精浆弹性硬蛋白酶与精子 DNA 完整性及精液参数的影响分析

目的：探讨男性不育患者精浆弹性硬蛋白酶水平与精子 DNA完整性及精液质量之间的关系。方法选择148例男性不育患者根据精浆弹性硬蛋白酶的检测结果将所有患者分为 A、B、C3组。 A组为精浆弹性硬蛋白酶含量＜290 ng／mL;B组为精浆弹性硬蛋白酶含量290～1000 ng／mL;C 组为精浆弹性硬蛋白酶含量＞1000ng／mL。用酶联免疫吸附试验（ ELISA）检测精浆中弹性硬蛋白酶,精子 DNA完整性检测用精子染色质扩散法（ SCD）,精液参数用计算机辅助精子分析系统检测。结果 A组与 C 组相比精子存活率与前向运动精子百分率（PR）均升高、精子DNA碎片指数（DFI）明显降低,差异均具有统计学意义（ P＜0．05）。 B组的上述指标与A组相比,差异均无统计学意义（ P ＞0．05）。结论精浆弹性硬蛋白酶与精子DNA完整性及精液质量密切相关,生殖道感染是影响男性精液质量的一个重要原因。     

肾移植对精子形态及运动参数的影响

目的 探讨肾移植对人精子形态及运动参数的影响。方法 对15例男性尿毒症患者在肾移植前后分别进行了精液各项指标的测定，并与12名正常男性进行对照。结果 肾移植后患者的精子活力、存活率及精子运动活力参数较术前有明显改善（P〈0．05），而精子密度、精子正常形态率、头部缺陷精子百分率、MAI和SDI及精子运动方式参数与术前相比无明显改善（P〉0．05）。结论 接受肾移植后患者精子运动能力得到了明显改观，但精子形态及密度的改善并不明显。这一结果是否与服用环胞素A引起FSH水平升高有关，需要进一步研究。     

精子冻存技术及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响

目的通过对冷冻前后及精子处理前后精子DNA完整性的比较,探讨冷冻技术、冷冻时间及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响。方法（1）精液常规检测正常的患者30例,手淫法取精,精液液化混匀后分4份,分别用于精子染色质扩散（SCD）实验检测精子DNA完整性、上游法处理精液、以及两组冻存实验（不加保护剂直接冻存的为冻存1组;添加蛋黄葡萄糖保护剂冻存的为冻存2组）;（2）上游法处理后的精液一部分用于检测精子动力和形态,一部分用于精子DNA完整性检测;（3）冻存1组分别于冻存第7天和第90天解冻,SCD实验检测精子DNA完整性;（4）冻存2组分别于第7天和第90天解冻,0．1ml用于精子DNA完整性检测,剩余精液应用上游法处理,检测上游处理前后精子DNA的完整性。结果（1）冻存1组中,冻存90d后解冻的精子DNA损伤率[（25．6土7．3）％]显著高于冻存7d者[（22．4±7．4）％]（P〈0．05）,且均显著高于新鲜精液的精子DNA损伤率[（20．6±7．3）％]（P〈O．05）;冻存2组中,冻存90d后精子DNA损伤率显著高于冻存7d者[（25．9±7．2）％VS．（23．6土7．8）％]（P〈O．05）,且均显著高于新鲜精液（P〈0．05）;而冻存7d和90d后,两个冻存组间比较,精子DNA损伤率均无显著差异（P〉0．05）。（2）新鲜精液经上游法处理后,精子DNA损伤率由处理前的（20．6±7．3）％降为（6．4±2．5）％（P〈O．05）;冻存2组中精液冻存7d和90d后复苏上游法处理后,精子DNA损伤率较未经上游法处理者均显著降低[分别为（9．38±2．8）％VS．（23．6±7．8）％和（9．7±2．6）％VS．（25．9±7．2）％]（P％0．05）。结论冻存对精子DNA有损伤,冻存时间对于精子DNA完整性有影响。不添加保护剂直接冻存和添加保护剂对精子DNA完整性的影响无显著差异。不论是新鲜精液还是冻存复苏精液,上游法处理并不会增加精子DNA的损伤,且有利于筛选出具有更好DNA完整性的精子。     

人类精子间期核荧光原位杂交

为研究人类精子染色体的畸变，用３号染色体涂染探针对人类精子间核进行荧光原位杂交，检测了１０名正常健康男子和２名涉及３号染色体平均易位携带者ｔ（３；７）、ｔ（３；９）的精液。结果表明，正常男性精子间期核中３号染色体数目和（或）结构畸变率〈２％，涉及３号染色体平衡易位携带者的畸变率〉１０％。     

不同处理方法优选精子效果的比较

目的 比较上游法、三种密度梯度离心法和洗涤离心法优选精子的效果. 方法 门诊收集浓度与活力正常的精液标本44份,每份精液各取0.5 ml×5,分别采用上游法、密度梯度离心法和洗涤离心法进行处理,比较各组的精子浓度、活力、畸形率、精子畸形指数（SDI）和DNA碎片指数（DFI）,再按试剂来源将密度梯度离心法分为Sperm Grad梯度离心组（A组）、Pure Sperm梯度离心组（B组）和Pure Ception梯度离心组（C组）,进行上述参数比较. 结果与上游法和梯度离心法相比,洗涤离心法精子浓度、DFI值、畸形率、SDI值及头部、中段、尾部畸形率均显著增高（P＜0.05）,活力显著降低（P＜0.05）;与梯度离心法相比,上游法精子浓度、DFI值均显著降低（P＜0.05）,活力显著升高（P＜0.05）,两组间总畸形率、SDI值及头部、中段、尾部畸形率均无显著性差异（P＞0.05）.A、B、C组间精子浓度、活力、畸形率、SDI及DFI等参数均无显著性差异（P＞0.05）,但C组中段畸形率显著高于A组和B组（P＜0.05）,B组尾部畸形率显著高于A组和C组（P＜0.05）; 结论对于精子浓度和活力正常的精液标本,上游法精子活力最高、畸形率和DFI值最低,且精子浓度能够满足临床需要,是较为理想的精子优选技术;三种不同梯度离心法优选精子效果无显著性差异,适用于严重少精子症精液标本的处理.     

IgA抗精子抗体对精子顶体反应的影响

目的 探讨精浆中IgA抗精子抗体对人精子顶体反应的影响。方法 利用免疫珠法（IBT）筛选出IgA抗精子抗体阳性精浆标本同正常人精子孵育，以孕酮诱发精子顶体反应；以特异性荧光标记物．络合异硫氰酸荧光素的花生凝集素（FITC-PNA）标记精子顶体，通过流式细胞仪检测精子顶体完整性。结果 与IgA抗精子抗体阳性精浆孵育的精子，其孕酮诱发的顶体反应发生率明显低于正常精浆及精子培养液组（P〈0．01），正常精浆组及精子培养液组间无显著性差异（P〉0．05）；IgA抗精子抗体阳性精浆组、正常精浆组、精子培养液组自发顶体反应的发生率无显著性差异（P〉0．05）。结论 免疫性不育患者精浆中的IgA抗精子抗体可以明显抑制孕酮诱发的顶体反应的发生，可能是导致不育的原因之一。     

人精子运动功能与腹腔液中干扰素-γ含量的关系

目的 观察子宫内膜异位症（EMs）患者腹腔液干扰素（IFN）-γ体外对精子运动功能的影响。方法 用双抗体夹心法，检测30例EMs不孕妇女，30例其他病因所致不孕妇女和20例生育力正常妇女腹腔液中IFN-γ含量，用精液自动分析系统检测与腹腔液共同孵育后的正常精液中精子活动力参数，荧光显微镜观察顶体反应发生率。结果 EMs组腹腔液IFN-γ含量（250．3±102．6）ng／L高于其他2组（P〈0．01）；EMs组腹腔液与正常精液共同孵育后，精子活动力显著降低（P〈0．01），并与IFN-γ含量呈负相关（r=-0．958，P〈0．01）。精子与EMs组腹腔液孵育16h后顶体反应发生率低于正常对照组（P〈0．01）。结论 EMs患者腹腔液IFN-γ对精子活动的抑制可能是导致不孕因素。     

反复自然流产与精子DNA完整性的相关性研究

目的 探讨反复自然流产与精子DNA完整性的相关性。方法 按纳入标准将研究对象分成反复自然流产患者丈夫组（n=58）和正常生育男性对照组（n=50），采用吖啶橙实验（AOT）对研究对象精子DNA完整性进行检测，并对研究对象精液进行常规分析。砖果两组研究对象年龄、吸烟史、饮酒史无统计学差异（P〉0．05）；反复自然流产患者丈夫组精液的精子密度、精子活力显著低于正常生育对照组（P〈O．05）；反复自然流产患者丈夫组精子DNA的完整性低于正常生育对照组，差异有统计学意义（P〈O．05）。砖论精子DNA完整性损伤是反复自然流产的可能原因，精子DNA完整性损伤导致反复自然流产的致病机理尚需进一步研究。     

三种精子质膜完整性检测方法的比较

目的对6-羧基二乙酸荧光素／碘化丙啶（6-CFDA／PI）双荧光标记方法进行改良并应用于人精子质膜完整性的检测,并与单用伊红Y染色、低渗肿胀试验（HOS）两种检测方法进行比较。方法随机选择30例本所人类精子库志愿者精液标本（密度≥20×10^6／ml、活力（a＋b）≥50%）,分别采用单用伊红Y染色、HOS和6-CFDA／PI双荧光标记试验检测精子质膜完整性。结果30例精液标本伊红Y染色活精子比率、HOS肿胀精子数比率、6-CFDA／PI双荧光标记结果分别为（68．8±7．6）％、（68．7±7．8）％和（67．9±7．8）％,两两比较,无显著性差异（P均〉0．05）,但双荧光标记能显示死活精子的过渡状态。相关性分析结果显示,三种方法检测的活精子比率均与前向运动（a＋b）精子呈显著正相关。结论6-CFDA／PI双荧光标记检测方法与单用伊红染色、HOS两种常用检测精子质膜完整性方法具有一致性,同时能鉴定出精子过渡的中间状态。     

复发性流产与精子畸形率的相关性

目的探讨复发性流产与丈夫精子畸形率的相关性。方法按纳入标准将研究对象分成复发性流产患者丈夫组（流产组）（n=37）、孕前常规检查组（孕检组）（n=48）和正常生育男性组（生育组）（n=26）,采用改良巴氏染色法,按照严格Kruger标准检测对象精子畸形率,以及精液进行常规分析。结果三组年龄、禁欲时间、精液量、精子密度、精子活力以及颈部和中段畸形率、尾部畸形率等无统计学差异（P〉0．05）;三组间精子头部畸形率和总畸形率有显著性差异（P〈0．05）。三组问进一步两两比较,流产组与孕检组及生育组精子头部畸形率均有非常显著性差异（P〈0．01）,孕检组与生育组精子头部畸形率无显著性差异（P〉0．05）;流产组精子总畸形率与孕检组有显著性差异（P〈0．05）,与生育组有非常显著性差异（P〈0．01）,两孕检组与生育组无显著性差异（P〉0．05）。结论丈夫精子畸形率高与妻子复发性流产存在相关性,精子畸形率高与复发性流产的之间相关机理尚需进一步研究。