hCGβ-03d3基因免疫BALB／c小鼠选择性促进B细胞克隆扩增

评价分子佐剂C3d在基因免疫中选择性促进抗原特异性B细胞增殖作用。分别用质粒pCMV4-hcGβ-C3d3和pCMV4-hOGβ免疫BALB／c小鼠，免疫剂量为50pmol。间隔3周相同剂量加强免疫1次。加强免疫后第1周及第2周，MTT法分析各组小鼠脾脏B细胞和T细胞增殖；ELISPOT法分析两免疫组小鼠脾脏hcGβ抗原特异性IgG分泌细胞。结果显示在加强免疫后第1周及第2周，hCGβ-C3d3免疫组B细胞增殖能力显著高于hCGβ免疫组及正常对照组；而各组间T细胞增殖状况未见明显差异。hcGβ-C3d3免疫组较hCGβ免疫组小鼠脾细胞分泌IgG的量和分泌hCGβ抗体的细胞数量均明显增加。结果表明分子佐剂C3d对于B细胞具有选择性克隆扩增作用。     

分子佐剂C3d3与hCGβ基因融合增强hCGβ基因疫苗体液免疫应答

目的：提高hCGβ在真核细胞中的表达效率，观察分子佐剂C3d3增强hCGβ基因疫苗的体液免疫应答。方法：构建带有增强目的基因表达效率的狗胰岛素前原信号肽(DPPISS)的高效真核表达质粒pCMV4-hCGβ-C3d3、pCMV4-hCGβ和pCMV4-C3d3。分别用pCMV4-DPPLSS-hCGβ-C3d3、pcMV4-DPPLSS-hCGβ和pcMV4-DPPISS-hCGβ联合pcMV4-DPPISS-C3d3免疫BALB／c小鼠，各组免疫剂量分别为5、10、50、100、500μmol，间隔3周相同剂量加强免疫1次。间接ELISA法分析免疫小鼠外周血抗hCGβ抗体动态变化以及IgG亚型。结果：含有DPPISS的pCMV4-hCGβ-C3d3较无DPPISS的pCMV4-hCGβ-C3d3在COS-7细胞中的表达效率明显提高。50μmol是BALB／c小鼠hCGβ基因免疫的最佳免疫剂量。C3d3使得BALB／c小鼠hCGβ的免疫原性增强了400倍。hCGβ-C3d3免疫组IgG1／IgG2a比值明显高于hCGβ免疫组和hCGβ与C3d3联合免疫组。结论：分子佐剂C3d3与hCGβ基因融合能够显著增强hCGβ基因避孕疫苗的体液免疫应答及抗体类型转换。     

表达hCGβ的重组乳酸杆菌经阴道免疫小鼠后的体液免疫应答

目的 用表达hCGβ的重组乳酸杆菌活疫苗经阴道黏膜途径免疫不同品系小鼠产生抗hCGβ免疫应答及机制。方法 用10^8、10^9、10^10个重组乳酸杆菌Lb hCGβ经阴道黏膜免疫6～8周龄雌性BALB／c和C57BL／6小鼠。3周后用相同剂量加强免疫一次。间接ELISA检测初次免疫后2～8周血清和阴道灌洗液中抗hCGβ IgG和IgA抗体滴度。分离免疫小鼠脾、子宫、阴道黏膜的淋巴细胞，流式细胞仪分析其中B和T细胞的增殖情况，ELISPOT分析分泌抗hCGβIgG和IgA抗体分泌细胞的克隆数。结果 对不同品系小鼠黏膜接种10^9、10^10 Lb hCGβ可诱导相近的免疫应答；而10^8诱导的抗体滴度较低。在加强免疫后，10^9和10^10 Lb hCGβ诱导的抗血清中和hC邰抗原的能力〉100ng／ml。LbhCGβ阴道黏膜免疫后T和B细胞增殖；脾脏、子宫及阴道内均存在抗hCGβIgG及IgA抗体分泌细胞。结论 重组乳酸杆菌活疫苗LbhCGβ可经阴道黏膜免疫诱导有效的免疫应答，产生的应答与免疫剂量呈正相关。黏膜局部及全身T和B细胞克隆增殖；子宫及阴道内抗hCGβIgG和IgA分泌细胞可能是Lb hCGβ阴道黏膜免疫诱导体液免疫的主要来源。     

融合蛋白hCGβ-hC3d3增强人免疫活性细胞对hCGβ抗原的免疫原性

目的:探讨分子佐剂hC3d3与hCGβ的融合蛋白hCGβ-hC3d3作用于人外周血单个核细胞(PBMC)对hCGβ抗原的免疫原性的影响.方法:对人PBMC进行细胞分离纯化,分别用1、10、100 nmol/L的hCGβ、hCGβ-hC3d3及PWM等抗原体外作用于B细胞、B T细胞、PBMC和Raji细胞8～12天,用3H-TdR掺入法了解不同抗原刺激后各组细胞增殖情况;用ELISA检测培养上清中总免疫球蛋白(Ig)水平;而ELISPOT可测定各种抗原刺激后Ig分泌细胞数量.结果:用不同浓度hCGβ、hCGβ-hC3d3及PWM作用于B细胞、B T细胞、PBMC、Raji细胞8～12天后,3H-TdR掺入法分析显示:与hCGβ处理组相比,融合蛋白hCGβ-hC3d3能使各组细胞增殖明显升高,且呈浓度依赖性;100 nmol/L hCGβ-hC3d3与前3组细胞共培养上清中总Ig的含量分别为hCGβ刺激组的4倍、10倍和10.85倍,且呈浓度依赖性.ELISPOT结果与培养上清液检测结果类似,经与hCGβ-hC3d3共培养后Ig生成细胞较hCGβ组明显增加.结论:融合蛋白hCGβ-hC3d3明显增强人免疫活性细胞抗hCGβ的免疫原性.     

分子佐剂C3d3增强hCGβ3蛋白疫苗的体液免疫效应

目的：通过分子佐剂C3d3增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性。方法：采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达载体phCMV1-6His-hCGβ-C3d3和phCMV1-6His-hCGβ，在CHO细胞中获得重组蛋白的稳定、高效表达并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化。分别用hCGβ-C3d3融合蛋白、hCGβ联合C3d3和单用hCGβ对BALB／c与C57BL／6小鼠进行免疫，共免疫两次，间隔4周，ELISA测定血清中的抗体滴度，比较各组的免疫效果。结果：无论是BALB／c小鼠还是C57BL／6小鼠，hCGβ-C3d3融合蛋白诱导产生的抗hCGβ抗体的出现时间都明显早于hCGβ与C3d3联合免疫和hCGβ单独免疫组。在BALB／c小鼠，初次和再次免疫结果显示，C3d3使hCGβ的免疫原性增强了1995倍。C57BL／6小鼠所显示出的体液免疫反应强度虽不如BALB／c小鼠，但C3d3也使hCGβ的免疫原性增强了1259倍。结论：通过分子佐剂C3d3可以大幅地提高hCGβ避孕疫苗的免疫原性，在个性差异很大的不同品系小鼠，C3d3均能增强机体对hCGβ的体液免疫应答能力。     

C3d3-hCGβ融合蛋白免疫BALB/c小鼠增强抗hCG-β TH2型体液免疫效应

目的 通过分子佐剂C3d3增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性并实现免疫效应向TH2型体液免疫偏倚。方法 在CHO细胞中表达、纯化hCGβ、C3d3和hCGβ-C3d3融合蛋白。分别用hCGβ-C3d3融合蛋白、单用hCGβ、hCGβ联合C3d3和hCGβ加用弗氏完全佐剂免疫BALB／c小鼠，共免疫2次，间隔4周。ELISA测定血清中抗hCGβ抗体滴度。末次免疫后3周处死小鼠制备单个脾细胞悬液，体外用hCG刺激培养48h，ELISA检测上清中TH1型(IFN-γ、IL-2)和TH2型(IL-Ⅱ，4、IL-10)细胞因子分泌水平。结果 C3d3使hCGβ的免疫原性增强了1995倍，C3d3的佐剂能力是弗氏完全佐剂的10倍(初次免疫)-32倍(再次免疫)。借助C3d3分子佐剂，hCGβ-C3d3融合蛋白可产生很明显的TH2型体液免疫优势效应。结论 分子佐剂C3d3可以大幅增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性，使免疫效应向TH2型体液免疫偏倚。     

分子佐剂C3d3增强hCGβ蛋白疫苗的体液免疫效应

目的:通过分子佐剂C3d3增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性。方法:采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达载体phCMV16HishCGβC3d3和phCMV16HishCGβ,在CHO细胞中获得重组蛋白的稳定、高效表达并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化。分别用hCGβC3d3融合蛋白、hCGβ联合C3d3和单用hCGβ对BALBc与C57BL6小鼠进行免疫,共免疫两次,间隔4周,ELISA测定血清中的抗体滴度,比较各组的免疫效果。结果:无论是BALBc小鼠还是C57BL6小鼠,hCGβC3d3融合蛋白诱导产生的抗hCGβ抗体的出现时间都明显早于hCGβ与C3d3联合免疫和hCGβ单独免疫组。在BALBc小鼠,初次和再次免疫结果显示,C3d3使hCGβ的免疫原性增强了1995倍。C57BL6小鼠所显示出的体液免疫反应强度虽不如BALBc小鼠,但C3d3也使hCGβ的免疫原性增强了1259倍。结论:通过分子佐剂C3d3可以大幅地提高hCGβ避孕疫苗的免疫原性,在个性差异很大的不同品系小鼠,C3d3均能增强机体对hCGβ的体液免疫应答能力。     

全反式维甲酸对基因免疫应答的调节作用

目的　研究全反式维甲酸 (ATRA)对TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生的特异性细胞免疫与体液免疫应答的调节作用。方法　肌肉注射重组质粒TR4 2 1 hCGβDNA(每只鼠 5 0 μg 10 0 μl)初次免疫小鼠 ,以灌胃的方式给予ATRA ,并以灌溶剂和TR4 2 1质粒免疫为对照 ;3周与 6周后经同样的方式加强免疫各组小鼠 ,采用ELISA方法对基因免疫小鼠血清中IgG抗体水平进行动态观察 ,分析小鼠血清中IgG抗体亚类 ;3H TdR掺入法测定特异性细胞增殖和细胞杀伤功能。结果　ELISA结果表明 ,TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生较高的抗hCGβ抗体水平 ,ATRA增强TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生的抗hCGβ特异性IgG抗体水平并且伴随IgG2a IgG1显著性降低 ;TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生较强的淋巴细胞增殖活性和CTL活性 ,ATRA抑制TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生的特异性细胞增殖和细胞杀伤功能。结论　ATRA促进基因免疫诱生的TH2免疫应答 ,抑制TH1型免疫应答 ,为改变基因免疫诱生的特异性免疫应答类型提供了一条新的途径。     

表达hCGβ的重组乳酸杆菌经口接种小鼠产生抗hCGβ体液免疫应答

目的：用表达hCGβ的重组乳酸杆菌活疫苗经口接种不同品系小鼠产生抗hCGβ免疫应答。方法：用10^8、10^9、10^10个重组乳酸杆菌Lb．hCGβ灌服6～8周龄雌性BALB／c和C57BL／6小鼠。3周后用相同剂量加强免疫1次。间接ELISA检测初次免疫后2～8周血清和阴道灌洗液抗hCGβIsG和IgA抗体滴度。流式细胞仪分析B和T细胞的增殖情况，ELISpot计数抗hCGβIsG和IsA抗体分泌细胞克隆数。结果：不同品系小鼠经口腔接种10^9、10^10Lb．hCGβ可诱导相近的免疫应答；而10。诱导的抗体滴度较低。在加强免疫后，10^9和10^10Lb．hCGβ诱导的抗血清结合hCGβ抗原的能力〉100ng／n11。Lb．hCGβ口腔接种后，BALB／c小鼠子宫和阴道的B细胞增殖；C57BL／6小鼠子宫及阴道的抗体分泌细胞克隆数较脾脏明显增多（P〈0．05）。结论：重组乳酸杆菌活疫苗Lb．hCGβ可经口接种诱导有效的抗hCGβ免疫应答，产生的应答强度与免疫剂量呈正相关。     

CCR9/CCL25介导小鼠经生殖道hCGβ避孕疫苗粘膜免疫后B细胞归巢

目的：探讨hCGβ粘膜避孕疫苗体液免疫的分子机制。方法：分别用1010个重组乳酸杆菌Lb.pIlac、Lb.pIlac-hCGβ经小鼠生殖道粘膜途径免疫6～8周龄BALB/c小鼠,3周后相同剂量加强免疫1次。间接ELISA检测加强免疫后2周阴道灌洗液中抗hCGβIgG和IgA抗体滴度;ELISPOT检测分泌抗hCGβIgG和IgA抗体分泌细胞数;RT-PCR筛查小鼠子宫B细胞上18种趋化因子受体和相关趋化因子CCL25;FCM和ELISA分析CCR9/CCL25的表达。结果：经小鼠生殖道粘膜接种1010Lb.pIlac-hCGβ可在生殖道局部诱导产生抗hCGβIgG和IgA抗体,且以IgG抗体为主;局部存在抗hCGβIgG和IgA抗体分泌细胞,而以IgG抗体分泌细胞为主;粘膜免疫后,小鼠生殖道局部B细胞上CCR9表达增高,粘膜局部相应配体CCL25表达亦增高。结论：重组乳酸杆菌活疫苗Lb.pIlac-hCGβ经小鼠生殖道粘膜免疫可诱导有效的免疫应答;粘膜局部CCR9/CCL25可介导B细胞归巢至生殖道局部,这可能增强hCGβ粘膜避孕疫苗的避孕效果。     

真核细胞表达质粒pCMV4增强hCGβ-C3d3DNA疫苗的表达效率和免疫效力

目的：比较以pCMV4和pcDNA3为载体的hCGβ-C3d3DNA疫苗的表达效率和免疫效力。方法：分别构建pcDNA3-hCGβ-C3d3、pCaMV4-hCGβ-C3d3真核细胞表达质粒，并转染真核细胞瞬时表达系统COS-7细胞，以分析体外表达效率。抽提与纯化pcDNA3、pcDNA3-hCGβ-C3d3、pCMV4-hCGβ-C3d3质粒。对6周龄BLAB／C小鼠行DNA免疫。于末次免疫后6周采血，用间接ELISA分析实验动物外周血抗hCGβ抗体效价。结果：对COS-7体外表达效率分析，由pCMV4介导的hCGβ-C3d3表达效率明显高于pcDNA3。动物DNA免疫结果，pCMV4-hCGβ-C3d3刺激动物机体产生的免疫应答强度及免疫效果显著高于pcDNA3-hCGβ-C3d3。结论：pCMV4真核表达质粒hCGβ-C3d3体外表达效率及动物DNA免疫效力均显著高于pcDNA3真核表达质粒。     

人源分子佐剂hC3d3促进人免疫活性细胞协同刺激分子表达及对hCGβ抗原的反应性

目的探讨分子佐剂hC3d3与hCGβ的融合蛋白hCGβ-hC3d3对人外周血单个核细胞（PBMC）中的B细胞与T细胞表面协同刺激分子表达及对hCGβ抗原反应性的影响。方法从人肝细胞cDNA文库克隆hC3d基因片段；构建pCI-gs-signal-6His-hCGβ及pCI-gs-signal-6His-hCGβ-hC3d3真核表达质粒，表达和纯化重组蛋白抗原hCGβ及hCGβ-hC3d3融合蛋白。实验分组：将B细胞、B＋T细胞组或PBMC，分别应用hCGβ、hCGβ-hC3d3或美洲商陆（PWM）等抗原进行体外处理48h。用流式细胞术分析培养后的上述淋巴细胞表面的CD80、CD86、CD154、CD25等协同刺激分子的表达；用ELISA检测培养上清中IL-2的含量。结果本研究成功克隆了hC3d基因，构建了真核表达质粒pCI-gs-signal-6His-hCGβ及pCI-gs-signal-6His-hCGβ-hC3d3；经转染CHO细胞，获得了目的蛋白高效分泌表达。经鉴定及纯化成功获得了较高纯度的目的蛋白hCGβ及hCGβ-hC3d3。hCGβ-hC3d3蛋白能够显著上调B细胞表面CD80、CD86分子的表达，尤其是CD86分子的表达（P〈0．01）；能明显增强T细胞表面CD154、CD25分子的表达（P〈0．05）。hCGβ-hC3d3蛋白提高B细胞抗原提呈能力及T细胞活化后分泌IL-2的能力（P〈0．05）。结论人源分子佐剂hC3d3明显促进人免疫活性细胞协同刺激分子表达及对hCGβ抗原的反应性。     

LC3-LpqH增强Ag85B抗结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫保护作用

目的探讨微管相关蛋白轻链3-脂蛋白前体-LpqH(LC3-LpqH)DNA佐剂对Ag85B抗结核分枝杆菌(MTB)DNA疫苗免疫保护作用的影响。方法分别用纯化的pCMV-Ag85B、pCMV-LpqH/pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-LpqH/pCMV-Ag85B、pCMV质粒DNA对BALB/c小鼠进行3次肌肉注射免疫。末次免疫2周后,ELISA检测血清中抗Ag85B IgG亚型及滴度。Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测血清白细胞介素2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-4、IL-10分泌水平。末次免疫3个月后,用MTB标准毒株H37Rv尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏MTB载量并观察肺组织病理变化。结果与Ag85B免疫组相比,LC3-LpqH/Ag85B免疫组抗Ag85B的IgG2a水平显著提高,而IgG1水平显著降低,并伴随IL-2、IFN-γ分泌增加及IL-4、IL-10减少,肺和脾脏内MTB载量降低,肺组织病变程度减轻。结论 LC3-LpqH可显著增强Ag85B抗MTB疫苗的Th1型免疫应答,并显示较好的免疫保护效应。     

重组乳酸杆菌Lb.hCGβ-C3d3经鼻腔免疫BALB/c小鼠的抗生育潜能

目的:探讨表达hCGβ-C3d3融合蛋白的重组乳酸杆菌避孕疫苗经鼻腔黏膜接种BALB/c小鼠及其抗生育潜能。方法:用野生型乳酸杆菌Lb.及重组乳酸杆菌Lb.hCGβ和Lb.hCGβ-C3d3以两种剂量(109个和1010个)经鼻腔滴注接种6~8周龄雌性BALB/c小鼠。3周后用相同剂量加强免疫一次。于初次免疫后的第6、7、8周收集血清,分别培养MLTC-1、BeWo细胞;化学发光法检测培养上清中孕酮或hCGβ水平;免疫荧光观察抗血清处理后BeWo细胞的融合情况。结果:用1010个Lb.hCGβ-C3d3滴鼻免疫BALB/c小鼠产生的抗血清能显著抑制hCG刺激MLTC-1分泌孕酮,明显抑制BeWo细胞分泌hCGβ及细胞融合。结论:重组乳酸杆菌活疫苗Lb.hCGβ-C3d3经鼻腔接种诱导的hCGβ抗体可拮抗hCGβ生物学功能,并干扰滋养细胞功能,因此具有抗生育潜能。     

用模式抗原OVA研究CTA1-DD／IgG佐剂的免疫调节作用

目的：进一步研究新型佐剂CTA1-DD/IgG的免疫调节作用。方法：小鼠经鼻内免疫抗原（鸡卵清白蛋白OVA）联合佐剂CTA1-DD或CTA1-DD/IgG复合物,用ELISA检测血清中OVA特异性IgG抗体生成和IgG抗体亚类,用酶联免疫斑点试验检测脾脏抗体分泌细胞。结果：CTA1-DD/IgG佐剂在小鼠中诱导血清特异性IgG抗体及脾脏特异性抗体分泌细胞的能力均高于CTA1-DD佐剂;CTA1-DD/IgG或CTA1-DD作为佐剂联合OVA免疫后IgG1、IgG2a、IgG2b 抗体皆提高,且IgG2a/IgG1＞1。结论：CTA1-DD/IgG佐剂的免疫调节作用强于CTA1-DD,且能产生混合IgG抗体亚型,促进平衡的免疫应答。     

口服幽门螺杆菌疫苗后小鼠粘膜免疫应答研究

为观测幽门螺杆菌 (Hp )全菌抗原和粘膜佐剂LT口服免疫Balb/c小鼠后的粘膜免疫应答 ,采用ELISPOT和ELISA法分析免疫小鼠胃粘膜、派伊尔小结 (PP )抗原特异性抗体分泌细胞和小肠粘液唾液sIgA抗体。结果表明抗原免疫组、抗原 +佐剂组胃粘膜、PP抗原特异性sIgA ASC、IgG ASC数量明显增加 ,尤以sIgA ASC为甚 ,并且抗原 +佐剂组明显高于单纯抗原组和对照组 ;小肠粘液唾液特异sIgA水平两免疫组均明显高于对照组 ,提示口服免疫可有效诱导粘膜免疫应答 ,局部特异sIgA在抗Hp感染中具有重要作用     

pCMV-LC3-Ag85B重组质粒DNA疫苗对结核的免疫保护作用

目的构建结核分枝杆菌Ag85B抗原基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的DNA疫苗,探究其抗结核分枝杆菌保护效应。方法构建pCMV-LC3-Ag85B重组质粒并转染RAW264.7细胞,Western blot法检测目的蛋白的表达水平。分别以pCMV、pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-Ag85B质粒免疫BALB/c小鼠。末次免疫2周后,Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10分泌水平。末次免疫3个月后,用H37Rv标准株尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏结核分枝杆菌载量。结果 pCMV-LC3-Ag85B在RAW264.7细胞的表达水平与质粒浓度呈剂量依赖性。与pCMV-Ag85B免疫组相比,pCMV-LC3-Ag85B免疫组的IL-2、IFN-γ分泌显著增加,而肺和脾脏内结核分枝杆菌载量降低。结论 pCMV-LC3-Ag85B可显著增强Th1型免疫应答,并显示较好的抗结核分枝杆菌免疫保护效应。     

hCGβ-C3d融合蛋白在CHO细胞中的表达

为了提高hCGβ的免疫原性 ,构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒pcDNA3 hCGβ C3d3,使其转染稳定表达系统中国仓鼠卵细胞 (CHO )后 ,检测融合蛋白分泌情况。CHO细胞转染了pcDNA3 hCGβ C3d3质粒后 ,经 4 8h培养 ,1 0× 10 6个CHO细胞可分泌 6 6 0ng的重组融合hCGβ C3d3蛋白。细胞免疫化学技术分析显示 ,表达产物既有hCGβ的组分也有C3d的成分。经SDS PAGE及免疫印迹试验发现CHO细胞培养上清液中含有三组蛋白成分 ,其相对分子质量分别为12 0 0 0 0、90 0 0 0和 6 5 0 0 0。利用新型分子佐剂C3d与hCGβ的连接 ,构建了pcDNA3 hCGβ C3d3真核细胞表达质粒 ,为提高hCGβDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础     

副黏病毒Tianjin株缺损性干扰颗粒增强小鼠免疫应答的初步研究

目的 探讨副黏病毒Tianjin株缺损性干扰(DI)颗粒作为新型生物佐剂的可行性.方法 分离提纯副黏病毒Tianjin株DI颗粒并鉴定,和脊髓灰质炎病毒(PV)灭活抗原等量混合后给小鼠皮下多点注射,并设氢氧化铝凝胶佐剂组、无佐剂组以及空白对照组.于免疫后14 d摘眼球取血检测免疫血清PV特异性IgG;无菌取脾脏制备脾细胞悬液,分别用MTT法进行T、B淋巴细胞增殖试验以及检测脾淋巴细胞接受PV灭活抗原再次刺激后IFN-γ、IL-4的产生情况.结果 副黏病毒Tianjin株DI颗粒佐剂组T、B淋巴细胞刺激指数(SI)、脾淋巴细胞分泌IFN-γ的量与其他组相比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 副黏病毒Tianjin株DI颗粒具有一定的增强机体免疫应答能力的作用,且以诱导Th1型细胞免疫应答为主.     

rAd/MDC-VP1初免pcDNA3/MDC-VP1加强策略抗CVB3的免疫效果研究

目的:应用柯萨奇病毒B3(CVB3)腺病毒载体疫苗rAd/MDC-VP1初免,核酸疫苗pcDNA3/MDC-VP1加强免疫的策略免疫小鼠,观察其免疫效果。方法:BALB/c小鼠随机分为A～D 4组,分别肌肉注射PBS、rAd/MDC-VP1、pcD-NA3/MDC-VP1、rAd/MDC-VP1+pcDNA3/MDC-VP1,用ELISA和微量中和试验法分别检测CVB3 VP1特异性IgG和中和抗体滴度,CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖活性和特异性CTL杀伤活性;用致死量的CVB3攻击小鼠后,检测小鼠血中病毒滴度并观察动物的存活情况。结果:D组CVB3 IgG、非特异性淋巴细胞增殖活性及特异性CTL杀伤活性明显高于其他各组(P<0.05);CVB3攻击后,D组小鼠血中病毒滴度较其他各组显著降低,生存率为41.67%,明显高于其他各组(P<0.05)。结论:rAd/MDC-VP1初免pcDNA3/MDC-VP1加强的免疫策略能显著提高小鼠细胞和体液免疫水平,提高致死量病毒攻击后的保护率。