016 肿瘤免疫抑制与治疗

肿瘤细胞能产生IL-10、IL-6、TGE2、PGFβ等多种免疫抑制物质,促进Th2细胞及肿瘤细胞增殖,抑制Th1、Mψ、CTL、NK细胞的分化与功能,引起宿主免疫功能高度抑制.肿瘤细胞Fas基因突变或缺失,可逃避CTL的杀伤作用.肿瘤细胞还可表达FasL,并用以杀伤肿瘤浸润淋巴细胞.因此肿瘤细胞能在宿主体内存活与增殖.用多种细菌组成的联合菌苗,与小剂量多种细胞因子及足量抗人IL-10、抗人IL-6抗体,PG拮抗剂等,配合手术、放疗或化疗协同治疗肿瘤,或许能有效地抑制肿瘤发展.     

肿瘤免疫抑制与治疗

肿瘤细胞能产生ＩＬ－１０、ＩＬ－６、ＴＧＥ２、ＰＧＦβ等多种免疫抑制物质,促进Ｔh２细胞及肿瘤细胞增殖,抑制Ｔh１、Ｍф、ＣＴＬ、ＮＫ细胞的分化与功能,引起宿主免疫功能高度抑制,肿瘤细胞Ｆas基因突变或缺失,可逃避ＣＴＬ的杀伤作用,肿瘤细胞还可表达ＦasL,并用以杀伤肿瘤浸润淋巴细胞。因此肿瘤细胞能在宿主体内存活与增殖,用多种细菌组成的联合菌苗,与小剂量多种细胞因子及足量抗人ＩＬ－１０、抗人ＩＬ－６抗体,ＰＧ拮抗剂等,配合手术、放疗或化疗协同治疗肿瘤,或许能有效地抑制肿瘤发展。     

人IL-4基因修饰增强瘤细胞特异性CTL杀伤活性机制初探

目的 探讨IL－4基因修饰瘤苗增强细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤活性的机制。方法 通过逆转录病毒载体pL-IL-4-SN将人IL－4基因导入肝癌细胞系HepG2细胞,以IL－4基因修饰瘤苗和野生型瘤细胞作刺激细胞诱导CTL反应,通过流式细胞仪检查肿瘤细胞表面分子表达。结果 IL－4基因修饰诱导瘤细胞表达MHCⅡ类抗原、B7－1及ICAM－1等细胞表面分子,对MHCⅠ类抗原表达无影响,其瘤苗诱导的CTL杀伤活性为罢生型瘤细胞的7倍（P＜0.01）,加入抗IL－4单克隆抗体（McAb）可完全阻断IL－4诱导的细胞表面分子表达,IL－4基因修饰瘤苗诱导CTL反应时培养上清可测及大量IL－2产生,抗IL－4或抗细胞表面分子的McAb可降低IL－2产生及抑制CTL反应。结论 IL－4基因修饰可能是通过诱导MHCⅡ类抗原等表达分子表达,促进IL－2产生而增强CTL杀伤活性。     

抗OX—40和抗IL—4抗体外促进Th12细胞的初步探讨

将灭活的自身黑色素瘤细胞MEL－72与BCG混合免疫MEL－72黑色素瘤病人，10d手术方法获取局部引流淋巴结制成淋巴细胞悬液，以抗CD3抗体体外培养，ELISA方法检测细胞上清中肿瘤特异性Th1、Th2细胞因子的表达。进一步用抗OX－40抗体与CD4^ T淋巴细胞表面OX－40作用或用抗IL－4抗体阻断IL－4的分泌，观察肿瘤特异性免疫反应能否向Th1方向转换。结果表明：用灭活的自体肿瘤细胞免疫机体能诱导出该肿瘤细胞特异性的Th1和Th2。应用抗OX－40抗体与抗IL－4抗体作用，Th1细胞因子分泌水平增加（TNF－β和INF－γ），结果提示，应用抗OX－40和抗IL－4抗体可诱导肿瘤特异性Th1反应。     

抗OX-40和抗IL-4抗体体外促进Th1细胞的初步探讨

将灭活的自身黑色素瘤细胞MEL 72与BCG混合免疫MEL 72黑色素瘤病人 ,10d后手术方法获取局部引流淋巴结 ,制成淋巴细胞悬液 ,以抗CD3抗体体外培养 ,ELISA方法检测细胞上清中肿瘤特异性Th1、Th2细胞因子的表达。进一步用抗OX 40抗体与CD4+ T淋巴细胞表面OX 40作用或用抗IL 4抗体阻断IL 4的分泌 ,观察肿瘤特异性免疫反应能否向Th1方向转换。结果表明 :用灭活的自体肿瘤细胞免疫机体能诱导出该肿瘤细胞特异性的Th1和Th2。应用抗OX 40抗体与抗IL 4抗体作用后 ,Th1细胞因子分泌水平增加 (TNF β和IFN γ ) ,结果提示 ,应用抗OX 40和抗IL 4抗体可诱导肿瘤特异性Th1反应。     

小鼠CTL体外非特异性扩增对其杀瘤活性的影响

目的 在体外用抗CD3单抗、抗CD28单抗和白细胞介素2（IL－2）扩增肿瘤特异性CTL,为肿瘤过继治疗提供足够数量的、具有高度杀瘤活性的效应细胞。方法 采用两种方案培养肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞。（1）抗CD3单抗刺激48h后,加入抗CD3单抗和20U／mlrIL－2（抗－CD3＋IL－2组）;（2）抗CD3单抗和抗CD28单抗同时刺激48h后,加入抗CD3单抗、抗CD28单抗和20U／ml rIL－2（抗－CD3＋抗－CD2＋IL－2组）。分别检测2组效应细胞的增殖水平、杀瘤活性及表型。结果 抗CD3＋IL－2组细胞的^3H－TdR掺入量在第6天、12天、20天分别为22126、52426、2072,抗－CD3＋抗－CD28＋IL－2组细胞的^3H-TdR掺入量在第6天、12天、30天分别为32168、12922、3265,后者明显高于前者。在培养12d时,抗－CD3＋IL－2组细胞对FBL03的最大杀伤活性为66．4％,抗－CD3＋抗－CD28＋IL－2组细胞对FBL－3的最大杀伤活性为77．8％。细胞表型FACS分析结果表明,抗－CD3＋抗－CD28＋IL－2组培养12d后的细胞90％以上为Thy1.2^ 细胞,且CD25^ 细胞在抗－CD3＋抗－CD28＋IL－2组、抗－CD3＋IL－2组分别为23．00％、8．15％。结论 抗CD3单抗、抗CD28单抗和低剂量IL－2同时非特异性刺激,可获得大量扩增的、具有高度杀瘤活性的肿瘤特异性CTL。     

IL—2激活的肿瘤浸润性淋巴细胞与LAK细胞体内外抗肿瘤作用的比较

本文对TIL与LAK细胞的体外,体内抗肿瘤作用进行了比较。发现TIL对自体肿瘤细胞有选择性地杀伤作用,其杀伤活性强于LAK细胞,但TIL对其他无关的肿瘤细胞的杀伤作用弱于LAK细胞,其对ConA诱导的正常淋巴母细胞无杀伤作用,而LAK细胞对比正常细胞有一定的杀伤作用。能特异性阻断抗B16黑色素瘤细胞CTL活性的单抗能抑制来自B16黑色素瘤的TIL对B16细胞的杀伤作用,提示TIL中富含CTL。体内试验证明,就单个细胞能力来讲,TIL的抗肿瘤作用确比LAK细胞强且对LAK细胞治疗无效的晚期肿瘤仍有一定的治疗效果。本研究证明TIL比LAK细胞更适合应用于肿瘤的过继免疫疗法。     

致敏树突状细胞活化细胞毒性T细胞抗肿瘤作用的研究

目的：研究树突状细胞（DCs）激活的细胞毒性T细胞的抗肿瘤及预防肿瘤发生的作用。 方法： 细胞因子诱生人PBMC未成熟DCs，加入肿瘤细胞抗原提取物致敏DCs产生成熟DCs；通过细胞形态、表面标记鉴定成熟DCs，MTT法测成熟DCs活化的细胞毒性T细胞(CTL)的体外杀伤活性；裸鼠体内注射活化CTL观察其抑制移植瘤生长及发生的作用。 结果： 经过7 d培养，获得大量形态典型、具有强烈刺激增殖能力、高表达CD80(63.5%)、CD83（67.6%）和CD3/ HLA-DR(83.2%)的DCs。其活化的CTL在20∶1效靶比时对抗原来源细胞株自身的杀伤率达75%以上，对同系细胞株的杀伤活性为35%-45%，对其它种系肿瘤细胞仅有微弱杀伤力（P<0.01）。CTL对裸鼠结肠癌HT-29移植瘤有特异性的生长抑制和预防生成作用（P<0.05）。CTL治疗组肿瘤组织中PCNA表达水平显著低于对照组（P<0.05）。 结论： 肿瘤细胞抗原活化的DC诱导CTL对肿瘤有特异性的杀伤作用，体内应用可特异性抑制移植结肠癌的生长或预防小鼠结肠癌移植瘤的发生。     

卵巢癌浸润淋巴细胞的生物学特性研究

目的 :研究卵巢癌浸润淋巴细胞 (TIL)在体外扩增后生物学特性 ,评估TIL用于晚期卵巢癌治疗的前景。方法 :利用流式细胞仪分析TIL的细胞表型 ,使用分子生物学和免疫学方法研究TIL分泌细胞因子的能力和杀伤肿瘤细胞的活性。结果 :TIL细胞表型的差异可能与肿瘤的种类、性质、取材部位有关 ,结缔组织、基质中来源的TIL以CD3 CD4 为主 ,肿瘤组织和小血管周围以CD3 CD8 为主 ,体外IL 2的浓度对TIL的免疫学特性有很大的影响。经rIL 2扩增后 ,TIL分泌产生IL 2、TNF α、IFN γ等多种细胞因子能力及杀伤肿瘤细胞的活性均有明显提高。再加入抗CD3单抗或PHA(合适浓度 ) ,TIL细胞因子表达可进一步增强。TIL联合磷酰胺或IL 2治疗晚期卵巢癌患者 ,可显著改善患者外周血细胞表型 ,具有一定的疗效。结论 :TIL在体外经rIL 2扩增后 ,免疫活性有明显提高。体内肿瘤细胞的消退可能主要并不是通过输入的TIL直接杀伤肿瘤细胞 ,而是在很大程度上依靠其分泌多种细胞因子增强了机体细胞免疫活性和免疫调节能力。TIL辅助其它疗法可成为晚期卵巢癌患者的一种有效治疗手段。     

脾细胞在CTL克隆增殖中的作用

本文证明二次MLC上清或重组IL2均不足以维持细胞毒 T细胞(CTL)克隆的正常增殖,而同种异体、同种第三者、甚至同基因的脾细胞均可增强rIL2诱导的CTL克隆增殖应答,亦可增强 CTL由 CD3∈链抗体(145-2C11)刺激的 IL-2非依赖性增殖。脾细胞的这种辅佐效应似与可溶性因子或脾粘附细胞无关。用 rIL2 预处理的脾细胞可诱导 CTL克隆的显著增殖,这种增殖可被抗IL2 受体抗体所抑制,提示脾细胞可能将其“膜结合”rIL2递给CTL而更有效地诱导增殖反应。FD18.5(抗 LFA-1),KH1.4(抗 Ly-6)及 HK2.1(抗 Thy-1)可显著抑制脾细胞对 145-2C11 激活 CTL增殖的辅佐效应,提示脾细胞对 CTL克隆 IL2非依赖性增殖的辅佐效应与一些细胞表面分子有关。     

巨噬细胞瘤苗免疫调节作用的研究

目的 观察巨噬细胞肿瘤疫苗对细胞毒性T细胞（CTL）反应及Th1／Th2型细胞因子分泌的调节作用。方法 分别采用MTT法和比色法检测肿瘤细胞杀伤率和清液上乳酸脱氢酶（LDH）含量,采用Western印记法与ELISA法检测脾细胞内及分泌入培养上清的IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ等细胞因子。结果 巨噬细胞肿瘤疫苗接种组的淋巴细胞肿瘤细胞杀伤率与培养上清液LDH水平分别为（36．70±21．02）％和（0．29±0．15）U／ml,明显高于热灭活肿瘤细胞接种组、石蜡诱导的巨噬细胞接种组（P值均〈0．05）。肿瘤细胞冻融物刺激72h后,各组免疫小鼠的脾细胞内均可检测到IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ等细胞因子;同时巨噬细胞肿瘤疫苗接种组脾细胞培养上清中,IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ含量分别为（7．97±3．15）pg／ml、（0．44±0．11）pg／ml、（1．83±0．85）pg／ml和（9．16±4．64）pg／ml,IL-2、IFN-γ的水平均高于热灭活肿瘤细胞接种组和石蜡诱导的巨噬细胞接种组（P值均〈0．05）。结论 巨噬细胞肿瘤疫苗可诱导机体产生特异性抗肿瘤反应,能够促进Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ的分泌。     

树突细胞对Lewis肺癌抗瘤作用的研究

目的：研究经体外骨髓细胞衍生的DC在Lewis肺癌中的抗瘤作用。方法：将肿瘤抗原MUT－1加载的DC（DC－MUT－1）经尾静脉免疫C57BL／6小鼠后，随后将肿瘤细胞接于小鼠皮下，观察DC能否诱发机体的免疫保护。同时检测DC－MUT－1免疫后小鼠脾脏T细胞的CTL活性。结果：经DC－MUT－1免疫后能诱发机体产生对相应肿瘤细胞的持久和特异性的免疫保护作用，体外检测CTL活性显示，免疫小鼠脾脏T细胞对相应肿瘤具有 特异性杀伤。结论：经DC－MUT－1免疫小鼠能诱发机体产生特异性抗肿瘤细胞免疫从而使宿主对随后的肿瘤细胞攻击产生特异性的免疫保护作用。     

CD226分子在NK细胞杀伤肿瘤中的作用及其分子机制

在肿瘤免疫中,自然杀伤细胞(NK)和细胞毒性T细胞(CTL)均发挥十分重要的作用,而NK细胞的功能受到表面活化性和抑制性受体的调控.CD226,又名DNAX辅助分子( DNAM-1),是一种表达于NK细胞、CTL细胞和血小板等多种细胞表面的活化性受体,在NK细胞的活化和杀伤功能调控中发挥重要作用.近年研究发现,CD226不仅直接参与调控NK细胞的活化和杀伤功能,在控制肿瘤转移以及调控树突状细胞(DC)功能中也发挥重要作用.本文综述了CD226分子在NK细胞杀伤肿瘤细胞中的作用及其分子机制.     

IL-2的真核表达载体对乙肝病毒基因疫苗的免疫佐剂效应

单以乙肝病毒S区基因疫苗 (pCR3 1 S)或联合IL 2真核表达载体 (pDOR IL 2 )注射BALB/c小鼠 (H 2 d)股四头肌 ,ELISA法检测小鼠血清抗HBs,4h51Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL活性。免疫 8周后 ,单注射pCR3 1 S及共注射IL 2真核表达载体的小鼠血清 45 0nmA值分别为 1 2 4± 0 1及 1 98± 0 17。CTL细胞杀伤活性分别为 (5 0 5± 6 4) %、 (6 1 9± 7 1) % ,两组均有明显差异 (P <0 0 1)。脾细胞悬液经抗CD4+ 单克隆抗体处理后CTL细胞杀伤活性分别为 (4 8 3± 5 9) %、 (5 6 2±6 1) % ,抗CD8+ 单克隆抗体处理后分别为 (10 6± 1 4) %、 (13 6± 1 3) %。结果表明 ,IL 2的真核表达载体能够提高小鼠对DNA疫苗的免疫应答 ,CTL细胞杀伤活性主要由CD8+ 执行。基因疫苗可能用于预防及治疗HBV感染。     

猪苓多糖对S180细胞培养上清免疫抑制作用影响的研究

目的 :研究猪苓多糖对肿瘤细胞系S180培养上清免疫抑制作用的影响。方法 :用MTT比色法检测有或无猪苓多糖作用的肿瘤细胞S180培养上清 (简称肿瘤上清 ) ,对ConA诱导的小鼠脾细胞增殖和IL 2产生 ,对小鼠脾细胞的杀伤活性 ,以及对CTLL 2细胞对IL 2反应性的影响。用流式细胞仪检测该培养上清对小鼠脾细胞表面IL 2Rα表达的影响。结果 :无猪苓多糖作用的肿瘤上清可强烈抑制上述 5项指标 ;而猪苓多糖作用的肿瘤上清则可明显上调上述方法中所测 5项指标。若先用含猪苓多糖培养液培养肿瘤细胞 2 4h或 48h ,而后洗去或不洗去猪苓多糖 ,再培养肿瘤细胞 2 4h ,所获肿瘤上清也可明显上调上述 5项指标。结论 :猪苓多糖可抵消肿瘤上清的免疫抑制作用 ,下调肿瘤细胞S180合成和 /或分泌免疫抑制物质     

体外培养系统中各细胞组分在IL-18诱导的肿瘤特异性CTL中的作用

应用rhIL 18在体外培养系统 (coculturesysteminvitro ,CCS )中诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞 (cytotoxicTlympho cyte ,CTL ) ,探索不同细胞在IL 18起动和促进肿瘤特异性免疫应答方面的作用。采用StemSepTM免疫磁性细胞分离法分离人外周血NK细胞、T细胞及树突细胞 (DC ) ,流式细胞仪分析细胞表型 ,12 5I UdR标记的细胞毒实验检测杀伤活性。结果表明 ,在肿瘤抗原存在的条件下 ,CCS中rhIL 18能够诱导并促进CTL介导的肿瘤特异性杀伤效应 ;并且 ,在rhIL 18诱导肿瘤特异性CTL的过程中 ,rhIL 18、NK细胞、DC及T细胞均起着十分重要的作用 ,缺少任一组份 ,均对诱导肿瘤特异性CTL有明显差异 (P <0 0 1)。提示在CCS中 ,rhIL 18诱导的NK细胞快速杀伤效应及DC的抗原提呈作用 ,在肿瘤特异性CTL产生过程中 ,均起着决定性的作用。     

肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂在肿瘤研究中的进展

肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)作为肿瘤坏死因子超家族的新成员可表达在多种细胞表面,也表达在多种肿瘤细胞和组织中,可诱导人肠腺癌细胞系HT29、人口腔鳞状细胞癌HSC3等肿瘤细胞凋亡,介导HepG2、HLE和SK-Hep-1等肿瘤细胞增殖,诱导巨噬细胞在肿瘤浸润区的杀伤活性,潜在介导肿瘤血管。     

晚期肿瘤患者外周血CTL、Ts及NK细胞免疫表型的联检及临床意义

机体对肿瘤的免疫应答及其抗肿瘤免疫效应机理是肿瘤免疫学研究中的重要内容。细胞免疫在抗肿瘤免疫应答中发挥着重要作用。人类肿瘤特异性T细胞大多为CD8^＋T细胞,又可分为抑制性T细胞（Ts）和细胞毒性T细胞（CTL）,前者抑制体液和细胞免疫应答,调节维持内环境稳定,后者是直接杀伤肿瘤细胞的免疫效应细胞。NK细胞可溶解靶细胞如特异性肿瘤细胞株和受细胞内病原体感染的细胞,还可通过分泌炎性介质参与T细胞的分化,而控制T细胞反应。我们采用双色荧光标记流式细胞术分别检测了晚期肿瘤患者外周血CTL、Ts及NK细胞比例,从而评价晚期肿瘤患者的细胞免疫功能,对临床肿瘤治疗和预后判断具有重要的意义。     

应用肺癌细胞系诱生肿瘤特异性T细胞的初步研究

目的 探讨通过构建表达人白细胞抗原(HLA)HLA-A2的肺癌细胞系以诱生肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL).方法 将编码HLA-A2基因的质粒pcDNA3.1D/V5转染人肺腺癌A549细胞,得到能够稳定表达HLA-A2的肺腺癌细胞系.将其用丝裂霉素(MMC)处理后,行混合淋巴细胞肿瘤细胞培养(mixed lymphocyte tumor cell culture,MLTC)以诱导HLA-A2 的健康人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte, PBL)产生肿瘤特异性CTL,并通过特异性杀伤实验、单克隆抗体阻断实验、淋巴细胞增殖实验进行检验.结果 HLA-A·0201基因在A549细胞中的瞬时与稳定表达率分别为0.32、0.91.成功获得稳定表达HLA-A2的A549细胞株.MLTC诱导最终产生4组T淋巴细胞,且符合肿瘤特异性CTL的形态学特征与大量增殖的特点,但CTL杀伤实验和单克隆抗体阻断实验结果示肿瘤细胞未被有效杀伤,可能与肿瘤特异性CTL的数量较少及活性较低有关.结论 本研究通过构建表达HLA-A2的肺癌细胞系,对建立肿瘤特异性CTL模型作了初步探讨,为进一步完善肺癌特异性CTL细胞模型并为研究肿瘤免疫逃避、免疫耐受及反杀伤淋巴细胞等生物学行为打下基础.     

Th细胞因子在移植免疫中的研究新进展

Th细胞是T细胞的一种重要的细胞亚群 ,能分泌多种细胞因子 ,调节机体的免疫应答 ,在移植免疫中发挥重要作用。根据Th细胞分泌细胞因子种类的不同 ,可分为Th0、Th1、Th2、Th34个细胞亚群。Th0细胞被认为是其它亚群的前体细胞 ,在一定条件下可分化为Th1、Th2、Th3细胞。Th1细胞主要分泌IL 2、IFN γ、TNF α ,它主要介导细胞免疫应答。Th2细胞主要产生IL 4、IL 5、IL 6、IL 9、IL 10、IL 13,它主要介导体液免疫 ,而近来其在免疫诱导与免疫耐受中的作用正在被人们逐渐所认识。Th3细胞主要分泌高水平的TGF β和IL 1RA ,抑制免疫系统功能。本文就这些细胞因子在器官移植排斥反应和诱导免疫耐受方面发挥的重要作用做一综述