抗氧化剂抑制内皮细胞的白细胞粘附不依赖它们的抗氧化特性

目的 探讨抗氧化剂能否抑制内皮细胞表面的粘附分子表达和内皮细胞与白细胞粘附,以及抗氧化剂调节ＮＦＥ－ｋＢ的活性是否通过一９种对氧化还原敏感的机制。方法 在一种液体流动小室中进行细胞粘附实验,抗氧化剂的抗氧化活性用２’－７’－二氯荧光素双醋酸盐（ＤＣＦＨ－ＤＡ）染色血管内皮细胞经流式细胞仪测量;内皮细胞ＮＦ－ｋＢ的活性用电泳迁移率分析测定,结果：ＰＤＴＣ和ｃｈｒｙｓｉｎ抑制ＨＬ６０往ＴＮＦα刺激的Ｕ     

高糖、肿瘤坏死因子促进血管内皮细胞表面整合素（α_vβ_3）表达

本文采用ＥＬＩＳＡ方法检测培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）表面玻璃连接蛋白受体（ＶｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒＶｎＲ即整合素家庭的α＿ｖβ＿３）的表达改变；用（５１）Ｃｒ－标记血小板（（５１）Ｃｒ－ｐｌａｔｅｌｅｔｅ，（５１）Ｃｒ－ｐＬ）检测ＨＵｖＥｃ的粘附功能；Ｆｕｒａ－２／Ａｍ负载ＥＣ，测定ＨＵＶＥＣ胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ（２＋）］），观察了高糖、肿瘤坏死因子－α（Ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α，ＴＮＦ－α）对ＥＣ粘附功能的影响。结果表明：①高糖（３０ｍｍｏｌ／Ｌ）可明显促进ＥＣ与ＰＬ的粘附（ＣＰＭ值：３６１±２ｌ．９３ＶＳ２ｌ９．６７±１６．２６，ｎ＝６Ｐ＜０．０１），抗β３亚单位单抗（β３ＭｃＡｂ）可部分阻断ＥＣ与ＰＬ粘附。ＴＮＦ－α（１０００μ／ｍ１）也有相同作用（ＣＰＭ值：４ｌ０．７±１７．６ＶＳ２１９．６７±１６．２６１ｎ＝６Ｐ＜０．０１），β３ＭｃＡｂ也部分阻断ＴＮＦ－α诱导的ＥＣ－ＰＬ间的粘附。②不同浓度高糖和ＴＮＦ－α不同时间可影响ＥＣ表面的α＿ｖβ＿３表达，并且在一定范围内有浓度和时间依赖性。③高糖和ＴＮＦ－α可明显增加ＥＣ的［Ｃａ（２＋）］ｉ，上述资料提示?     

细胞因子对心脏微血管内皮细胞与淋巴细胞粘附的影响

目的：观察细胞因子对心脏微血管内皮细胞表面细胞间粘附分子－１（ｉｎｔｅｒｃｅｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ－１，ＩＣＡＭ－１）的表达的调控，及对内皮细胞与激活淋巴细胞粘附的影响。方法：体外培养大鼠心脏微血管内皮细胞，以肿瘤坏死因子（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α，ＴＮＦ－α）、白细胞介素－６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ６，ＩＬ－６）和白细胞介素－１（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１β，ＩＬ－１β）诱导。采用免疫组织化学染色法观察内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１表达；采用粘附试验和抗ＩＣＡＭ－１或抗ＬＦＡ－１单克隆抗体阻断抑制试验。结果：ＴＮＦ－α、ＩＬ－６和ＩＬ－１β诱导内皮细胞１８～２４ｈ，均可使内皮细胞与淋巴细胞的粘附率显著增加，ＴＮＦ－α和ＩＬ－１β的诱导还可使内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１分子表达明显增强，表现为ＩＣＡＭ－１表达阳性细胞数增多，着色加深。用１０～２０ｍｇ／Ｌ抗ＩＣＡＭ－１或抗ＬＦＡ－１单克隆抗体均可部分抑制内皮细胞与淋巴细胞的粘附。结论：ＴＮＦ－α和ＩＬ－１β可以有效地激活心脏微血管内皮细胞，通过诱导内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达增多，促进内皮细胞与淋巴细胞的粘附     

TNF—α诱导分泌型IL—1和膜型IL—1生成的实验研究

本实验应用丙酸杆菌和内毒素引起的肝坏死模型研究了肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα），分泌型白细胞介素１（ｓＩＬ－１）和膜型白细胞介素１（ｍＩＬ－１）在肝坏死形成中的相互作用。其结果：①枯否细胞培养上清液中的ＴＮＦα、ｓＩＬ－１和枯否细胞的ｍＩＬ－１活性较对照组明显增高。ＴＮＦα首先增高，随之为ｍＩＬ－１，最后为ｓＩＬ－１。②ＴＮＦα可以诱导ｓＩＬ－１和ｍＩＬ－１生成。③未发现ＩＬ－１诱导ＴＮＦα生成的作用     

实验性肺纤维化大鼠组织整合素α5β1和转化生长因子—β的表达

目的 研究纤维连接蛋白受体整合蛋白受体整合素α５β１在大鼠肺纤维化中的作用。方法 用免疫组化方法观察实验性大鼠肺纤维化纤维连接蛋白及其受体整合素α５β１和转化生长因子－β表达的动态变化：用Ｎｏｒｔｈｅｍ印迹杂交和免疫细胞化学方法观察ＴＧＦ－β对体外培养的大鼠肺成纤维细胞整合素α５β１ ｍＲＮＡ和 白表达的影响。结果 （１）实验组１￣３天,病灶内上皮细胞和骨皮细胞整合素α５β１表达明显增强,炎细胞及     

抗TNF-α人-鼠嵌合抗体的构建及表达

目的：构建和表达抗ＴＮＦ－α人－鼠嵌合抗体。方法：将抗ＴＮＦ－α鼠单抗Ｚ８的轻、重链可变区基因插入到含有人ｋ链和ＩｇＧ１重链恒定区基因的真核细胞表达载体中,分别构建轻、重链分开表达和共同表达的人－鼠嵌合抗体真核表达载体转染真核细胞,通过ＥＬＩＳＡ,ＲＴ－ＰＣＲ、免疫印迹检测ＴＮＦ－α的活性。用Ｌ９２９细胞检测嵌合抗体体外中和ＴＮＦ－α的活性。结果：ＥＬＩＳＡ鉴定结果表明该嵌合抗体与ＴＮＦ－α特异性     

肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ对心肌细胞的细胞间粘？…

目的：研究肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）和血管紧张素Ⅱ对心肌细胞的细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）表达的不同影响。方法：运用免疫组化技术和流式细胞仪观察ＴＮＦα和ＡｎｇⅡ对培养的乳鼠心肌细胞ＩＣＡＭ－１表达量的影响。结果Ｌ：ＴＮＦα明显增加心肌细胞ＩＣＡＭ－１表达量,以刺激６ｈ最明显,随时间作用延长表达量减少。ＡｎｇⅡ对培养的心肌细胞ＩＣＡＭ－１表达量无显著作用。结论：ＴＮＦα是调节心肌细胞ＩＣＡＭ     

FAS， NF-κB及Caspases在TNFα介导的微血管内皮细胞凋亡中的作用

目的 :研究肿瘤坏死因子α(ＴＮＦ)引起微血管内皮细胞凋亡的特点及ＦＡＳ ,ＮＦ -κＢ和Ｃａｓｐａｓｅｓ在此种凋亡中的作用。方法 :用ＴＵＮＥＬ ,流式细胞仪等方法测定ＴＮＦ引起体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞(内皮细胞 )凋亡。用免疫组化方法测定ＴＮＦ引起内皮细胞ＮＦ -κＢ的活化 ,研究其活化对ＴＮＦ引起的内皮细胞凋亡的影响。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、ＦＡＳ抗体测定ＴＮＦ对内皮细胞ＦＡＳ表达的影响及ＦＡＳ在内皮细胞凋亡中的作用。用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、免疫组化测定ＴＮＦ作用后凋亡蛋白酶Ｃａｓｐａｓｅ- 8,Ｃ…     

IFN-γ和TNF-α诱导Fas表达在β胰岛细胞杀伤中的作用

目的：研究人β胰岛细胞Ｆａｓ的表达及细胞因子诱导Ｆａｓ表达量的增加在β胰岛细胞杀伤中的作用。方法：用ＦＡＣＳ检测ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α作用于人β胰岛细胞株（ＮＩＴ）前后Ｆａｓ表达水平及ｓＦａｓＬ和抗Ｆａｓ介导细胞凋亡的变化。结果：ＮＩＴ表达无Ｆａｓ表达,ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α可促进其Ｆａｓ表达增加,以及对ｓＦａｓＬ和ａｎｔｉ－Ｆａｓ介导细胞毒敏感性增加。结论：细胞因子诱导β胰岛细胞表面Ｆａｓ的表达可能在Ⅰ型糖尿病（ＩＤＤＭ）的病理损伤中起重要作用。     

TNFα对嗜酸性粒细胞L-选择素表达的影响

多种细胞因子参与一哮喘时嗜酸性粒细胞与血管内皮细胞粘附的调节，但对嗜酸性粒细胞具有选择性作用的细胞因子尚未澄清。采用双色免疫荧光流式细胞技术，研究了炎前性细胞因子ＴＮＦα对人外周血嗜酸性粒细胞表面具有介导细胞粘附作用的粘附分子Ｌ－选择素和极迟抗原－４表达的影响，并与嗜中性粒细胞作以比较。ＴＮＦα对嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞表面Ｌ－选择素均有上调表达的作用，而对极迟抗原－４表达无明显影响。实验结果说     

肿瘤坏死因子—α对中性粒细胞凋亡的影响

细胞凋亡是生物界普遍的生命现象,是由基因控制的细胞自主的有序性的死亡,与临床疾病关系密切。中性粒细胞（ＰＭＮ）是一种主要的炎性细胞,本实验通过光镜、电镜、电泳。流式细胞仪等方法研究了重要的炎性介质肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）对正常和炎症状态下外周血ＰＭＮ凋亡的影响。结果表明,ＴＮＦ－α可以诱导ＰＭＮ凋亡,且与作用时间作用浓度相关,ＰＭＮ的凋亡在炎症微环境中被改变,ＰＭＮ凋亡延迟,对ＴＮＦα反应性下     

α-黑素细胞刺激素体外对星形胶质细胞产生NO和前炎性细胞因子的影响

目的：研究α－黑素细胞刺激素（α－ＭＳＨ）对ＬＰＳ诱导星形胶质细胞产生ＮＯ和前炎性细胞因子的影响。探讨α－ＭＳＨ的抗炎作用机制。方法：分别用ＬＰＳ或α－ＭＳＨ＋ＬＰＳ处理体外培养的大鼠脑星形胶质细胞,用Ｇｒｉｅｓｓ试剂测定ＮＯ,以ＭＴＴ显色法检测ＩＬ－１、ＩＬ－６和ＴＮＦ－α,采用半定量ＲＴ－ＰＣＲ检测ＭＩＦｍＲＮＡ表达。结果：体外培养的星形胶质细胞在ＬＰＳ刺激下产生ＮＯ、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α和表达ＭＩＦｍＲＮＡ表达。结果：体外的星形胶质细胞在ＬＰＳ刺激下产生ＮＯ、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α和表达ＭＩＦｍＲＮＡ显著增高;若同时给予ＬＰＳ和α－ＭＳＨ,可明显降低ＮＯ、ＩＬ－１、ＩＬ－６和ＴＮＦ－α的产生以及ＭＩＦｍＲＮＡ表达。结论：Ｒ昧α－ＭＳＨ抑制星形胶质细胞产生ＮＯ和前炎性细胞因子与其抑制中枢神     

实验性肺纤维化大鼠肺组织整合素α5β1和转化生长因子-β的表达

目的　研究纤维连接蛋白受体整合素α５β１ 在大鼠肺纤维化中的作用。方法　用免疫组化方法观察实验性大鼠肺纤维化纤维连接蛋白（ＦＮ） 及其受体整合素α５β１ 和转化生长因子β（ＴＧＦβ）表达的动态变化;用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交和免疫细胞化学方法观察ＴＧＦβ对体外培养的大鼠肺成纤维细胞整合素α５β１ ｍＲＮＡ和蛋白表达的影响。结果　（１）实验组１～３ 天,病灶内上皮细胞和内皮细胞整合素α５β１ 表达明显增强,炎细胞及增生的间质细胞亦呈阳性反应。以后,整合素α５β１ 阳性反应主要见于明显增生的间质细胞,并与ＴＧＦβ阳性分布相似。ＦＮ的变化与整合素α５β１ 的变化同步。（２）ＴＧＦβ作用后,大鼠肺成纤维细胞整合素α５β１ ｍＲＮＡ 及其蛋白表达增强（α５、β１ ｍＲＮＡ 杂交条带的积分光密度值,依次分别是对照的６．６ 、４．４ 倍;α５β１ 蛋白染色积分光密度值为对照的３．６ 倍） 。结论　整合素α５β１在肺间质细胞活化、增殖、分化及细胞外基质合成中起了极其重要作用。     

树突状细胞体外定向诱导扩增及其分离纯化

目的：探讨定向诱导及纯化树突状细胞（ＤＣ）的方法，为进一步研究树突状细胞的功能、特性及临床应用提供技术方法。方法：利用免疫磁珠江（ＭＡＣＳ）分离纯化脐血ＣＤ３４细胞，在液体培养体系中加入ＦＬ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＩＬ－４ｅｙ ＳＣＦ，培养１２ｄ后光镜检测细胞形态及流式细胞仪分析表达标志；利用抗估状细胞单克隆抗体（Ｘ－１１）及免疫磁珠分离纯化树突状细胞，流式细胞仪检测纯化后ＤＣ的纯度。结果：经体     

HSP患儿治疗前后血清sTNF—R水平变化及意义

ｓＴＮＦ－Ｒ是细胞表面膜结合型肿瘤坏死因子受体（ｍＴＮＦ－Ｒ）经蛋白激酶等裂解而形成的。ｓＴＮＦ－Ｒ有两型：ｓＴＮＦ－ＲＩ和ｓＴＮＦ－ＲＩＩ。ＴＮＦ包括ＴＮＦ－α和ＴＮＦ－β是一种具有多种生物学效应的炎性介质,其生物学活性通过与ｍＴＮＦ－Ｒ结合而介导１。为了探讨ＨＳＰ患儿血清ｓＴＮＦ－Ｒ的水平变化及其意义,我们检测了过敏性紫癜ＨＳＰ患儿治疗前后、有无并发肾炎ＨＳＰ患儿及其中９例治疗后复发的急性期ＨＳＰ患儿血清ｓＴＮＦ－Ｒ的水平。１材料和方法１．１材料研究对象：ＳＨＰ患儿２６例,其中…     

单纯分泌型TNF—α真核表达质粒的构建及表达细胞株的建立

膜结合的ＴＮＦ－α前体与分泌型ＴＮＦ－α生物学活性的不同。方法在克隆出ｍＴ－ＮＦ－α基因的基础上，我们采用ＩＬ－２信号肽编码序列置换ｍ－ＴＮＦ－α前导肽编码序列，构建出只产生分泌型ＴＮＦ－α的真核表达持 粒ｐＢＫ－ｓＴＮＦｍ，要至ＮＩＨ３Ｔ３细胞中。     

细胞因子对小鼠α2(I)型前胶原基因启动子活性影响的研究

目的：探讨细胞因子对小鼠α２（Ｉ）型前胶原基因上游启动子活性的影响。方法：以小鼠α２（Ｉ）型前胶原基因启动子（－２ｋｂ～＋５４ｂｐ）为靶序列,将它与氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）报告基因组成的重组体ｐＡＺ１００９用脂质体法转染至胶原产生细胞ＮＩＨ／３Ｔ３细胞,讨论ＩＦＮα、ＩＦＮγ、ＴＮＦα对小鼠α２（Ｉ）型前胶原基因上游启动子活性的影响。结果：ＴＮＦα抑制小鼠α２（Ｉ）型前胶原基因启动子活性,ＴＮＦα分别与ＩＦＮγ、ＩＦＮα联合应用能加强这种抑制作用。结论：ＴＮＦα分别与ＩＦＮγ、ＩＦＮα联合应用能加强抑制作用,这可能与ＩＦＮγ、ＩＦＮα诱导ＴＮＦα受体表达,从而加强ＴＮＦα抑制作用有关,而ＩＦＮγ抑制胶原蛋白合成作用与该序列无直接相关。     

脱细胞猪角膜表面基底膜成分的检测

背景：前期实验显示脱细胞猪角膜具有良好的组织相容性,可以支持角膜细胞和皮肤上皮细胞的生长。 目的：检测脱细胞猪角膜是否保存了利于角膜上皮细胞生长的重要组织结构—基底膜。 方法：利用荧光抗体对脱细胞猪角膜表面的基底膜成分(层粘蛋白和Ⅳ型胶原)进行免疫组织化学检测,荧光显微镜下观察脱细胞猪角膜表面是否保存了基底膜成分。 结果与结论：免疫荧光染色显示脱细胞猪角膜前基质表面层粘蛋白和Ⅳ型胶原呈阳性表达,与新鲜猪角膜表面基底膜的荧光表达相同,表明脱细胞猪角膜保存了利于角膜上皮细胞生长的基底膜。     

阿米巴肝脓肿患者血清细胞因子水平与免疫防卫能力的研究

目的 了解阿米巴肝脓肿患者抗体的免疫防卫能力。方法 ＥＬＩＳＡ、比色法及流式细胞仪等检测了４０例阿米巴肝脓肿患者血清细胞因子ＴＮＦ－α,ＩＬ－６,ＩＬ－８,ｓＩＬ－２Ｒ,弓形虫感染率,ＮＯ,血液ＣＤ４／ＣＤ８Ｔ细胞,红细胞Ｃ３ｂ受体花环率（ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ）及免疫复合物花环率（ＲＢＣ－ＩＣＲ）。结果 ＴＮＦα,ＩＬ－,ＩＬ－８,ｓＩＬ－２Ｒ,ＮＯ,ＲＢＣ－ＴＣＲ显著高于正常对照组,ＲＢＣ－Ｃ３ｂ     

9.1C3分子抑制杀伤性细胞的细胞毒作用及其机制

目的 探讨９．１Ｃ３分子对杀伤细胞功能的影响。方法 以新鲜分离的ＰＢＭＣ或混合淋巴细胞培养活化的淋巴细胞为效应细胞,采用重导向杀伤实验（Ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ ｋｉｌｌｉｎｇ ａｓｓａｙ,ＲＫＡ）观察９．１Ｃ３抗体效应细胞杀伤Ｐ８１５细胞作用及其杀伤过程中ＴＮＦ－α分泌的影响。结果 ９．１Ｃ抗体能显著抑制杀伤细胞对靶细胞的细胞毒作用,并使效应细胞分泌ＴＮＦ－α水平降低。结论：９．１Ｃ３分子是一种抑制