多重耐药鲍曼不动杆菌中16SrRNA甲基化酶基因的检测及耐药分析

目的了解医院分离的多重耐药鲍曼不动杆菌16SrRNA甲基化酶基因分布情况,为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法采用Phoenix100微生物全自动鉴定系统进行菌株鉴定及药敏试验;采用PCR方法检测armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD基因。结果 46株鲍曼不动杆菌中armA基因阳性36株,阳性率78.3%,未检出rmtA、rmtB、rmtC、rmtD基因。药敏试验结果显示医院分离的多重耐药鲍曼不动杆菌对多黏菌素全部敏感,对四环素、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、甲氧苄啶-磺胺甲唑耐药率分别为13.0%、80.4%、91.3%、95.7%、95.7%,对其他测试药物耐药率100%。结论医院分离鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药性已非常严重,携带armA基因是导致氨基糖苷类耐药的原因之一,延缓鲍曼不动杆菌多重耐药性已刻不容缓。     

革兰阴性杆菌16S rRNA甲基化酶基因检测及作用研究

目的分析上海中医药大学附属普陀医院临床分离的革兰阴性杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的流行情况及革兰阴性杆菌的氨基糖苷类耐药机制。方法收集临床分离的对阿米卡星和/或庆大霉素耐药的革兰阴性杆菌53株。采用聚合酶链反应（PCR）法检测16S rRNA甲基化酶基因：armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA;PCR阳性产物测序分析。构建PET32-armA和PET32-rmtB的重组质粒并转化入宿主菌BL21中。纸片扩散法（K-B）检测临床分离16S rRNA甲基化酶基因阳性菌株和重组菌对5种氨基糖苷类药物的敏感性。结果 53株耐药菌中5株鲍曼不动杆菌、2株肺炎克雷伯和1株阴沟肠杆菌检出armA基因,2株大肠埃希菌检出rmtB基因。获得PET32-armA和PET32-rmtB的重组BL21菌株。PET32-armA和PET32-rmtB的重组菌均获得氨基糖苷类抗菌药物耐药性。结论本院临床样本检测到16S rRNA甲基化酶基因armA和rmtB阳性菌株,armA基因存在于鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中;rmtB基因位于大肠埃希菌中。将armA和rmtB基因转入非耐药的宿主菌中可以诱导其对氨基糖苷类抗菌药物的耐药。     

多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因的研究

目的调查16S rRNA甲基化酶基因在我院院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌中的表达情况,为临床合理使用抗菌药物和控制院内感染的发生提供依据。方法用微量稀释法和纸片扩散法测定菌株的药敏情况。PCR方法检测armA和rmtB16S rRNA甲基化酶基因在46株多重耐药鲍曼不动杆菌中的存在情况。结果 46株多重耐药鲍曼不动杆菌中,40株armA基因阳性,未检出rmtB基因,16S rRNA甲基化酶基因携带率为87%(40/46)。结论我院院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因携带率很高,可能与氨基糖苷类耐药有关。     

16S rRNA甲基化酶在氨基糖苷类抗生素耐药革兰阴性菌中的分布

目的了解6种编码16SrRNA甲基化酶的基因在氨基糖苷类抗生素耐药革兰阴性菌中的流行情况。方法收集本院2007年10～12月分离的211株阿米卡星和庆大霉素耐药革兰阴性菌，采用PCR检测其中6种甲基化酶基因（armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA）的分布。对16SrRNA甲基化酶基因阳性的菌株，用ERIC-PCR进行同源性分析。结果211株阿米卡星和庆大霉素耐药革兰阴性菌中，91．5％（193／211）被检出16SrRNA甲基化酶基因，其中133株含armA（133／211，63．0％），60株含rmtB（60／211，28．4%）。阿米卡星MIC≥512mg／L、庆大霉素MIC≥128mg／L的104株肠杆菌科细菌中，甲基化酶基因检出达100％，且armA和rmtB的检出相仿（分别为49与55株）。阿米卡星MIC≥512mg／L、庆大霉素MIC≥128mg／L的94株铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌中，甲基化酶检出94．7％（89株），以armA（84株）为主。未检测到rmtA，rmtC，rmtD和npmA基因。ERIC-PCR结果显示该类基因并非单克隆传播。结论几乎所有临床分离的阿米卡星MIC〉512mg／L的革兰阴性菌中都能检出armA或rmtB基因。     

阴沟肠杆菌16SrRNA甲基化酶基因分布

目的：了解湖南邵阳地区耐氨基糖苷类抗菌药物的阴沟肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因分布特点及其与氨基糖苷类抗菌药物耐药性的关系。方法收集2012年8月至2014年5月邵阳地区新宁县人民医院、武岗市人民医院、邵阳县人民医院和邵阳医学高等专科学校附属医院临床样本中分离的241株阴沟肠杆菌,采用API20E进行菌种鉴定,同时用纸片扩散法进行体外药物敏感性试验。采用聚合酶链反应（ PCR）进行armA、npmA、rmtA、rmtB、rmtC和rmtD基因检测,分析耐药基因与耐药表型的关系。结果241株阴沟肠杆菌中200株对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星4种氨基糖苷类抗菌药物耐药,其耐药率分别为41．9％、68．5％、70．1％和63．5％。基因检测结果提示,241株阴沟肠杆菌检出2种16S rRNA甲基化酶基因,分别为armA（96株,39．8％）和rmtB（17株,7．1％）,未检出npmA、rmtA、rmtC和rmtD基因。结论16S rRNA甲基化酶与氨基糖苷类抗菌药物的耐药性有相关性。不同地区分离的对氨基糖苷类药物耐药的阴沟肠杆菌菌株携带16S rRNA甲基化酶的基因型有一定差异,湖南邵阳地区阴沟肠杆菌以携带armA基因为主。     

肠杆菌科细菌对氨基糖苷类的耐药性及16S rRNA甲基化酶基因的检测研究

目的了解氨基糖苷类耐药肠杆菌科细菌的分布、耐药情况,及16S rRNA甲基化酶基因型的分布,为临床用药提供参考依据。方法收集宁夏医科大学总医院2017年临床分离的非重复肠杆菌科细菌142株,细菌鉴定采用VITEK-2Compact系统,药敏试验采用肉汤微量稀释法,PCR扩增16S rRNA甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rmtE、rmtF、rmtG、rmtH、npmA)。结果 142株肠杆菌科细菌中72株对氨基糖苷类耐药。这72株菌对头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨曲南的耐药率均≥77.1%,对酶抑制剂复合制剂头孢哌酮-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦的耐药率≥51.4%,对头孢他啶-阿维巴坦、替加环素的耐药率10%,对碳青霉烯类耐药率≤40.0%。氨基糖苷类敏感株对多数抗菌药物的耐药率低于氨基糖苷类耐药株。氨基糖苷类耐药株中有71株检出16S rRNA甲基化酶基因,总阳性率为50.0%(71/142),在氨基糖苷类耐药株中的阳性率为98.6%(71/72)。71株中rmtB 54株,占76.1%;armA 14株,占19.7%;rmtA 2株,占2.8%;rmtB+armA 1株,占1.4%。未检出rmtC、rmtD、rmtE、rmtF、rmtG、rmtH和npmA基因。结论 rmtB和armA 16S rRNA甲基化酶是该院临床分离肠杆菌科细菌对氨基糖苷类耐药的主要机制。     

鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药及其携带基因的探讨

目的探讨鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药情况和耐药表型及其携带基因的关系。方法收集48株鲍曼不动杆菌,用K-B法和琼脂稀释法检测其对阿米卡星的敏感性,PCR法扩增aac(6′)Ⅰ基因以及3种16SrRNA甲基化酶基因(armA、rmtB及rmtC基因)。结果 72.9%(35/48)菌株对阿米卡星表现为双圈耐药,其中100.0%菌株检出armA基因,未检出rmtB、rmtC基因,77.1%(27/35)菌株检出aac(6′)Ⅰ基因;10.4%(5/48)菌株对阿米卡星普通耐药,均未检出16SrRNA甲基化酶基因,其中80.0%(4/5)菌株检出aac(6′)Ⅰ基因;16.7%(8/48)菌株对阿米卡星敏感,未检出相关耐药基因。结论鲍曼不动杆菌对阿米卡星的耐药情况非常严重;双圈耐药现象与armA基因诱导型表达有关。     

多重耐药不动杆菌16S rRNA甲基化酶和同源性研究

目的 调查2007年7月-2008年5月山西医科大学第二附属医院临床分离的61株多重耐药不动杆菌中介导氨基糖苷类抗生素高水平耐药的16S rRNA甲基化酶基因和Ⅰ类整合子携带耐药基因的分布.方法 利用blaOXA-51基因及16S rRNA-23S rRNA序列进行菌株鉴定,琼脂稀释法测定12种抗菌药物对61株不动杆菌的MIC,PCR筛选6种16S rRNA甲基化酶基因以及整合子基因盒,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株同源性.结果 61株临床分离不动杆菌中55株为鲍曼不动杆菌、3株为3TU不动杆菌、l株13TU不动杆菌、1株醋酸钙不动杆菌、l株溶血不动杆菌.48株不动杆菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素均耐药,其中有47株检出armA基因;未检出rmtA、rmtB、rmtC、mad和npmA基因.armA基因阳性的菌株中Ⅰ类整合子阳性27株,分别携带arr-3、accA4、aacCl、catB8、aadA1和dfrA12基因.PFGE条带分析发现47株armA阳性菌株分为5个克隆,其中A、B为主要克隆,分布在我院多个科室中.结论 16S rRNA甲基化酶基因armA在多重耐药不动杆菌中广泛存在,armA基因不位于Ⅰ类整合子中,不动杆菌Ⅰ类整合子携带耐药基因主要介导对氨基糖苷类及氯霉素的耐药性.PFGE结果显示armA基因阳性菌株在我院呈克隆播散,必须采取有效的措施来控制耐药菌的传播.     

广泛耐药铜绿假单胞菌甲基化酶基因的检测和基因周边结构分析

目的了解16S rRNA甲基化酶基因在广泛耐药(XDR)铜绿假单胞菌临床株中的分布及此类耐药基因周边结构。方法收集XDR铜绿假单胞菌59株,琼脂稀释法测定MIC,PCR方法检测16S rRNA甲基化酶基因(armA,rmt A,rmtB,rmtC,rmtD,rmtE,npmA),ERIC-PCR方法进行同源性分析,并对检出的16S rRNA甲基化酶基因armA和rmtB进行周边序列分析。结果 59株XDR铜绿假单胞菌临床分离株中,16S rRNA甲基化酶基因总检出率62.7%(37/59),rmtB的检出率略高于armA,未检出其他甲基化酶基因。根据ERIC-PCR结果受试临床株可分为19个型别。17株检出armA基因菌株分布在3个克隆,其中15株(88.2%)集中在一个克隆(克隆D);而rmtB基因散布于9个克隆。基因周边序列分析显示,armA基因位于一个含多种转座酶的移动元件上,其与大肠埃希菌和鲍曼不动杆菌携带的armA阳性质粒序列一致性达99%;rmtB基因也位于一个含转座酶的移动元件上,其与大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌携带的rmtB质粒序列高度一致。结论 16S rRNA甲基化酶基因在XDR铜绿假单胞菌分离株中分布广泛,均在对庆大霉素高度耐药的菌株中检出。armA在铜绿假单胞菌中存在克隆传播。     

革兰阴性菌中16SrRNA甲基化酶基因的检测

目的 了解大连2所医院临床分离革兰阴性菌中介导高水平氨基糖苷类抗生素耐药的16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtB的流行情况,并研究其耐药机制.方法 收集临床分离的耐阿米卡星的革兰阴性杆菌134株.PCR法筛选2种甲基化酶基因armA及rmtB;PCR产物进行测序.质粒提取、接合试验及转化试验确定armA及rmtB基因定位.琼脂稀释法测定阳性菌株、结合子和转化产物对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素3种氨基糖苷抗生素的MIC值.结果 134株耐药菌株中,21株鲍曼不动杆菌检出armA基因,5株大肠埃希菌和5株肺炎克雷伯菌检出rmtB基因.质粒抽提试验及接合试验rmtB阳性菌获得成功.接合子及转化产物DH5a(pMDarmA)均获得高水平耐氨基糖苷类抗生素的特性. 结论 大连2所医院检测到16S rRNA甲基化酶基因armA和rmtB阳性菌株.armA基因存在于鲍曼不动杆菌中;rmtB基因位于大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的质粒上.armA和rmtB可以导致细菌对氨基糖苷类抗生素的高水平耐药.