益气活血法对脑出血大鼠血肿周围新生血管内皮整合素α5亚基表达的影响

目的 通过观察益气活血中药对脑出血大鼠血肿周围新生血管内皮整合素α5亚基表达的影响,探讨益气活血法治疗脑出血的机制.方法 150只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、益气组、活血组、益气活血组,通过立体定位向脑内苍白球注入Ⅶ型胶原酶0.5U建立脑出血模型.假手术和模型组灌服蒸馏水,余各组灌服补阳还五汤或其益气、活血组分药物.运用免疫组织化学方法,半定量分析各组术后3、7、14、21、28 d各时点血肿周围新生血管内皮整合素α5亚基的表达.结果 除假手术组外,模型组和各处理组的血管内皮整合素α5亚基表达趋势大致相近;3d时即可见各组血肿周边血管内皮表达整合素α5亚基,各组表达无明显差异;7 d时各组阳性微血管分布靠近血肿,表达均增高;14 d时α5阳性表达进一步升高达到高峰,21 d时仍持续高表达;28 d显著下降(P＜0.05).7、14、21 d时,益气活血组的表达还高于同时间点模型组;28 d活血组、益气活血组表达仍高于同时点模型组.结论 益气活血法能促进脑出血大鼠血肿周围新生血管整合素α5亚基表达,提示该治法能通过调节脑出血后的新生血管的结构,影响微血管系统重建,达到修复损伤组织的目的.     

益气活血法对脑出血大鼠脑内血管内皮生长因子蛋白表达的影响

目的观察脑出血大鼠脑组织中血管内皮生长因子（VEGF）表达,探讨益气活血法治疗脑出血的分子生物学机制。方法Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型,分别以补阳还五汤及该方的拆方益气方和活血方灌胃,Western印迹法观察出血后1、4、7、14、21、28d鼠脑VEGF蛋白表达。结果模型组、益气组、活血组和益气活血组造模后1d均可检测到VEGF蛋白阳性信号,益气活血组于14d达高峰（P〈0.01）,早于其他3组（21d）;益气活血组第7～28天均高于模型组、益气组、活血组水平（P〈0.01）。结论脑出血大鼠脑VEGF蛋白表达上调;益气活血法能增强脑出血大鼠脑VEGF蛋白表达,促进VEGF峰值提前,并维持在较高水平,以促进脑出血损伤修复。     

脑血疏口服液对脑出血大鼠神经功能及CD36表达的影响

目的观察脑血疏口服液对脑出血大鼠神经功能及脑组织CD36表达的影响。方法采用Ⅶ型胶原酶以大鼠尾状核为目的注射点制备大鼠脑出血模型。采用随机数字表法将无特定病原体动物(SPF)大鼠分为假手术组、模型组、脑血疏组,每组6只。脑血疏组按照3.6 mL/kg灌胃给药,假手术组及模型组分别给予等量生理盐水。造模后连续3 d模型组和脑血疏组采用改良的神经功能缺损评分标准(mNSS)进行神经功能缺损评分,苏木精-伊红染色法(HE)观察大鼠血肿周围组织病理形态学改变,免疫组化观察CD36阳性细胞数。蛋白质印迹法(Westem Blot)检测各组血肿周围组织CD36的表达变化。结果模型组与脑血疏组大鼠均出现不同程度的神经功能缺失症状,脑血疏组神经功能恢复较模型组快;与模型组比较,脑血疏组HE染色坏死面积减少,周围组织疏松减轻,神经细胞核结构较清晰。Westem Blot检测脑血疏组CD36表达量高于模型,免疫组化检测脑血疏组血肿周围CD36阳性细胞数高于模型组。结论脑血疏口服液可以通过增加大鼠脑出血后CD36表达,改善其神经功能缺失及促进血肿吸收,减轻脑出血后继发脑损害。     

硫化氢对大鼠脑血肿周围血管新生及神经功能恢复的影响

目的探讨硫化氢(H2S)对大鼠脑血肿周围血管新生及神经功能恢复的影响。方法将75只350~400 g SD大鼠随机分为对照组、模型组和H2S组,每组25只。模型组、H2S组大鼠行自体血脑内注入法建立脑出血动物模型,对照组仅行头皮正中切口及暴露前囟而不行注射,H2S组于手术当日开始每日腹腔注射硫氢化钠10 mg/kg,连续28 d,其余两组仅腹腔注射等体积生理盐水。分别于术后4、7、14、28 d对各组大鼠进行神经功能缺失体征评分及后肢运动功能Tarlov评分,术后14、28 d收集脑血肿周围组织进行CD34免疫组化染色以计算微血管密度及血管场面积,分别采用免疫组化法和酶联免疫吸附法检测术后4、7、14、28 d的血肿周围组织神经生长相关蛋白(GAP)-43和血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果对照组术后4、7、14、28 d的神经功能缺失体征评分及后肢运动功能Tarlov评分分别为0分和5分,提示神经功能和后肢运动功能正常。与对照组相比,模型组的神经功能缺失体征评分均升高,而Tarlov评分、血肿周围微血管密度和血管场面积及血肿周围组织VEGF水平和GAP-43阳性细胞数均降低(P0.05);脑血肿大鼠经H2S治疗后以上指标获改善,如H2S组的神经功能缺失体征评分低于模型组,Tarlov评分、血肿周围微血管密度和血管场面积及血肿周围组织VEGF水平和GAP-43阳性细胞数均高于模型组(P0.05),但H2S组以上指标与对照组的差异仍有统计学意义(P0.05)。结论 H2S可促进大鼠脑血肿周围血管新生及神经功能恢复,可能与其增加脑血肿周围组织VEGF水平及促进GAP-43表达有关。     

益气活血法对脑出血大鼠脑组织Ⅳ型胶原表达的影响

目的 探讨益气活血中药对脑出血大鼠脑损伤区组织Ⅳ型胶原表达的影响及其作用机制.方法 150只SD大鼠被随机分为假手术组、模型组、益气活血组、益气组和活血组各30只.用Ⅶ型胶原酶诱导脑出血大鼠模型.各组相应灌服蒸馏水、益气活血法代表方补阳还五汤全方及其益气组分、活血组分药物.用免疫组化方法检测术后3、7、14、21 d和28 d Ⅳ型胶原的表达,其结果进行平均光密度扫描半定量分析.结果 假手术组不同时间点Ⅳ型胶原表达未见明显阳性信号;模型组、益气组、活血组及益气活血组脑出血后3 d即有Ⅳ型胶原表达,模型组及益气组至21 d达到高峰,随后开始下降;活血组及益气活血组表达高峰时间提前至14 d,并至21 d时仍维持一定的表达水平;各个时间点益气活血组表达均高于其他组.结论 益气活血中药可能通过增强脑出血后血肿周围脑组织Ⅳ型胶原的表达参与组织修复.     

子宫肌瘤组织中TSP-1和IGF-Ⅱ蛋白的表达及意义

目的探讨凝血酶敏感蛋白1（TSP-1）、胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）蛋白表达在子宫肌瘤发生、发展中的作用。方法应用免疫组化SP法分别检测子宫肌瘤组织以及邻近子宫肌瘤的正常平滑肌组织中TSP-1I、GF-Ⅱ蛋白表达情况。结果子宫肌瘤组织中TSP-1表达（111.68±6.56）低于正常子宫肌层组织（154.76±8.95）,P〈0.05。子宫肌瘤组织中IGF-Ⅱ表达（156.61±7.60）高于正常子宫肌层组织（111.43±6.06）,P〈0.05。结论子宫肌瘤的发生发展可能与TSP-1蛋白表达的下调来抑制新生血管生成、抑制凋亡和IGF-Ⅱ表达的上调来促进肿瘤新生血管的形成、促进细胞的分裂增殖有关。     

脑溢安对脑出血大鼠脑内BDNF mRNA表达的影响

目的 观察脑出血模型大鼠脑内脑源性神经营养因子mRNA（BDNF mRNA）的分布以及中药脑溢安对其影响.方法 通过微量注射器向苍白球内注入Ⅶ型胶原酶0.4 U制作脑出血模型,用原位杂交法观察脑出血后2、6、12 h及1、4、7 d共6个时间点BDNF mRNA的表达变化,以阳性细胞计数作为观察指标.结果 正常组、假手术组大鼠脑内皮质、海马、纹状体等处有BDNF mRNA的表达.脑出血后2 h上述部位BDNFmRNA的表达增高,但血肿中心区域未见表达信号,6 h后上述部位表达信号继续增强,1 d后达高峰,4 d后表达开始减弱,7 d后其表达水平继续下降但仍高于正常,14 d后BDNF mRNA阳性细胞数量及表达水平降至基础水平.两者的阳性细胞主要表达于神经元,其中在6 h、1 d、4 d 3个时间点上,两组阳性细胞计数比较有显著性差异（P＜0.01）.结论 脑溢安可促进脑出血后BDNFmRNA的表达.     

大鼠脑出血后脑红蛋白在脑组织中的表达及其对细胞凋亡的影响

目的 研究实验性大鼠脑出血后脑组织中脑红蛋白的表达及其对细胞凋亡的影响.方法 随机将86只大鼠分为正常对照组、假手术组及脑出血组,应用立体定向技术,将自体未抗凝血注入大鼠基底节区制备脑出血模型.分别在造模后6、24、48、72小时断头取脑制作标本,采用TUNEL染色检测脑组织中细胞凋亡、荧光定量RT-PCR检测脑红蛋白mRNA表达、免疫组化分析脑红蛋白的表达.结果 脑出血后6h血肿周围脑组织脑红蛋白及TUNEL染色阳性细胞表达升高,其中脑红蛋白48h达高峰,72h开始下降,而细胞凋亡72h达高峰,表达均明显高于假手术组和正常对照组,差异有统计学意义（P ＜0.05,＜0.01）;脑红蛋白的表达与细胞凋亡数呈正相关（r=0.51,P＜0.05.结论 脑出血后脑红蛋白表达上调,可能对脑出血继发神经损伤起重要的保护作用.     

益气活血方对球囊损伤大鼠颈总动脉后血栓形成的抑制作用研究

目的观察损伤血管环氧化酶-1（COX-1）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达情况,探讨益气活血方对球囊损伤大鼠颈总动脉后血栓形成的干预机制。方法随机将90只雄性SD大鼠分为模型组,阿司匹林组,益气活血方大、中、小剂量组。球囊损伤大鼠颈总动脉前给予高脂饲料喂养30d,造成高脂血症;然后经右股动脉穿刺球囊扩张损伤大鼠左颈总动脉,造成颈总动脉管腔狭窄。手术前1d开始给药,每组动物于术后（5d、14d、28d）处死,取损伤颈总动脉,常规固定、包埋、切片,用免疫组织化学SABC法检测COX-1和iNOS的表达。结果血管损伤后模型组COX-1表达明显增多,术后应用中药益气活血方或阿司匹林后,COX-1表达明显减少,术后5d、14d和28d,用药各组（除中药小剂量组外）COX-1表达与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;术后用药各组iNOS表达明显增多,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论益气活血方下调细胞COX-1的表达、上调iNOS表达,可能通过抑制TXA2产生和舒张血管作用而抑制血管内血栓形成防治再狭窄。     

促血管生成素-1对糖尿病大鼠肾脏色素上皮衍生因子和血小板反应蛋白-1基因表达的影响

目的 观察色素上皮衍生因子（PEDF）、血小板反应蛋白-1（TSP-1）在糖尿病大鼠肾脏的表达变化,探讨促血管生成素-1（Ang-1）对上述因子的影响. 方法 将雄性SD大鼠分正常对照（NC）组、DN组、空载处理（BV）组、Ang-1处理（AV）组.采用STZ腹腔注射诱导大鼠DN模型.成模8周后尾静脉注射Ang-1腺病毒载体.多时点检测24 hUAlb和肾组织PEDF、TSP-1蛋白及mRNA表达水平.结果 DN、BV、AV组24 hUAlb均升高,其中AV组于20周后降低（P＜0.05）.DN、BV、AV组肾组织PEDF蛋白及mRNA表达下调,TSP-1表达上调（P＜0.05）,其中AV组12周后肾组织PEDF和TSP-1mRNA及蛋白表达变化较DN、BV组改善明显（P＜0.05）. 结论 糖尿病大鼠肾脏PEDF、TSP-1异常表达参与DN发生发展,给予Ang-1可改善糖尿病大鼠肾脏PEDF、TSP-1异常表达.     

肾上腺皮质肿瘤VEGF、TSP-1的表达及其与微血管密度的关系

目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)、血小板反应素1(TSP-1)在肾上腺皮质肿瘤中的表达及其与微血管密度(MVD)的关系.方法 采用免疫组化方法检测13例肾上腺皮质癌、30例肾上腺皮质腺瘤和7例正常肾上腺组织中VEGF、TSP-1及MVD(以CD34为标记)的表达.结果 肾上腺皮质癌VEGF表达高于肾上腺皮质腺瘤,差异有统计学意义(P＜0.01);TSP-1在正常肾上腺皮质表达明显高于肾上腺皮质癌(P＜0.01);MVD在肾上腺皮质癌为(107.67±11.91)/视野,显著高于肾上腺皮质腺瘤(59.46±21.31)/视野和正常肾上腺皮质组织(25.10±3.94)/视野(均P＜0.01);VEGF的表达与MVD呈正相关(P＜0.01),TSP-1的表达与MVD呈负相关(P＜0.01),VEGF与TSP-1的表达呈负相关(P＜0.01).结论 VEGF和TSP-1在肾上腺皮质肿瘤的表达失衡是其肿瘤血管异常生成的重要原因.     

The role of TSP-1-CD47 in ROS-mediated pulmonary fibrosis induced by paraquat

正Objective To construct the paraquat induced pulmonary fibrosis model in vitro,and to explore the role of TSP-1 (Thrombospondin-1, TSP-1) and its receptor CD47 in PQ-induced pulmonary fibrosis. Methods Human A549 cells were cultured in vitro,divided into normal control group,PQ group,Anti-TSP1 group (PQ with     

糖/血小板反应素-1/转化生长因子β1信号传导途径在糖尿病心肌病发病中的作用

目的探讨糖／血小板反应素-1（TSP-1）／转化生长因子（TGF）B。信号传导途径在糖尿病心肌病发病中的作用。方法采用高脂高热量饮食诱导出胰岛素抵抗,加小剂量链脲佐菌素注射建立糖尿病心肌病动物模型,以Masson染色、实时定量逆转录-聚合酶链反应、Western blot技术,检测左室心肌胶原含量、TSP-1、TGFβ1 mRNA和蛋白质表达水平的变化。结果与对照组相比,糖尿病心肌病大鼠左室心肌组织胶原含量明显高,存在心肌间质纤维化;TSP-1 mRNA和蛋白质表达均明显高,TGFβ1 mRNA、活性和非活性TGFβ1蛋白质表达亦明显高;TSP-1、TGFβ1 mRNA水平与空腹血糖、心肌组织胶原含量以及左室舒张功能指标均明显相关,TSP-1、活性TGFβ1蛋白质表达水平与空腹血糖、心肌组织胶原含量以及左室舒张功能指标之间亦存在明显的相关关系,但非活性TGFβ1蛋白质表达水平与空腹血糖、心肌组织胶原含量以及左室舒张功能指标之间无相关性。结论糖／TSP-1／TGFβ1信号传导途径在糖尿病心肌病时心肌间质纤维化发生发展过程中可能起着重要的作用,为临床上糖尿病心肌病的治疗提供了新的靶点。     

颅脑损伤患者血清NF-L、TSP-1水平变化及临床意义

目的 探讨颅脑损伤患者血清神经丝蛋白轻链(NF-L)、血小板反应蛋白1(TSP-1)水平变化,分析其对颅脑损伤患者预后的预测价值。方法 选择106例颅脑损伤患者(颅脑损伤组),根据Fisher CT分级将患者分为1～2级组(47例)和3～4级组(59例),根据格拉斯哥昏迷评分(GCS)将患者分为轻型昏迷组(12～15分,34例)、中型昏迷组(7～11分,49例)和重型昏迷组(＜7分,23例),根据伤后30天格拉斯哥预后量表(GOS)将患者分为预后不良组(GOS评分1～3分,48例)和预后良好组(GOS评分4～5分,58例),另选择门诊体检部接诊的103例健康志愿者(对照组)。采用酶链免疫吸附试验检测血清NF-L、TSP-1水平。Spearman秩相关分析颅脑损伤患者血清NF-L、TSP-1水平与Fisher CT分级、GCS评分、GOS评分之间的相关性。Logistic回归分析影响颅脑损伤患者预后的危险因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清NF-L、TSP-1水平预测颅脑损伤患者预后的价值。结果 颅脑损伤组血清NF-L、TSP-1水平均高于对照组(P＜0.05),Fisher CT分级3～4级组血清NF-L、TSP-1水平高于1～2级组(P＜0.05),重型昏迷组血清NF-L、TSP-1水平高于中型昏迷组和轻型昏迷组(P＜0.05),中型昏迷组血清NF-L、TSP-1水平高于轻型昏迷组(P＜0.05),预后不良组血清NF-L、TSP-1水平高于预后良好组(P＜0.05)。Spearman秩相关分析表明血清NF-L、TSP-1水平与Fisher CT分级呈正相关(r_s=0.622、0.593,P＜0.05),与GCS评分、GOS评分呈负相关(r_s=－0.589、－0.693;－0.629、－0.617,P＜0.05)。Logistic回归分析结果显示Fisher CT分级、GCS评分、NF-L、TSP-1与颅脑损伤患者预后相关(P＜0.01)。ROC曲线分析显示血清NF-L、TSP-1水平预测颅脑损伤患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.823、0.836,联合NF-L、TSP-1预测颅脑损伤患者预后的AUC为0.937,高于单独NF-L、TSP-1(P＜0.05)。结论 颅脑损伤患者血清NF-L、TSP-1水平显著升高,NF-L、TSP-1水平与颅脑损伤严重程度和预后密切相关,可作为预后评估的参考指标。     

在垂体腺瘤中TSP-1和TGF-β1的表达及其与微血管密度的关系

目的探讨凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)在垂体瘤中的表达以及与微血管密度(MVD)、侵袭性的关系。方法取52例垂体瘤(侵袭性组24例,非侵袭性组28例)手术标本,采用Western印迹方法检测TSP-1、TGF-β1蛋白表达,并分析其表达与垂体瘤侵袭性、MVD等因素之间的关系。MVD以CD34为指标采用免疫组化方法进行检测。结果与非侵袭组相比,侵袭组TSP-1蛋白表达较弱(0．435±0．052vs 0．642±0．043,P<0．01),TGF-β1蛋白表达则较强(0．533±0．061vs 0．364±0．049,P<0．01),两组间MVD表达差异无统计学意义。TSP-1表达与MVD无明显相关性,TGF-β1与侵袭性及MVD呈正相关(r=0．51,P<0．05)。结论TSP-1和TGF-β1在垂体瘤发生发展中起重要作用,并影响其血管生成及侵袭性。     

High glucose-induced alterations of extracellular matrix of human skin fibroblasts are not dependent on TSP-1-TGFbeta1 pathway

Elevated glucose level is the main cause of extracellular matrix (ECM) derangement in various tissues in diabetes mellitus. The development of diabetic nephropathy is considered to be dependent on profibrotic cytokine, transforming growth factor-β1 (TGFβ1). Its excessive activation due to the up-regulation of thrombospondin-1 (TSP-1) in mesangial cells exposed to high glucose contributes to ECM accumulation. However, the role of TSP-1–TGFβ1 pathway in the development of glucose-induced imbalance of ECM homeostasis in skin connective tissue is not studied. We investigated the response of human skin fibroblasts to elevated glucose level (11.0 and 30.0 mM) in terms of: (1) the expression and secretion of fibronectin (FN) and plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1); (2) the accumulation of hyaluronic acid (HA) in pericellular matrix and in the conditioned medium; (3) TGFβ1 expression, secretion and activation; (4) TSP-1 expression and secretion. We demonstrated the up-regulation of FN and PAI-1 by elevated glucose and the stimulation of HA accumulation in both cellular compartments. However, we failed to demonstrate the increase of expression, secretion and activation of TGFβ1, and the increase of TSP-1 expression and secretion in fibroblasts exposed to high glucose. These results show that ECM derangement in skin fibroblasts due to high glucose is not determined by TGFβ1 and its activation by TSP-1.     

小肠腺瘤和腺癌促血管生长因子与抑制血管生成因子表达及意义

目的：研究小肠腺瘤和腺癌组织中碱性成纤维细胞（bFGF)，血小板衍生生长因子（PDGF）和血小板反应蛋白－1（TSP－1）三种mRNA表达水平及其临床病理意义。方法：收集小肠腺癌手术标本44例，病理类型包括腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级各11，26，7例；癌细胞未侵犯肌层或仅达浅肌层12例，侵犯深肌层18例，浆膜层14例。10例良性病变包括十二指肠腺瘤9例和回肠腺瘤1例。三种mRNA染色方法均为原位杂交染色法。结果：44例小肠腺瘤bFGF mRNA,PDGF mRNA和TSP－1 mRNA阳性率分别为57％，48％和36％，10例小肠腺瘤则分别为20％，30％和90％。小肠腺瘤bFGF mRNA阳性率明显高于腺瘤（P＜0．05），而SP－1 mRNA则相反（P＜0．05）。腺癌Ⅰ级＋Ⅱ级，癌细胞未侵犯肌层＋侵犯浅肌层，肿块最大径＜3cm和未见淋巴结转移病例，bFGF,mRNA,PDGF mRNA阳性率明显低于腺癌Ⅲ级，癌细胞侵犯深肌层＋浆膜层，肿块最大径≥3cm和淋巴结转移病例，但TSP－1mRNA表达则相反。bFGF mRNA在腺癌中表达与PDGF mRNA表达呈正相关，但与TSP－1mRNA表达呈负相关。结论：bFGF,PDGF和TSP－1均为重要的肿瘤血管生成调节因子，其中bFGF,PDGF mRNA表达与小肠癌发生，发展，生物学行为，转移及其预后有密切关系，为重要生物学标记物，而TSP－1mRNA表达者可能分化好，侵袭力弱，预后较好。     

COX-2、u—PA、TSP-1、MLD、MVD在胃癌中的表达及对生存期的影响

目的研究环氧合酶2（COX-2）、尿激酶纤溶酶原激活物（U—PA）、血小板反应素-1（TSP-1）,微血管密度（MVD）,微淋巴管密度（MLD）在胃癌组织表达,探讨与生存期关系。方法调查患者的生存期,用组织芯片技术和免疫组化法检测胃癌组织COX-2、u—PA、TSP-1、MVD和MLD的表达,分析对生存期的影响,另设同期30例浅表性胃炎作为对照组。结果COX．2、U—PA、TSP-1在胃癌组阳性率均显著高于对照组（P〈0．05）;胃癌组MVD、MLD均显著高于对照组（P〈0．05）;U．PA阳性、COX-2和U—PA双阳性、MVD高表达、弥漫型、肿瘤直径≥5cm、淋巴结转移、低分化、肿瘤浸润至浆膜层及以外组的平均生存期显著低于对照组（P〈0．05）;Cox回归分析淋巴结转移、浸润深度、U—PA和COX-2双阳性表达是影响患者生存期的独立危险因素（P〈0．05）。结论COX-2、u—PA、TSP-1在胃癌组织呈高表达,淋巴结转移、浸润深度、U-PA和COX-2双阳性表达是影响患者生存期独立的预后因素。