尖吻蝮蛇毒小分子多肽的分离及抗血小板聚集作用

目的从尖吻蝮蛇毒中分离纯化一种抗血小板聚集小分子多肽,研究其理化性质以及对ADP、胶原、凝血酶诱导的血小板聚集反应的影响。方法经SephadexG-75凝胶过滤,超滤,DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析法分离纯化蛇毒组分,采用高效液相鉴定纯度,用SDS-凝胶电泳(SDS-PAGE)测定其分子量,用比浊法测定其抗血小板聚集活性。结果从尖吻蝮蛇毒中分离相对分子质量约为7862u等电点为4.29的组分,该组分能抑制由ADP、胶原、凝血酶诱导的血小板聚集并成剂量依赖性。结论此法成功地从尖吻蝮蛇毒中纯化出抗血小板聚集组分。该组分与去整合素比较相似,可能属于去整合素家族。     

乌苏里蝮蛇毒一种C-型凝集素相关蛋白的分离、纯化及活性测定

目的从乌苏里蝮蛇蛇毒中分离纯化得到具有促凝血活性的C-型凝集素相关蛋白。方法利用IDA-Sepharose FF亲和色谱作为独立的蛋白分离纯化手段,并且结合Sephadex G-100,Sephadex G-50凝胶过滤色谱从乌苏里蝮蛇蛇毒中分离得到一个新的蛋白组分。结果该组分经还原和非还原SDS-PAGE电泳鉴定结果显示为均一的单一条带,即C-型凝集素相关蛋白,相对分子质量约为15.7 kD。结论经过一系列的分离和纯化,能够从乌苏里蝮蛇蛇毒中提取到C-型凝集素相关蛋白组分。     

皖南尖吻蝮蛇毒提取物体外抗肿瘤活性的实验研究

目的：从中国皖南尖吻蝮蛇（Agkistrodon acutus）蛇毒中提取蛇毒金属蛋白酶x（snake venom metallopmteinases,SVMP-x）并观察其体外抗癌活性。方法：尖吻蝮蛇粗毒冻干粉溶解并经过离子交换和凝胶过滤后纯化后得到SVMP-x组分,CCK．8比色法测定该组分对体外培养的肿瘤细胞的细胞毒作用。结果：从中国皖南尖吻蝮蛇毒中分离出一种单一组分（sVMP-x）,sVMP-x呈剂量依赖性抑制体外培养的人胃癌细胞株（SGC7901）、结肠癌细胞株（sw480）、神经母细胞瘤细胞株（SH—SY5Y）、肝癌细胞株（HepG2）及小鼠黑色素瘤细胞株（B16）的增殖,并且对SGC7901及B16的抑制作用强于5．氟脲嘧啶（5-FU）,对SGC7901的抑制作用呈剂量一时间依赖关系。结论：从尖吻蝮蛇粗毒冻干粉中成功提取出抗肿瘤组分SVMP-x,该组分对体外培养的肿瘤细胞有明显的抑制作用。     

长白山白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶的纯化

从长白山白眉蝮蛇蛇毒中纯化具有溶栓功效的纤溶酶。方法：用 ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ５０离子交换、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ７５凝胶过滤层析和 ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ ５０三步柱层析分离方法,对长白山白眉蝮蛇蛇毒进行分离纯化,得到了一种纤溶酶活性组分。结果：经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱表征该酶为单一蛋白,其分子量为 ２３．３６７ ｋＤ。结论：为进一步研究其结构和功能提供了可靠依据。     

江浙蝮蛇毒镇痛组分的分离纯化及其理化性质

目的　分离筛选江浙蝮蛇毒中主要镇痛组分 ,研究其分子量、等电点、纯度、氨基酸序列、稳定性等理化性质 ,以及镇痛作用、机体耐受性和依赖性等药理学性质。方法　采用离子交换和分子筛 ,以柱层析法分离蛇毒组分。用生化测定方法 ,测定其理化性质。用热板法和醋酸扭体法等确定最佳镇痛组分 ,并用纳洛酮催促和自然戒断实验、耐受性实验考察其依赖性和耐受性。结果　分离获得 14个蛋白组分 ,经ED50 /LD50 筛选出最佳镇痛组分C4 ,鉴定结果表明纯度为电泳纯 ,HPLC相对纯度为 92 .16 % ,分子量 16 .6ku ,等电点 8.8,氨基酸序列与磷脂酶A2 同源 ,为一种新的镇痛蛋白 ,并获得其紫外吸收特征峰、镇痛耐受和依赖性等性质。结论　C4组分具有显著的镇痛效果 ,未发现耐受性和依赖性 ,值得进一步研究开发。     

蝮蛇毒的研究和利用 2.蝮蛇毒柱层析分离及各组分的酶活性和生理活性测定

蝮蛇毒注射液在临床试用后,已观察到初步疗效,为了进一步了解其作用机理和提高治疗效果,我组又进行了蝮蛇毒的蛋白组分分离和各组分酶活性等的测定。日本大阪大学 Suzuki 等人,从1963年开始,用二乙胺基乙基纤维素分离纯化日本产蝮蛇毒,得到11—14个蛋白组分,并鉴定和纯化了其中三个蛋白酶组分,三个精氨酸酯酶组分和二个出血毒素组分。上海生理研究所曾用二乙胺基乙基纤维素分离浙江产蝮蛇毒,得到5个主要蛋白组分,     

长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的分离纯化方法研究

目的:研究长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的简单分离纯化方法。方法:采用DEAE-Sephadex A-25及Sephadex G-25层析的方法,比较二者对长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶简单分离纯化的效果。结果:从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离出类凝血酶,SDS-PAGE电泳显示为一条带,分子量大约为35.5kDa,达到电泳纯。理化性质研究表明,此类凝血酶具有体外凝血活性,体外凝血酶比活力为12.57IU.mg-1,用N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐测得该酶的精氨酸酯酶比活力为137.65IU.mg-1。用蛋白酶抑制剂和乙二胺四乙酸对该酶进行抑制实验,结果表明该酶属于丝氨酸蛋白酶,而不是金属蛋白酶。结论:本方法可用于长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的分离纯化。     

蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及性质研究

目的 :寻找一种分离纯化蝮蛇毒纤溶酶的工艺并研究其理化性质。方法 :采用DEAE SepharoseCL 6B和HeparinCL 6B层析方法 ,从蝮蛇毒中分离纯化纤溶酶。结果 :蝮蛇毒纤溶酶经HPLC为单一峰 ,等电聚焦电泳为一条带 ,其等电点为 4.5 5 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为 2 9.4kD。该酶对热不稳定 ,在 pH6～ 9时稳定 ,氨基酸组成分析表明含酸性氨基酸较多。结论 :用此工艺可制得高纯度的蝮蛇毒纤溶酶。     

短尾蝮蛇毒中磷脂结合抗凝蛋白的分离纯化及鉴定

目的从短尾蝮蛇毒中分离纯化一种抗凝蛋白,并对其生化性质进行研究。方法利用阳、阴离子交换、凝胶过滤的方法分离纯化这种抗凝蛋白,用活化部分凝血活酶时间(APTT)测定其抗凝活性,用SDS-PAGE测定其蛋白相对分子量,用等电聚焦法测定蛋白的等电点.用薄层析方法确定抗凝蛋白与磷脂酰胆碱结合。结果从短尾蝮蛇中分离纯化出的抗凝蛋白是二聚体,相对分子量为24.0×103(非还原)和14.6×103(还原)。等电点为pH 5.2。该蛋白具有精氨酸酯酶活性,能明显地延长活化的部分凝血活酶时间(APTT),其抗凝活性与磷脂结合有关。结论此方法成功地从短尾蝮蛇毒中纯化出一种抗凝蛋白。因其能够与磷脂结合,又具有明显的抗凝活性,因此把该蛋白称为磷脂结合抗凝蛋白(phospholip id-b ind ing anticoagu lation prote in,PBAP)。     

长白山白眉蝮蛇血凝酶的分离纯化研究

摘 要 目的：建立一种分离纯化长白山白眉蝮蛇血凝酶的方法。方法: 先后采用分子筛层析法、离子交换色谱法、肝素 Sepharose亲和层析法从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离纯化得到一种具有有凝血活性的酶成分,并采用SDS-Page法、RP-HPLC法测定其纯度,凝胶电泳法(SDS-Page)考察其对牛纤维蛋白原的作用方式、高效空间排阻色谱法（HPSEC）测定其相对分子质量,等电聚焦电泳分析法（IEF）测定其等电点,Lowry法测定其蛋白浓度。结果: 从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离纯化了一种凝血酶成分,SDS-Page显示为一条带,HPLC得到单一的色谱峰,该酶只作用于纤维蛋白原的α链,其相对分子质量为32.2 kD,等电点为5.21,此酶具有体外凝血活性。结论:该方法可用于长白山白眉蝮蛇血凝酶的分离纯化。     

皖南尖吻蝮蛇蛇毒中抗肿瘤活性蛋白分离纯化及其活体外性研究

目的:分离纯化皖南尖吻蝮蛇蛇毒(Wannan Agkistrodon acutus venom)中抗肿瘤活性蛋白并研究其活性。方法:利用DEAE-sepharose Fast Flow和SP-sepharose Fast Flow阴阳离子交换层析以及Sephadex G-75凝胶过滤层析等分离方法从皖南尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化得一种抗肿瘤活性蛋白,用CCK-8法检测该蛋白对体外培养的白血病K562细胞、结肠癌细胞(SW480)、胃癌细胞(SGC7901)、肝癌细胞(HepG2)的增殖抑制作用。结果:分离纯化得一相对分子质量约23700的抗肿瘤活性组分(ATF1-c),CCK-8检测对体外培养的K562、SW480、SGC7901、HepG2细胞的增殖抑制作用,呈剂量-时间依赖关系。结论:ATF1-c对体外培养的人癌细胞有明显的抑制和杀伤作用。     

小鼠颌下腺神经生长因子的分离、纯化

目的 分离、纯化小鼠颌下腺神经生长因子。方法 采用冷冻离心和亲和色谱法分离纯化神经生长因子,并用放射免疫法测定其含量。结果　神经生长因子含量平均为0.42mg/ml。结论　从小鼠颌下腺成功地分离、纯化神经生长因子。     

短尾蝮蛇毒纤溶酶原激活剂的分离纯化及活性测定

目的从短尾蝮蛇毒中分离纯化纤溶酶原激活剂(plasminogen activator of Gloydius brevicaudus venom,GBV-PA),对其理化性质及部分生物活性进行研究。方法应用苯甲脒-琼脂糖凝胶(Benzamidine Sepharose6B)亲和层析及Lichrospher C18反相层析柱进行分离纯化,应用SDS-PAGE测定分子量、聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳测定等电点,以发色底物法测定生物活性。结果通过亲和层析、反相层析等方法可从短尾蝮蛇毒中分离纯化出纤溶酶原激活剂至电泳纯以上,其相对分子质量约为32.6×103,等电点约为5.2,能特异激活人纤溶酶原为纤溶酶,其比活性为2.87t-PA IU.mg-1;该酶为丝氨酸蛋白酶,对纤维蛋白无亲和性。结论应用亲和层析和反相层析可从短尾蝮蛇毒获得一种纤溶酶原激活剂;该酶为丝氨酸蛋白酶,对纤维蛋白无亲和性。     

白眉蝮蛇降纤酶的纯化及特性分析

目的从白眉蝮蛇蛇毒中提取降纤酶,并对其进行特性分析。方法采用一步亲和色谱法分离纯化降纤酶,用高效液相色谱分析其纯度,SDS-PAGE测定其相对分子质量。结果分离得到的降纤酶纯度高(99%以上),SDS-PAGE分析为一条带,相对分子质量为36 000,比活性为4 800 u/mg。结论用一步亲和色谱法从白眉蝮蛇蛇毒中纯化降纤酶的方法简单有效,所得产品纯度高、产量高。     

皖南尖吻蝮蛇毒抗凝蛋白组分的分离纯化及其急性毒性实验研究

目的：从皖南尖吻蝮蛇毒中分离纯化-种新的抗凝蛋白组分．7221（ACPF-7221）。研究小鼠对ACPF-7221的急性毒性反应及死亡率并确定其L‰及95％可信区间。方法：先后用DEAESepharose Fast Flow阴离子交换柱层析、SephadexG75分子筛、SPSephamse FastFlow阳离子交换柱层析、SephadexGS0分子筛过滤对尖吻蝮蛇粗毒进行分离纯化,利用部分凝血活酶活性时间（APTT）活性检测筛选出抗凝成分。ACPF-7221从小鼠的尾静脉注射,根据每组小鼠的体重确定其相对应的给药量。根据死亡结果计算出LD50及其95％可信区间。结果：分离纯化的ACPF-7221由相对分子质量分别为25000、30000、50000的3种蛋白所构成三聚体,其蛋白含量约为65％。小鼠静脉注射LD50为7．848mg／kg,LD50（95％可信区间）分别为7．353～8．375mg／kg。结论：利用离子交换柱层析法可从皖南尖吻蝮蛇毒中提取出-种新的抗凝蛋白组分,此组分由3种相对分子质量各异的蛋白所构成三聚体。通过对小鼠急性毒性实验确定uk及其95％可信区间。肺为急性毒性的靶器官,肺出血窒息是其死亡的原因。     

尖吻蝮蛇毒中一种新类凝血酶的分离纯化

用阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱技术,从尖吻蝮蛇毒中纯化得到一个具有凝血活性的组分.经Superdex 75 HR10/30预装柱检测,纯度达99.91%.SDS-PAGE显示为单一条带,还原、非还原条件下分子量分别为59.25k、52.58k.该组分的凝血酶比活为41.5u/mg,精氨酸酯酶比活为14.29u/mg,但不激活血浆凝血因子ⅩⅢ.EDTA不能抑制其凝血活性,而苯甲磺酰氟则产生不可逆抑制作用.结果表明该酶是一种新尖吻蝮蛇毒类凝血酶.     

江浙蝮蛇毒镇痛组分对吗啡依赖大鼠尾状核神经肽的调控作用

目的:研究江浙蝮蛇毒镇痛C4组分对大鼠尾状核中神经肽水平的调控作用.方法:应用微透析技术,探针定位于大鼠尾状体,以人工脑脊液透析,HPLC检测亮氨酸脑啡肽、β-内啡肽和P物质的含量,动态监测其变化.结果:在吗啡依赖大鼠给予C4组分后,尾状核亮氨酸脑啡肽含量显著增高,为可乐定组的1.5倍,并持续作用8h以上,而β-内啡肽和P物质含量变化较小.结论:C4组分主要作用于亮氨酸脑啡肽,通过提高其含量发挥镇痛作用.     

黑眉蝮蛇蛇毒纤溶酶的纯化及其性质研究

目的从黑眉蝮蛇蛇毒中纯化出无出血毒的纤溶酶。方法用DEAE-Sepharose FF阴离子交换树脂、CM-sepharose FF阳离子交换树脂和Sephacryl S-100凝胶过滤树脂三步分离方法,从黑眉蝮蛇蛇毒中纯化出一种纤溶酶活性成分。结果经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测为单一蛋白质,相对分子质量为31 800,小鼠皮下注射无出血反应。该酶与纤维蛋白原保温15 min能迅速水解Bβ(β)链,随后缓慢水解Aα(α)链,而对γ(γ-γ)链无影响。结论此工艺可以快速纯化黑眉蝮蛇蛇毒纤溶酶。     

江浙蝮蛇抗栓酶基础实验及临床应用研究

江浙蝮蛇抗栓酶(SVATE)是在蛇岛蝮蛇抗栓酶研制的基础上进一步研制成功的一种毒性低、疗效高、用途广的抗凝溶栓药物。     

白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶的分离纯化

目的用白眉蝮蛇蛇毒分离纯化纤溶酶。方法利用离子交换层析、亲和层析、分子筛层析技术进行分离纯化纤溶酶。结果得到了电泳纯的纤溶酶,其相对分子质量为24000。结论该工艺可以快速地分离纯化白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶：