抗重组人巨细胞病毒单克隆抗体的制备与鉴定

为了获得抗人巨细胞病毒(HCMV)单克隆抗体(McAb).采用重组HCMV(rhCMV)gp52蛋白片段免疫Balb/c小鼠,将免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,经ELISA法筛选阳性克隆及测定效价,用免疫印迹法进行特异性鉴定.最终获得4株(3E9,5A6,4G12,2H2)能稳定分泌高效价抗rhCMV McAb的杂交瘤细胞.其培养上清的ELISA效价分别为12048,11024,11024,1512;腹水效价分别为1×10-7,1×10-7,1×10-6,2×10-6.它们分别识别gp52蛋白上的2个不同的抗原表位,2H2识别gp52蛋白上的一个表位,3e9,5A6和4G12识别另一个表位.该单抗可作为快速诊断CMV感染的特异性抗体.     

相思子毒素单克隆抗体的制备纯化及鉴定

目的制备相思子毒素单克隆抗体并鉴定其特性。方法以甲醛处理的相思子毒素毒蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等方法筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株,用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行单抗的纯化,并对单克隆抗体的特异性进行鉴定。结果获得了4株可稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞2D3、4E6、1C8和1E5,诱生的腹水效价分别为1∶1×107、1∶1×106、1∶1×105、1∶1×106,亚类鉴定表明2D3为IgG1,其余3株均为IgG2b;特异性鉴定显示它们与多种毒素均无交叉反应,经过亲和层析,获得了纯化的单抗。结论获得了特异性的相思子毒素单克隆抗体,为建立相思子毒素的检测及纯化方法奠定了基础,其中4E6的效价最高,可作为检测相思子毒素的核心试剂。     

抗SARS病毒融合蛋白单克隆抗体的制备与初步鉴定

用基因工程技术表达的SARS-CoV S蛋白片段和N蛋白片段的融合蛋白作抗原免疫Balb/c小鼠,将免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,经ELISA法筛选阳性克隆及测定效价,用免疫印迹法进行特异性鉴定。最终获得2株(1F11和3D2)能稳定分泌抗SARS-CoV融合蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。其培养上清的ELISA效价分别为1∶1024和1∶512;腹水效价分别为:1×10-6,2×10-5。1F11株识别融合蛋白上的N抗原表位,3D2识别其上的S抗原表位。该单抗可望成为快速诊断SARS-CoV感染的特异性抗体。     

ApoAⅡ单克隆抗体对抗原决定簇的测定及应用研究

目的　研究载脂蛋白AⅡ (ApoAⅡ )单克隆抗体 (McAb)对其抗原的决定簇。方法　应用淋巴细胞杂交瘤技术 ,建立抗人ApoAⅡ杂交瘤细胞株 (BI1 ,BI2 ,BI3,BI4 ,BI5,BI6 ,BI7) ,以制备的McAb用双向免疫扩散法和ELISA对其免疫学特性进行了测定 ,用单抗相加试验和双抗体竞争试验对其抗原决定簇进行分析。结果　Ig亚类测定 :BI1 、BI2 、BI5和BI7为IgG1 ,而BI3、BI4 和BI6 均为IgG2b,腹水效价BI1与BI6 为 1× 10 - 6 ,BI2 、BI3、BI4 、BI5和BI7均达到 1× 10 - 5。特异性测定 :与载脂蛋白AⅠ、B、CⅠ、CⅡ、CⅢ、E、脂蛋白 (a)、人血清白蛋白及纤维蛋白溶酶原 (pg)没有交叉反应。单抗相加试验和双抗体竞争试验结果证实 ,BI1 、BI4 和BI5为识别apoAⅡ上同一抗原决定簇的McAb、BI2 、BI3、BI6 和BI7则为针对apoAⅡ上另一抗原决定簇的McAb。结论　ApoAⅡ的McAb对抗原决定簇的测定为预测动脉粥样硬化危险性提供了理论依据     

抗哇巴因单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗哇巴因单克隆抗体。方法以半抗原哇巴因与蛋白质载体卵清蛋白(OVA)的耦联物为抗原,免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,获得两株分泌抗哇巴因的单克隆抗体的细胞株(OUA1,OUA2)。结果两株细胞染色体数目均为100条左右,证实为杂交瘤细胞;所分泌抗体为小鼠IgG1亚类;小鼠腹水效价测定分别为5×106,8×106;和地高辛交叉反应率分别为1.342%和2.323%;ELISA相加试验表明,两株单克隆抗体可能针对同一抗原决定簇。结论成功制备出小分子物质哇巴因的单克隆抗体。     

人结缔组织生长因子单克隆抗体的制备及鉴定

用纯化的人结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)免疫BalB/C小鼠,采用杂交瘤技术制备CTGF单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),获得2株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系7C7和8A11。两株细胞染色体众数分别为95条和91条;单抗亚类鉴定结果显示2株单抗均为IgG1型;间接ELISA法测定7C7和8A11腹水效价分别为:1.3×105和8.1×104;相对亲和力:7C7>8A11。CTGF单克隆抗体的制备为相关实验研究和临床诊断提供了条件。     

抗伤寒沙门菌鞭毛蛋白特异单克隆抗体的制备及其对伤寒免疫诊断应用的可能性

按Ibrahim等的方法自伤寒菌提取纯鞭毛蛋白,分别免疫新西兰白兔及BALB/c小鼠,并从兔抗伤寒鞭毛蛋白多克隆血清中提取IgG抗体。将免疫的小鼠脾细胞与P3-X63/Ag8鼠骨髓瘤细胞融合,经克隆选择获得4株稳定分泌抗伤寒菌鞭毛蛋白的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,即A1、C4、     

抗重组人骨唾液酸蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的研制重组人骨唾液酸蛋白(rhBSP)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法以纯化的rhBSP免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗rhBSP mAb;用亚型鉴定试剂条鉴定IgG亚类;ELISA鉴定mAb的特异性和效价。结果获得2株能稳定分泌特异性mAb的抗rhBSP的杂交瘤细胞系AHB1和AHB5,Ig亚类分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型,其效价分别为1×10-3和1×10-7。腹水mAb经Protein A亲和色谱柱纯化后,纯度达92%以上。结论获得抗rhBSP的mAb,为进一步研究BSP的生物学功能和用于临床诊断实验研究创造了条件。     

抗delta-like-1单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗delta-like-1的单克隆抗体并鉴定其特异性.方法 用delta-like-1多肽-BSA蛋白复合物作为免疫原免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗delta-like-1单抗的杂交瘤细胞株.用ELISA、Western blot、细胞免疫组化对此抗体特性进行鉴定.结果 筛选到两株能稳定分泌抗delta-like-1单抗的细胞株3H11C11A9E3和2D5D11F8F1,亚类鉴定两株均为IgG1,轻链为kappa链;ELISA法测定两株细胞腹水抗体效价分别为1∶4.096×105和1∶1.024×105,抗体亲和常数分别为3.98×107、3.28 × 107L·mol-1;Western blot显示此单抗能特异性识别神经胶质瘤细胞株U251中的天然delta-like-1蛋白;细胞免疫组化进一步显示delta-like-1分布于细胞核中.结论 成功制备了抗delta-like-1单克隆抗体,可为研究delta-like-1与脑胶质瘤等神经系统疾病的关系奠定基础.     

抗紫杉醇单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立

目的:制备抗紫杉醇单克隆抗体并建立间接ELISA检测方法。方法:用琥珀酸酐法将紫杉醇(taxol)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制成全抗原taxol-BSA,采用紫外波长扫描法和薄层层析检测法对合成抗原进行鉴定;以taxol-BSA免疫Blab/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0进行融合,经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的特异性进行鉴定;用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化腹水。同时,对间接ELISA法反应条件进行了优化。结果:获得了3株能稳定分泌抗紫杉醇单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为taxol-A1,taxol-A2和taxol-A3;taxol-A3株腹水效价为1∶128 000,属于IgG2b亚型;建立的间接ELISA法检测条件为15μg.mL-1抗原、4℃包被过夜、1%BSA封闭1 h,PBS做抗体稀释液,单抗反应时间为30 min,酶标二抗作用时间1 h,10%浓硫酸终止反应。结论:获得了特异性的抗紫杉醇单克隆抗体并建立了间接ELISA检测方法。本研究制备的抗紫杉醇单克隆抗体及建立的间接ELISA检测方法,为从内生真菌生物合成紫杉醇发酵液中迅速、高效地分离纯化和检测紫杉醇奠定了基础。     

抗人血小板单克隆抗体SZ-2和SZ-21的研究和应用

用杂交瘤技术在国内首次获得了14株分泌抗人血小板单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株,并将其中两株SZ-2,SZ 21应用于血小板生理和病理的研究。SZ-2单克隆抗体为IgG_1亚类,分子量150,000,PI5.7,只与正常人血小板及巨核细胞特异结合,其识别的抗原决定簇位于血小板膜糖蛋白I_b的α链。与血小板的结合位点数为1.52±0.41×10~4/血小板,KD为0.66±0.33     

肝癌组织γ-谷氨酰转移酶单克隆抗体制备及ELISA方法的建立

目的应用纯化的人肝癌组织中蔓陀罗凝集素(DSA)强结合的γ-谷氨酰转移酶(GGT)制备单克隆抗体(McAb),并建立ELISA检测方法。方法应用亲和色谱法纯化肝癌组织中DSA强结合的GGT;采用单克隆抗体技术获得其McAb;protein A-Sepharose亲和色谱法纯化McAb,过碘酸钠法标记HRP法后建立ELISA方法。结果获得5株能特异性识别DSA强结合GGT的McAb细胞株,其中3株细胞所分泌McAb具有较高的特异性,应用所获得McAb进行HRP标记后,建立的ELISA方法,其检测灵敏度为10μg/L,批内及批间平均变异系数为8.9%和11.5%。结论成功制备了DSA强结合的GGT McAb杂交瘤细胞系,并建立了ELISA免疫学检测方法,为临床应用打下基础。     

丙型肝炎病毒单克隆抗体的制备及其鉴定

目的：以基因工程表达的丙型肝炎病毒抗原蛋白（HCAg）为抗原，建立分泌单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞系．并对其分泌的McAh进行鉴定。方法：用纯化HCV基因工程表达抗原（HCAg）免疫Balb／c小鼠，取脾细胞及骨髓瘤细胞按常规方法融合、筛选、克隆化及腹水注射制备McAb。采用ELISA及分片断鉴定技术进行鉴定。结果：筛选出5株能稳定分泌特异性抗-HC的McAb杂交瘤细胞株，经多次复苏传代仍能稳定分泌抗体，特异性强，效价高。与不同抗原蛋白的ELISA反应呈特异性阳性反应。分片断鉴定结果显示，所获5株McAb主要为抗HCV核心蛋白和非结构蛋白NS3。结论：此5株丙肝杂交瘤细胞株分泌的抗体对丙肝抗原具有特异亲和性，为丙型肝炎病毒抗原诊断试剂的研制提供了关键技术基础。     

抗Ⅱ型单纯疱疹病毒表面抗原gD单克隆抗体的制备及鉴定

制备抗Ⅱ型单纯疱疹病毒(Simplex Herpes VirusⅡ,HSV-2)表面抗原gD的单克隆抗体(mAb)并对其性质进行鉴定。以基因工程重组制备纯化的HSV2-gD为抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规融合制备杂交瘤细胞,通过HAT选择培养、有限稀释法获得单克隆细胞株,用间接ELISA法、Western blot方法筛选和鉴定阳性杂交瘤细胞株。获得了4株可稳定分泌抗HSV2-gD抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1A11C6、1A11F10、4C9D5以及4C9E9,抗体的类型均为IgG1,轻链均为κ型,Western blot结果显示各单抗都可以特异性识别HSV2-gD。用杂交瘤细胞注射小鼠制备腹水,腹水内的抗体效价均大于1×10-5,腹水内的抗体经硫酸铵-辛酸分级沉淀和阴离子交换柱纯化,成功制备了纯度超过95%的高特异性抗体,抗体有较好的特异性。为进一步研究HSV2感染和临床上的预防、诊断及治疗提供了有力的工具。     

SARS冠状病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的:SARS 冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳蛋白 N(nucleocapsid protein)单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)的制备及鉴定。方法:用基因重组的 SARS-CoV N 蛋白免疫 BALB/c 小鼠制备 McAb,并采用间接 ELISA、免疫印迹法进行筛选和鉴定。结果:筛选出2株抗 SARS-CoV N 蛋白 McAb 杂交瘤细胞株,间接 ELISA 证实这组单克隆抗体仅与 SARS-CoV 产生特异性反应,而与其他病原体无交叉反应,IgG 亚类鉴定1株为 IgG1,另1株为 IgG2b。2株抗体亲和常数分别为4.14×10~(-9)和3.19×10~(-9)。结论:获得特异性针对 SARS-CoV 的单克隆抗体,为 SARS-CoV 早期诊断试剂的研制奠定了基础。     

2型猪链球菌谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗猪链球菌（Streptococcus suis,S.suis）谷氨酸脱氢酶（glutamate dehydrogen-ase,GDH）的单克隆抗体。方法分别以2型S.suis全菌细胞和重组GDH蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠;采用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选分泌抗GDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株并克隆化;免疫印迹（Western blot）鉴定GDH单克隆抗体的特异性;制备小鼠腹水并进行抗体效价测定。结果细胞融合后经ELISA筛选获得分泌的阳性细胞株,经过有限稀释克隆化筛选,获得4株能稳定分泌抗GDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单抗腹水的抗体效价均在1∶102400以上。结论本研究获得了4株能稳定分泌抗体且其分泌的抗体能够与GDH蛋白进行特异性反应的单克隆抗体细胞株,所获得特异性单克隆抗体能用于猪链球菌结构和功能的研究,也能够进一步用于猪链球菌感染血清学诊断方法研究。     

氯霉素单克隆抗体的制备与纯化

目的制备氯霉素(CAP)单克隆抗体。方法用人工合成抗原氯霉素-牛血清白蛋白(CAP-BSA)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按5∶1的比例融合,间接竞争ELISA法和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选;制备腹水抗体;采用HiTrap rProtein A FF亲和色谱柱纯化抗体,用间接竞争ELISA法和间接ELISA测定抗体特异性。结果得到两株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,细胞培养上清中抗体效价达10-4以上,腹水抗体效价达10-7以上,纯化后的单克隆抗体纯度达98%,回收率达80%,抗体活性好并且与BSA、甲砜霉素、磺二甲基嘧啶等无交叉反应。结论成功获得两株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,对动物性食品中CAP的检测具有较大的价值。     

抗人CDC7单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗人CDC7蛋白的单克隆抗体并鉴定其生物学特性.方法 以GST-CDC7为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞)融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗人CDC7单克隆抗体的杂交瘤细胞株.用间接ELISA,Western Blot,免疫细胞化学(ICC)对此抗体特性进行鉴定.结果 筛选到1株能稳定分泌抗人CDC7的细胞株1F7D2C9.亚类鉴定为IgG2a,轻链为kappa链,ELISA法鉴定该抗体腹水效价为1∶102 400,抗体亲和常数为1.558×109 L/mol,Western Blotting分析表明,此抗体能特异识别细胞株的天然CDC7蛋白质.免疫细胞化学进一步显示CDC7分布于细胞核中.结论 成功制备了抗人CDC7单克隆抗体,为研究CDC7与细胞癌变的关系建立了基础.     

单克隆抗体的制备、纯化和保存方法对其特异性的影响

将流感病毒NT68株所产生的血凝素作为抗原,通过杂交瘤技术获得38个亚克隆细胞株.其中各有10株分别分泌IgG_1、IgG_(2a)、IgG_(2b)、8株分泌IgM.杂交瘤细胞经组织培养或注入BALB/c小鼠腹腔制备单克隆抗体McAb.用同种病毒作血凝抑制(HI)试验测定抗体效价,用一组非同种病毒株作HI试验测定McAb的特异性和交叉反应性.McAb经以下物理处理:(1)温度:将腹水作1∶500～1∶2000系列稀释后,分别置62℃、10分钟;56℃、30分钟;37℃、1小时;20℃、16小时.并以     

抗前列腺干细胞抗原单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的　制备抗前列腺干细胞抗原 (PSCA)单克隆抗体 (McAb) ,并对其特性进行鉴定。方法　应用PC 3细胞免疫BALB/c小鼠 ,按常规方法融合并经间接ELISA方法筛选 ,制备稳定的抗PSCAMcAb ,并对McAb的亚型、组织特异性进行鉴定。结果　制备出抗PSCA单克隆抗体 ,免疫扩散鉴定为IgG1亚类 ,ELISA法测定其腹水效价为 5× 1 0 -5。组织学检查与前列腺癌组织呈阳性反应 ,与其他肿瘤组织均呈阴性反应 ,和人体正常组织细胞无一出现阳性反应。结论　初步制备出一株抗PSCA的单克隆抗体细胞株 ,能特异性识别前列腺癌组织 ,对前列腺癌的诊断和治疗提供有用的工具。