血府逐瘀胶囊对脑缺血再灌注大鼠一氧化氮合酶亚型表达的影响

目的:探讨血府逐瘀胶囊在大鼠的缺血再灌注模型中对神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法:采用随机分组的方法,将165只SPF级健康大鼠分为假手术组、模型组、血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组。血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组大鼠,在手术前1周依次灌胃0.1 g/(kg·d)、0.2 g/(kg·d)、0.5 g/(kg·d)的血府逐瘀胶囊混悬液,同时假手术组及模型组大鼠给予等量的生理盐水;免疫组织化学染色法在不同时间点检测各组大鼠脑组织切片中各一氧化氮合酶(NOS)亚型(nNOS、eNOS和iNOS)的表达。结果:假手术组大鼠未出现神经功能缺失症状,脑组织未检测到iNOS阳性表达。与假手术组比较,模型组大鼠在24 h后出现明显的神经功能缺失症状;脑组织切片中各时间点eNOS阳性细胞数均显著增加;各时间点nNOS阳性细胞数均显著减少;在脑缺血再灌注后10 h时达到最大值,差异均有统计学意义(P 0.05)。与模型组比较,低、中、高剂量组大鼠脑组织eNOS的阳性表达均显著升高;nNOS及iNOS的阳性表达均显著下降,差异均有统计学意义(P 0.05);其中在高剂量组大鼠eNOS阳性表达最高;nNOS及iNOS的阳性表达最低。与低剂量组比较,中、高剂量组大鼠的神经行为评分显著降低(P 0.05)。结论:NOS参与了脑缺血再灌注损伤过程,nNOS和eNOS从损伤早期开始表达,而后逐渐降低;iNOS则主要在损伤后期表达。使用血府逐瘀胶囊对脑缺血再灌注模型大鼠进行预处理,可促进eNOS表达,抑制nNOS和iNOS表达,说明血府逐瘀胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护功能可能和NOS不同亚型的表达有关。     

丹参酮ⅡA对血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：研究丹参酮ⅡA（TanⅡA）对H2O2所致人脐静脉内皮细胞（ECV-304）损伤的保护作用。方法：MTT法检测细胞活力,比色法测定细胞培养液中超氧化物歧化酶（SOD）活性及细胞内丙二醛（MDA）含量,RT-PCR方法测定细胞内皮素1（ET-1）、过氧化物酶体增生物激活受体γ（PPAR-γ）mRNA的表达。结果：丹参酮ⅡA可剂量依赖性地抑制H2O2所致的细胞活力降低,减少MDA生成,提高SOD活性,并可抑制ET-1mRNA的表达,升高PPAR-γmRNA的表达。结论：丹参酮ⅡA对H2O2所致ECV-304损伤具有明显的保护作用。     

搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞iNOS mRNA及ET-1 mRNA表达的影响

目的观察搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ致体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）iNOS及ET-1 mRNA表达的影响。方法制备兔活心汤含药血清。采用酶消化法培养HUVECs2-3代用于实验,采用RT-PCR法测定内皮细胞iNOSmRNA及ET-1 mRNA。结果活心汤可抑制AngⅡ导致的内皮细胞损伤,减少iNOSmRNA及ET-1 mRNA的表达。结论活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,保护血管内皮细胞功能。     

四物降脂颗粒含药血清抗血管内皮细胞氧化损伤的实验研究

目的:观察四物降脂颗粒对过氧化氢(H2O2)致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:制备四物降脂颗粒大鼠含药血清,随机分为4组:空白组,H2O2模型组,药物组,丹参素对照组。倒置显微镜下观察细胞形态、密度;噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;比色法测定细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)活性及细胞内丙二醛(MDA)含量;RT-PCR方法测定细胞内皮素1(ET-1),血栓调节蛋白(TM)mRNA的表达。结果:四物降脂颗粒含药血清可抑制过氧化氢所致的细胞活力降低,减少MDA生成,提高SOD活性;并可抑制ET-1mRNA的表达,升高TMmRNA的表达。结论:四物降脂颗粒含药血清对过氧化氢所致HUVECs损伤具有明显的保护作用。     

黄芩苷对脂质过氧化及内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:观察黄芩苷对脂质过氧化及内皮细胞氧化损伤的保护作用。方法:50只小鼠分为正常对照组及模型组、黄芩苷低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组,每组10只,采用高脂饮食联合维生素D3建立AS模型,给药组在建立模型同时给药4 w。检测血脂水平、血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)水平。另采用H2O2体外诱导人脐静脉内皮细胞损伤的方法,建立人脐静脉内皮细胞损伤模型,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度黄芩苷对ECV304细胞增殖的影响。结果:黄芩苷高剂量组血清CHO、TG、LDL-C、MDA水平较模型组显著降低(P0.05或P0.01),HDL-C、SOD和NO水平显著升高(P0.05或P0.01),不同质量浓度的黄芩苷可以剂量依赖地减少H2O2诱导的细胞凋亡,恢复血管内皮细胞增殖。结论:黄芩苷对调节脂质代谢、抗脂质过氧化,减轻血管内皮细胞的氧化损伤,促血管新生有良好的作用。     

三七总皂苷对血管紧张素Ⅱ致脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究三七总皂苷(血塞通)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)致脐静脉内皮细胞(HUVECS)损伤的保护作用。方法:体外培养HUVECS细胞,采用CCK8法,采用不同浓度的血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)干预正常HUVECS细胞,然后得到损伤条件为10~(-6) mol·L~(-1),24 h。对于损伤后的HUVECS给予不同浓度的三七总皂苷(血塞通)进行保护治疗,设置100、50、25 mg·L-1为高、中、低剂量组,10~(-4)、10~(-5)、10~(-6)mol·L~(-1)氯沙坦为阳性对照组。按对照组、模型组、氯沙坦高、中、低剂量组,三七总皂苷高、中、低剂量组进行实验。对LDH、NO、NOS、eNOS、ET-1、PGI2、TX-B2、t-PA、PAI-1指标进行检测。结果:三七总皂苷对Ang Ⅱ损伤的细胞可以降低LDH、ET-1、TXB2、PAI-1的分泌,增加NO、NOS、eNOS、PGI2、t-PA的分泌。结论:三七总皂苷对Ang Ⅱ损伤的脐静脉内皮细胞具有保护作用,并可促进内皮细胞分泌扩血管物质和抗血栓物质。     

丹参素对血管内皮细胞氧化应激损伤保护作用的实验研究

目的研究丹参素对过氧化氢(H2O2)所致人脐静脉内皮细胞(ECV-304)损伤的保护作用。方法体外培养ECV-304,用H2O2孵育细胞,建立氧化诱导内皮细胞损伤和凋亡模型。用此模型筛选出浓度适合的丹参素。应用噻唑蓝(MTT)法检测内皮细胞生长和增殖活性;比色法测定细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)活性及细胞内丙二醛(MDA)含量。结果丹参素可明显减轻H2O2所致的ECV-304细胞损伤,中、高浓度的丹参素均可使MDA含量明显下降,SOD活性明显升高,与模型组比较均有显著性差异(P均<0.01)。结论丹参素对H2O2所致ECV-304损伤具有明显的保护作用,其机制与减少MDA生成,提高SOD活性有关。     

调脂一号含药血清对H_2O_2诱导HUVECs炎症因子表达的影响

目的:探讨调脂一号(TZYH)含药血清对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎性因子表达的影响。方法:采用100μmol·L-1H2O2复制HUVECs损伤模型,TZYH含药血清倍比稀释后分为3个剂量干预组(体积分数10%),运用MTT法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附实验检测细胞分泌白细胞介素1β和肿瘤坏死因子的变化,进一步通过RT-PCR方法检测炎症因子相关基因白细胞介素1β和肿瘤坏死因子的表达。结果:TZYH含药血清能明显提升H2O2损伤后的HUVECs存活率,流式细胞技术结果显示TZYHF含药血清抑制血管内皮细胞凋亡;ELISA和RT-PCR结果提示TZYHF抑制H2O2所致的血管内皮细胞凋亡可能是通过降低IL-1β、TNF-αmRNA和蛋白的表达实现的。结论:TZYH含药血清可以抑制H2O2诱导的内皮细胞凋亡,对血管内皮细胞损伤具有一定的保护作用。     

当归红芪超滤物对过氧化氢致内皮细胞凋亡中热休克蛋白70及内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨当归红芪超滤物对过氧化氢(H2O2)致内皮细胞凋亡中热休克蛋白70(HSP70)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法 H2O2诱导ECV-304人脐静脉内皮细胞凋亡制备模型,实验分为正常对照组、模型组、单纯药物组、药物干预组,并给予相应药物干预,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞内Ca2+浓度,RT-PCR法检测HSP70、eNOS的基因表达,蛋白印迹法检测HSP70的蛋白表达,硝酸还原酶法及分光光度法检测一氧化氮(NO)的含量。结果与正常对照组比较,模型组细胞凋亡率明显增加、细胞内Ca2+浓度明显上升(P0.05),细胞HSP70基因和蛋白表达上调、eNOS基因表达下调及NO含量降低(P0.05);与模型组比较,药物干预组细胞凋亡率、细胞内Ca2+浓度明显降低(P0.05),细胞HSP70基因和蛋白表达上调、eNOS基因表达上调及NO含量升高(P0.05)。结论当归红芪超滤物通过上调HSP70、eNOS的表达及NO含量,降低细胞内钙超载,发挥抗H2O2致ECV-304人脐静脉内皮细胞凋亡的作用。     

红芪总黄酮对过氧化氢致脐静脉内皮细胞损伤的抗氧化作用

目的:研究红芪总黄酮对过氧化氢(H2O2)诱导脐静脉内皮细胞损伤的保护作用。方法:化学发光法检测红芪总黄酮对氧自由基的清除能力。建立H2O2致脐静脉内皮细胞损伤模型,化学比色法检测乳酸脱氢酶(LDH),丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,单细胞凝胶电泳法检测对细胞DNA损伤的影响。结果:红芪总黄酮可清除氧自由基。100μmol/L H2O2诱导脐静脉内皮细胞4 h,细胞液LDH、细胞内MDA含量升高SOD活性降低,DNA损伤明显。红芪总黄酮可明显抑制MDA损伤,显著降低LDH释放及细胞内MDA含量,提高SOD活性。结论:红芪总黄酮对H2O2诱导脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高脐静脉内皮细胞的抗氧化能力有关。     

人参黄芪含药血清对人脐静脉内皮细胞活性的影响

目的:通过观察养心汤中君药(人参、黄芪)对人脐静脉内皮细胞增殖率的影响,探讨其防治冠心病不稳定型心绞痛的作用机制。方法:实验细胞分为空白血清组、模型组、参芪低剂量组、参芪中剂量组、参芪高剂量组5组。应用MTT法检测细胞活性。结果:H2O2培养液可使人脐静脉内皮细胞收缩变圆,细胞间隙增宽,部分细胞脱落。随参芪含药血清浓度的增加,细胞越成片贴壁生长,细胞形态和间隙越接近正常。经MTT法检测,与空白血清组相比,模型组增值率明显降低,差异具有统计学意义(P0.05);各参芪组间比较,参芪高剂量组增殖率显著升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:参芪含药血清能预防H2O2对人脐静脉内皮细胞造成的损伤,并能够促进内皮细胞增殖,这可能是其防治冠心病不稳定型心绞痛的作用机制之一。     

活血通络汤对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤CD54表达及中性粒细胞粘附率的影响

目的研究活血通络汤对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧/复氧损伤CD54表达及中性粒细胞(PMN)粘附率的影响。方法制备兔含药血清;HUVEC复苏和培养后,建立缺氧/复氧损伤模型;将模型细胞分为5组,即正常对照组、模型组及活血通络汤高、中、低剂量组。上述分组处理后,倒置显微镜下观察其形态学变化,测定CD54表达及PMN粘附率。结果活血通络汤低、中、高剂量组能够抑制HUVECCD54表达、降低PMN与HUVEC的粘附率,且作用呈剂量依赖性改变,其中活血通络汤中、高剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论活血通络汤能够抑制CD54的表达增多、改善血管内皮细胞在缺氧条件下的细胞粘附性,从而对血管内皮细胞起到保护作用,这可能是该方防治下肢深静脉血栓的作用机制之一。     

含溶栓颗粒血清对TNF-α损伤人脐静脉内皮细胞ICAM-1的影响研究

目的：探讨溶栓颗粒对TNF-α损伤血管内皮细胞ICAM-1表达的影响。方法：用TNF-α（40ng/mL）损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）造模,用含大、中、小剂量溶栓颗粒的大鼠血清干预受损HUVEC,应用HE染色观察细胞形态变化,免疫组化法观察血管细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达。结果：TNF-α可以造成HUVEC损伤,表现细胞数量下降,皱缩、变形,分裂相细胞明显增加。受损细胞的ICAM-1表达明显增多。含大、中剂量溶栓颗粒的大鼠血清能减少ICAM-1表达,减少细胞有丝分裂。结论：溶栓颗粒可以减少因炎性介质TNF-α增加而受损的血管内皮细胞ICAM-1表达,或许可以减缓动脉粥样硬化形成;溶栓颗粒减少血管内皮细胞分裂增殖,对稳定动脉粥样斑块稳定性或许有积极作用。     

冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤炎性因子水平的影响

目的：观察冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤过程中TNE-α与IL-1水平的影响。探讨冠心平治疗冠心病的相关机制。方法：体外培养内皮细胞ECV304,随机分成正常对照组、模型对照组、阳性药对照组、冠心平大、中、小剂量组,用100μmol／LH2O2,损伤细胞,以血清药理学方法给药,继续培养后显微镜下观察细胞生长情况,检测细胞上清中TNF-α与IL-1水平。结果：100μmol／LH2O2对ECV304有损伤作用。冠心平能显著降低TNF-α的水平;减少H2O2诱导ECV304IL-1的产生。结论：冠心平可降低H2O2对ECV304的损伤程度,其机理可能与其降低TNF-α和IL-1水平,从而调节血管内皮炎性反应有关。     

冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤的影响

目的：观察冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤过程中NOS与ET的影响。探讨冠心平治疗冠心病的可能机制。方法：体外培养内皮细胞ECV304,用100umol/L H2O2损伤细胞,随机分成正常对照组、模型对照组、阳性药对照组、冠心平大、中、小剂量组。用血清药理学方法给药,继续培养后显微镜下观察细胞生长情况,检测NOS与ET。结果：100umol/L H2O2对ECV304有损伤作用。冠心平能显著提高NOS的活性;显著减少H202诱导ECV304ET的产生。结论：冠心平可降低H2O2对ECV304的损伤程度,其机理可能与其提高NOS活性,增加NO合成,并且减少ET的合成,从而调节血管舒缩功能有关。     

灯盏乙素对过氧化氢致血管内皮细胞损伤的作用及其机制研究

目的：探讨灯盏乙素对过氧化氢（H2O2）损伤的血管内皮细胞的保护作用。方法：体外培养血管内皮细胞,将细胞分为6组,即正常对照组（control）,氧化损伤组（H2O2组）,氧化损伤加入维生素E对照组（VitE＋H2O2）,氧化损伤加入灯盏乙素组（scutellarin1＋H2O2,scutellarin2＋H2O2,scutellarin3＋H2O2）。用VitE及不同浓度灯盏乙素预先培养血管内皮细胞24 h,然后加入1 mmol.L-1 H2O2继续培养24 h,MTT法检测细胞存活率;检测SOD,GSH-PX,CAT活力。结果：不同浓度灯盏乙素呈能够降低H2O2对抗氧化酶SOD,GSH-PX,CAT活力的影响,各指标差异有显著性（P〈0.01）。结论：灯盏乙素可保护过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤,其作用可能与抗氧化、增强抗氧化酶SOD、GSH-PX、CAT的活力有关。     

复方薤白胶囊对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的研究

目的：研究复方薤白胶囊对过氧化氢（H2O2）诱导的凋亡内皮细胞的保护作用,及相关凋亡基因表达的影响,以明确其作用机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,以H2O2行内皮细胞凋亡造模后,再加入不同浓度的复方薤白胶囊提取液作用24h。以MTT法检测细胞增殖率,Hoechst染色观察细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率,Western Blot检测抗凋亡基因Bcl-2含量变化。结果：H2O2造模后,细胞增殖明显受抑,Hoechst染色见大量凋亡细胞,流式细胞检测出明显凋亡峰,抗凋亡基因Bcl-2含量降低,与正常组相比P〈0.01,具有明显的统计学意义。而各中药组提高了造模后细胞增殖率,降低了凋亡细胞及凋亡峰,提高了Bcl-2含量表达,且与浓度呈正相关,具有明显的统计学意义。结论：复方薤白胶囊能上调抗凋亡基因Bcl-2的表达,保护内皮细胞,抗内皮细胞凋亡。     

黄芪含药血清对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型细胞活性的影响

目的：观察养心汤方中单味中药黄芪不同浓度含药血清对H：O：诱导人脐静脉内皮细胞（HU—VEC）氧化损伤模型细胞增殖的影响及对损伤HUVEC的保护作用,以进一步研究养心汤对冠心痛不稳定型心绞痛的确切作用机制。方法：以浓度为1．03g·mL^-1的黄芪药液灌胃大鼠1周,于末次给药后取血离心制备含药血清。将HUVEC与不同剂量浓度（2％、4％、6％）单味黄芪含药血清、基础培养液、空白血清培养液一起培养,共分5组,培养24h后加入H2O2作用2h,通过MTT法及形态学方法观察不同浓度黄芪含药血清对H2O2损伤HUVEC生长活性变化。结果：黄芪含药血清2％、4％、6％各组细胞OD值均较H2O2模型对照组明显升高,与H2O2模型组相比较均有统计学意义（P〈0．01）,且2％、4％、6％组间比差异有统计学意义（P〈0．05）。形态学方面,黄芪含药血清可使细胞体积变小,间隙变大,但彼此之间存在联系,脱落细胞较少;皱缩的程度明显改善。结论：黄芪含药血清可以促进H2O2损伤人脐静脉内皮细胞的增殖,增强HUVEC抗氧化损伤能力,逆转和改善内皮功能障碍,具有一定剂量依赖关系。     

通络宁心方对人脐静脉内皮细胞保护作用的实验研究

目的观察通络宁心方对人脐静脉内皮细胞分泌作用的影响。方法体外培养人脐带静脉内皮细胞;分别制备通络宁心方煎剂、复方丹参滴丸含药动物血清,随机分为正常组、模型组、治疗组(大、中、小剂量)、对照组(大、中、小剂量)8组。除正常组外,其余7组予H2O2造模,治疗组、对照组分别予大、中、小剂量含药血清,分别检测一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、P-选择素(Ps)指标。结果模型组NO含量显著低于正常组、治疗及对照大、中、小剂量组;模型组ET-1含量显著高于治疗及对照大、中、小剂量组;模型组Ps含量显著高于正常组,治疗中、小剂量组,对照大、中剂量组,与治疗大剂量、对照小剂量组比较,无显著性差异。结论通络宁心方对血管内皮细胞分泌作用的影响与复方丹参滴丸有同一性,均能对抗H2O2对血管内皮细胞的损伤。