粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子质粒对小鼠树突状细胞前体的体内诱导研究

目的 观察粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)表达质粒体内转染对小鼠髓源性树突状细胞(DC)前体的诱导作用,为探索乙型肝炎新的免疫治疗提供研究基础.方法 30只BALB/c小鼠随机分为对照组、100μg剂量组和200 μg剂量组,注射1周,分离骨骼肌,抽提RNA,利用RT-PCR观察反转录水平;分离小鼠骨髓细胞,并以重组小鼠粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)诱导培养DC,倒置显微镜下观察其形态,并做扫描电镜检测.ELISA法检测小鼠血清中的GM-CSF表达量,流式细胞仪检测其表面分子(CD80,CD86,MHC-Ⅱ,CD11c)表达情况.结果 体内转染后,ELISA检测血清中GM-CSF表达量,与对照组比较,100 μg组和200 μg组表达量均有明显升高(P＜0.01);流式细胞仪检测显示100 μg组和200 μg组CD11c和MHC-Ⅱ类分子表达较对照组明显升高(P＜0.01),CD80和CD86有所升高(P＜0.05).结论 GM-CSF质粒体内注射可以明显刺激诱导小鼠髓源性DC前体的增殖,增强DC的抗原提呈作用.     

內脂素对小鼠DC2.4细胞成熟及功能的影响

目的 评价内脂素对小鼠树突状细胞（DC）系DC2.4细胞的活化作用,探讨内脂素在动脉粥样硬化发病机制中的作用机理。方法 将DC2.4细胞分4组：正常对照组、脂多糖组（LPS,1 mg/L）、低剂量内脂素组（100 μg/L）、高剂量内脂素组（200 μg/L）。流式细胞仪检测各组DC2.4细胞表面MHC-II类分子、CD86和CD80的表达,酶联免疫法检测各组细胞培养上清液肿瘤坏死因子α（TNF-α）与白细胞介素12（IL-12）水平的变化,通过混合淋巴细胞反应检测内脂素对同种异体T淋巴细胞的刺激能力。结果 与对照组比较,低剂量内脂素组、高剂量内脂素组、脂多糖组细胞突触增多增粗,细胞体积增大,呈现成熟DC2.4细胞形态。细胞表面MHC-Ⅱ类分子、CD80和CD86分子表达水平增高,上清液的TNF-α、IL-12水平明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较,刺激细胞∶效应细胞的比例为1∶10和1∶25时,低剂量内脂素组、高剂量内脂素组和LPS组刺激指数明显升高（P均＜0.05）。结论 内脂素可能通过激活T淋巴细胞,启动免疫炎症反应,参与并促进动脉粥样硬化发生及发展。     

乙型肝炎病毒转基因小鼠B7-H1表达水平与免疫耐受的相关性

目的 探讨HBV转基因(Tg)小鼠脾脏树突状细胞(DC)及肝脏B7-H1表达水平与HBV免疫耐受的相关性. 方法 制备小鼠脾脏DC,混合淋巴细胞反应检测其同种抗原刺激能力,流式细胞仪检测DC表面主要组织相容性复合物-Ⅱ(MHC-Ⅱ)及CD80、CD86、B7-H1等共刺激分子表达水平,酶联免疫吸附法检测白细胞介素-2(IL-2)、干扰素γ、IL-10水平,逆转录聚合酶链反应法和Western blot法检测肝组织B7-H1表达水平.计量数据组间比较采用f检验.结果 DC和T淋巴细胞比例分别为1:1、1:10、1:100时,HBV Tg小鼠脾脏DC刺激同种小鼠T淋巴细胞增殖数量(每分钟放射细胞数)分别为(865.4±39.3)个、(680.2±34.8)个和(320.0±12.7)个,正常小鼠刺激同种小鼠T淋巴细胞增殖数量分别为(22 385.6±99.7)个,(17 850.6±79.4)个和(760.0±32.1)个,HBV Tg小鼠脾脏DC刺激同种小鼠T淋巴细胞增殖能力明显均弱于正常小鼠DC,t值分别为16.674、19.674和21.712,P值均<0.01,差异有统计学意义.同时,HBV Tg小鼠MHC-Ⅱ,CD80表达下调,而CD86、B7-H1表达差异无统计学意义.HBV Tg小鼠分泌IL-2、干扰素γ、IL-10水平均降低,而HBV Tg小鼠和正常小鼠肝组织表达B7-H1的差异无统计学意义. 结论 HBV免疫耐受与MHC-Ⅱ、CD80下调表达导致的HBV Tg小鼠脾脏DC功能缺陷有关,而与负性共刺激分子B7-H1表达无关.     

小鼠髓源性半成熟树突状细胞致免疫耐受的实验研究

三组体外培养的小鼠骨髓细胞，分别采用低剂量粒细胞巨细胞集落刺激因子（GM-CSF）诱导、高剂量GM—CSF诱导及脂多糖（LPS）刺激、低剂量GM—CSF诱导及LPS刺激，使其分化为树突状细胞（DC）。流式细胞术检测DC表面CD11c、CD25、CD40、CD80和CD86、MHC-Ⅱ，ELISA法检测细胞培养上清液中IL-10、IL-12，初次和再次混合淋巴细胞实验检测DC刺激T细胞增殖能力，术前回输DC行同种异位心脏移植并观察术后移植心存活时间。结果显示，低剂量GM—CSF能诱导骨髓细胞分化为CD11c^＋、CD25^-、CD40^low、CD80^low和CD36^low、MHC-Ⅱ^low未成熟表型DC，经LPS刺激后分化为CD11c^＋、CD25^-、CD40^mid、CD80^low和CD86^low、MHC-Ⅱ^mid。半成熟表型DC；半成熟表型DC培养上清液中IL-10／IL-12明显升高，该DC可明显抑制同种异型T细胞增殖反应，较未成熟DC更能延长移植心存活时间。认为小鼠骨髓细胞经低剂量GM—CSF体外诱导可分化为未成熟DC，经LPS刺激可转化为半成熟DC，拥有更强的致耐受性。     

内毒素耐受小鼠脾脏 CD11clowCD45RBhigh树突状细胞对急性肝功能衰竭锌指蛋白 A20表达的影响

目的：观察内毒素耐受 CD11clow CD45RBhigh DC 对急性肝功能衰竭小鼠锌指蛋白 A20表达的影响,探讨其在急性肝功能衰竭治疗中的作用及可能机制。方法建立内毒素耐受小鼠模型,经免疫磁珠法分选正常小鼠脾脏来源 CD11clow CD45RBhigh DC 和内毒素耐受小鼠脾脏来源 CD11clow CD45RBhigh DC。选取健康雄性 BALB／c 小鼠126只,随机分为正常对照组（A 组6只）、急性肝功能衰竭组（B 组40只）、正常小鼠脾脏 CD11clow CD45RBhigh DC 治疗组（C 组40只）和内毒素耐受小鼠脾脏CD11clow CD45RBhigh DC 治疗组（D 组40只）;B、C、D 三组小鼠同时腹腔注射 D-GalN 600 mg／kg和脂多糖10μg／只,A 组注射等体积0．9％氯化钠溶液;30 min 后 C 组腹腔注射正常小鼠脾脏来源 CD11clow CD45RBhigh DC（1×106／只,0．2 mL／只）,D 组腹腔注射内毒素耐受小鼠脾脏来源 CD11clow CD45RBhigh DC（1×106／只,0．2 mL／只）进行干预,A、B 组则给予相同剂量的0．9％氯化钠溶液。检测各组小鼠各时间点血 ALT、AST 水平;采用 HE 染色观察各组小鼠各时间点肝组织病理变化;反转录（RT）-PCR 和Western 免疫印迹法检测各组小鼠各时间点 TNF-α、核因子-κB、锌指蛋白 A20表达情况。样本均数比较采用单因素方差分析。进行正态性检验和方差齐性分析,方差齐者采用 LSD 检验。结果 B 组在造模2 h 后 ALT、AST 开始逐渐升高,于24 h 达高峰,明显高于 A 组（t 值分别为31．00和11．52,均 P ＜0．05）。C、D 两组于造模2 h 后 ALT、AST 也逐渐升高,于24 h 达高峰,与 B 组比较,差异均有统计学意义（t 值分别为14．60和26．43,均 P ＜0．05）。B 组小鼠 TNF-αmRNA（t ＝427．58）、核因子-κB mRNA （t＝122．42）及蛋白表达量（t 值分别为179．35和165．98）随着时间的推移逐渐升高,至12 h 达高峰,与A 组相比差异有统计学意义（均 P ＜0．05）。B 组小鼠锌指蛋白 A20 mRNA 及蛋白则随着时间的延长逐渐降低,在12 h 达到最低,与 A 组相比差异有统计学意义（t 值分别为90．80和160．43,均 P ＜0．05）;A20 mRNA 及蛋白表达量则随着时间的延长逐渐增加,在12 h 达到最高值,且 D 组增加较 C 组更明显,差异有统计学意义（t 值分别为11．21和24．80,均 P ＜0．05）。结论内毒素耐受小鼠脾脏来源CD11clow CD45RBhigh DC 治疗可减轻肝脏损害。     

PvMSP1对树突状细胞分化成熟和功能的影响

目的 目的 观察间日疟原虫裂殖子主要蛋白1 （PvMSP1） 对树突状细胞 （DC） 分化成熟和功能的影响, 并探讨该蛋白通 过Toll样受体 （TLR） 通路活化DC的机制。方法 方法 选择不同剂量的PvMSP1 （1.0、 10.0、 100.0 μg/ml） 体外刺激人单核细胞来 源的DC, 采用流式细胞术分析DC成熟性相关分子CD83、 CD86、 HLA?DR的表达变化; ELISA检测DC培养上清中IL?10、 IL?12 的表达水平; RT?PCR检测DC TLR4、 TLR9 mRNA的表达水平; MTT法检测DC刺激自体淋巴细胞增殖的能力。同时选择未 刺激的DC作为阴性对照组, LPS刺激的DC作为阳性对照组。对所得数据进行方差分析和q检验。结果 结果 与未刺激组比 较, LPS诱导组CD83、 CD86、 HLA?DR的百分含量均增加, PvMSP1诱导组CD83、 CD86、 HLA?DR的表达也均升高 （P均 < 0.05）; LPS诱导组IL?10、 IL?12的表达量明显增加 （P < 0.01）, PvMSP1诱导组IL?10、 IL?12的表达量也均增加 （P均 < 0.05）; LPS组DC TLR4 mRNA的表达增加 （P < 0.05）, TLR9 mRNA的表达无明显变化 （P > 0.05）, PvMSP1诱导组DC TLR4 mRNA 的表达增加 （P < 0.01）, TLR9 mRNA无明显变化 （P > 0.05）; DC能够刺激自体淋巴细胞增殖。结论 结论 PvMSP1具有促进DC 分化成熟的作用, 且经其诱导成熟的DC具备抗原递呈功能; PvMSP1可能经TLR4通路而非TLR9通路诱导DC成熟。     

小鼠感染不同毒力疟原虫早期根治性治疗对再感染树突状细胞成熟及功能的影响

目的探讨小鼠感染不同毒力疟原虫早期根治性治疗对再感染过程中树突状细胞(DC)成熟及功能的影响。方法分别用两种毒力不同的约氏疟原虫感染DBA/2小鼠,3 d后进行根治性治疗,并于初次感染后90 d进行再感染。通过姬姆萨薄血膜染色法计数红细胞感染率,流式细胞术检测再感染前后不同时间点脾细胞表达MHC-Ⅱ、CD80、CD86和CD40的DC以及活化性T细胞的百分率。结果再感染同种疟原虫后,两组根治性治疗小鼠均出现短暂的低水平虫体血症,再感染后第3 d表达MHC-Ⅱ、CD80、CD86和CD40的DC百分率显著升高(P<0.01),再感染后第1~5 d活化性T细胞百分率持续升高(P<0.05或<0.01),但在每一相同检测时间点两组小鼠的虫体血症水平、活化性T细胞和表达MHC-Ⅱ、CD80、CD86、CD40的DC百分率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论小鼠感染不同毒力疟原虫早期根治性治疗后,再感染同种疟原虫,强毒株原虫与弱毒株均能诱导DC成熟并发挥其功能。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞的成熟度研究

目的：研究慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血树突状细胞（DC）的成熟度及其占单核细胞的比例,探讨CHB患者DC免疫治疗的机制。方法选取20例CHB患者和10例健康人,分别采集外周抗凝全血2 mL,流式细胞仪检测DC表面CD80、CD86、CD83的表达量及单核细胞表面CD14的表达。结果两组DC表面CD80、CD86、CD83分子表达无差异（P＞0．05）;CHB组较健康对照组单核细胞表面分子 CD14表达明显增多,具显著统计学差异（P＜0．05）;CHB组CD80、CD86、CD83三者表达之和占CD14的比例明显高于CHB组,两者有显著统计学意义（P＜0．05）。结论CHB患者外周血存在单核细胞增多、成熟DC减少现象,恢复DC功能是治疗CHB的手段之一。     

猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白对仔猪树突状细胞活化的影响

目的 探讨猪囊尾蚴排泄分泌抗原(Excretory secretory antigen, ESA)富含亮氨酸重复序列结构域(Leucine-rich repeat containing 15, LRRC15)蛋白对仔猪树突状细胞(Dendritic cell, DC)成熟活化的影响。方法 收集正常仔猪DC体外诱导、培养，获得成熟与未成熟DC(immature DC, imDC)。在正常仔猪未成熟DC中，分别加入LRRC15蛋白、ESA刺激，将LRRC15组作为实验组；同时建立ESA对照组、LPS阳性对照组、LRRC15+LPS阳性对照组、LPS+ESA阳性对照组和培养基阴性对照组。流式细胞术检测DC表面标志物MHC-Ⅱ、CD80、CD86的表达量；ELISA检测DC细胞培养上清TNF-α、IL-6、IL-10、IL-12的分泌水平。结果 与未刺激DC组相比，LRRC15蛋白组诱导DC表面标志物CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达均增加。在LPS存在情况下，LRRC15蛋白也能诱导CD80、CD86、MHC-Ⅱ分子上调；ELISA检测结果显示，与1640培养基组、LPS组和ESA组相比，L...     

胆汁酸膜受体TGR5在小鼠骨髓来源的树突状细胞中的表达及其相关功能

目的 通过TGR5天然激动剂石胆酸(LCA)刺激小鼠树突状细胞(DC),探讨TGR5受体在DC成熟活化及吞噬功能方面的作用.方法 体外诱导小鼠骨髓细胞形成DC,LCA 30 μmol/L预处理2h后,用CFSE标记的胸腺凋亡细胞测试其吞噬功能;加入脂多糖(LPS)1 μg/mL诱导其成熟,6h后提取细胞总RNA,PCR法检测IL-12、TNF-α和IL-10等细胞因子;48 h后以流式细胞术检测细胞表面分子MHCII、CD80、CD86表达水平.组间比较采用t检验.结果 (1)LCA可以上调DC表达TGR5,并增强DC吞噬凋亡细胞功能(P＜0.05);(2)LCA可以降低LPS引起的DC表面MHCⅡ、CD80和CD86表达水平(均P＜0.05),提示LCA可抑制DC成熟;(3)LCA可抑制LPS诱导的DC促炎性细胞因子IL-12、IL-6、TNF-α mRNA表达,而IL-10表达水平升高(均P＜0.05).结论 TGR5受体激动剂可抑制DC成熟并增强DC吞噬功能,发挥免疫调节作用.     

不同浓度屋尘螨对Der p2基因修饰的树突状细胞表面分子的影响

目的 观察不同浓度屋尘螨(HDM)对HDM过敏原Der p2基冈修饰的树突状细胞(DC)表面分子的影响.方法 以未转染DC为对照,不同浓度HDM处理HDM主要抗原基因Der p2转染的DC(Der p2-DC),培养72 h后流式细胞仪检测Der p2-DC表面共刺激分子CD80、CD86和MHC Ⅱ.结果 加入HDM...     

瓜氨酸化波形蛋白对类风湿关节炎患者外周血来源树突状细胞的干预作用

目的 探讨波形蛋白瓜氨酸化前后在体外对类风湿关节炎(RA)患者外周血来源树突状细胞( DCs)的细胞形态、表型和功能的影响.方法 分离外周血单个核细胞(PBMCs),粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4体外培养制备未成熟DCs(imDCs),分别用脂多糖、瓜氨酸化波形蛋白(cVim)和波形蛋白刺激培养的imDCs,磷酸盐缓冲液(PBS)作为阴性对照,流式细胞仪检测DCs表面标志CD14、CD80、CD83、CD86、主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ、MHCⅡ表达变化.将实验组获得的DCs和同种异体T细胞进行混合淋巴细胞反应,通过单溶液细胞增殖分析(MTS)法检测T细胞的增殖情况.采用t检验.结果 以阴性对照组imDCs的各个免疫表型阳性率作为1,脂多糖能显著诱导RAimDCs表面MHCⅡ、CD80、CD83、CD86表达(1.07±0.14,1.25±0.13,1.90±1.08,2.44±0.65,P均＜0.05);cVim诱导MHCⅡ(1.18±0.09)、CD83( 1.97±0.99)表达水平上调(P＜0.05,P＜0.01);波形蛋白对MHCⅡ及CD83、CD86表达无影响(0.950.11,0.90±0.29,1.04±0.06),仅抑制CD80表达(0.82±0.18,P＜0.01).与脂多糖组相比,cVim组的MHCⅡ表达水平显著增高(P＜0.05),而CD80、CD86(0.83±0.36、1.32±0.15)的表达水平则低于脂多糖组(P＜0.01,P＜0.05);cVim组MHCⅡ和CD83的表达水平显著高于波形蛋白组(P均＜0.05).混合淋巴细胞反应显示经脂多糖和cVim诱生的DCs对同种异体T细胞具有明显刺激增殖作用,且随着DCs细胞浓度的增加而作用增强;波形蛋白诱生的DCs则无刺激增殖作用.结论cVim可诱导imDCs成熟,并且能够提高细胞表面共刺激分子的表达.     

姜黄素诱导肿瘤细胞自噬后的自噬体浓缩疫苗抗肿瘤的机制研究

目的研究姜黄素诱导肿瘤细胞自噬后的自噬体浓缩疫苗抗肿瘤的机制。方法细胞自噬通过Western blotting和透射电子显微镜。小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDCs)的成熟表型经常规扫描电子显微镜(SEM)、流式细胞仪(FCM)和透射电子显微镜(TEM)证实。自噬体介导的交叉呈递效率通过羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)的分布测定T细胞的增殖。分析自噬体的抗原交叉呈递的机理。结果姜黄素诱导的自噬通过自噬体的电子显微镜以及LC3-Ⅱ的表达所证实。自噬体浓缩疫苗上调表达CD40、CD86和MHCⅡ。经自噬体介导的T细胞激活后,T细胞有明显的扩增同时能杀伤靶细胞。HSP90、HSP70和HMGB1在这种新的疫苗中发挥重要作用。结论这些数据表明以自噬体为基础的疫苗有抗肿瘤疗效独特的特点。这种新的肿瘤疫苗的功效需临床试验的进一步验证。     

Phagocytic dendritic cells from myelomas activate tumor-specific T cells at a single cell level

Antigen-presenting cells (APCs) from subcutaneous mouse MOPC315 plasmacytoma phagocytosed immunoglobulin G-coated magnetic beads, enabling efficient isolation within 2 hours by magnetic separation (APC-MB). Cell morphology was heterogeneous, with some of the cells having dendrites. The surface phenotype of purified tumor APCs-MB was CD11b(+), CD11c(+), CD40(+), CD80(+), CD86(+), and MHC class II(+). Tumor APCs-MB expressed messenger RNA for fractalkine and ABCD-1 chemokines, and for CC-type chemokine receptors CCR5 and CCR7, indicating the presence of mature dendritic cells (DCs). Visualized at a single cell level within 4 hours after disruption of the tumor, APCs-MB induced rapid Ca(++) mobilization in MHC class II-restricted tumor idiotype (Id)-specific cloned CD4(+) T cells. In long-term assays, tumor APCs-MB induced proliferation of naive T cells from Id-specific T-cell receptor transgenic mice. The results suggest that tumor APCs-MB represent a heterogeneous cell population that includes myeloid-derived DCs of various stages of maturation. A considerable fraction (> or = 15%) of DCs is spontaneously primed with tumor-specific antigen.     

不同浓度屋尘螨对Der p2基因修饰的树突状细胞表面分子的影响

目的 观察不同浓度屋尘螨(HDM)对HDM过敏原Der p2基因修饰的树突状细胞(DC)表面分子的影响.方法 以未转染DC为对照,不同浓度HDM处理HDM主要抗原基因Der p2转染的DC(Der p2-DC),培养72 h后流式细胞仪检测Der p2 DC表面共刺激分子CD80、CD86和MHCⅡ.结果 加入HDM后...     

间日疟原虫疟色素对树突状细胞成熟的影响

目的观察间日疟原虫代谢产物疟色素(HZ)对树突状细胞(DC)成熟分化的影响。方法以间日疟患者感染红细胞获得间日疟原虫制备纯化HZ,体外刺激人单核来源的未成熟DC。采用流式细胞术分析0.1、1.0、10.0μmol/L不同浓度的HZ作用下DC成熟相关分子CD83、CD86、HLA-DR的表达变化;同时观察DC在HZ刺激后再经脂多糖(LPS)诱导其上述分子的表达变化。结果 0.1、1.0、10.0μmol/L的HZ刺激的DC表达CD83、CD86和HLA-DR阳性百分率均低于LPS诱导组(P均0.05);1.0、10.0μmol/L的HZ刺激组的CD83、CD86和HLA-DR明显低于未刺激组(P均0.05);HZ1.0、10.0μmol/L组HLA-DR的表达低于HZ0.1μmol/L组(P均0.05)。与未刺激组DC相比,HZ0.1μmol/L+LPS组DC的CD83表达明显升高(P0.01),CD86表达明显升高(P0.05),HZ1.0μmol/L+LPS组的CD83明显升高(P0.01);HZ10.0μmol/L+LPS组CD86表达与HZ0.1μmol/L+LPS和HZ1.0μmol/L+LPS组相比明显降低(P均0.05)。结论间日疟原虫来源的HZ能导致DC的CD83、CD86和HLA-DR表达下调,但负载HZ的DC仍可以在LPS等诱导剂作用下部分上调这些成熟相关分子的表达。HZ对DC的成熟性分化具有剂量依赖性抑制的特征。DC对HZ的过度吞噬而导致成熟抑制可能是疟原虫逃逸免疫攻击的重要方式之一。     

胰腺癌相关抗原MUC1与survivin mRNA联合转染树突细胞激发特异性细胞毒T淋巴细胞能力的体外研究

目的 研究人胰腺癌MUC1与survivin mRNA联合转染树突细胞（DC）体外激发特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）的能力,为构建负载多抗原表位DC疫苗治疗胰腺癌提供实验依据.方法 自6例胰腺癌患者外周血单核细胞中分离、培养并鉴定DC.常规培养人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2,采用RT-PCR方法扩增MUC1和survivin mRNA.应用电穿孔法将两种mRNA单独或联合转染DC,分别命名为DC-MUC1、DC-survivin、DC-MUC1＋ survivin.采用实时定量PCR法检测DC的MUC1、survivin mRNA表达;四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测DC存活率;使用混合细胞培养法检测转染DC体外刺激自体T淋巴细胞的增殖能力;应用ELISA法检测转染DC体外激发抗原特异性CTL释放Th1型细胞因子IL-2、IL-10、granzyme B、IFN-γ的水平.结果 成功获得成熟的DC,成熟DC的表面标志物CD40、HLA-DR、CD83和CD86的阳性表达率分别为34.31％、50.21％、89.17％和73.62％.DC-MUC1的MUC1 mRNA表达量为36.24±5.17;DC-survivin的survivin mRNA表达量为34.53±4.02;DC-MUC1＋survivin的MUC1、survivin mRNA表达量分别为31.79±4.26和14.67±2.96,显著低于单转染的DC（P值均＜0.05）.DC-MUC1＋ survivin的存活率呈现时间依赖性下降,96 h时的存活率显著低于单转染DC（50.21％比80％左右,P值均＜0.05）.当作为刺激细胞的DC和作为效应细胞的T淋巴细胞比例为1∶10、1∶20时,DC-MUC1＋ survivin刺激自体T细胞的增殖指数显著高于单转染DC,差异有统计学意义（P值均＜0.05）;而比例为1∶40、1∶80时的增殖指数差异无统计学意义.当DC∶T为1∶10孵育14 d时,DC-MUC1、DC-survivin、DC-MUC1＋survivin的IL-2水平分别为（892.73±32.90）、（713.62±56.37）、（1884.37±95.21） pg/ml;granzyme B水平分别为（501.62±12.30）、（203.84±12.55）、（1193.15±86.04） pg/ml;IFN-γ水平分别为（981.50±47.82）、（696.05±41.66）、（2237.94±189.55） pg/ml.DC-MUC1＋ survivin显著高于单转染的DC,差异有统计学?     

CD2 engagement induces dendritic cell activation: implications for immune surveillance and T-cell activation

We have shown previously that primary dendritic cells and monocytes express equal levels of CD14 but are distinguishable by the presence of CD2 on dendritic cells. CD2 is known to mediate the activation of T and natural killer (NK) cells through its interaction with CD58. CD2 epitopes recognized by anti-T111, -T112, and -T113 monoclonal antibodies (mAbs) are present on dendritic cells. Here we show that CD2 engagement significantly increases class II, costimulatory (CD40, CD80, CD86), adhesion (CD54, CD58), and CCR7 molecule expression on primary dendritic cells. Conversely, minimal or no change in the expression of the above antigens occurs on monocyte-derived dendritic cells, because these molecules are already maximally expressed. However, both kinds of dendritic cells release interleukin-1beta (IL-1beta) and IL-12 after CD2 engagement. Lastly, interference with dendritic cell CD2-T-cell CD58 engagement decreases naive CD4+CD45RA+ T-cell proliferation. Collectively, our results suggest another role of the CD2-CD58 pathway that allows nonimmune and immune cells to interact directly with dendritic cells and initiate innate and adaptive immune responses.     

CCR9在非小细胞肺癌患者外周血CD4+ T淋巴细胞中的表达及其对趋化活性的影响

目的：探讨CC族趋化因子受体9（ CCR9）在非小细胞肺癌（ NSCLC ）肿瘤免疫机制中的作用。方法采用流式细胞术检测42例NSCLC患者和30名健康人手术前后T细胞亚群以及外周血中CD4＋T淋巴细胞表面CCR9的表达情况,计数各组细胞表达的百分率。免疫磁珠分选外周血CD4＋T淋巴细胞,采用transwell实验检测并分析CCL25/CCR9对CD4＋T淋巴细胞迁移的影响。结果 NSCLC患者外周血T淋巴细胞亚群均降低,术后外周血CD4＋T淋巴细胞、CD4＋/CD8＋比值均明显高于术前[（49.11±8.32） vs （46.17±8.71）,P＝0.031和（1.66±0.09） vs （1.44±0.06）,P＝0.001];术前CD4＋CCR9＋T淋巴细胞的百分率低于术后[（3.33±1.11） vs （6.57±1.92）,P＜0.05]和健康对照组[（3.33±1.11） vs （11.06±1.37）,P＜0.05]。在CCL25诱导下,NSCLC患者外周血CD4＋T淋巴细胞趋化指数（CI）为3.14,明显低于健康对照组的3.83（ P＜0.05）。经过anti-CCR9单抗处理后,CD4＋T淋巴细胞的CI为0.62,与未经anti-CCR9 mAb处理者相比明显降低（ P＜0.05）。结论 NSCLC患者外周血T淋巴细胞调节机制紊乱,CL25/CCR9相互作用可介导外周血CD4＋T淋巴细胞迁移,NSCLC患者外周血淋巴细胞中CCR9低表达,影响淋巴细胞迁移,可能与肿瘤逃避免疫监视的机制有关。手术可以逆转CD4＋T淋巴细胞表面CCR9的表达变化, CCR9可能作为评价肺癌治疗后免疫重建的指标。     

青春型双歧杆菌对哮喘儿童树突状细胞功能的影响

目的研究青春型双歧杆菌对过敏性哮喘儿童外周血单个核细胞来源的树突状细胞（dendritic calls,DC）表面共刺激分子表达及其细胞因子分泌的影响。方法从15例过敏性哮喘儿童和15例非哮喘儿童的外周血单个核细胞诱导生成未成熟DC．与青春型双歧杆菌共培养48小时后．用流式细胞仪检测DC表面CD86和HLA-DR分子的表达,用ELISA方法检测培养上清中自细胞介素（IL）-10、IL-12和IFN-γ的水平。结果经双歧杆菌刺激后,哮喘儿童DC表面CD86表达明显增高（P〈0．05）,DC分泌IL-12和IFN-γ水平明显增高;而双歧杆菌刺激对非哮喘儿童的CD86和HLA-DR表达无明显影响,但可使其DC分泌IL-12及IL-10水平明显增高。结论青春型双歧杆菌既可以通过上调CD86的表达,促进DC成熟;又可刺激DC分泌IL-12和IFN-γ,改变Th2优势分化,纠正Th1/Th2失衡,这可能是益生菌防治变态反应性疾病的机制之一。