应用双功能抗体和T细胞治疗病毒感染

应用双功能抗体和Ｔ细胞治疗病毒感染［日］／罔田秀亲／／临床免疫。－１９９４，２６（７）；－７８４～７８８应用具有抗Ｔ淋巴细胞受体（ＴＣＲ）和抗病毒感染细胞（ＨＩＶ感染细胞）表面抗原的双重功能的抗体（ＢＦＡ）介导ＣＤ８￣＋Ｔ淋巴细胞，可以有效地清除ＨＩ...     

蜂毒多肽BVI-2对T细胞及THP-1细胞功能的影响

目的：探讨蜂毒多肽ＢＶＩ中有效的抗炎成份及其作用机制。方法：观察蜂毒多肽对小鼠脾淋巴细胞转化、ＩＬ－１合成及ＴＨＰ－１细胞合成ＴＮＦα的影响。结果：蜂毒多肽ＢＶ、ＢＶＩ、ＢＶＩ－２可抑制ＣｏｎＡ（２．５μｇ／ｍｌ）诱导的小鼠脾淋巴细胞转化、ＩＬ－１合成及ＰＭＡ（１００ｎｇ／ｍｌ）诱导的ＴＨＰ－１细胞合成ＴＮＦα。结论：利用高效液相色谱相分离得到的蜂毒多肽ＢＶＩ－２具有一定的抗炎作用。     

抗人活化B淋巴细胞单克隆抗体制备及鉴定

自儿童手术摘除的新鲜扁桃体分离人Ｂ淋巴细胞，经ＰＭＡ（佛波醇）激活后得到人活化Ｂ淋巴细胞，用于免疫ＢＡＢＬ／Ｃ小鼠后，取免疫小鼠之脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，融合后细胞于含ＨＡＴ－ＩＭＤＭ完全培养基的２％甲基纤维素半固体培养基选择生长，经细胞酶联免疫吸附（ＣＥＬＩＳＡ）筛选间接免疫荧光流式细胞仪鉴定，获培养上清对活化Ｂ细胞及３Ｄ５细胞株细胞反应阳性，而Ｊｕｒｋａｔ细胞株细胞反应阴必的杂交     

脂蛋白（a）杂交瘤细胞株的建立及鉴定

用脂蛋白（ａ）［Ｌｎ（ａ）］免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，应用淋巴细胞杂交技术，将免疫小鼠的脾细胞与ＮＳ１骨髓瘤细胞进行融合，得到６Ｇ８、９Ｆ１１２株分泌抗Ｌｐ（ａ）单克隆抗体的杂交瘤细胞株，对２株细胞进行免疫学鉴定，应用间接ＥＬＩＳＡ法证明，培养上清效价１×１０－３～２×１０－３，培养上清与Ｌｐ（ａ）呈阳性反应，而与ａｐｏＡⅠ、ＡⅡ、Ｂ、ＣⅢ、Ｅ及血浆纤溶酶原（ＰＬＣ）均无交叉反应，ＥＬＩＳＡ相加实验证明：２株杂交瘤细胞株分别识别Ｌｐ（ａ）分子上２个不同的抗原决定簇。     

BCL—2基因表达与乳腺癌抗凋亡及免疫耐受的关系

目的 观察乳腺癌细胞株ＢＣＬ－２基因表达与其耐受肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）免疫攻击的关系,探索应用ＢＣＬ－２硫代反义寡核苷酸（ＢＣＬ－２ＳＯＮ）治疗乳腺癌的途径。方法 ＢＣＬ－２硫代反义寡核苷酸处理乳腺癌细胞株ＭＣＦ－７,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法观察其对ＢＣＬ－２表达的抑制;并将ＭＣＦ－７细胞与乳腺标本分离出来的ＴＩＬ共同培养,通过ＪＡＭ试验观察ＴＩＬ诱导ＭＣＦ－７细胞凋亡的情况。结果 ＢＣＬ－２ＳＯＮ处理的ＭＣＦ－７细胞无ＢＣＬ－２表达,并在ＪＡＭ试验中随着ＴＩＬ浓度增加,凋亡细胞也增加,未经处理的对照组可见ＢＣＬ－２表达,ＪＡＭ试验中随着ＴＩＬ浓度增加,凋亡细胞的量无明显变化。结论 ＢＣＬ－２表达的乳腺癌细胞可对抗肿瘤浸润淋巴细胞的免疫攻击,ＢＣＬ－２ＳＯＮ可作为治疗乳腺癌的新途径。     

104例重症肌无力胸腺的临床病理研究

１０４例重症肌无力（ＭＧ）胸腺的临床病理研究，其中６例分别用细胞角蛋白（ＣＫ），上皮细胞膜抗原（ＥＭＡ），癌胚抗原（ＣＥＡ），全Ｔ细胞标记物（ＵＣＨＴ１），Ｔ辅助细胞标记物（Ｔ４），Ｔ抑制细胞标记物（Ｔ８），Ｂ细胞标记物（Ｌ２６），Ｓ－１００蛋白（Ｓ－１００）作免疫组化和电镜检查，长期随访７３例。结果：光镜下胸腺淋巴细胞增生伴生发中心形成和分枝状增生的毛细血管为其病理特征；电镜下见淋巴细胞可形成丰     

应用脂多糖激活人血B淋巴细胞的研究

人血在体外培养时用脂多糖（ＬＰＳ）激活Ｂ淋巴细胞，＾３Ｈ－ＴｄＲ、，＾１４Ｃ－ＵＲ和＾１４Ｃ－缬氨酸作掺入试验反映淋转，测定了正常和各类病人１０６５人次，结果能够反映病情。用单克隆抗体（ＭｃＡｂ）分纯ＣＤ４，ＣＤ８和Ｂ细胞，发现ＬＰＳ只对Ｂ淋巴细胞有激活作用。实验还反映ＣＤ４和ＣＤ８细胞分别对ＬＰＳ激活的Ｂ细胞有辅助和抑制作用。     

女贞子多糖免疫增强作用的体外实验研究

应用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测女贞子多糖（ＬＬＳ）体外对小鼠免疫细胞增殖的影响。实验结果显示：１５６￣１２５０ｕｇ／ｍｌ的女贞子多糖对正常小鼠脾淋巴细胞、Ｂａｌｂ／ｃ裸鼠脾淋巴细胞（Ｂ细胞）及通过尼龙毛柱的脾细胞（Ｔ细胞）均有直接的刺激增殖作用，量效关系明显；巨噬细胞在脾淋巴细胞增殖反应中起一定的辅助作用。     

从植入载有抗原的海绵中收集肿瘤特异性T细胞方法的应用

将含灭活ＦＢＬ－３瘤细胞的聚氨酯海绵块植入免疫的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠皮下，１０天后收集海绵中的浸润淋巴细胞（ＳＩＬｓ），经体外含ｒＩＬ－２的培养系统中扩增后作特异性杀伤试验。结果表明：所获得的ＳＩＬｓ对ＦＢＬ－３瘤细胞显示出明显的特异杀伤活性，而且高于同一宿主脾脏中的致敏Ｔ细胞和未免疫鼠中ＳＩＬｓ。经流式细胞仪分析表明，从免疫鼠中以的ＳＩＬｓ是以Ｌｙｔ２＾＋占绝对优势的Ｔ细胞系列，联合应用化疗与ＳＩ     

人外周血特异性抗体形成细胞的培养及检测

采用以绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）为免疫原，两次诱导并伴有ｐｗｍ作用的免疫培养方法，对２３例健康人外周血淋巴细胞进行体外诱导，并以空斑细胞（ｐｌａｑｕｅ－ｆｏｒｍｉｎｇｃｅｌ，ＰＦＣ）技术检测培养中产生的特异性抗体形成细胞（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｃｅｌ），结果表明：该条件下的实验组产生的ＰＦＣ数最高，细胞活性好。以兔ＲＢＣ代替ＳＲＢＣ的特异性溶血试验中，几乎无ＰＦＣ产生，证实ＳＲＢＣ诱导ＰＦＣ的特异性及本实验体外免疫培养方法的可行性。此外，本文采用的改良ＰＦＣ单电子层的检测方法，操作简便，便于临床应用，可作为研究人体免疫细胞功能的手段之一。     

人单核细胞超化蛋白—1（MCP—1）基因的PCR扩增,克隆…

本文报道用植物血凝素（ＰＨＡ）诱导健康人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ，包括单核细胞和淋巴细胞），提取细胞总ＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ第一链，再以其为模板进行ＰＣＲ，得到了编码成熟单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的ｃＤＮＡ。该ｃＤＮＡ用ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ双酶切后，回收含ＭＣＰ－１基因的长约２８０ｂｐ的ＤＮＡ片段，插入到经ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ双酶切的ｐＵＣ１９载体中，进行序列分析。结果表明，ＭＣ     

导入B7-1基因的NK细胞敏感靶细胞诱导抗肿瘤免疫反应的研究

目的了解Ｂ７－１分子是否参与人体自然杀伤细胞（ＮＫ细胞）的激活。方法利用ＮＫ细胞敏感靶细胞——Ｋ５６２细胞上无ＮＫ细胞抑制性配体这一特点，用基因工程方法将Ｂ７－１基因导入Ｋ５６２细胞，利用Ｋ５６２细胞的激活性配体及Ｂ７－１基因表达激活ＮＫ细胞。结果发现导入Ｂ７－１基因的Ｋ５６２细胞（Ｂ７＋Ｋ５６２）能激活ＮＫ细胞，表现出ＮＫ细胞增殖及杀伤活性升高。进而分离纯化出ＮＫ细胞克隆，发现这些克隆能分泌ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ以及ＧＭ－ＣＳＦ因子，用含有这些因子的ＮＫ细胞培养上清液当其在有单核细胞及肿瘤抗原存在下，能诱导患者的Ｔ淋巴细胞介导的自身肿瘤细胞杀伤活性。结论Ｂ７＋Ｋ５６２细胞可诱导一系列的抗肿瘤免疫反应。从肿瘤治疗上考虑提示可将Ｂ７＋Ｋ５６２细胞进一步开发成一种通用的肿瘤治疗性疫苗     

MHC-Ⅰ类分子在肿瘤浸润性淋巴细胞识别人黑色素瘤细胞中的作用

应用人白细胞抗原－Ａ２阳性（ＨＬＡ－Ａ＋２）黑色素瘤病人的瘤块中分离得到的肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ），进行ＨＬＡ－Ａ２限制性ＴＩＬ抗人黑色素瘤细胞作用的研究。在实验中发现，ＴＩＬ对自身和同种异体的ＨＬＡ－Ａ＋２黑色素瘤细胞具有杀伤作用，而对ＨＬＡ－Ａ－２黑色素瘤细胞及ＨＬＡ－Ａ＋２非黑色素瘤细胞无作用。选择重组白细胞介素４（ｒＩＬ－４）＋肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）能促进黑色素瘤细胞ＨＬＡ－Ａ２表达量，并增强ＴＩＬ对瘤细胞的杀伤活性。抗ＣＤ３、抗ＨＬＡ－ＡＢＣ和抗ＨＬＡ－Ａ２单抗具有明显抑制ＴＩＬ的抗瘤细胞活性。结果表明ＴＩＬ杀伤黑色素瘤细胞依赖于Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）对瘤细胞共同抗原的识别，并有主要组织相容性复合体－Ⅰ类分子参与。     

CTLA-4及其在T细胞活化中的作用

细胞毒性Ｔ淋巴细胞相关分子－４（ＣＴＬＡ－４）和ＣＤ２８的结构相似，在转录水平和蛋白的亚细胞运输水平对其表达进行调控，和Ｂ７－１、Ｂ７－２的亲和力极高，主要与Ｂ７－１分子形成受体／配体对，相互作用可以抑制Ｔ细胞的增殖、活化，是机体维持淋巴细胞稳态平衡的关键环节。被磷酸化的ＣＴＬＡ－４和Ｓｙｐ磷酸酯酶的ＳＨ２功能区结合，可导致Ｔ细胞活化的Ｒａｓ途径关闭，此可能为ＣＴＬＡ－４发挥抑制作用的信号传导机制。ＣＴＬＡ－４也为肿瘤和自身免疫性疾病的免疫治疗研究开辟了新的路径。     

白癜风患者外周血T淋巴细胞异常活化

本文以人类白细胞抗原ＤＲ位点（ＨＬＡ－ＤＲ）及白细胞介素２受体亚单位Ｐ５５和Ｐ７５（ＩＬ－２Ｒ，Ｐ５５和ＩＬ－２Ｒ，Ｐ７５）的表达为Ｔ淋巴细胞活化的指标，用双色免疫标记流式细胞法对白癜风患者外周血Ｔ淋巴细胞（ＶＰＢＴＬ）进行分析。实验发现：ＨＬＡ－ＤＲ在ＶＰＢＴＬ及其亚群Ｔ辅助细胞（Ｔｈ，ＣＤ４＾＋细胞）和Ｔ抑制细胞（Ｔｓ，ＣＤ８＾＋细胞）的表达均明显高于正常人，分别为：４９．６２％比１４．５４％     

心脏移植与疮疹病毒6型感染

从加拿大渥太华市民医院的１３例心脏移植病人收集移植前后静脉肝素血３０份，将按常规方法分离出的淋巴细胞加入经ＰＨＡ活化的脐带血淋巴细胞中共同培养，结果分离出２株疱疹病毒６型（ＨＨＶ－ｅ），这２株ＨＨＶ－６引起典型的细胞病变，而且毒株在多次传代后仍可保持感染性，分离的毒株在电镜下可见疮疹类病毒样颗粒。经特异性抗体和ＤＮＡ杂交试验证明这两殊病毒均属于ＨＨＶ－６Ｂ，同时收集此１３例病人移植前后连续血清５２份，用间接免疫荧光方法测定血清中特异性抗ＨＨＶ－６ＩｅｇＧ抗体，５例（３９％）病人抗体出现４倍或４倍…     

高压氧抗小鼠同种皮肤移植排斥反应的实验研究

目的：探讨高压氧抗移植排斥反应机理。方法：Ｃ５７ＢＬ／６小鼠接受ＢＡＬＢ／ｃ小鼠移植皮片后，在９９２％Ｏ２，０２５ｍＰａ条件下每天１ｈ直至皮片排斥。动态观察移植局部Ｔ细胞及亚群，ＩＬ－２Ｒ（α）阳性细胞浸润情况以及混合淋巴细胞培养（ＭＬＣ）、细胞杀伤活性（ＬＭＣ）等。结果：高压氧组小鼠移植皮片存活时间明显延长；移植局部Ｔｈｙ－１，Ｌ３Ｔ４，Ｌｙｔ－２及ＩＬ－２Ｒ（α）阳性细胞浸润明显减少，ＭＬＣ及ＬＭＣ均降低。结论：高压氧可通过抑制移植局部Ｔ淋巴细胞浸润及ＩＬ－２Ｒ表达以及Ｈ－２诱导的增殖反应及杀伤活性，从而抑制移植排斥反应。     

系统性红斑狼疮患者B淋巴细胞EBV-LMP1和ZEBRA的表达研究

目的：探讨ＥＢＶ－ＬＭＰ１和ＺＥＢＲＡ在系统性红斑狼疮患者（ＳＬＥ）的表达情况。方法：间接荧光免疫标记，流式细胞仪检测。结果：ＳＬＥ患者Ｂ淋巴细胞中ＥＢＶ－ＬＭＰ１和ＺＥＢＲＡ的表达显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０１）。活动期患者ＣＤ２３＋细胞ＥＢＶ－ＬＭＰ１和ＺＥＢＲＡ的表达率均高于ＣＤ１９＋细胞（Ｐ＜０．０１）。非活动期患者ＣＤ２３＋细胞ＥＢＶ－ＬＭＰ１表达也高于ＣＤ１９＋细胞（Ｐ＜０．０１）。但ＥＢＶ－ＺＥＢＲＡ表达在两亚群间差异没有统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论：朋病毒参与了ＳＬＥ的发病机制，病毒主要以潜伏期状态存在于患者中，病毒复制促进病情发展，检测Ｂ淋巴细胞ＥＢＶ－ＬＭＰ１和ＺＥＢＲＡ的表达率，有助于病情活动指标的判断。     

诱导特异性CTL为基础的EBV相关肿瘤免疫治疗策略

Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒（ＥＢＶ）属于γ－疱疹病毒家族，在人群中感染非常普遍，在体内以潜伏和增殖状态存在。它是传染性单核细胞增多症（ＩＭ）的病原，同时也能引起Ｂ淋巴细胞增生性疾病。ＥＢＶ也是重要的肿瘤ＤＮＡ病毒，目前发现其与非洲儿童Ｂｕｒｋｉｔｔ＇ｓ淋巴瘤（ＢＬ）和鼻咽癌（ＮＰＣ）、何杰金氏淋巴瘤（ＨＤ）、成人Ｔ细胞淋巴瘤及各种免疫抑制剂治疗病人和器官移植病人的淋巴细胞增生紊乱引起的淋巴瘤等密切相关。ＥＢＶ感染在体内能激发强烈的特异性杀伤性Ｔ细胞（ＣＴＬ），其能控制病毒的潜伏、增殖、维持及转…     

吸入糖皮质激素对哮喘儿童细胞免疫功能的影响

为了解糖皮质激素对免疫功能的作用，检测了哮喘发作期患儿。对经丙酸倍氯松（ＢＤＰ）吸入治疗的患儿及正常儿童外周血淋巴细胞膜ＩＬ－２受体（ｍＩＬ－２Ｒ）、超微结构、血浆游离ＩＬ－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）、淋巴细胞亚群及ＢＤＰ对体外培养淋巴细胞ｍＩＬ－２Ｒ的表达进行比较。结果显示，ＢＤＰ可以明显抑制ＰＨＡ刺激引起的体外培养淋巴细胞ｍＩＬ－２Ｒ的表达，引起淋巴细胞的凋亡，而吸入ＢＤＰ（２００μｇ／ｄ）的哮喘患儿（缓解期）除ｓＩＬ－２Ｒ比哮喘发作期显著降低（Ｐ＜０．０５）外，外周血淋巴细胞ｍＩＬ－２Ｒ及淋巴细胞亚群并未出现显著变化．结果提示，抑制淋巴细胞ｍＩＬ－２Ｒ表达和淋巴细胞活化可能是ＢＤＰ治疗哮喘等变态反应的重要机制之一。吸入ＢＤＰ主要是呼吸道局部作用，对全身细胞免疫指标影响不大