用国产酶标板测定黄曲霉毒素的条件

用ELISA法测定黄曲霉毒素B_1及其代谢产物M_1,适合于大规模的流行病现场调查。由于主要试剂和酶标板都靠进口,难于在国内推广。我们改进了测定方法,并使用国产试剂和器材的稳定性、可靠性、重复性与进口抗体和酶标板相同。 材料与方法 材料 黄曲霉毒素B_1(AFB_1),黄曲霉毒素M_1(AFM_1),辣根过氧化物酶(HRP),抗AFM_1抗血清和AFB_1-HRP(见方法),ABTS(2,2'-azino-diethy bentiazoline-6-     

微孔板自动化筛查Rh(D)阴性血的结果分析

传统的Rh血型筛查,采用手工操作,比较繁锁,肉眼判断结果,不易于标准化管理。采用微孔板自动化筛查,经酶标仪扫描自动判定结果,易于管理。1材料与方法1.1标本来源经EDTA-K2抗凝的本站无偿献血者的全血标本。1.2设备与软件AT全自动加样系统(瑞典)、Z-380平板离心机、Anthos编程孵育振荡器、AnthosHT3酶标仪(奥地利)、96孔U-微孔板(国产)。1.3试剂抗D(单克隆IgM)血型试剂(加拿大)。1.4操作步骤使用AT全自动加样系统在微孔板中加入15μl预稀释的血球(1∶10),再加入抗D(1∶2)45μl。将微孔板在震荡器上300r/min离心2min,振幅2;再于平板离…     

肠杆菌快速鉴定技术(微量塑料板法)

肠杆菌的鉴定通常需时18～24小时得到纯培养,再需24～48小时才能得到确诊,对少见菌或变异菌则需时更长。本文在丹麦国立血清研究所建立的4小时酶板鉴定技术的基础上,应用国产塑料板(天津塑料厂生产),并对其中某些试剂的配方进行了适当变动,保持了与原来酶板同等质量而产生了塑料板微量快速鉴定法(简称酶板法),该法所用的每一试剂仅为     

双清颗粒的提取工艺研究

双清颗粒系由板蓝根、大青叶、葛根等中药制成,具清热、解毒、抗炎等作用,用于治疗病毒性感冒。为了保证药效和制剂工艺的合理性,本实验选择板蓝根中有效成分靛玉红和生药材总提取物收率作为考核指标,通过L9(34)正交试验筛选最佳提取工艺。1仪器与试剂CS—9000薄层扫描仪(日本岛津),微量进样器(美国D rumm ond),高效硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂),靛玉红对照品(中国药品生物制品检定所);试剂均为分析纯,样品由本所实验药厂提供。2方法与结果2.1靛玉红的测定2.1.1薄层色谱条件:高效硅胶G薄层板,110℃活化1 h;展开剂:苯-氯仿-丙酮(4∶4∶1),…     

自制移液器吸头冲洗板

目前大多数实验室加血清和小量试剂,都使用定量(或可调)移液器,与刻度吸管相比,它加液量准确,使用方便。但是加液器的吸头很不容易清洗。我们自制了一种吸头冲洗板,使用效果很好,现介绍如下。取一块磨损报废的微量血凝板(U型或V型的均可),用直径5毫米的钻头将每个孔钻     

乙型肝炎两对半酶联免疫吸附试验检测条件的优化及实验研究

目的分析和探讨本院乙型肝炎两对半酶联免疫吸附试验(ELISA)检测条件的优化途径。方法比较洗板机洗板后用蒸馏水或干净自来水冲洗反应板与不冲洗反应板的临界值率。结果 1洗板后用蒸馏水再次冲洗反应板数秒后、用干净自来水再次冲洗反应板与不冲洗反应板的表面抗原临界值率(临界阴性和弱阳性)分别为0.52%、2.60%和5.56%;表面抗体临界值率(临界阴性和弱阳性)分别为5.52%、8.02%和14.86%;e抗原临界值率(临界阴性和弱阳性)分别为2.82%、2.92%和3.55%。2表面抗原三者两两比较差异有统计学意义(P<0.05),表面抗体三者两两比较差异有统计学意义(P<0.05),e抗原三者两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 1洗板结束后用蒸馏水或干净自来水再次冲洗反应孔边缘可降低因酶标试剂或显色剂污染反应孔边缘导致的高临界值率结果。2用蒸馏水冲洗比用干净自来水更适合作为反应孔边缘的冲洗液。     

全自动电泳分离测定乳酸脱氢酶同工酶的实验观察

目的 通过实验使LDH-ISO电泳试剂国产化,达到LDH-ISO电泳的自动化和普及.方法 进行LDH-ISO电泳凝胶板最适条件的选择、试剂最佳浓度、显色试剂的实验研究及与国外试剂的比较.结果 LDH-ISO同一凝胶板检测结果一致性CV为3.23%～6.88%,同一批凝胶板检测结果一致性CV为2.53%～9.0%,不同批凝胶板检测结果的一致性CV为4.57%～15.33%,表明凝胶板检测结果的一致性好.研制的LDH-ISO琼脂糖凝胶板与进口的电泳凝胶板的LDH-ISO电泳的5条区带均无显著性差异(P＞0.05).结论 本实验完成了LDH-ISO琼脂糖凝胶板的制备及酶促反应显色试剂的最佳配方,实现了试剂的国产化.     

微板干试剂测定血糖方法学的建立及其在体检筛查中的应用

目的研制一种通过微板干试剂葡萄糖氧化酶法快速检测血糖的新方法,并小批量在普查糖尿病中应用。方法将改良葡萄糖试剂冻干于96孔板中并封存。检测时微板中每孔由排枪加入200∶1比例去离子水和待检标本混匀的预处理液,复溶冻干试剂并进行反应,水浴10min,用酶标仪检测并计算结果。结果该法在1～24mmol/L范围内线性良好,其准确性在允许偏差±5%内,变异系数(CV)<5%,干扰实验均能满足检测的要求。对120例体检者应用本法进行血糖测定,其结果与日立7060全自动生化分析仪测定结果具有较好的相关性(r=0.987 5)。结论微板干试剂葡萄糖氧化酶法快速检测血糖结果准确可靠,检测过程简便,适合基层医疗机构快速检测及批量普查。     

赤热散中芍药苷含量测定

1 材料与方法 CS-930型双波长薄层扫描仪(日本岛津);定量毛细管(Drummond Co.);硅胶HF254;薄层板(青岛海洋化工厂);芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所),赤热散(吉林省中医中药研究院制剂室提供).所用试剂均为分析纯.     

Easylyte钾钠分析仪试剂的研制及钠电极再生

目的配制美国Easylyte钾钠分析仪试剂及再生钠电极。方法自配试剂参照进口试剂离子组分浓度,选用几种化学试剂,进行多次模拟配方优化试验而得到最佳配方。结果用自配试剂(X)与进口试剂(Y),再生钠电极(X)与新钠电极(Y),同时测定10份标本,相关性良好。钾Y=0.9530X 0.2024,r=0.9607,P>0.05。钠Y=1.0397X-5.4707 r=0.9445,P>0.05。Y=28.9606 0.7912X,r=0.9652。结论自配试剂与再生钠电极各项技术指标符合要求,可推广应用。     

细菌性阴道病阴道分泌物革兰染色与细菌性阴道病联合试剂检测的临床意义

目的探讨细菌性阴道病(BV)阴道分泌物革兰染色与BV联合试剂检测的临床意义。方法选取2017年6月至2019年6月至禹州市妇幼保健院就诊的60例疑似BV患者,所有患者取其阴道分泌物行革兰染色与BV联合试剂检测,以Amsel法为金标准,分析BV阴道分泌物革兰染色与BV联合试剂检测的临床意义。结果 60例患者经Amsel法检测,43例确诊。革兰染色与BV联合试剂检测的准确性为91.67%(55/60),灵敏度为93.02%(40/43),特异度为88.23%(15/17),阳性预测值为95.24%(40/42),阴性预测值为83.33%(15/18)。经Kappa一致性检验,革兰染色与BV联合试剂诊断BV的结果和Amsel法检测一致性较高(Kappa=0.798,P<0.001)。绘制受试者操作特征曲线(ROC),显示革兰染色与BV联合试剂诊断BV的曲线下面积(AUC)为0.906(95%CI:0.806～997)。结论将革兰染色与BV联合试剂检测应用于BV的临床诊断中,准确性、灵敏度、特异度均较高,与Amsel法检测的一致性较高,可为疾病的临床诊治提供可靠的检测依据。     

自制琼脂糖板测定新生儿血清急相蛋白

采用国产试剂自制琼脂糖板测定新生儿血清α_1-AT、α_1-AGP和PA3种急相蛋白含量,并分别与Behring厂相应免疫扩散板进行方法学比较:分10次交互测定标准(参考)血清蛋白含量,并用两种方法同时测定35份新生儿血清。结果显示两种方法测定α_1-AGP和PA含_量无明显差异,而国产α_1-AT参考血清实际含量(1907.3mg/L)显著低于其出厂标签值(2582mg/L,P<0.01),需按Behring标准血清值换算。     

不同解脲支原体试剂的药物浓度对药敏结果的影响

目的探讨不同品牌试剂所配备的药物不同浓度对解脲支原体(UU)药敏实验结果的影响。方法用两国产品牌试剂甲、乙对20株UU作药敏实验,每株每试剂同时做两份,比较9种药物在各自试剂内的药敏不同值、在两试剂间的药敏一致性程度。结果9种药物在各自试剂内的药敏不同值与理论上不同值(为零)相比,均差异无显著性(P>0.05)。试剂甲乙间每种药物药敏结果一致性程度,弱(κ值0.20~):氧氟沙星(OFL)、左氧氟沙星(LEV);适中(κ值0.40~):克拉霉素(CLA)、交沙霉素(JOS)、罗红霉素(ROX)、阿奇霉素(AZI)、司帕沙星(SPA);显著(κ值0.60~):强力霉素(DOX)、美满霉素(MIN)。结论试剂甲、乙质量相对稳定,对药敏结果无显著影响;药物浓度对药敏结果影响较大,各品牌试剂浓度应统一,建议(低、高)浓度分别统一为:OFL(1mg/L、4mg/L),LEV(1mg/L、4mg/L),CLA(2mg/L、8mg/L),JOS(2mg/L、8mg/L),试剂加样量统一为100μl。     

两种不同生产工艺黄芪精口服液中活性成分的含量比较

1 仪器与材料 CS-930型薄层扫描仪(日本岛津)；939薄层制板器(重庆南岸贝尔德仪器技术厂)；微量定量毛细管(美国)；黄芪甲苷(中国药品生物制品检定所)；硅胶G(青岛海洋化工集团公司)；所用试剂均为分析纯。     

CA-50血凝仪试剂预热时间对测定结果的影响

目的探讨CA-50血凝仪试剂预热时间对PT(凝血酶原时间)、APTT(部分凝血活酶时间)、Fib(纤维蛋白原)测定结果的影响。方法将试剂在CA-50血凝仪上分别预热不同的时间后,对同一混合新鲜血浆进行PT、APTT、Fib测定,其结果与参考值(试剂预热20分钟所测得的结果)进行比较。结果STAGO试剂和Dade试剂的结果均显示PT、Fib在试剂预热60min(分钟)内结果变化不明显(P>0.05),APTT在35min内结果变化不明显(P>0.05),而在45min和60min时结果有显著变化(P<0.05)。结论PT、Fib试剂在CA-50血凝仪上预热60min内可安全使用,APTT则要求试剂预热时间不超过35min。     

CCL4损伤原代培养大鼠肝细胞模型的实验研究

1材料和方法 1.1材料 1.1.1实验动物:清洁级SD大白鼠,体重150克左右,雌雄不限,由江汉大学医学院动物室提供. 1.1.2试剂:1640液与胎牛血清(Gibco公司),胶原酶Ⅱ(Boehringer mannheim公司)、CCL4(中国医药上海化学试剂公司),MTT与DMSO(Sigma公司),MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所).其他试剂均为分析纯试剂.     

两种艾滋病病毒抗体初筛诊断试剂的检测效果对比

目的对两种艾滋病病毒(HIV)抗体初筛诊断试剂的检测效果进行观察对比。方法同时使用快检试剂和酶联免疫吸附(ELISA)试剂对初筛500例HIV抗体进行检测,对两种试剂的检测结果进行对比分析。结果两种试剂检测结果无明显差异(P0.05),两种试剂在敏感性、约登指数、假阴性率及PPV上具有明显差异(P0.05),而在特异性、功效率、假阳性率及NPV上两种试剂无明显差异(P0.05)。结论在对HIV的诊断中采用ELISA试剂进行检测比快检试剂能更好地检测出阳性样本,其更实用与感染率低的一般人群中。     

酶联免疫一步法试剂检测乙型肝炎表面抗原的钩状效应及其对策

目前 ,检测乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)的酶联免疫一步法试剂因其操作省时简便而在医院和血站系统得到广泛使用 ,尤其在大批体检时。所谓一步法试剂 ,是相对于经典的二步法试剂而言的。二步法试剂的操作程序是 :第一步 ,向酶标反应板中加入待检血清 ,孵育约 30min ,洗板 ;第二步 ,加入酶标抗体 ,孵育约 30min ,洗板 :显色约 1 5min后判断结果。一步法是将二步法中的第一步和第二步合二为一 ,即将血清加入已包被有抗 -HBsAg的反应板后立即加入酶标抗体 ,孵育约 30min ,洗板 ;显色约 1 5min后判断结果。这样 ,操作时间从二步法的 75min减少到…     

改良碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶桥联酶染色微板法检测细胞表面抗原

目的　对碱性磷酸酶 -抗碱性磷酸酶 ( APAAP)桥联酶染色常规玻片法进行改良 ,用于检测细胞表面抗原。方法　用微量细胞毒试验反应板 (简称微板 )代替载玻片作细胞载体进行 APAAP桥联酶染色 ,检测人外周血淋巴细胞表面 CD3、CD4、CD8、CD11a、CD11b、CD18和 CD5 4的表达。结果　微板法与玻片法检测结果无显著性差异 ( P均 >0 .0 5 ) ,有良好重复性 ,并将检测 7项指标所需的血量由 10 m l减至 2 m l,各种试剂 (一抗、二抗、APAAP复合物和底物 )用量由 5 0μl减至 5μl。结论　微板法节约了试剂及用血量 ,操作方便 ,效果良好 ,可替代传统的玻片法用于细胞表面抗原的检测     

3种试剂测定血清葡萄糖的评价

血清葡萄糖测定是临床化学常规检测项目之一,其中已糖激酶法为国际临床化学联合会推荐的参考方法。现有各种品牌的试剂供应,但其性能如何?国产试剂能否与进口试剂相抗衡?笔者对国内应用较广的两种国产试剂与一种进口试剂主要的性能指标进行了评价。 材料和方法 1.试剂:美国Beckman试剂(简称B试剂),批号为M8001175。上海长征试剂(简称C试剂),批号为980436。宁波亚太试剂(简称E试剂),批号为N980711。德国宝灵曼公司生产的定值血清,批号为191691。