结核分枝杆菌MPT64抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答

目的研究结核分枝杆菌MPT64抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答。方法用表达MPT64的真核表达质粒pcDNA-M免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度和抗体亚类。分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,检测淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-12产生水平、流式细胞仪计CD4+细胞和CD8+细胞数、脾淋巴细胞特异性CTL杀伤效应。结果MPT64基因免疫可诱导小鼠高水平的体液免疫应答,免疫小鼠脾淋巴增殖显著,IFN-γ和IL-12含量增加,CD4+细胞和CD8+细胞百分比明显增加,CTL杀伤效应明显。结论MPT64 DNA疫苗可诱导小鼠有效的体液和细胞免疫应答,有可能作为新型TB疫苗的组分。     

恶性疟原虫富组氨酸蛋白2重组蛋白与真核表达质粒免疫特性的比较

目的　探讨以恶性疟原虫富组氨酸蛋白 2 (PfHRP2 )为基础的不同形式的侯选疫苗诱导小鼠免疫应答的特性 ,为包含HRP2的恶性疟红内期疫苗的研制提供实验依据。方法　用重组蛋白TP HRP2及真核表达质粒pcDNA3 1(- ) HRP2免疫BALB c小鼠 ,对抗体应答的动力学及特异性进行分析 ,取脾细胞进行体外增殖实验 ,用免疫血清进行P f.体外生长抑制实验。结果　重组蛋白TP HRP2加福氏佐剂诱导BALB c小鼠产生了高水平的抗体 ,其抗体产生快、持续时间久 ,并具较高的特异性 ,细胞应答被同期激活 ,免疫血清可明显抑制红细胞内发育期疟原虫。重组真核表达质粒pcDNA3 1(- ) HRP2诱导BALB c小鼠产生了较高水平和具有一定特异性的抗体 ,其抗体的产生需要多次免疫和较长时间 ,初始化的脾细胞对抗原再刺激的回忆应答显著 ,但免疫血清对疟原虫的体外生长没有抑制作用。结论　HRP2重组蛋白与真核表达质粒在小鼠具有较为不同的免疫特性 ,HRP2重组蛋白疫苗具有潜在的应用前景     

恶性疟原虫Pf12基因重组质粒DNA接种诱导小鼠的免疫应答

目的　观察重组质粒VR10 12 -Pf12DNA直接免疫接种诱导BALB/c小鼠所产生的免疫应答 ,分析Pf12基因的抗原性和作为疫苗抗原候选分子的可能性。方法　构建重组质粒VR10 12 -Pf12 ,直接免疫BALB/c小鼠 ,通过NK细胞杀伤活性、脾T淋巴细胞增殖水平、ELISA、体外抑虫试验测定 ,观察其诱导的细胞和体液应答以及体外抑虫效果。结果　重组质粒VR10 12 -Pf12免疫BALB/c小鼠 ,NK细胞杀伤活性、脾T淋巴细胞增殖水平明显高于对照组 (P <0 0 1) ,诱导小鼠产生的抗体水平明显增高 (P <0 0 1) ,免疫血清在体外能抑制恶性疟原虫的生长、发育。结论　重组质粒VR10 12 -Pf12DNA直接免疫接种诱导BALB/c小鼠产生一定水平的体液和细胞免疫应答 ,其免疫血清在体外对恶性疟原虫的生长、发育有明显的抑制作用。     

免疫佐剂增强乙型肝炎核心抗原核酸疫苗免疫应答的小鼠初步实验

目的 观察小鼠实验中免疫佐剂QS－21对乙型肝炎核心抗原（HBcAg)核酸疫苗免疫应答的增强作用。方法 基因枪轰击法接种HBcAg核酸疫苗或对照质粒,皮内注射法给予QS－21;间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠血清抗－HBc(IgG及IgG亚类）水平;^51 铬释 放法检 小鼠脾 细胞特异性CTL杀伤活性。结果 Balb/c和C57BL／6小鼠单用疫苗组和疫苗加QS－21组的血清抗－HBc 终点滴度均分别为1:328050和1:984150;两组的-HBc-I gG亚类均以IgG2a略占优势;当效：靶比为12：1时,Balb/c小鼠单用疫苗组和疫苗加QS－21组的特异性CTL杀伤活性分别为51.1%和63.6%;C57BL／6小鼠两组的CTL杀伤活性分别为53.1%和68.1%。结论 QS－21对HBcAg核酸疫苗所诱导的小鼠特异性抗体及CTL应答均有增强作用。     

重组质粒pcDNA3．1S2S／Fc在小鼠诱导免疫反应的观察

目的探讨S2S／Fc融合基因疫苗诱导小鼠HBV preS2S特异性体液和细胞免疫应答情况。方法取pcDNA3．1S2S/Fc、pcDNA3．1S2S＋pCMVsFc、pcDNA3．1S2S和空载体对照免疫BALB／c小鼠。在免疫动物2,4和6周后检测血清抗-HBs水平;在初次免疫7周后,测定免疫脾细胞的杀伤活性、增殖活性及细胞因子的分泌水平。结果经pcDNA3．1S2S／Fc免疫小鼠6周抗体滴度升至最高,免疫脾细胞的杀伤活性在效靶比为20：1时最高,免疫脾细胞的增殖活性以及IL-2和IFN-γ的分泌水平均比对照组明显增高。结论S2S／Fc融合基因在小鼠能诱导很强的特异性体液和细胞免疫应答。     

西尼罗病毒多表位基因免疫保护研究

目的探讨西尼罗病毒多表位基因诱导体液及细胞免疫的可行性及其免疫攻毒保护作用。方法将西尼罗病毒多抗原表位基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-M。通过脂质体转染法将该多表位基因导入BHK细胞中,采用RT-PCR和IFA检测其在细胞内的瞬时表达。将重组质粒通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠,通过间接免疫ELISA法、CTL杀伤功能检测和淋巴细胞增殖试验等,检测小鼠体内特异性体液免疫和细胞免疫的水平。在此基础上进行攻毒试验,分析重组质粒DNA对西尼罗病毒攻击的免疫保护作用。结果重组质粒pcDNA3.1-M能够在真核细胞内表达,采用IFA方法能在细胞内检测到西尼罗病毒特异性抗原。在抗原的刺激下,免疫后的小鼠脾淋巴细胞增殖显著,可诱导特异性CTL应答反应。攻毒试验显示,重组多表位基因能够对西尼罗病毒的攻击起到一定的保护作用,达到50%,中和抗体效价达到1∶50,应用免疫佐剂或应用重组蛋白加强免疫后,其保护率为62.5%,中和抗体效价达到1∶90。结论西尼罗病毒多表位基因可诱发特异性免疫应答,对西尼罗病毒感染具有保护作用,为其基因疫苗研制提供了一定的实验依据。     

重组SARS病毒M蛋白的免疫效应研究

目的 检测SARS冠状病毒重组M蛋白疫苗诱导小鼠的免疫应答能力。方法 PCR扩增M蛋白基因，构建至原核表达质粒pET-23a，pET-23a-M重组质粒转化BL21（DE3）宿主菌，诱导表达蛋白经SDSPAGE、免疫印迹分析和纯化后免疫BALB／c小鼠，3次免疫后测定免疫功能，进行免疫效果评价。结果 成功构建pET-23a—M重组质粒，转化宿主菌后诱导表达27kuM蛋白。检测M蛋白免疫鼠体内有特异性抗体产生，抗体效价达1，10^4；脾脏CD8^＋比例升高，CD4^＋／CD8^＋比值下降；免疫鼠血清IFN-y／和IL-4水平无显著变化。结论 SARS病毒重组M蛋白疫苗能诱导BAI。B／c小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫应答。     

恶性疟原虫复合抗原DNA疫苗诱导小鼠的细胞免疫及体液免疫应答

目的 观察用恶性疟原虫复合抗原基因HGFSP构建的DNA疫苗pc-HGFSP免疫小鼠诱导的细胞及体液免疫应答。方法 用pc-HGFSP肌注免疫C57BL／6小鼠并加强免疫2次，取小鼠脾淋巴细胞及血清测定；脾淋巴细胞增殖活性（MTT）法，NK细胞活性和CTL活性（LDH）；脾脏CD4^ 及CD8^ T细胞亚群（免疫荧光法）：血清pc-HGFSP批原特异性抗体（ELISA法）及一氧化氮（NO）含量。结果 与pcDNA3对照比较，pc-HGFSP免疫小鼠脾淋巴细胞增殖活性增高24％－37％；NK细胞活性增高38％－90％；CTL活性增高65％－153％；CD8^ T细胞亚群增加。免疫血清产生HGFSP抗原特异性IgG抗体；NO含量也有所增高。结论 恶性疟DNA疫 pc-HGFSP有一定的诱导小鼠细胞免疫和体液免疫应答的作用。     

布氏杆菌BCSP_(31)/pVAX1重组表达质粒的构建及其免疫保护效果的研究

目的构建布氏杆菌BCSP31/pVAX1重组表达质粒,免疫BALB/c小鼠,观察其免疫应答及免疫保护效果。方法克隆BCSP31基因,构建BCSP31/pVAX1重组表达质粒。转染COS7细胞,免疫组化检测其BCSP31蛋白抗原的表达。BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉注射免疫BALB/c小鼠,观察特异性体液免疫和细胞免疫效果。进一步用1.25×104布氏杆菌A544强毒株腹腔攻毒,观察BCSP31/pVAX1重组表达质粒的免疫保护效果。结果扩增的BCSP31保护性抗原基因片断在牛、羊和猪布氏杆菌株中具有高度保守性,构建的BCSP31/pVAX1重组表达质粒在COS7细胞有目的蛋白抗原的表达。制备的BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉免疫BALB/c小鼠4次,ELISA检测BCSP31/pVAX1重组表达质粒产生了较高水平的特异性IgG抗体,并随免疫次数增加抗体的滴度也递增,且抗体亚型以IgG2a为主,表明主要引起Th1型的免疫应答。FCM检测BCSP31/pVAX1重组表达质粒的CD4+/CD8+比值明显下降,说明激发了显著的CTL效应。MTT测定BCSP31/pVAX1重组表达质粒的淋巴细胞增殖能力与对照组比较差异显著。布氏杆菌A544强毒株攻毒后,动物存活及脾组织细菌数与对照组比较有显著性差异,说明BCSP31/pVAX1重组表达质粒能够产生有效的保护效果。结论研制的BCSP31/pVAX1重组表达质粒免疫BALB/c小鼠能产生高水平的特异性体液免疫和细胞免疫,以细胞免疫为主,并产生有效的免疫保护效果,为布氏杆菌病新型疫苗的研究奠定了基础。     

表达丙型肝炎病毒非结构蛋白3的重组腺病毒免疫小鼠的研究

目的构建表达HCV非结构蛋白3（NS3）的重组腺病毒RAd／NS3，探讨其免疫小鼠后诱导机体产生特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增编码NS3蛋白（329～935位氨基酸）的基因片段，定向克隆至重组腺病毒AdEasy-1系统的穿梭质粒pAdTrack-CMV上，与腺病毒基因组质粒pAdEasy-1共转化BJ5183菌，利用细菌内同源重组获得重组腺病毒质粒，转染293细胞，以包装、扩增重组腺病毒。将重组腺病毒以1×10^8 pfu剂量经皮下注射免疫BALB／c小鼠，并以100μg重组质粒pRC／NS3经肌内注射途径免疫小鼠为对照。ELISA法检测免疫小鼠血清抗体水平，^51 Cr释放法检测免疫小鼠细胞毒性T淋巴细胞体外杀伤功能。结果重组腺病毒经皮下免疫小鼠后可刺激机体产生较强的特异性体液免疫应答和细胞免疫应答，且免疫效果强于重组质粒pRC／NS3组，初次免疫后2周，前者20只小鼠抗-HCV全部阳转，而后者10只小鼠仅3只阳转，未观察到明显的不良反应。结论表达HCV NS3抗原的重组腺病毒载体疫苗能够诱导机体产生有效的体液和细胞免疫应答。     

丙型肝炎病毒基因疫苗的构建物的实验研究

目的 探讨丙型肝炎病毒基因疫苗诱发小鼠免疫反应,为进一步开展ＨＣＶ基因疫苗研制奠定基础。方法 将编码ＨＣＶ－Ⅱ型结构蛋白基因片段插入真核细胞表达载体ｐＣＤ－ＳＲ１中,形成基因疫苗构建物ｐＣＤ－ＨＣＶ１。从股四头肌免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,用ＥＬＩＳＡ和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测免疫鼠抗体反应和外周血单个核细胞对ＨＣＶ抗原的增殖反应。     

Immunogenicity and immunoprotection of recombinant PEB1 in Campylobacter-jejuni-infected mice

AIM： To construct a prokaryotic expression vector carrying Campylobacterjejuni peblA gene and express it in Escherichia coli. Immunoreactivity and antigenicity of rPEB1 were evaluated. The ability of rPEB1 to induce antibody responses and protective efficacy was identified. METHODS： peblA gene was amplified by PCR, target gene and prokaryotic expression ptasmid pET28a （＋） was digested with BamHI and XhoI, respectively. DNA was ligated with T4 DNA ligase to construct recombinant plasmid pET28a（＋）-peblA. The rPEB1 was expressed in E. coli BL21 （DE3） and identified by SDS-PAGE. BALB/c mice were immunized with rPEBI. ELISA was used to detect the specific antibody titer and MTT method was used to measure the stimulation index of spleen lymphocyte transformation. RESULTS： The recombinant plasmid pET28a （＋）-peblA was correctly constructed. The expression output of PEB1 protein in pET28a （＋）-peblA system was approximately 33% of total proteins in E. coil The specific IgG antibody was detected in serum of BALB/c mice immunized with rPEB1 protein. Effective immunological protection with a lower sickness incidence and mortality was seen in the mice suffering from massive C. jejuni infection. CONCLUSION： rPEB1 protein is a valuable candidate for C. jejuni subunit vaccine.     

丙型肝炎病毒核心基因免疫诱生细胞免疫应答研究

目的 研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心（Ｃ）基因免疫在诱生特异性细胞免疫应答中的作用。方法 将包含ＨＣＶ Ｃ基因片段的重组真核表达质粒ｐｃＣＮＡ ＨＣＶ Ｃ,在主宰其可以在小鼠骨髓瘤ＳＰ２／０（Ｈ－２^d）中表达之后,注射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠股四头肌。ＥＬＩＳＡ法检测血清中抗体水平;^3Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定免疫小鼠脾细胞特异性增殖能力;^51Ｃｒ释放法检测免疫小鼠细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬｓ）体外杀伤功能。结     

日本脑炎病毒DNA疫苗和基因工程亚单位颗粒疫苗的动物保护实验研究

目的　评价 3种日本脑炎病毒 (JEV)新型疫苗 ,即E蛋白病毒样颗粒 (VLPs)、DNA疫苗 (pV/JE)以及E蛋白颗粒 (Eps)的动物免疫效果。方法　BALB/c小鼠经 2次接种疫苗后 ,测定其病毒特异性的CTL活性、结合抗体、中和抗体 ,并以10LD5 0JEV攻击免疫小鼠 ,观察其保护效果。结果　各新型疫苗组的CTL活性为 33%～ 5 6 % ,灭活疫苗组为 2 2 % ,而载体和PBS对照组的CTL活性分别为 17%和 18%。一次免疫后 ,实验组小鼠血清结合抗体阳转率为 90 %。除DNA疫苗组外 ,各组小鼠的二次免疫血清抗体效价高于一次免疫的抗体效价 (P <0 0 5 ) ,且以VLPs加佐剂组小鼠血清抗体效价最高 ,Eps加佐剂组次之 ,均高于 pV/JE组和灭活疫苗组 (P <0 0 5 )。三种疫苗可诱发小鼠产生中和抗体。各实验组小鼠能够抵抗JEV的攻击 ,而对照组小鼠的死亡率为 37 5 %。结论　三种新型疫苗可以正确表达JEV的E蛋白表位 ,可诱发免疫小鼠产生抗JEV的中和抗体并有保护性作用 ,免疫效果优于灭活疫苗 ,有可能成为候选的JEV新型疫苗。     

弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗免疫小鼠诱导体液免疫应答及保护性的初步观察

目的观察弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗免疫BALB/c小鼠诱导其体内产生的体液免疫应答及抗虫感染的免疫保护作用. 方法重组质粒pBK-P30用生理盐水稀释后,肌注免疫BALB/c小鼠.分别于免疫后5周和10周,ELISA测定IgG抗体滴度;取免疫鼠的血液、肺、心脏、肝脏、脾、肾脏及肌肉PCR扩增P30基因;免疫鼠腹腔注射弓形虫速殖子攻击感染.结果两次检测,均可测到特异性IgG抗体,且抗体的滴度随免疫时间的延长而增高;免疫后5周,免疫鼠的上述组织均可扩增出P30基因条带,但免疫后10周仅血液扩增出特异P30基因条带;弓形虫速殖子腹腔攻击感染,免疫组鼠的平均存活时间较对照组鼠延长,但统计学差异不显著(P＞0.05). 结论弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗能诱导BALB/c小鼠产生特异性体液免疫应答及部分抗虫免疫保护作用.     

抗斯氏按蚊中肠蛋白组分的抗体对约氏疟原虫卵囊的作用

目的 观察抗斯氏按蚊中肠蛋白组分的抗体对约氏疟原虫卵囊的抑制作用。 方法 解剖实验室饲养斯氏按蚊雌蚊，取中肠（胃）制备中肠蛋白抗原并免疫BALB/c小鼠（8只， 100 μg/只)， 共免疫4次， 每次间隔7～10 d，末次免疫后10 d，腋窝动脉取血，分离血清。用蛋白质印迹（Western blotting）分析中肠蛋白的免疫活性抗原。用葡聚糖凝胶过滤法获得相对分子质量（Mr）为38 000~50 000的蛋白。用该中肠蛋白免疫小鼠（12只， 100 μg/只)， 共免疫4次，每次间隔7~10 d。同时设PBS对照组。末次免疫后7 d，ELISA检测小鼠血清中的抗体，抗体效价≥1 : 2 560时，该免疫组小鼠和对照组小鼠经腹腔接种感染约氏疟原虫（约含2×10⁷个感染疟原虫的红细胞），感染后3 d取小鼠尾血镜检，雌配子体数＞2/10个视野的小鼠作为供血鼠，斯氏按蚊成蚊吸血后9 d解剖，计数中肠的卵囊数量。 结果 Western blotting显示斯氏按蚊中肠蛋白抗原的显色区带有8条，其中Mr 38 000~50 000的区带显色较清晰；实验组和对照组中肠卵囊感染率分别为28.70%（62/216）和51.09%（47/92）（P＜0.05），中肠卵囊指数分别为14.14（1 541/109）和26.02（1 223/47），两者差异有统计学意义（P＜0.01）。 结论 斯氏按蚊Mr 38 000~50 000中肠蛋白有免疫活性；针对该中肠蛋白的抗体对约氏疟原虫卵囊的发育有明显的抑制作用。     

Immunogenicety and immunoprotection of recombinant PEB1 in Campylobacter-jejuni-infected mice

AIM: To construct a prokaryotic expression vector carrying Carnpylobacter jejuni peb1A gene and express it in Escherichia coli. Immunoreactivity and antigenicity of rPEB1 were evaluated. The ability of rPEB1 to induce antibody responses and protective efficacy was identified. METHODS: peb1A gene was amplified by PCR, target gene and prokaryotic expression plasmid pET28a (+) was digested with BamHI and XhoI, respectively. DNA was ligated with T4 DNA ligase to construct recombinant plasmid pET28a(+)-peb1A. The rPEB1 was expressed in E. coli BL21 (DE3) and identified by SDS-PAGE. BALB/c mice were immunized with rPEB1. ELISA was used to detect the specific antibody titer and MTT method was used to measure the stimulation index of spleen lymphocyte transformation. RESULTS: The recombinant plasmid pET28a (+)-peb1A was correctly constructed. The expression output of PEB1 protein in pET28a (+)-peb1A system was approximately 33% of total proteins in E.coli The specific IgG antibody was detected in serum of BALB/c mice immunized with rPEB1 protein. Effective immunological protection with a lower sicknessincidence and mortality was seen in the mice suffering from massive C. jejuni infection. CONCLUSION: rPEB1 protein is a valuable candidate for C. jejuni subunit vaccine.     

结核分枝杆菌休眠相关抗原Rvl733cDNA疫苗的构建及免疫学特性研究

目的 构建结核分枝杆菌（Mtb）休眠相关抗原Rv1733c的真核表达载体,并评价其作为DNA疫苗的免疫学特性。 方法 利用限制性酶切的方法从本室前期保存的pMD-18T-Rv1733c质粒中构建Rv1733c的真核表达载体pcDNA-Rv1733c。将pcDNA-Rv1733c重组质粒稳定转染P815细胞,并用间接免疫荧光法检测Rv1733c的表达。采用数字表法随机将BALB/c小鼠分为3组,每组10只,即pcDNA-Rv1733c质粒DNA组、生理盐水组和BCG组。pcDNA-Rv1733c质粒DNA组和生理盐水组采用肌内注射方式免疫,间隔2周免疫1次,共免疫3次。BCG组采用皮下免疫一次。各组小鼠每2周采血,ELISA检测血清中特异性抗体水平和IgG2a/IgG1抗体亚类比率与比值。初次免疫8周后,MTS［3-(4,5-diethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-etrazolium,inner salt］（四氮唑蓝盐化合物）法检测小鼠脾淋巴细胞特异性增殖、ELISPOT检测脾淋巴细胞分泌IFN-γ的水平。流式细胞法检测脾淋巴细胞中CD4⁺和CD8⁺ T细胞所占比率;LDH法检测CTL（cytotoxic T lymphocytes;细胞毒性T淋巴细胞）活性。 结果 成功构建Rv1733c的真核表达载体pcDNA-Rv1733c。间接免疫荧光实验表明pcDNA-Rv1733c质粒稳定转染的P815细胞中能够稳定表达Rv1733c蛋白。pcDNA-Rv1733c质粒DNA免疫小鼠后能诱导小鼠产生特异性抗体,抗体亚类以IgG2a为主,随着免疫时间的延长,IgG2a/IgG1的比值趋于平衡;脾淋巴细胞增殖指数（2.00±0.36）高于BCG组（1.1±0.06）（t=3.096,P<0.05）;特异性分泌IFN-γ的脾淋巴细胞频数(41.48±5.30) SFC/10⁶高于生理盐水组（2.75±1.37）SFC/10⁶（t=4.752,P<0.05）;然而脾淋巴细胞中CD4⁺、CD8⁺ T细胞所占比率［分别为(18.15±2.30)%、(7.68±1.34)%］、CTL杀伤活性［(29.52±1.96)%］都与生理盐水组相当［(16.43±2.02)% (t=0.571,P>0.05)、(7.32±0.42)% (t=0.234,P>0.05)、（25.28±2.51）%（t=0.726,P>0.05）］。 结论 成功构建Rv1733c真核表达载体pcDNA-Rv1733c;并能够诱导小鼠机体产生特异性的体液和细胞免疫应答,提示用于结核病新型疫苗的研究具有一定的意义。     

HBV基因疫苗联合抗原蛋白免疫小鼠的研究

目的构建乙肝病毒（ＨＢＶ）基因疫苗,观察其与ＨＢＶ表面抗原蛋白（ＨＢｓＡｇ）联合免疫小鼠诱导的免疫应答．方法构建重组真核表达质粒ｐＣＲ３１Ｓ作为ＨＢＶ基因疫苗,联合应用纯ＨＢｓＡｇ蛋白免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,以单用基因疫苗ｐＣＲ３１Ｓ或纯蛋白ＨＢｓＡｇ免疫小鼠作为对照组．采用ＥＬＩＳＡ法检测免疫小鼠血清抗ＨＢｓ,另取免疫小鼠脾细胞,用３ＨＴｄＲ掺入法测定各组免疫小鼠的淋巴细胞增殖活性．结果２,４ｗｋ时联合免疫组抗ＨＢｓ效价低于纯蛋白免疫组,高于基因疫苗免疫组;６ｗｋ后基因疫苗免疫组抗ＨＢｓ效价升至最高,联合免疫组次之．３ＨＴｄＲ掺入法测定显示,各组免疫小鼠的淋巴细胞增殖反应差异不显著．结论乙肝病毒基因疫苗与表面抗原蛋白联合免疫无优势．     

Elevated soluble MUC1 levels and decreased anti-MUC1 antibody levels in patients with multiple myeloma

Soluble MUC1 (sMUC1) levels are elevated in many MUC1(+) cancers. We and others have shown that MUC1 is expressed on multiple myeloma (MM) plasma cells and B cells. In this study, we measured sMUC1 levels in bone marrow (BM) plasma from 71 MM patients and 21 healthy donors (HDs), and in peripheral blood (PB) plasma from 42 MM patients and 13 HDs using an immunoassay that detects the CA27.29 epitope of MUC1. sMUC1 levels were found to be significantly greater (mean 31.76 U/mL, range 5.69 to 142.48 U/mL) in MM patient BM plasma versus HD BM plasma (mean 9.68 U/mL, range 0.65 to 39.83 U/mL) (P <. 001). Importantly, BM plasma sMUC1 levels were related to tumor burden because sMUC1 levels were significantly higher for MM patients with active disease (34.62 U/mL, range 5.69 to 142.48 U/mL) versus MM patients with minimal residual disease (16.16 U/mL, range 5.7 to 56.68 U/mL) (P =.0026). sMUC1 levels were also elevated in the PB plasma of MM patients (32.79 U/mL, range 4.15 to 148.84 U/mL) versus HDs (18.47 U/mL, range 8.84 to 42.49) (P =.0052). Lastly, circulating immunglobulin M (IgM) and IgG antibodies to MUC1 were measured in 114 MM patients and 31 HDs, because natural antibodies to MUC1 have been detected in patients with other MUC1-bearing malignancies. These studies demonstrated lower levels of circulating IgM (P <.001) and IgG (P =.078) antibodies to MUC1 in MM patients compared with HDs. Our data therefore show that in MM patients, sMUC1 levels are elevated and correlate with disease burden, whereas anti-MUC1 antibody levels are decreased.