米非司酮对卵巢癌细胞的增敏作用及其机制的研究

目的研究米非司酮对卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP的增敏作用及其作用机制。方法用卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP和敏感细胞系COC1为实验对象,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测米非司酮对COC1/DDP细胞的增敏作用,流式细胞仪检测米非司酮对凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。结果1.25μmol/L的米非司酮能够增强COC1/DDP对顺铂的敏感性,并使Bcl-2的阳性率从(23.80±0.44)%下降至(19.40±0.69)%(P=0.000),Bax从(12.75±0.25)%上升至(25.60±0.88)%(P=0.000),其逆转作用有剂量依赖性。结论米非司酮逆转卵巢癌COC1/DDP细胞对顺铂的耐药可能与下调Bcl-2的表达、上调Bax的表达、降低Bcl-2/Bax的比率有关。     

川芎嗪对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的逆转作用研究

目的建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP,探讨川芎嗪对COC1/DDP顺铂耐药性的逆转作用及其机制。方法采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP;CCK-8(cell counting kit-8)检测川芎嗪对COC1/DDP细胞顺铂耐药性的逆转作用;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内GSH的水平,高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果历时5个月建立了在1.0μg/mL DDP作用下生长良好的耐药细胞株COC1/DDP,耐药指数为9.44,对卡铂、长春新碱和阿霉素有不同程度的交叉耐药性;川芎嗪0.25 mg/mL对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到3.76倍;与COC1比较,COC1/DDP细胞内GSH水平增高,顺铂含量下降,但经川芎嗪0.25 mg/mL干预后,COC1/DDP胞内的GSH水平降低,顺铂的含量增加(P<0.01)。结论川芎嗪对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,其机制可能与干预COC1/DDP细胞内GSH/GST-π解毒系统,增加细胞内顺铂的含量有关。     

顺铂诱导的人卵巢癌多药耐药细胞系基因表达谱分析

目的卵巢癌多药耐药性的产生是导致其化疗失败的主要原因,为研究卵巢癌耐药机制,本研究建立了人卵巢癌细胞多药耐药模型COC1/DDP,并进行了基因表达谱分析。方法以顺铂为诱导剂,采用中等剂量、间歇作用法建立多药耐药细胞系COC1/DDP,然后以其亲本细胞COC1为对照,应用cDNA微阵列检测COC1/DDP细胞的基因表达。结果与COC1细胞相比,COC1/DDP细胞对顺铂有6.2倍耐药性,细胞倍增时间延长了8.9h,S期细胞减少了(27.4±2.13)%,而G1和G2期细胞则分别增加了(19.6±3.71)%和(8.3±1.95)%,对阿霉素、5-氟脲嘧啶和长春新碱也有明显的交叉耐药性。较之COC1亲本细胞,COC1/DDP细胞有143个基因的表达水平发生改变,表达上调的有71个基因,表达下调的有72个基因,包括大量的凋亡和抗凋亡基因、信号转导和细胞周期调节基因、DNA转录与修复基因以及蛋白激酶和磷酸酶基因。结论COC1/DDP细胞具有多药耐药的特性,耐药性的产生与其特异的基因表达谱有关。     

姜黄素对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的增敏作用及其机制的研究

目的:探讨姜黄素对卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP的增敏作用并探讨其机制.方法:采用MTT法检测姜黄素对COC1/DDP细胞的增敏作用;用流式细胞仪检测单用顺铂、单用姜黄素、顺铂与姜黄素合用作用于COC1/DDP细胞48 h后的细胞凋亡率;Western blot法检测单用顺铂及顺铂与姜黄素合用后各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达.结果:姜黄素浓度在15～35 μmol/L以内时以一定的剂量-效应关系对COC1/DDP有明显的增殖抑制作用.顺铂的浓度在1.25～5 mg/L时加入20 μmol/L姜黄素后耐药细胞生存率下降明显(P＜0.05),尤以2.5 mg/L顺铂和20 μmol/L姜黄素联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;COC1/DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂及单用姜黄素相比,凋亡率明显增加(P＜0.05);顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Survivin蛋白的表达明显降低(P＜0.05),Caspase-3蛋白的表达明显增高(P＜0.05).结论:姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,其机制可能与降低Bcl-2、Survivin蛋白的表达,增加Caspase-3蛋白的表达有关.     

中药活性成分雷公藤红素通过抑制Bcl-w的表达逆转宫颈癌细胞的顺铂耐药

目的：研究中药活性成分雷公藤红素是否能逆转耐药宫颈癌细胞株Hela/R对顺铂的耐药性并探讨其机制。方法：采用顺铂梯度暴露法构建顺铂耐药宫颈癌细胞株Hela/R;采用MTT法检测雷公藤红素是否能增强顺铂对Hela/R的杀伤活性;Western blot试验检测常规Hela细胞及Hela/R细胞Bcl-2, Bcl-w及Bcl-xl的表达水平;采用流式细胞术检测雷公藤红素联合顺铂对Hela/R细胞的凋亡诱导效应及对线粒体膜电位的影响。结果：不同浓度顺铂对Hela及Hela/R细胞的细胞活力抑制率如下：1μmol/L顺铂组: 18.6±1.5 (Hela), 1.9±1.0 (Hela/R); 2μmol/L顺铂组: 23.9±2.4 (Hela), 3.1±1.2 (Hela/R); 4μmol/L顺铂组: 47.8±3.9 (Hela), 6.8±1.5 (Hela/R); 8μmol/L顺铂组: 63.4±5.4 (Hela), 11.6±1.8 (Hela/R); 16μmol/L顺铂组: 72.7±5.9 (Hela), 20.4±2.0 (Hela/R); 32μmol/L顺铂组: 85.7±6.7 (Hela), 41.2±3.3 (Hela/R); 64μmol/L顺铂组: 91.8±7.9 (Hela), 55.8±4.3 (Hela/R)。雷公藤红素联合顺铂对Hela/R细胞的细胞活力抑制率如下: 雷公藤红素组: 6.6±1.1; 10μmol/L顺铂组: 12.4±1.2; 20μmol/L顺铂组: 27.8±1.9; 40μmol/L顺铂组: 45.2±3.1; 10μmol/L顺铂+雷公藤红素组: 57.2±3.9; 20μmol/L顺铂+雷公藤红素组: 71.4±5.1; 40μmol/L顺铂+雷公藤红素组: 84.8±6.8。Hela及Hela/R细胞Bcl-2抗凋亡蛋白家族成员的相对表达水平如下: Bcl-2/β-actin: 37.9±1.8 (Hela), 41.4±2.1 (Hela/R); Bcl-xl/β-actin: 32.1±1.9 (Hela), 30.2±1.7 (Hela/R); Bcl-w/β-actin: 22.1±1.3 (Hela), 70.9±4.9 (Hela/R)。雷公藤红素显著增强顺铂对Hela/R细胞线粒体膜电位的损伤,促进细胞色素C的释放,进而诱导Hela/R细胞发生凋亡。结论：雷公藤红素通过抑制Bcl-w的功能促进顺铂对耐药宫颈癌细胞的凋亡诱导效应。     

不同存在形式人卵巢癌细胞株的细胞内顺铂浓度测定

目的　了解人卵巢癌细胞株COC1及其耐药亚株COC1/DDP以多细胞团簇形式和单细胞形式存在的细胞内顺铂浓度的差异 ,探讨细胞存在形式在COC1/DDP耐药中的作用。方法　选用半贴壁生长的人卵巢癌细胞株COC1及其耐药亚株COC1/DDP ,应用常规继代培养法获取多细胞团簇 ,对照组用相应的单细胞悬液 ,高效液相色谱测定细胞内顺铂浓度。结果　顺铂作用 2h后COC1单细胞悬液和多细胞簇的胞内浓度分别是 (11.2 0 6 2 7± 1.340 6 )ng/10 6细胞和 (11.14 78± 1.176 2 )ng/10 6细胞 ,无统计学差异 (P >0 .0 5 ) ,COC1/DDP分别为 (5 .2 835± 0 .772 8)ng/10 6和 (4 .86 83± 1.0 380 )ng/10 6细胞 ,无统计学差异 (P >0 .0 5 ) ,同种存在形式的两种细胞间比较有统计学差异 (P <0 .0 1) ,前者分别为后者的 2 .1倍和 2 .3倍 ,而两种存在形式的细胞COC1与COC1/DDP细胞内顺铂浓度的差值经比较亦未发现统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论　相同浓度药物作用下COC1细胞内顺铂浓度高于COC1/DDP细胞 ,细胞存在形式不是影响细胞内顺铂浓度的主要因素     

TRAIL联合顺铂诱导卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡机制的研究

目的:研究TRAIL联合顺铂对卵巢癌耐药细胞COC1/DDP生长的影响,以及联合用药对TRAIL死亡受体(DR4、DR5)、凋亡相关基因Smac、Survivin表达的影响,揭示TRAIL联合顺铂可能逆转COC1/DDP细胞耐药性的机制。方法:采用MTT法检测不同浓度TRAIL蛋白与DDP联合用药对COC1/DDP细胞生长的影响,用Annexin V-FITC法检测COC1/DDP细胞凋亡,用RT-PCR方法检测DDP对TRAIL受体(DR4、DR5)、凋亡相关基因Smac、Survivin表达。结果:TRAIL蛋白对COC1/DDP细胞生长有抑制作用,DDP与TRAIL蛋白联合作用后细胞生长抑制率显著升高(P0.05)。DDP使COC1/DDP细胞的DR5表达水平显著增强,为正常对照组的3.45倍(P0.001);Smac表达为对照组的2.82倍(P0.001);DR4水平无明显变化;Survivin表达较对照组显著减少(P0.001)。结论:TRAIL蛋白对COC1/DDP细胞生长有抑制作用,DDP与TRAIL联合增强了对COC1/DDP细胞生长抑制;TRAIL逆转COC1/DDP细胞对DDP的耐药性可能与DDP导致TRAIL受体DR5水平升高、Smac表达增加,通过线粒体途径促进了肿瘤细胞的凋亡有关。     

米非司酮对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP增敏作用研究

目的探讨米非司酮对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的增敏作用。方法采用RPMI1640培养液对COC1/DDP细胞株进行培养,实验分2批进行,第一批将COC1/DDP细胞株分5组:对照组(不加任何药物)、顺铂组(2μg/ml)、高剂量米非司酮组(15μg/ml)、中剂量米非司酮组(10μg/ml)、低剂量米非司酮组(5μg/ml);第二批将COC1/DDP细胞株分5组:对照组(不加任何药物)、顺铂组(2μg/ml)、高剂量米非司酮加顺铂组(15μg/ml米非司酮和2μg/ml顺铂)、中剂量米非司酮加顺铂组(10μg/ml米非司酮和2μg/ml顺铂)、低剂量米非司酮加顺铂组(5μg/ml米非司酮和2μg/ml顺铂)。培养结束后采用MTT法观察各组COC1/DDP细胞株增殖活力和生存率的变化。结果与对照组比较,顺铂组和低剂量米非司酮组对细胞增殖活力的影响,差异均无统计学意义(P>0.05);随着米非司酮浓度的升高,对COC1/DDP细胞抑制作用逐渐增强,中、低剂量米非司酮组与顺铂组比较细胞增殖活力和生存率差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),高剂量组与低剂量组比较有统计学意义(P<0.01);各剂量米非司酮加顺铂组与顺铂组比较对细胞增殖活力和生存率的影响,差异有统计学意义,且随着米非司酮浓度的升高,对COC1/DDP细胞抑制作用逐渐增强(P<0.05或P<0.01)。结论单药米非司酮和联合顺铂对COC1/DDP细胞增殖活力均具有显著抑制作用,米非司酮可提高顺铂化疗的敏感性,且与米非司酮的浓度呈剂量依赖关系。     

切除修复交叉互补基因表达与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的:探讨卵巢癌细胞系COC1、COC1/DDP、A2780、A2780/DDP中切除修复交叉互补基因(ERCC1)表达与顺铂耐药的关系.方法:采用RT-PCR方法检测4种卵巢癌细胞系中ERCC1基因的表达,MTT检测各细胞系对顺铂的敏感性.结果:4种细胞系中均有ERCC1基因表达,耐药细胞中的表达量明显高于敏感细胞(P＜0.05).DDP作用于COC1、COC1/DDP细胞72小时后,随着ERCC1基因表达的升高,细胞对顺铂的耐药性增加.结论:卵巢上皮性癌细胞系中ERCC1基因表达的升高与卵巢癌顺铂耐药相关.     

功能蛋白在氯化镧逆转卵巢癌顺铂耐药中的差异表达分析

目的 从蛋白质水平研究氯化镧对人卵巢癌顺铂耐药细胞(COC1/DDP)功能蛋白表达的影响,为探讨氯化镧逆转卵巢癌顺铂耐药的机制提供实验依据.方法 取对数生长期COC1/DDP细胞分为4组,对照组只加入10%胎牛血清培养基培养,顺铂组加入23.08 μg/mL顺铂,氯化镧组和氯化镧+顺铂组分别加入1.5 μmol/L氯化镧,处理8 h后氯化镧+顺铂组加入23.08 μg/mL顺铂.采用蛋白印迹(Western blot)技术检测顺铂和氯化镧分别作用于COC1/DDP后,4组中ERCC1、Ki67、CDK6、HDAC2、c-Cbl和微管末端结合蛋白1(EB1)6种功能蛋白的表达变化.结果 与对照组相比,COC1/DDP的4种功能蛋白ERCC1、Ki67、CDK6、c-Cbl在顺铂组和顺铂+氯化镧组中表达显著下调,差异有统计学意义(P<0.05);且顺铂+氯化镧组较顺铂组表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05).与对照组比较,顺铂组中HDAC2和EB1表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05);顺铂+氯化镧组与顺铂组、氯化镧组中表达比较有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 氯化镧可能通过多种途径下调ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl表达,从而介导逆转卵巢癌顺铂耐药.     

米非司酮对卵巢癌细胞2的增敏作用及其机制的研究

OBJECTIVE: To observe the effect of mifepristone in enhancing chemosensitivity of drug-resistant ovarian cancer cell line to cisplatin and investigate its mechanism. METHODS: Human ovarian cancer cell lines COC1 (DDP-sensitive) and COC1/DDP (DDP-resistant) were incubated with or without mifepristone. The proliferation rate of the cells was determined by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay and positive expression of apoptosis-associated proteins Bcl-2 and Bax were observed by means of flow cytometry. RESULTS: It was observed that mifepristone at the dose of 1.25 micromol/L reversed the resistance of COC1/DDP cells to cisplatin, and Bcl-2 protein expression was deceased from (23.8067+/-0.4382)% to (19.3967+/-0.6866)% (P=0.000) while Bax protein expression increased from (12.75+/-0.2524)% to (25.5967+/-0.8834)% (P=0.000). CONCLUSION: Mifepristone may act to enhance the sensitivity of COC1/DDP cells to cisplatin, possibly through regulating Bcl-2 and Bax protein expressions.     

米非司酮调控卵巢癌细胞表达葡萄糖神经酰氨合成酶并逆转其多药耐药性

目的 观察米非司酮体外逆转COC1/DDP细胞对顺铂的多药耐药性(MDR)以及对细胞葡萄糖神经酰氨合成酶(GCS)表达的影响,初步探讨其增敏机制.方法 以米非司酮为MDR修饰剂,MTT法检测米非司酮对COC1/DDP的增敏效应.RT-PCR技术分析耐药株COC1/DDP的MDR逆转前后以及亲本株COC1细胞的GCS在mRNA水平的表达.结果 米非司酮增强COC1/DDP细胞对DDP敏感性;与COC1相比,COC1/DDP细胞的GCS在mRNA水平的表达增强;米非司酮使GCS表达降低,效应呈剂量依赖关系.结论 无毒性剂量米非司酮可以在体外增加卵巢癌COC1/DDP细胞对DDP的敏感性.作用机制与抑制GCSmRNA表达有关.     

RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌细胞耐药的影响

目的:观察RNA干扰沉默ERCC1基因对卵巢癌细胞耐药的影响。方法:体外合成靶向于ERCC1基因的小干扰RNA(ERCC1-siRNA),用脂质体法转染至卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP,RT-PCR方法检测转染前后细胞内ERCC1 mRNA的表达,W estern blot方法检测ERCC1基因蛋白表达的改变,MTT实验检测转染前后COC1/DDP细胞对顺铂敏感性的变化。结果:转染ERCC1-siRNA后,COC1/DDP细胞中ERCC1基因的mRNA和蛋白表达均明显减少。RNA干扰联合顺铂用药能明显提高COC1/DDP细胞对顺铂的敏感性。结论:RNA干扰ERCC1基因能明显抑制COC1/DDP细胞内ERCC1基因mRNA和蛋白的表达,增加COC1/DDP细胞对化疗药顺铂的敏感性。     

bcl-2基因表达在人卵巢癌多药耐药现象中的作用

为探讨凋亡抑制基因bcl-2的表达在人卵巢癌顺铂耐药现象中的作用,采用DNA电泳,流式细胞仪技术及逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,分别对顺铂诱导的人卵巢癌细胞敏感株COC1及耐药株COC1/DDP的细胞凋亡及其bcl-2基因表达进行研究.结果发现①不同浓度顺铂作用下敏感细胞株和耐药细胞株中均见凋亡梯度,且随顺铂浓度的增加凋亡梯度增大.②不同浓度顺铂作用下流式细胞仪分析结果显示耐药细胞株中凋亡率明显低于敏感细胞株(P＜0.05).③耐药细胞株中bcl-2基因表达明显强于敏感细胞株.在顺铂作用下敏感细胞株和耐药细胞株中bcl-2基因表达下调.结果表明顺铂可诱导卵巢癌细胞凋亡;凋亡抑制基因bcl-2在人卵巢癌多药耐药细胞中高表达,是导致其细胞凋亡受抑制的重要原因.     

姜黄素促卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡机制探索

目的研究姜黄素对耐药卵巢癌细胞的促凋亡作用及其可能的机理。方法用MTT法检测不同浓度姜黄素、化疗药物〔顺铂(DDP),紫杉醇〕及姜黄素联合化疗药物(姜黄素+顺铂,姜黄素+紫杉醇)作用于卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP细胞48h后各组的细胞抑制率,并用流式细胞仪检测上述各组细胞的凋亡率。RT-PCR技术检测姜黄素、顺铂、姜黄素+顺铂作用于COC1/DDP细胞48h后各组的磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基(PI3KCA)mRNA的表达。结果不同浓度姜黄素作用COC1/DDP 48h后,细胞的抑制率和凋亡率随着姜黄素浓度的升高相应增高,姜黄素联合化疗药物作用组比单用化疗药物组的细胞抑制率及细胞凋亡率高(P<0.05)。顺铂与姜黄素联合用药与顺铂单独作用相比PI3 KCA mRNA的表达降低(P<0.05)。结论姜黄素能够促进卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的凋亡,这一作用可能与姜黄素和化疗药物协同诱导该细胞系的凋亡有关,其机制可能为降低PI3 KCA基因的表达。     

人卵巢癌顺铂耐药细胞株的建立及其耐药机制的研究

目的 通过建立人卵巢癌体外耐药模型，研究卵巢癌对顺铂的耐药机制。方法应用顺铂连续作用并逐步提高药量的递增压力选择法，从人卵巢腺癌细胞ＣＯＣ１中分离出对顺铂耐药的细胞亚株（ＣＯＣ１／ＤＤＰ），并比较耐药细胞和亲代细胞某些生物学特性差异。结果ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞对顺铂的耐药性是ＣＯＣ１的６．５倍，群体倍增时间较亲代细胞缩短了１２．９％。对卡铂和丝裂霉素Ｃ有不同程度的交叉耐药性，对阿霉素和５－氟尿嘧啶则保持敏感。并且耐药细胞内铂离子含量及ＤＮＡ链间交联指数均明显低于ＣＯＣ１细胞，但免疫细胞化学显示ＣＯＣ１及ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞内均无Ｐ糖蛋白表达。结论ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞对顺铂耐药的主要原因是细胞内药物浓度降低及ＤＮＡ链间交联形成减少，与Ｐ糖蛋白关系不大。     

人卵巢癌顺铂耐药细胞株的建立及耐药机制研究

目的：建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP,探讨其耐药的机制。方法：采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导卵巢癌细胞系COC1,建立卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP;CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8）检测各种抗癌药对COC1和COC1／DDP细胞增殖的抑制作用,并计算耐药指数;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）的水平;高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果：历时5个月建立COC1／DDP,对顺铂耐药性稳定,耐药指数为9．44;与COC1比较,COC1／DDP细胞内GSH的水平增高,顺铂含量下降（P〈0．01）。结论：入卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP耐药性稳定,耐药机制可能与GSH／GST-π解毒系统活性增强,减少细胞内顺铂含量有关。     

卵巢癌顺铂耐药细胞中DNA转录与修复相关基因的表达

目的 研究DNA转录与修复相关基因的表达与卵巢癌顺铂耐药性之间的关系。方法 以卵巢癌亲本细胞系COC1为对照,应用cDNA微阵列检测其顺铂耐药细胞系COC1/DDP中DNA转录与修复相关基因的表达。结果和结论 与COC1细胞相比,COC1/DDP细胞有143个基因的表达水平发生改变,其中共有20个DNA转录与修复相关基因的表达发生改变,表达上调的有13个基因,表达下调的有7个基因,包括CAD、DDB1、DDIT4等大量DNA修复基因以及一般转录因子RNA多聚酶Ⅰ、Ⅱ基因和DHX9、DDX3X基因的表达上调以及MLH1和BTF3基因的低表达,提示COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性与DNA转录和损伤修复能力的异常有关。