspase-3、p65蛋白的表达变化.结果:RT-PCR检测显示MDA-MB-231细胞中COX-2 mRNA的表达随着Celecoxib浓度的增加而逐渐降低.Celecoxib能够显著地抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.05),但Celecoxib联合PGE2与单独应用Celecoxib对细胞增殖的影响差异无统计学意义(P>0.05).流式细胞术结果显示Celecoxib可使MDA-MB-231细胞阻滞在G0/G1期,并可诱发细胞凋亡.Western blot检测发现Celecoxib作用MDA-MB-231细胞24 h,随着Celecoxib浓度的增加,Caspase-3蛋白表达增加,P65蛋白表达下调.结论:Celecoxib可以通过下调P65蛋白的表达从而阻断NF-kB信号途径,抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进其凋亡.     

RNA干扰Semaphorin 4D表达对乳腺癌细胞增殖、周期及迁移的影响

目的 :研究Semaphorin 4D(Sema 4D)表达沉默对乳腺癌细胞增殖、周期及迁移的影响,初步探讨该蛋白在乳腺癌发生和发展中的作用。方法 :实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测Sema 4D在不同转移潜能的乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7中的表达水平。采用短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)慢病毒感染法,建立Sema 4D稳定低表达的MDA-MB-231细胞系,然后采用CCK-8法、FCM法、划痕愈合实验及Transwell迁移实验检测细胞增殖、周期分布及迁移能力的变化。结果 :Sema 4D在MDA-MB-231细胞中表达水平明显高于MCF-7细胞(P<0.05);sh RNA慢病毒感染可明显下调MDA-MB-231细胞中Sema4D的表达;与空白对照组比较,Sema 4D干扰组的MDA-MB-231细胞增殖明显被抑制(P<0.05),G0/G1期细胞所占比例明显增高(P<0.05),而细胞迁移能力明显降低(P<0.05)。结论:Sema 4D在高转移潜能的乳腺癌MDA-MB-231细胞中高表达,sh RNA干扰Sema 4D表达可抑制该细胞的增殖和迁移,并阻滞细胞周期于G1期。     

华蟾素对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231生物学特性的影响

目的:探讨华蟾素(cinobufacini)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、细胞周期和体外侵袭的影响及其可能机制.方法:用CCK-8试剂盒测定并绘制华蟾素作用后MDA-MB-231细胞的生长曲线,FCM法分析细胞周期分布,Transwell小室检测MDA-MB-231细胞的体外侵袭能力, RT-PCR检测细胞周期素(cyclin)及p21 mRNA的表达变化.结果:华蟾素可抑制MDA-MB-231细胞的增殖能力,其半数抑制浓度(half inhibition concentration, IC50)为 0.31 mg/mL,抑制作用随着华蟾素作用时间的延长而增强,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);Transwell小室检测表明,华蟾素作用后细胞的侵袭能力比对照组明显下降(P<0.05);FCM分析可见,随着华蟾素浓度的增加,停滞于S期的细胞比率比对照组明显增加(P<0.000 1);华蟾素作用后,MDA-MB-231细胞cyclin A1、cyclin D1和cyclin E1 mRNA的表达水平下降, p21 mRNA的表达水平上升,但cyclin B1 mRNA的表达无明显改变.结论:华蟾素通过调控cyclin A1、cyclin D1、cyclin E1和p21的表达而抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭,并影响其细胞周期的分布.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰-双羟肟酸对乳腺癌细胞增殖的影响

背景与目的:目前乳腺癌发病率仍居首位,是严重威胁女性健康的主要肿瘤之一。组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰双羟肟酸(suberic bishydroxamate,suberoyl bishydroxamic acid,SBHA)能够抑制组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)中的HDAC1和HDAC3的活性,选择性抑制某些肿瘤的生长而对正常细胞无不良反应。本实验旨在研究SBHA对人乳腺癌细胞增殖及周期的影响。方法:将不同浓度的SBHA以不同时间作用于乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞,用WST-8法检测其对细胞增殖能力的影响;用相差显微镜观察药物对细胞形态学变化;用流式细胞仪分析细胞周期。结果:SBHA呈时间和剂量依赖性抑制乳腺癌细胞增殖,使细胞形态发生明显变化,明显使G0～G1期细胞比例增高,S期细胞比例降低,与对照组比较差异有统计学意义(P>0.05)。结论:SBHA具有抑制人乳腺癌细胞增殖作用,使细胞阻滞在G0～G1期。     

顺铂耐药乳腺癌细胞株的建立及FANCF 基因在耐药中的作用

[摘要] 目的：探讨三阴性乳腺癌顺铂（cisplatin, DDP)耐药细胞和敏感细胞中FA/BRCA通路关键基因FANCF的表达和功能,以及与DDP耐药的相关性。方法：DDP浓度递增法诱导建立乳腺癌细胞MDA-MB-231的DDP耐药细胞株MDA-MB-231/DDP;通过RNAi技术敲减MDA-MB-231 敏感细胞和DDP耐药细胞中FANCF,并在mRNA和蛋白水平进行敲减效果验证。CCK-8 法检测DDP耐药细胞株增殖活性,Western blotting 法检测该细胞中FANCF蛋白表达,流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞周期和凋亡情况,实时定量PCR（RT-qPCR）法检测FANCF mRNA的表达。结果：MDA-MB-231细胞DDP诱导3个月建立的MDA-MB-231/DDP细胞株耐药指数为13.5,其G0/G1 期细胞增多、S期和G2/M期细胞减少。MDA-MB-231/DDP细胞中FANCF mRNA和蛋白表达水平显著升高（均P<0.01）。FANCF敲低后MDA-MB-231/DDP细胞凋亡增加,细胞对DDP的药物敏感性显著升高（均P<0.01）。结论：FANCF基因通过抗凋亡作用导致MDA-MB-231细胞对DDP的耐药性,FANCF是乳腺癌治疗的一个潜在靶点。     

siRNA沉默HYAL1基因表达对人乳腺癌细胞生长和增殖的影响

背景与目的：有研究证实透明质酸酶（hyaluronidase,Hyase）与人乳腺癌的恶性潜能相关。本研究拟探讨RNA干扰是否能有效抑制Hyde基因HYAL1的表达以及人乳腺癌细胞的生长和增殖。方法：体外化学合成HYAL1序列特异性双链RNA（dsRNA）,在脂质体（SiPORT Lipid）的介导下转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-453S、ZR-75和ZR-75-30。荧光共聚焦显微镜下观察转染效率,RT-PCR分析HYAL1 mRNA的表达,MTT测定细胞的增殖,流式细胞仪测定细胞周期。结果：（1）HYAL1-siRNA能有效地封闭HYALl基因的表达．使HYAL1 mRNA相对水平明显降低（P〈0．05）;（2）HYAL1-siRNA能明显抑制细胞增殖（P〈0．05）;（3）HYAL1-siRNA使细胞周期G0／G1期细胞百分比明显增加,S期的细胞百分比显著减少（P〈0．05）。结论：siRNA-HYAL1能有效抑制人乳腺癌细胞株HYAL1基因的表达,抑制细胞增殖,将更多的细胞阻滞在G0／G1期。     

结缔组织生长因子转染对人乳腺癌细胞系生物学行为的影响

背景与目的:结缔组织生长因子(CTGF)是CCN家族成员之一,参与体内多种生理和病理生理过程。本研究探讨CTGF对人乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:构建含有CTGF开放读码框的真核表达质粒,通过脂质体介导的方法将正义质粒转染MCF-7细胞,反义质粒转染MDA-MB-231细胞。观察CTGF不同表达水平与乳腺癌细胞增殖、凋亡、周期分布和体外侵袭等生物学行为的关系。结果:转染正义质粒使MCF-7细胞CTGF表达上调,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,细胞发生G0G1期阻滞,体外侵袭能力下降。转染反义质粒使MDA-MB-231细胞CTGF表达下调,促进细胞增殖,减少细胞凋亡,增强细胞体外侵袭能力,但对细胞周期无影响。结论:CTGF具有抑制乳腺癌细胞生长和侵袭的功能。促进细胞凋亡是CTGF抑制乳腺癌细胞体外生长的机制之一。CTGF可能对细胞周期有一定的影响。     

沉默p65基因对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞周期的影响

目的研究miRNA(microRNA)沉默p65基因后对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞周期分布的影响。方法用pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体构建p65 miRNA表达质粒,转染MDA-MB-231细胞,用RT-PCR检测转染前后各组细胞中p65 mRNA表达变化;凝胶电泳迁移率改变分析(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)实验研究转染前后细胞中NF-κB结合活性的变化;流式细胞术(Flow cytometry, FCM)观察转染前后细胞周期分布的变化;Westernblot法检测转染前后细胞周期相关因子cyclinD1、CDK4、p21蛋白表达的变化。结果p65 miRNA质粒明显下调MDA-MB-231细胞中p65 mRNA的表达水平,并显著抑制细胞中NF-κB的结合活性(P<0.05)。FCM结果显示,转染组细胞G₀/G₁期细胞比例显著增加,S、G₂/M期细胞比例明显下降(P<0.05);Western blot分析结果显示,沉默p65基因后细胞中cyclinD1蛋白表达下调,p21蛋白表达增加。结论p65 miRNA可以显著降低p65 mRNA的表达,诱导乳腺癌细胞发生G₀/G₁期阻滞,可能是通过降低cyclinD1蛋白,上调p21蛋白表达而实现的。     

Fangchinoline Inhibits Cell Proliferation Via Akt/GSK-3beta/cyclin D1 Signaling and Induces Apoptosis in MDA-MB-231 Breast Cancer Cells

Fangchinoline (Fan) inhibits cell proliferation and induces apoptosis in several cancer cell lines. The effectsof Fan on cell growth and proliferation in breast cancer cells remain to be elucidated. Here, we show that Faninhibited cell proliferation in the MDA-MB-231 breast cancer cell line through suppression of the AKT/Gsk-3beta/cyclin D1 signaling pathway. Furthermore, Fan induced apoptosis by increasing the expression of Bax(relative to Bcl-2), active caspase 3 and cytochrome-c. Fan significantly inhibited cell proliferation of MDAMB-231 cells in a concentration and time dependent manner as determined by MTT assay. Flow cytometryanalysis demonstrated that Fan treatment of MDA-MB-231 cells resulted in cell cycle arrest at the G1 phase,which correlated with apparent downregulation of both mRNA and protein levels of both PCNA and cyclin D1.Further analysis demonstrated that Fan decreased the phosphorylation of AKT and GSK-3beta. In addition, Fanup-regulated active caspase3, cytochrome-c protein levels and the ratio of Bax/Bcl-2, accompanied by apoptosis.Taken together, these results suggest that Fan is a potential natural product for the treatment of breast cancer.