RNA干扰Grp78蛋白对肺癌细胞A549的作用研究

目的 探讨采用RNA干扰Grp78蛋白表达,观察对肺癌细胞A549的作用.方法 通过转染Grp78的siRNA质粒到肺癌细胞A549并进行表达,观察A549细胞的Grp78蛋白的表达及细胞的侵袭和转移能力的变化.结果 RNA干扰肺癌细胞A549的Grp78的表达,能够显著地抑制癌细胞的黏附、伸展,以及MMP-2,MMP-9蛋白的表达,甚至诱导细胞凋亡.结论 siRNA特异性下调Grp78蛋白,可以抑制肺癌细胞A549的侵袭和转移,甚至导致细胞凋亡.     

抗菌肽merecidin通过ERK/mTOR 信号通路对肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨抗菌肽merecidin通过ERK/mTOR 信号通路对肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 实验分为对照组Control、抗菌肽Merecidin干预组和雷帕霉素Rapamycin干预组。通过CCK-8 法检测A549细胞的增殖能力,通过流式细胞术检测A549细胞凋亡和周期,通过平板划痕试验和Transwell检测A549细胞的迁移和侵袭能力,通过 Western blot 法检测A549细胞中MAPK1、MEK2、mTOR、PRAS40、EIF4EBP1 磷酸化蛋白的表达量。结果 抗菌肽merecidin能够明显抑制A549的增殖能力,处理24 h后的 IC50值为10.01 μmol /L(P<0.05)。与control组比较,抗菌肽merecidin处理后促进细胞凋亡(P<0.05),阻滞细胞周期于S期(P<0.05),细胞的迁移及侵袭能力均降低(P<0.05)。同时抗菌肽merecidin可抑制p-MAPK1和p-MEK2蛋白的表达,并且降低了mTOR、PRAS40和EIF4EBP1 的磷酸化水平(P<0.05)。结论 抗菌肽merecidin可抑制肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期于S期,该作用可能与其抑制ERK/mTOR通路有关。     

姜黄素与卡铂联合用药对肺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨姜黄素与卡铂联合用药对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响。方法通过Western blotting检测、细胞活性检测不同浓度姜黄素和卡铂对肺癌细胞的影响;划痕实验Transwell侵袭实验检测加入姜黄素和卡铂对肺癌细胞的侵袭能力的影响;Western blotting检测NF-k B信号通路受不同浓度姜黄素和卡铂的影响。结果 10 m M姜黄素和50、100 m M卡铂联用对肺癌A549细胞的影响效果最佳;加入姜黄素和卡铂后,肺癌细胞株A549的侵袭和增殖能力明显降低,且联合用药效果较好;加入姜黄素和卡铂后,NF-k B信号通路蛋白相应下调。结论姜黄素和卡铂联合用药可以通过NF-k B信号通路抑制肺癌A549细胞株的迁移和侵袭能力。     

缺氧对肺癌细胞中lncRNA H19的表达及耐药机制的研究

目的 探索缺氧对非小细胞肺癌细胞株A549和H1650中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA) H19表达的影响,并与顺铂耐药的关系。方法 在常氧和缺氧条件下对肺癌细胞A549和H1650采用qPCR检测lncRNA H19、HIF1-α、MRP1和HO-1 mRNA的表达;采用Western blot检测HIF1-α、MRP1、HO-1和P-gp的表达;并进行肿瘤细胞迁移和侵袭实验;采用Annexin V-APC和流式细胞仪检测顺铂诱导的细胞凋亡率。结果 在缺氧条件下非小细胞肺癌细胞株A549和H1650中lncRNA H19、HIF1-α、HO-1、MDR相关蛋白1和P-gp的表达水平升高。肿瘤细胞的侵袭和迁移能力增强,顺铂诱导的细胞凋亡减少。结论 缺氧增加非小细胞肺癌细胞株A549和H1650中lncRNA H19的表达水平,顺铂诱导的细胞凋亡减少,对顺铂产生耐药性。     

异丙酚对食管癌细胞侵袭能力的影响及机制探讨

目的探讨异丙酚对食管癌细胞侵袭能力的影响及其机制。方法分别以30、60和120μg/ml异丙酚处理Eca109细胞,采用平板克隆实验、Transwell实验和划痕实验检测细胞的克隆形成能力、侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白的表达情况。结果 30μg/ml异丙酚对Eca109细胞的克隆形成能力无显著影响,但60和120μg/ml异丙酚能够显著抑制Eca109细胞克隆形成能力;异丙酚能够呈浓度依赖性抑制Eca109细胞的侵袭和迁移,且抑制MMP-2、MMP-9、PI3K和p-AKT蛋白的表达。结论异丙酚能够抑制食管癌Eca109细胞的侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

黄芩苷对结肠癌细胞迁移与侵袭能力的抑制作用及其机制研究

目的研究黄芩苷对人结肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT法、细胞划痕实验和Transwell实验检测黄芩苷对SW480细胞增殖、迁移和侵袭能力的作用,Western blot方法检测黄芩苷作用后SW480细胞中MMP-9和COX-2的蛋白表达水平。结果黄芩苷以时间和浓度依赖方式抑制SW480细胞的增殖;黄芩苷能明显抑制SW480细胞的迁移和侵袭能力(P=0.0012,P=0.0017);并且黄芩苷能够下调SW480细胞中MMP-9和COX-2蛋白的表达(P=0.0013,P=0.0036)。结论黄芩苷可能通过下调MMP-9和COX-2蛋白的表达,从而发挥抑制SW480细胞增殖、迁移和侵袭的作用。     

MiR-191靶向调控TIMP3促进肺癌细胞恶性转化进程的研究

目的探索miR-191靶向调控基质金属蛋白酶抑制剂3(TIMP3)对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭影响及相关机制,为深入了解肺癌发生发展机制及寻找新的诊断和治疗靶标提供新思路。方法 Target Scan软件预测miR-191的潜在靶基因;双荧光素酶报告实验检测miR-191对TIMP3调控作用; Western blot和实时定量聚合酶链式反应(qPCR)检测正常肺细胞CCD-19Lu和肺癌细胞A549中TIMP3、miR-191表达水平;肺癌细胞A549中转染anti-miR-191后检测TIMP3蛋白表达变化;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力; Transwell检测细胞迁移、侵袭能力; Western blot检测细胞中MMP2、JNK、p-JNK、β-actin蛋白表达水平。结果 Target Scan预测软件发现TIMP3是miR-191的潜在靶基因;双荧光素酶报告实验证实TIMP3是miR-191的靶标;正常肺细胞CCD-19Lu中miR-191表达较低,TIMP3 mRNA表达较高;肺癌细胞A549中miR-191表达较高,TIMP3 mRNA表达较低;肺癌细胞A549中转染anti-miR-191可显著增加TIMP3蛋白表达;MTT结果显示肺癌细胞增殖未受明显影响; Transwell实验结果表明anti-miR-191可抑制细胞迁移和侵袭; Western blot结果显示TIMP3下游癌蛋白MMP2、p-JNK显著下调。结论 TIMP3是miR-191的一个靶标,肺癌中高表达的miR-191可靶向抑制TIMP3激活MMP2、JNK等癌基因促使肺癌细胞发生恶性转化; miR-191/TIMP3信号轴在肺癌恶性病变过程中可能起重要作用,可成为肺癌早期诊断与靶向治疗的分子靶标。     

甘草素对B16F10黑色素瘤细胞侵袭转移的抑制作用及其机制探讨

目的研究甘草素(liquirigenin,LQ)对黑色素瘤B16F10侵袭转移的抑制作用及分子机制。方法采用四甲基氮唑兰MTT比色法检测甘草素对B16F10细胞存活力的影响;划痕实验检测甘草素对细胞迁移的影响;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;蛋白质印迹法分析甘草素对侵袭转移相关蛋白和信号通路的影响。结果在无毒剂量下,甘草素能明显抑制B16F10细胞的侵袭转移能力,并且随着浓度增加,其细胞的迁移和侵袭逐渐减弱;甘草素能通过抑制PI3K/AKT信号通路,下调基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9蛋白表达。结论甘草素可能通过阻碍PI3K/PTEN/AKT信号通路传导,下调MMP-2和MMP-9的表达,从而抑制黑色素瘤B16F10细胞的侵袭转移。     

长链非编码PCAT-1在乳腺癌组织和细胞株中的表达及其对癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA (lnc RNA) PCAT-1在乳腺癌组织和细胞株中的表达及其对癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 q RT-PCR检测PCAT-1在乳腺癌组织和乳腺癌MCF7和MDA-MB-468细胞中的表达水平;通过小RNA干扰技术下调MCF7细胞中PCAT-1的表达,CCK-8和Ed U实验检测si-PCAT-1对MCF7细胞活性和增殖能力的影响;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测si-PCAT-1对MCF7细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 PCAT-1在乳腺癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织,PCAT-1在MCF7和MDA-MB-468细胞中的表达水平显著高于人乳腺上皮细胞MCF10A。MCF7细胞转染si-PCAT-148 h后,MCF7细胞的活性和增殖能力明显降低,迁移距离显著减少,侵袭能力也明显下降。结论 PCAT-1在乳腺癌组织和乳腺癌细胞(MCF7和MDA-MB-468)中的表达水平明显升高;下调PCAT-1表达显著抑制了乳腺癌MCF7细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

IL-1β诱导肺癌A549细胞CEA过表达对其浸润迁移的影响

目的 探讨IL-1β对肺腺癌A549细胞CEA表达的影响及IL-1β诱导的CEA对肺癌A549细胞迁移侵袭能力的影响. 方法 体外培养的A549细胞分别经IL-1β 50、100和200 ng/ml刺激24 h,Western-blot和免疫细胞化学方法检验CEA蛋白的表达;采用细胞Transwell实验和侵袭实验检测IL-1β诱导的CEA对肺癌A549细胞迁移和侵袭能力的影响. 结果 不同浓度的IL-1β (50、100、200 ng/ml)处理A549细胞后,CEA的表达量较空白对照组增高,且呈剂量依耐性(P＜0.05);Transwell试验中对照组、100 ng/ml IL-1β组和加兔抗人CEA多抗组穿过Transwell小室膜的细胞数分别为(52.8±5.5)、(117.2±12.2)和(83.6±5.2)个/视野,侵袭试验中对照组、100 ng/ml IL-1β组和加兔抗人CEA多抗组穿过Matrigel胶的细胞数分别为(37.4±6.1)、(92.6±6.7)和(47.8±6.4)个/视野,均为100ng/ml IL-1β组高于对照组(P＜0.05);加兔抗人CEA多抗组低于100 ng/ml IL-1β组(P＜0.05). 结论 IL-1β可能通过诱导CEA过表达,促进肺癌A549细胞的迁移和侵袭.     

microRNA-424-5p对电离辐射的A549细胞侵袭和迁移能力的影响

目的探讨microRNA-424-5p(miR-424-5p)在辐射诱导的A549细胞侵袭和迁移中的作用。方法采用茎环RT-PCR检测辐照后A549细胞中miRNA的表达;Transwell小室实验检测A549细胞侵袭和迁移能力。结果 4GyX射线照射诱导了A549细胞中miR-424-5p的表达;过表达miR-424-5p后,与对照组相比,A549细胞侵袭和迁移能力明显增强;导入外源性miR-424-5p抑制物后进行4 GyX射线照射,A549细胞侵袭和迁移能力明显减弱。结论 4 GyX射线诱导了miR-424-5p的表达并促进了A549细胞的侵袭和迁移。本研究为未来进一步研究其分子作用机制奠定基础。     

Survivin基因调节人脑胶质瘤细胞侵袭与迁移机制的探讨

目的:检测并研究Survivin基因对U251及U87神经胶质瘤细胞侵袭及迁移的影响,为胶质瘤的基因治疗提供理论和实验依据.方法:(1)通过划痕实验及Transwell迁移实验检测细胞在干扰及过表达Survivin胶质瘤细胞迁移的变化;(2)通过Transwell侵袭实验检测细胞在干扰及过表达Survivin胶质瘤细胞侵袭能力的变化;(3)通过Westernblot和免疫荧光实验检测细胞在干扰Survivin 48h后N-cadherin表达及定位的变化;(4)通过明胶酶谱实验检测在干扰及过表达Survivin 48h后细胞分泌MMP的变化.结果:(1)针对Survivin特异性的三条siRNAoligo,干扰效率达70％-80％;过表达后转染率在80％左右;(2)划痕实验Transwell实验(不铺胶)证实转染siRNAoligo和过表达Survivin后细胞迁移数目明显低于对照组(P＜0.01),Transwell迁移实验证实转染siRNAoligo和过表达Survivin后穿过滤膜的细胞数目明显低于对照组(P＜0.01);(3) Transwell侵袭实验证实转染siRNAoligo和过表达Survivin后细胞侵袭数目明显低于对照组(P＜0.01);(4)明胶酶谱证实转染siRNAoligo后细胞分泌基质金属酶低于对照组,而过表达Survivin后高于对照组;明胶酶谱实验显示:与对照组相比,siRNAoligo组MMP2的活性明显降低(P＜0.05).结论:(1) Survivin基因调节神经胶质瘤细胞的迁移能力;(2) Survivin基因通过调节MMP2的分泌来影响神经胶质瘤细胞的侵袭能力.     

白藜芦醇抑制人肺癌A549细胞生长过程中长链非编码RNA BC043009的作用

目的 探讨白藜芦醇抑制人肺癌A549细胞生长过程中长链非编码RNA BC043009的作用.方法 运用CCK-8检测白藜芦醇对人肺癌A549细胞的生长抑制作用,运用实时荧光定量PCR检测BC043009在A549细胞及人类正常支气管上皮细胞16HBE中的表达水平.瞬时转染siRNA(小分子干扰RNA)下调BC043009的表达水平,检测BC043009表达水平下调对A549细胞增殖能力的影响.结果 白藜芦醇能有效抑制A549细胞生长并存在剂量反应关系.与16HBE相比,A549细胞中BC043009的表达水平升高(21.81±6.25)倍；白藜芦醇处理后A549细胞中BC043009的表达水平下降到(3.80±2.30)倍.瞬时转染siRNA-2后BC043009的表达水平下降到(0.10±0.03)％,增值率下降到(0.87±0.07)％.结论 BC043009在A549细胞中高表达,白藜芦醇可降低A549细胞中BC043009的表达水平,BC043009表达水平的降低会使A549细胞的增殖能力下降,推断BC043009在白藜芦醇抑制人肺癌A549细胞生长过程中可能发挥重要作用.     

沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的探究长链非编码RNA SPRY4-IT1在宫颈癌中的表达水平及其对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 20对宫颈癌组织和癌旁组织取自2016年2月-2017年2月到该院就诊的20例宫颈癌患者,qRT-PCR检测长链非编码RNA SPRY4-IT1在宫颈癌组织和宫颈癌HeLa细胞中的表达水平;通过小RNA干扰技术检测沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1,CCK-8实验检测沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1对HeLa细胞增殖能力的影响;划痕愈合实验和Transwell迁移侵袭实验检测沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1对HeLa细胞迁移及侵袭能力的影响。结果长链非编码RNA SPRY4-IT1的表达水平在宫颈癌组织和HeLa细胞中显著高于癌旁组织和人永生化表皮细胞HaCaT,差异有统计学意义(t=3.21,P0.01;t=4.58,P0.001)。HeLa细胞转染si-SPRY4-IT1 48 h后,HeLa细胞的增殖能力明显降低,差异有统计学意义(t=2.75,P0.01);迁移距离显著减少(t=4.19,P0.001);迁移和侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(t=3.84,P0.001;t=3.96,P0.001)。结论长链非编码RNA SPRY4-IT1的表达水平在宫颈癌中显著上调,沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1抑制HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

原儿茶酸对小鼠乳腺癌细胞增殖和转移能力的影响北大核心CSCD

目的研究原儿茶酸（protocatechuic acid,PCA）对小鼠乳腺癌细胞（4T1）增殖和转移的影响。方法体外培养4T1细胞。实验分组：溶剂对照组（DMSO）和PCA组（浓度为1、10、100、250、500、1000nmol／L）。MTT法检测PCA对细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell小室法观察PCA对细胞迁移和侵袭能力的影响;蛋白印迹法和荧光定量PCR法分析PCA对基质金属蛋白酶-2（MMP-2）蛋白和mRNA表达的影响。结果1～1000nmol／LPCA对4T1细胞增殖无影响;500、1000nmol／LPCA能够抑制4T1细胞的迁移和侵袭,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P〈0．05）;PCA对4T1细胞MMP-2蛋白和mRNA表达均无影响。结论PCA能够抑制小鼠乳腺癌细胞的迁移和侵袭,其作用机制可能与MMP-2无关。     

原儿茶酸对小鼠乳腺癌细胞增殖和转移能力的影响

目的研究原儿茶酸(protocatechuic acid,PCA)对小鼠乳腺癌细胞(4T1)增殖和转移的影响。方法体外培养4T1细胞。实验分组:溶剂对照组(DMSO)和PCA组(浓度为1、10、100、250、500、1000 nmol/L)。MTT法检测PCA对细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell小室法观察PCA对细胞迁移和侵袭能力的影响;蛋白印迹法和荧光定量PCR法分析PCA对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白和mRNA表达的影响。结果 1¹000 nmol/L PCA对4T1细胞增殖无影响;500、1000 nmol/L PCA能够抑制4T1细胞的迁移和侵袭,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05);PCA对4T1细胞MMP-2蛋白和mRNA表达均无影响。结论 PCA能够抑制小鼠乳腺癌细胞的迁移和侵袭,其作用机制可能与MMP-2无关。[营养学报,2014,36(1):53-57]     

PPARα激动剂抑制THP-1细胞中组织因子表达(英文)

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体α(peroxisome proliferator-activated receptor-α,PPARα)的激动剂对单核细胞株THP-1中组织因子(tissue factor,TF)表达的影响。方法用不同浓度的PPARα激动剂非诺贝特预处理单核细胞THP-1一定时间,然后分别用RT-PCR和Western Blot法检测由细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的细胞TF的mRNA和蛋白质表达水平。结果非诺贝特减少了LPS诱导的人单核细胞TF mRNA和蛋白质的表达,此作用呈现浓度依赖性。结论非诺贝特抑制了THP-1中LPS诱导的TF表达,此机制可能参与了PPARα激动剂的抗动脉粥样硬化作用。     

5F对人绒癌JAR细胞株侵袭转移能力的影响

目的:探讨Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)对人绒癌JAR细胞侵袭、转移、黏附的影响及MMP-9、VEGF表达的变化。方法:用不同浓度的5F作用JAR细胞,MTT比色法,Transwell小室,细胞黏附实验观察其增殖、侵袭、迁移、黏附能力的变化;Western blot方法检测5F对JAR细胞MMP-9、VEGF表达水平的影响。结果:作用6 h,5F能抑制JAR细胞的增殖、转移、侵袭、黏附,其抑制率呈剂量效应(P<0.05)。5F作用24 h JAR细胞,MMP-9、VEGF蛋白表达水平能明显下调。结论:5F能抑制JAR细胞的侵袭、转移、黏附并下调MMP-9、VEGF蛋白表达水平。     

野生型P53诱导的蛋白磷酸酶1对卵巢癌细胞侵袭的影响

目的:探讨野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1(Wip1)与卵巢癌细胞SKOV3侵袭力的关系,揭示Wip1对SKOV3细胞的侵袭和迁移等恶性生物学行为的影响。方法:采用划痕实验、Transwell小室法测定Wip1沉默后SKOV3细胞体外侵袭能力。实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot方法检测SKOV3细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、组织金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达。结果:细胞迁移距离Wip1-siRNA组(30.33±3.67)短于Control组(59.33±7.69),细胞侵袭到Transwell小室滤膜下细胞数Wip1-siRNA组(17.17±1.84)低于Control组(30.17±3.43),RT-PCR和Western blot检测Wip1-siRNA组MMP-2(0.51±0.01)和MMP-9(0.40±0.03)的表达较Control组(1.00±0.00)降低(均P0.01);Wip1-siRNA组TIMP-1和TIMP-2的表达与Control组未见差异(P0.05)。结论:沉默Wip1能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞侵袭能力,可能是通过抑制MMP-2、MMP-9的表达实现的。     

长链非编码RNA SFTA1P在非小细胞肺癌组织中的表达和细胞功能研究

  目的   研究长链非编码RNA SFTA1P在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)中的表达情况, 以及对NSCLC细胞系生物学功能的影响。   方法   运用定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测SFTA1P在18对非小细胞肺癌组织及癌旁组织中的表达情况; 用qRT-PCR检测5株NSCLC细胞系(A549、SPCA1、H1975、H460和H1299)和1株肺正常上皮细胞系(human bronchial epithelial, HBE)中SFTA1P的表达情况; 构建SFTA1P的过表达载体, 通过转染构建过表达细胞模型; 运用CCK-8、Transwell等实验方法检测SFTA1P过表达对NSCLC细胞增殖、侵袭、迁移的影响。   结果   SFTA1P在非小细胞肺癌组织中的表达低于癌旁组织(t=2.158, P=0.043);与HBE细胞相比较, SFTA1P在A549和H460细胞系中相对低表达(t=5.769, P=0.004; t=5.772, P=0.004), 在H1299和H1975细胞系中相对高表达(t=22.248, P < 0.001; t=11.814, P < 0.001);SFTA1P过表达质粒转染A549和H460细胞系后, 与空质粒的对照组比较, SFTA1P的表达均升高, 且有统计学差异(均有P < 0.05);过表达SFTA1P可以抑制非小细胞肺癌细胞H460、A549的增殖、侵袭、迁移, 差异有统计学意义(均有P < 0.05)。   结论   SFTA1P基因能够抑制NSCLC细胞的增殖、迁移、侵袭等生物学功能, SFTA1P在肿瘤发生和发展中可能起着抑癌基因的作用。