蛇毒蛋白基因克隆与高效表达的研究进展

蛇毒是从毒蛇的毒腺中分泌出来的毒液,属于生物毒素。其化学成分很复杂,是一类有酶活性和其他生物活性的蛋白质和多肽的混合物．具有广泛的生物学活性．可作为天然的药用资源。目前通过捕蛇或养蛇提取蛇毒存在局限性．所以采用基因工程生产高纯度的蛇毒蛋白成为当前及今后的研究方向。本文就蛇毒蛋白基因克隆与高效表达的研究进展作一综述。     

提高教学质量培养高素质医学人才

进行医学教育改革，采用将传授知识、培养能力与提高素质融为一体的医学人才培养模式已是当务之急。本文从以往的教学实战，对如何提高教学质量及培养具有系统、广博的基础知识和高素质的医学人才，谈谈粗浅的体会。     

福建产眼镜王蛇毒神经毒素的分离及活性测定

目的 从眼镜王蛇蛇毒中分离神经毒素，测定其活性和毒性。方法 应用CM—Sephadex C-50离子交换色谱，阶段梯度洗脱分离粗毒；用Sephadex G-50凝胶过滤纯化组分；用大鼠体外膈神经-膈肌标本鉴定分离组分对神经-肌肉接头的作用性质；观察神经毒素对乙酰胆碱(Ach)引起蛙体外腹直肌收缩的量效曲线的影响；以Meier法测定神经毒索对小鼠的半数致死量(LD50)。结果 眼镜王蛇粗毒经阳离子交换色谱后获得A～N共14个蛋白峰，经鉴定E、F、G，H、I、K等6个蛋白峰具有阻断神经一肌肉接头传导的作用，被鉴定为神经毒素，约占粗毒的48．3％；通过凝胶过滤对E、G和K组分进行初步纯化；E、G和K组分可使Ach引起的蛙腹直肌收缩的量效曲线平行右移，它们与N2-胆碱受体(N2-AchR)的解离常数(KD)分别为：145．87，73．53和20．04ng／mL；E、G和K组分小鼠静脉注射的LD50分别为：0．884，0．749和1．58mg／kg。结论 眼镜王蛇粗毒经离子交换色谱获得6个神经毒索组分，经鉴定E、G和K组分为N2-AchR的竞争性拮抗剂。     

蛇毒蛋白基因的大肠杆菌表达研究进展

蛇毒是多种生物活性蛋白和多肽的混合物，由于蛇毒在基础医学和临床上的特殊作用以及天然蛇毒蛋白获取方法的局限性，采用生物工程方法规模化生产高纯度的蛇毒蛋白已成为当前及今后的研究方向。该文就蛇毒蛋白基因在大肠杆菌中表达的研究近况进行介绍。     

组蛋白去乙酰化酶抑制药研究现状

组蛋白去乙酰化酶抑制药具有的锌指结构与组蛋白乙酰化赖氨酸残基侧链结构相似,可通过竞争性抑制组蛋白去乙酰化酶活性而提高组蛋白乙酰化水平,改变特定基因的转录与表达水平,抑制细胞增殖,诱导细胞分化与凋亡,从而发挥多种药理作用尤其是抗癌作用。多种组蛋白去乙酰化酶抑制药已得到了深入的研究,并在临床试验中显示出良好的治疗效果。     

徐长卿多糖的分离纯化及其抗辐射和升高白细胞的作用

目的 从徐长卿中提取多糖组分并观察其对辐射和环磷酰胺 (CTX) 所致小鼠骨髓抑制的影响。方法水提醇沉法从徐长卿根茎粉末中提取徐长卿多糖粗品 (CPB),粗品经 DEAE-Sepharose FF 柱纯化,组分作 IR 分析。以 7.5 Gy ^６０Co 射线正面及背面照射小鼠,观察徐长卿多糖对模型小鼠外周白细胞总数、骨髓 DNA 系数、胸腺系数及脾系数的影响。以 CTX 100 mg/kg ip 1 次致小鼠骨髓抑制后,观察徐长卿多糖对模型小鼠外周血白细胞总数的影响。结果 CPB 经 DEAE-Sepharose FF 柱色谱分离获得两个多糖组分峰 (CPBA 和 CPBB),提取率分别 16.57%、7.80%。小鼠接受 ^６０Co 辐射后,CPBB 高剂量［100 mg/(kg·d)］组小鼠外周血白细胞数、骨髓 DNA 系数与模型组相应指标比较均明显增高 (P＜0.05);CPBB 低剂量［50 mg/(kg·d)］组胸腺系数及脾系数 (0.92±0.32) 与模型组相应指标比较均明显增高 (P＜0.01)。小鼠 ip CTX 后,CPBB 高、中剂量组小鼠外周血白细胞数与模型组比较均有明显提高 (P＜0.05)。结论 徐长卿多糖 CPBB 有明显对抗^６０Co 辐射引起的小鼠胸腺、脾缩小和骨髓 DNA 降低的作用,同时也有对抗^６０Co 辐射或 CTX 引起的白细胞降低的作用。     

蛇毒解离素对肿瘤侵袭、转移的影响

解离素是蛇毒中的一类活性蛋白质,因含特异性RGD(精-甘-天冬氨酸,Arg—Gly—Asp)或KGD(精-甘-天冬氨酸,Lys—Gly—Asp)基序,可阻断细胞膜表面的整合素与其配体结合,具有抑制血小板聚集、影响细胞迁移和抑制血管生成等作用,从而在多个环节遏制肿瘤细胞的侵袭和转移。     

整合素与肿瘤转移

整合素族（integrins）为一族亲异性细胞粘附分子,介导细胞-细胞之间及细胞-细胞外基质之间的相互作用。在肿瘤细胞转移的全过程中,整合素几乎参与每一个步骤,并随肿瘤的进展而影响肿瘤细胞与其微环境的相互作用。整合素通过与生长因子受体、各种蛋白酶、细胞骨架和胞外信号传导的协同作用完成这一进程。     

健男春对免疫功能及超氧化物歧化酶（SOD）活性和脂质过氧化物（LPO）含量的影响

健男春1．25，2．5和5．0／kg·d－1×8dig给予阳虚小鼠（强的松龙5mg／kg·d-1×9dim）对小鼠体液免疫（溶血素法）无影响．健男春2．5g／kg·d－1×7dig给予正常小鼠则可增强网状内皮系统吞噬功能（碳粒廓清法），同时增加其肾上腺重量．健男春1．0和2．0g／kg·d-1×30dig给予大鼠，大鼠血中SOD活性（U／ml）分别为283．±S20．9和301．1±19．4，血清中LPO含量（nmol／ml）分别为3．07±s0．47和2．52±s0．21与空白对照（SOD为253．0±s27．2，LPO为3．44±s0．37）比较．低．高剂量健男春均能显著提高大鼠全血中SOD活性（P＜0．01和0．001），降低血清中LPO含量（P＜0．05和0001）．此外，健男春1．25，2．5和5．0g／kg·d－1×7dig给予正常小鼠，各组耗氧率（ml／min·g-1体重）分别为0．033±S0．005，0．040±S0．004和0．033±S0．005，与对照组（0．044±S0．004）比较差别非常显著（P＜0．01～0．001）．阳性对照药男宝组0．038±s0．004，亦有明显降低（P＜0．01）．     

蛇毒神经毒素的镇痛作用

早在二十世纪初，人们就开始应用蛇毒来缓解恶性肿瘤疼痛、神经痛和关节痛。1933年Calmette及Taguet先后发现肌肉注射微量眼镜蛇毒具有类似吗啡样的中枢性镇痛作用。此后Macht和Steinbrocker等不少学者也相继报告了类似的结果。之后，其它含有神经毒素的蛇毒也先后被发现具有镇痛作用，人们从蛇毒中分离出神经毒素（neurotoxin,NT）作为镇痛药物。