乙型肝炎病毒核心抗原在慢性乙型肝炎病毒感染者肝细胞内的分布及临床意义

目的 探讨HBcAg在慢性HBV感染者肝细胞内的分布情况及其临床意义.方法 对41例慢性HBV感染者进行肝组织穿刺,用免疫荧光组织化学技术在激光共聚焦显微镜下观察肝细胞内HBcAg的分布情况.计量资料采用Kruskal Wallis检验,计数资料采用卡方检验.结果 41例慢性HBV感染者中,36例肝细胞内HBcAg阳性表达,阳性率为87.8%,其中23例肝功能中度异常,10例肝功能轻度异常,3例肝功能正常.HBcAg有膜、胞质与核三种形式表达.在23例肝功能中度异常者中,6例呈明显膜型表达,无明显胞质型及核型,17例以胞质型与膜型混合表达,未发现核型表达.在10例肝功能轻度异常者中,以单纯胞质型为主,未见膜型与核型表达.在3例肝功能正常者中,以胞质型表达与少许核型表达为主,未见膜型表达.HBcAg表达类型与肝功能之间差异有统计学意义(χ2=10.60,P＜0.01).结论 慢性HBV感染者肝组织损伤与HBcAg的表达有直接联系,提示膜型表达的HBcAg是肝脏免疫损伤过程中的靶抗原.

Abstract：

Objective To explore the distribution and clinical significance of hepatitis B core antigen( HBcAg) in the hepatocytes of chronic hepatitis B virus infected patients. Methods Paraffin sections were made from 41 liver biopsy samples obtained from chronic hepatitis B virus infected patients. The immuno-fluorescence confocal technique was utilized to analyze the expression level and localization of HBcAg in hepatocytes. The data were analyzed by using Kruskal Wallis test and chisquare test. Results HBcAg expression were detected in 36 (87. 8%) patients, among whom 23 cases had moderate abnormal liver function, 10 with mild abnormal liver function and 3 with normal liver function. Among the cases with moderate abnormal liver function, 6 cases showed the simple membrane-type HBcAg expression, 17 cases showed mixed cytosolic-type and membrane-type HBcAg expression without the nuclear-type expression. Twelve cases with mild abnormal liver function only showed simple cytosolic-type HBcAg expression without membrane-type or nuclear-type expression. In the three patients with normal liver function, HBcAg was expressed in cytoplasm and nuclear but not on membrane. The correlation between HBcAg expression pattern and liver function was statistically significant (χ2 =10. 60, P＜0.01). Conclusion HBcAg expression is directly correlated with liver injury in chronic hepatitis B virus infected patients, which indicates that membrane expressed HBcAg is the target antigen during the immuno-attack of liver.     

乙型肝炎病毒转基因小鼠免疫耐受状态及血液生物化学指标的研究

目的 了解HBV转基因鼠HBV基因的复制表达和免疫耐受状态,为探讨乙型肝炎发病机制和抗HBV新药评价提供可靠的参考依据.方法 选取遗传背景相同的SPE级HBsAg阴性非转基因鼠和转基因鼠.化学发光法检测HBsAg、HBeAg、HBV DNA,ELISA检测前S1、HBcAg,肝组织行病理学检查,免疫组织化学染色检测不同时期转基因鼠肝HBsAg表达,流式细胞仪检测小鼠淋巴细胞增殖情况,酶联免疫斑点检测(ELISPOT)分泌IFNγ的T淋巴细胞斑点数,双色免疫荧光法检测脾细胞悬液和脾树突状细胞(DC)中Toll样受体(TLR)2和TLR9的表达.数据行t检验和F检验.结果 HBV转基因鼠可复制表达HBsAg、前S1、HBeAg、HBcAg和HBVDNA,而抗-HBs、抗-HBc、抗-HBe均阴性;肝组织无明显病理改变,肝细胞中HBsAg在胞质表达,HBcAg在胞核表达.HBsAg刺激后,HBV转基因鼠T淋巴细胞增殖能力为(697.6±67.3)cpm,显著低于非转基因鼠的(1315.5±191.6)cpm.经HBsAg刺激后,HBV转基因鼠脾细胞分泌IFNγ的T淋巴细胞斑点数为8.25±1.10,低于非转基因鼠的28.50±4.21(F=155.967,P=0.000).HBV转基因DC表达CD11c+、TLR2和TLR9与非转基因鼠比较,差异无统计学意义(均P＞0.05).在18日龄胎鼠和1日龄仔鼠肝组织观察到HBsAg表达.结论 HBV转基因鼠有HBV相关抗原表达,并对HBV相关抗原存在免疫耐受,其先天和获得性免疫功能均正常,类似于人类慢性HBV无症状携带者.HBV转基因鼠是比较理想的动物模型.     

乙型肝炎病毒基因调控的小鼠肝细胞质膜蛋白质变化

目的 通过对转HBV全基因小鼠肝细胞质膜蛋白质组的分析,研究病毒基因对宿主肝细胞质膜蛋白质表达的影响,探讨HBV感染机制. 方法 以HBV转基因C57小鼠和正常鼠肝为材料,通过蔗糖密度梯度离心结合抗体亲和法纯化肝细胞质膜.用Western blot法验证质膜的纯度和转基因鼠肝细胞质膜中HBV外膜蛋白质的表达.对纯化的质膜组分进行差异蛋白质组学分析. 结果 亲和纯化法较密度梯度离心法能进一步富集质膜近3倍,线粒体的污染减少近2倍;HBV外膜蛋白质只在转基因鼠肝细胞质膜中表达.蛋白质双向电泳分离得到500多个蛋白质点,分析得到26个具有2倍以上差异的蛋白质点,准确鉴定出7个蛋白质.结论 获得了好的质膜纯化方法;HBV基因调节了小鼠肝细胞质膜蛋白质的表达,鉴定得到了与HBV病毒感染相关蛋白质,为进一步探讨HBV感染机制打下了基础.     

中草药抑制乙型肝炎病毒（HBV）的机理

近年来,采用中草药治疗乙型肝炎并取得满意疗效的报道越来越多;采用中草药抑制HBV的实验研究也在加紧进行,并摸索出了一些较好的经验,现将有关机理介绍如下: 一、HBV复制的一般规律 各类病毒在复制的细节上有很大差异,但在宏观上都遵从一个总的规律,即经过吸附、穿入、脱壳、合成装配和释放等步骤。HBV复制必须经过这些步骤。 (一) 吸附 吸附是HBV颗粒进入敏感细胞(肝细胞)的初级阶段。通过HBV与肝细胞上的HBV表面受体相结合来完成。 (二) 穿入 HBV颗粒被肝细胞受体吸附后,由于HBV表面的某些蛋白与肝细胞上的受体发生化学反应,破坏了肝细胞壁原来结构,如破坏了肝细胞     

乙型肝炎病毒感染、复制及其清除机制

一、乙型肝炎病毒（HBV）感染、复制与表达 1.HBV感染肝细胞等宿主细胞机制:HBV进入细胞是由其包膜蛋白介导的,该包膜蛋白是由S基因区（分pre-S1、pre—S2和S区）编码的大蛋白（LP）、中蛋白（MP）和小蛋白（SP）按一定的比例和方式装配而成的复合物。HBV包膜蛋白成分与肝细胞等宿主细胞膜上相应的受体特     

HBV包膜蛋白

乙型肝炎病毒(HBV)是怎样感染人体的呢?初步研究表明,HBV 通过其包膜蛋白与肝细胞膜上的特异性受体结合而感染细胞,参与这一吸附作用的配体一受体系统包括 HBV 包膜蛋白中的pre S_1 蛋白(21～47片断)一肝细胞膜受体以及     

乙型肝炎病毒嗜肝性机制研究进展

乙型肝炎病毒 (ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ,ＨＢＶ)属嗜肝脱氧核糖核酸病毒 (ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ)。其吸附、入侵肝细胞 ,是感染肝细胞并引起病变的第一步 ,也是ＨＢＶ嗜肝性的原因之一 ,人们对ＨＢＶ吸附肝细胞的机制进行了长期大量的研究 ,现将有关内容综述如下 :1　ＨＢＶ与肝细胞受体直接结合研究初期 ,许多学者[1,2 ] 成功地以ＨＢＶ颗粒感染肝癌细胞系ＨｅｐＧ2 细胞 ,推测 ｐｒｅＳ1和 ｐｒｅＳ2 蛋白可以直接与肝细胞结合。Ｎｅｕｒａｔｈ等利用人工合成多肽方法 ,对 ｐｒｅＳ1及 ｐｒｅＳ2 的决定簇进行分析 ,通过…     

β2糖蛋白Ⅰ与乙型肝炎病毒嗜肝性的关系

目的 研究乙型肝炎表面抗原（HBsAg）与β2糖蛋白Ⅰ（β2GPⅠ）的结合特性，探讨β2GPⅠ在乙型肝炎病毒（HBV）嗜肝性中的作用。方法 采用Western blot技术，研究还原型与非还原型β2GPⅠ与HBsAg的结合特性。结果 还原型与非还原型β2GPⅠ与HBsAg有相同的亲和力，推测β2GPⅠ与HBsAg的结合部位是在一级结构上相邻的氨基酸残基肽段，与空间构象关系不大。结论 HBV与β2GPⅠ有特异的亲和能力，这一亲和能力可能在HBV感染肝细胞过程中发挥了重要作用，是HBV嗜肝性的原因之一。     

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA与松弛环状DNA对核苷(酸)类药物耐药变异的比较

目的 了解肝细胞内HBV共价闭合环状DNA( HBV cccDNA)核苷(酸)类药物耐药变异的情况,并比较其与松弛环状DNA(rcDNA)耐药变异的异同.方法 取40例慢性HBV感染肝移植患者的部分肝组织,采用十二烷基硫酸钠-蛋白质沉淀法结合DNA提取试剂盒分离提取肝内的HBV cccDNA和rcDNA.将抽提产物用不降解质粒的ATP依赖DNA酶酶切纯化后,用跨HBV基因组双链缺口并涵盖常见核苷类耐药位点(rt169～rt250)的引物行单轮PCR或套式PCR选择性扩增cccDNA.另用不跨双缺口的引物PCR扩增肝组织内的HBV rcDNA和患者肝移植术前的血清HBV rcDNA.用直接测序法对上述扩增产物进行基因测序并分析核苷(酸)类药物耐药位点的检出情况.结果 40例患者中,31例肝组织内检测到HBV cccDNA,35例肝组织检测到HBV rcDNA,21例肝移植术前血清中检测到HBV rcDNA.测序结果显示,2例肝组织内cccDNA、rcDNA和血清rcDNA均检测到rtM204Ⅰ变异;有2例患者肝内cccDNA、rcDNA分别存在rtM204Ⅰ、rtQ215H变异,而血清rcDNA未检测到相应变异;3例血清中分别存在rtM204V、rtM204V、rtV173L+ rtL180M+rtM204V变异,而肝内cccDNA和rcDNA未检测到相应变异.结论 慢性HBV感染者肝细胞内cccDNA可出现核苷(酸)类药物耐药变异,且肝组织内的cccDNA、rcDNA耐药变异株与血清中的rcDNA耐药变异株不完全一致.     

β_2糖蛋白Ⅰ与乙型肝炎病毒嗜肝性的关系

目的研究乙型肝炎表面抗原(HBsAg)与β_2糖蛋白Ⅰ(β_2GPⅠ)的结合特性,探讨β_2GPⅠ在乙型肝炎病毒(HBV)嗜肝性中的作用。方法采用Western blot技术,研究还原型与非还原型β_2GPⅠ与HBsAg的结合特性。结果还原型与非还原型β_2GPⅠ与HBsAg有相同的亲和力,推测β_2GPⅠ与HBsAg的结合部位是在一级结构上相邻的氨基酸残基肽段,与空间构象关系不大。结论HBV与β_2GPⅠ有特异的亲和能力,这一亲和能力可能在HBV感染肝细胞过程中发挥了重要作用,是HBV嗜肝性的原因之一。     

临床肝病患者中庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)的感染

本文应用抗-HGV酶联免疫法(EIA)和逆转录套式聚合酶链反应法(RT-PCR)检测150份乙型、120份丙型、15份戊型和49份非甲-戊型肝炎患者血清。结果显示:乙肝、丙肝、戊肝和非甲-戊型肝炎患者中抗-HGV抗体的阳性率分别为22.0％(33/150)、25.0％(30/120)、33.3％(5/15)和40.1％(20/49)。其中乙型、丙型、戊型和非甲-戊型肝炎的抗-HGV抗体阳性者中,HGV RNA的阳性率分别为58.3％(7/12)、60.0％(6/10)、40.0％(2/5)和45.5％(9/12)。说明GBV-C/HGV可与HBV、HCV或HEV合并感染,该病毒可能引起临床型肝炎。     

拉米夫定治疗其他方法抗病毒治疗失败的慢性乙型肝炎患者的疗效

目的观察拉米夫定对复发性慢性乙型肝炎患者的疗效和安全性。方法选择27例其他方法抗病毒治疗失败的慢性乙型肝炎患者,给予拉米夫定100mg口服,每日一次,连续服用12个月。结果治疗后12个月时ALT和血清总胆红素平均值(分别为52.7±26.5U/L和19.7±21.1μmol/L),与治疗前平均值(211.3±182.4U/L和54.6±28.8μmol/L)相比显著下降(P<0.01);其ALT复常率为88.9%(24/27),HBV DNA阴转率77.8%(21/27),HBeAg阴转率29.6%(8/27),HBeAg/抗-HBe血清转换率18.5%(5/27)。停药后6个月内有7例复发。治疗全程未见严重不良反应。结论拉米夫定治疗其他方法抗病毒治疗失败的慢性乙型肝炎患者也能够迅速抑制病毒的复制,使肝功能复常,而且安全、方便。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎病人的长期疗效

通过多中心,承机,双盲,安慰剂对照的临床试验,研究拉米夫定（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）对慢性乙型肝炎（乙肝）病人的疗效和安全性。方法随机选择３２２例慢性乙肝病拉米夫定治疗（１００ｍｇ／ｄ）,１０７例病人服用安慰剂作对照,共治疗１２周,在１２周治疗结束后,拉米夫定组和安慰剂组病人均继续服用拉米夫定１００ｍｇ治疗至５２周。疗效评估包括临床症状和体征,肝功能和ＨＢＶ复制指标。结果治疗１２周,拉米夫定组ＨＢＶ     

HDV感染后乙型肝炎患者血清肝炎病毒标志物的变化

目的　分析HDV感染患者血清病毒性肝炎标志物的变化和意义 ,探讨HDV致病机理。方法　对 469例HDV阳性乙型肝炎患者常见各类型病毒性肝炎血清标志物的变化等作统计分析 ,以 2 13例HDV( -)乙型肝炎患者作对照。结果　HDV感染后血清HBeAg检出率降低 (P <0 .0 1)。在HDV ( +)HBVDNA( -)组 ,HBeAg( -)的机会大 (P <0 .0 1)。在急性肝炎、重型肝炎和肝硬化患者HDAg( +)HBeAg( -)为主要血清病毒表现形式 (P <0 .0 1或 0 .0 5 )。HDV感染后合并其它肝炎病毒感染率高于乙型肝炎组。结论　HDV感染可抑制HBV复制或HBeAg表达 ,混合感染HDV的乙型肝炎中HDV的直接细胞毒性作用可能起主要致病作用。重叠感染HDV的乙型肝炎患者其病情重、病死率高和容易慢性化。     

树突状细胞疫苗的制备及治疗慢性乙型肝炎的疗效观察

目的　探讨自体乙肝疫苗致敏的树突状细胞 (DC)的制备方法及其治疗慢性乙型肝炎 (CHB)的疗效。方法　取 CHB患者外周血 2 0 ml分离单个核细胞 ,加入重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子 (r GM- CSF)和白细胞介素 4 (IL- 4 )进行 DC体外扩增 ,于培养第 5天加入 5 0 μg/ m l乙型肝炎疫苗 ,7天收获细胞。 34例 CHB患者根据年龄和发病时间分为治疗 1(年龄 11～ 2 0岁 ,发病时间 0 .5～ 8.5年 )、2 (年龄 2 1～ 2 8岁 ,发病时间 3.5～ 18年 )、3(年龄 32～ 6 0岁 ,发病时间 10～ 4 2 .5年 )组 ,皮内回输 DC;对照组 CHB患者 (均为自愿停药者 ,2 0例 )注射等量生理盐水 ,均每周 1次 ,连续 8次。于回输 DC后 2周检测患者血清 HBV- DNA含量。结果　培养后可得到形态及功能典型的 DC,治疗 1、2、3组患者回输 DC后血清 HBV- DNA含量拷贝数均较对照组显著降低 (P<0 .0 1) ,总应答率 5 8.8% (2 0 / 34) ,对照组输注前后无明显变化 (P>0 .0 5 ) ;治疗 1组与 3组相比 HBV- DNA定量拷贝数降低幅度有显著性差异 (P<0 .0 1)。结论　 DC可明显降低CHB患者血清 HBV- DNA含量 ,感染病毒时间短和 /或年龄小者降低幅度大     

Randomized trial of lamivudine versus hepatitis B immunoglobulin for long-term prophylaxis of hepatitis B recurrence after liver transplantation

BACKGROUND/AIMS: The long-term prophylaxis of hepatitis B after liver transplantation requires further optimization. In a randomized trial we investigated a regimen where the initially given hepatitis B immunoglobulin (HBIg) is replaced by long-term lamivudine treatment. METHODS: Twenty-four liver transplant recipients (all HBsAg-positive/HBV DNA-negative before transplantation), who had received HBIg for at least 6 months without HBV recurrence, were randomized to receive lamivudine (n = 12) or HBIg (n = 12) for 52 weeks. The efficacy criteria involved seronegativity for HBsAg and undetectable HBsAg/ HBcAg in the liver. RESULTS: Twenty-one of 24 patients completed the study without hepatitis B virus (HBV) recurrence (11 on HBIg, ten on lamivudine), while three patients became HBsAg-positive. Amongst those without HBV recurrence HBV DNA was detectable only by polymerase chain reaction, intermittently in serum and lymphocytes, and in liver specimens from six of eight patients receiving HBIg and five of seven receiving lamivudine. YMDD variant was found in four cases with no viral antigen expression. Eight patients continued lamivudine after the study and during an additional 6-22 months remained HBsAg-negative with normal graft function. CONCLUSIONS: Substitution of HBIg with lamivudine is effective for prevention of HBV recurrence in low-risk liver transplant recipients and offers a convenient and cost-effective alternative for long-term HBV prophylaxis.     

慢性乙型肝炎干扰素治疗前后血清中HBV DNA定量检测及肝组织学变化

目的　探讨α 2b干扰素治疗慢性乙型肝炎前后肝组织学的变化及对血清HBVDNA滴度的影响。方法　对 2 1例慢性乙型肝炎患者于治疗前及治疗结束后 1周进行肝穿刺活检 ,用Knodell方法 (HAI)对治疗前后肝组织学进行评分 ,采用定量PCR方法检测血清中HBVDNA拷贝 ,免疫组织化学检测肝组织中HBsAg、HBcAg表达。结果　治疗前后血清中HBVDNA定量 (log值 )分别为 8 2 84± 0 .68,7.3 3 8± 1.12 (P <0 .0 1) ;肝组织学HAI计分治疗前后分别为 9.73 8± 3 .46,7.42 9± 3 .47(P <0 .0 5 ) ;肝组织中HBcAg于治疗后 10例转为阴性 (10 /2 1)占 47 61%。血清e抗原阴转率为 5 7 14 %。结论　α 2b干扰素对HBVDNA有显著的抑制作用 ,明显降低血清HBVDNA水平 ,并能明显改善慢性乙型肝炎肝组织的炎症及坏死程度。     

Hepatitis B virus lineages in mammalian hosts:Potential for bidirectional cross-species transmission

The hepatitis B virus(HBV)is a cosmopolitan infectious agent currently affecting over 350 million people worldwide,presently accounting for more than two billion infections.In addition to man,other hepatitis virus strains infect species of several mammalian families of the Primates,Rodentia and Chiroptera orders,in addition to birds.The mounting evidence of HBV infection in African,Asian and neotropical primates draws attention to the potential crossspecies,zoonotic transmission of these viruses to man.Moreover,recent evidence also suggests the humans may also function as a source of viral infection to other mammals,particularly to domestic animals like poultry and swine.In this review,we list all evidence of HBV and HBVlike infection of nonhuman mammals and discuss their potential roles as donors or recipients of these viruses to humans and to other closely-related species.     

未接受抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者多聚酶P基因YMDD变异检测

目的 了解未经拉米夫定及干扰素抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中HBV多聚酶YMDD变异情况。方法 应用错配PCR扩增方法检测病人血清HBV的YMDD位点，选择65例病史超过半年以上、肝功能异常、HBV DNA阳性的慢性乙型肝炎患者。结果 在65例患者中，YMDD变异阳性6例(9．07％)，阴性59例，6例变异中2例为YIDD阳性，其中1例为YMDD野毒株和变异株混合存在，4例为YYDD阳性，其中1例为YMDD野毒株和变异株混合存在。结论 本检测方法简便、实用，在未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中可存在YMDD变异株，其与野生株一样是自然存在的。