Effect of Oct-4 on chemosensitivity of cisplatin against gastric cancer cells

目的:建立胃癌BGC-823顺铂耐药细胞株,研究Oct-4基因在胃癌顺铂耐药中的作用.方法:使用顺铂逐步增加剂量法诱导胃癌BGC-823细胞,以建立其多药耐药细胞株BGC-823/DDP; MTT细胞毒实验检测顺铂对肿瘤细胞的细胞毒作用;半定量RT-PCR检测Oct-4基因的表达;基因转染干扰Oct-4表达;Western blot实验检测Oct-4蛋白的表达改变.结果:经过30～34周的诱导我们建立了胃癌BGC-823顺铂耐药细胞株;MTT细胞毒实验结果显示顺铂对BGC-823和BGC-823/DDP细胞的IC50值分别为(2.33±0.12)和(21.46±0.97)μmol/L(P＜0.01),与BGC-823细胞比较,BGC-823/DDP细胞对顺铂耐药是其9.21倍;半定量RT-PCR检测显示胃癌耐药株BGC-823/DDP高表达Oct-4基因;Western blot结果显示化学合成的siRNA可以靶向下调Oct-4蛋白的表达;siRNA干扰BGC-823/DDP细胞Oct-4基因的表达后,BGC-823/DDP细胞对顺铂的的IC50值从(22.04±1.84) μmol/L减小到(6.15±0.53)μmol/L,二者差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:研究结果表明,Oct-4基因的高表达在胃癌顺铂的耐药中起着重要的作用.     

RNAi对人胃癌BGC-823细胞中HPA基因表达的影响

目的探讨RNAi（RNA interference,RNAi）对人胃癌BGC-823细胞中肝素酶（heparanase,HPA）mRNA表达的影响。方法针对HPA不同基因位点设计合成寡核苷酸然后转录为小干扰RNA（siRNA）,分别用浓度为10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L的siRNA经LipofectamineTM2 000脂质体介导转染BGC-823细胞72h,同时设无关序列组及不转染组。采用完整细胞原位杂交技术观察各组BGC-823细胞中HPA mRNA的表达。结果 siRNA可有效抑制人胃癌BGC-823细胞中HPA mRNA的表达,以20μmol/L的siRNA作用效应最强,但不同浓度siRNA两两相比,差异均无统计学意义（P〉0.05）,不同浓度siRNA对HPA mRNA表达的抑制效应均显著强于无关序列组及不转染组（P〈0.05）。结论 RNAi技术可有效抑制人胃癌BGC-823细胞中HPA mRNA表达,为进一步运用RNAi技术治疗胃癌等恶性肿瘤奠定了一定的理论基础。     

MiR-497对人胃癌细胞株顺铂耐药性的影响和机制

目的:通过建立人胃癌细胞SGC-7901的顺铂耐药细胞株SGC-7901/DDP,探讨miR-497对SGC-7901/DDP耐药性的影响及其机制。方法:体外研究采用顺铂体外逐步加量诱导法建立人胃癌细胞SGC-7901耐药株,并通过检测药物半抑制浓度和耐药基因MDR1、BCRP、MRP1的表达以鉴定耐药细胞株;检测在亲本及耐药细胞中miR-497、MDR1、MRP1、BCRP和凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达水平;miR-497模拟物分别转染SGC-7901/DDP细胞株,利用SRB法和流式细胞术检测转染miR-497模拟物后细胞对顺铂醇的敏感程度和细胞的周期、凋亡的变化,并检测耐药基因和凋亡相关基因的表达。结果:成功建立人胃癌SGC-7901/DDP耐药细胞株,耐药细胞株中耐药基因MDR1、BCRP、MRP1表达均升高,抗凋亡基因Bcl-2升高,凋亡基因Bax下降,miR-497表达下降(P<0.05);miR-497模拟物提高耐药细胞株对顺铂的药物敏感性,凋亡水平增加,细胞周期G₀/G₁期细胞增多(P<0.05),并可抑制耐药细胞中耐药基因的表达,降低Bcl-2/Bax比值(P<0.05)。结论:人胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP的miR-497表达下调;上调miR-497的表达可逆转人胃癌SGC-7901/DDP细胞株对化疗药物顺铂的耐药性。     

实时荧光定量RT—PCR检测胃癌细胞中MRP2、MRP3及MRP5mRNA的表达

目的 研究多药耐药相关蛋白2(MRP2)基因及MRP3、MRP5基因在正常胃细胞系GES-1、胃癌细胞株(BGC-823)及胃癌耐药细胞株BGC-823/ADM的表达差异,并探讨其在胃癌耐药中的意义.方法 分别提取GES-1、BGC-823及BGC-823/ADM细胞的总RNA,逆转录cDNA,利用实时荧光定量PCR,根据标准品绘制标准曲线,检测MRP2、MRP3、MRP5基因的表达水平.结果 MRP2基因在胃癌耐药细胞株BGC-823/ADM细胞中的表达量明显高于在胃癌细胞株(BGC-823)的表达,而与其在正常胃细胞系GES-1的表达没有显著性差异;MRP3、MRP5基因表达量在三种细胞中均有显著性差异.结论 MRP2可能参与了胃癌的内在性耐药,而MRP3、MRP5可能与胃癌的获得性耐药有关,实时荧光定量方法是一种灵敏度高,特异性强,重复性好的定量检测方法.     

不同温度热疗对人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的影响

目的观察热疗对人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的影响,为临床上应用热疗及热化疗联合治疗耐药胃癌提供理论依据。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同温度热疗、热化疗对SGC7901/DDP细胞的抑制作用;流式细胞仪及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测热疗、热化疗对细胞GST-π蛋白及mRNA表达的影响。结果不同温度热疗处理SGC7901/DDP细胞后对顺铂的敏感性均有提高,以43℃时最佳;43℃热疗2h处理前后此细胞的IC50值分别为(11.7±0.6)μg/mL及(7.2±0.7)μg/mL。耐药逆转倍数RF为1.63倍;热疗后尤其是热化疗后SGC7901/DDP细胞GST-π蛋白及mRNA表达明显下降(P<0.01)。结论热疗能提高人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP对顺铂的敏感性,热化疗可能更大限度地抑制SGC7901/DDP细胞增殖;热疗部分逆转其耐药机制可能与下调GST-π蛋白及mRNA表达有关。     

沉默EZH2表达逆转人非小细胞肺癌顺铂耐药性

目的探讨沉默EZH2表达逆转人肺癌顺铂耐药性的作用及机制。方法以实时荧光定量PCR和Western blot法检测人非小细胞肺癌A549及其顺铂耐药株A549/DDP细胞中EZH2的表达;以siRNA沉默EZH2的表达,MTT法检测细胞增殖力;流式细胞术检测细胞周期分布与凋亡;β-半乳糖苷酶染色法检测细胞的衰老;Western blot法检测细胞衰老通路P14ARF、P16INK4a、P53、P21、CDK1、CDK2、Rb、E2F1和H3K27me3的表达。结果 A549/DDP细胞的EZH2在mRNA和蛋白质水平上的表达均明显高于A549细胞。沉默EZH2的表达并未引起细胞发生明显的凋亡现象,但G0/G1期比值明显升高(从0.53±0.08升到0.84±0.09,P<0.01),明显增加耐药株对顺铂的敏感性[IC50从(41.2±4.3)μmol·L-1降低到(19.4±3.3)μmol·L-1,P<0.01]。细胞呈衰老特征,细胞衰老通路的P14ARF、P16INK4a、P53、P21、Rb表达上调,CDK1、CDK2、H3K27me3、E2F1表达下调。结论沉默EZH2的表达能诱导A549/DDP细胞衰老,逆转其对顺铂的耐药性,其机制与调节INK4a/ARF/Rb衰老通路有关。     

IGFBP-3在白藜芦醇抑制胃癌细胞增殖过程中的作用

目的研究在白藜芦醇(Res)抑制胃癌细胞增殖过程中,胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)表达的变化。方法噻唑蓝(MTT)法测定Res对BGC-823细胞增殖的抑制程度,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot技术检测Res处理后BGC-823细胞中IGFBP-3表达变化,siRNA技术沉默IGFBP-3基因表达,MTT法观察Res对BGC-823细胞增殖的影响,流式细胞技术测定各组细胞凋亡率。结果 Res能够抑制BGC-823生长,经20,40,80,160μmol·L-1Res处理后,细胞存活率分别为(82.35±10.65)%,(74.30±12.36)%,(62.80±14.66)%,(50.75±11.14)%。Res刺激后,IGFBP-3表达水平升高,与对照组比较,IGFBP-3 mRNA水平增高2.96倍(P<0.05),IGFBP-3蛋白水平变化与其mRNA一致。siRNA技术沉默IGFBP-3表达后,160μmol·L-1Res刺激BGC-823细胞,细胞存活率下降(78.5±9.86)%,但高于同浓度下Res刺激的未经IGFBP-3沉默的BGC-823细胞(P<0.05)。IGFBP-3沉默后,160μmol·L-1Res处理后BGC-823细胞凋亡率(20.13±9.12)%,明显低于未经IGFBP-3沉默的BGC-823细胞[(35.48±11.12)%],且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Res可以抑制BGC-823细胞增殖,促进其凋亡。该机制涉及IGFBP-3高表达。     

miR-203和ZEB2直接相互作用逆转胃癌细胞顺铂耐药性的作用研究

目的探讨miR-203和E盒结合锌指蛋白(ZEB2)直接相互作用对胃癌顺铂(DDP)耐药细胞株SGC-7901/DDP增殖和凋亡活性的影响。方法体外培养SGC-7901细胞和SGC-7901/DDP细胞,将miR-203 mimics或siRNA ZEB2转染至SGC-7901/DDP细胞,分别为miR-203组和Si-ZEB2组。另外,沉默SGC-7901/DDP细胞ZEB2基因的表达,采用MTT法和Annexin V/PI双染法检测SGC-7901细胞和SGC-7901/DDP细胞增殖和凋亡活力的改变。采用双荧光素酶报告基因方法验证miR-203与ZEB2的靶向关系。采用Western blot法检测各组细胞中上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin和Snail的表达。结果经MTT法检测,DDP对SGC-7901细胞和SGC-7901/DDP细胞的IC_(50)分别为18.37μmol/L和94.68μmol/L。SGC-7901/DDP的耐药指数为5.15±0.27。SGC-7901/DDP细胞中miR-203表达量低于SGC-7901细胞(P<0.05)。miR-203组细胞miR-203表达量较其他组明显升高(P<0.05)。另外,Si-ZEB2组细胞ZEB2 mRNA表达量降低,而miR-203表达量明显升高(P<0.05)。相同浓度条件下,DDP对miR-203组SGC-7901/DDP细胞增殖活性的抑制率明显高于SGC-7901/DDP组和NC组(P<0.05),同时,DDP对Si-ZEB2组细胞增殖活性的抑制率明显高于SGC-7901/DDP组和Si-NC组(P<0.05)。DDP(25μmol/L)对miR-203组细胞凋亡的促进作用明显高于SGC-7901/DDP组和NC组(P<0.05)。miR-203组细胞Snail蛋白表达量低于SGC-7901/DDP组和NC组,而E-cadherin蛋白表达量高于SGC-7901/DDP组和NC组(P<0.05)。另外,沉默SGC-7901/DDP细胞ZEB2基因表达后,E-cadherin蛋白表达量升高,而Snail蛋白的表达量降低(P<0.05)。结论 miR-203与ZEB2形成双向负反馈调节通路,通过上调E-cadherin的表达,抑制Snail的表达,阻止EMT进程,从而逆转胃癌细胞对顺铂的耐药性。     

异钩藤碱逆转人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂耐药性

目的 研究异钩藤碱(IR)在体外对耐药人肺腺癌细胞系A549/DDP对顺铂(DDP)的耐药性.方法 采用MTT法检测药物细胞毒性作用及耐药细胞逆转倍数,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定细胞内顺铂浓度.结果 IR无细胞毒浓度组(3.0μg·mL-1)使A549/DDP细胞对DDP的IC50由16.81 mg·L-1降至3.36 mg·L-1;低细胞毒浓度(8.0μg·mL-1)组的IC50降至2.34 mg·L-1;2组均明显提高DDP在A549/DDP细胞内的浓度.结论 研究表明IR能部分逆转A549/DDP细胞的MDR,并可增加肿瘤细胞内DDP药物浓度.     

SHIP2通过上调Bim表达增强胃癌细胞BGC-823对紫杉醇的敏感性

目的探讨SHIP2(SH2 domain containing inositol 5-phosphatase 2)基因转染人胃癌细胞BGC-823后对紫杉醇敏感性的影响。方法流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率。应用免疫蛋白印迹法(Western blot)检测各组细胞蛋白表达情况。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析mRNA的变化水平。将pCMV6-SHIP2质粒在脂质体介导下转染人胃癌BGC-823细胞,同时以转染空载体和未转染细胞作为对照组。将GV112-Puromycin空载体和GV112-Puromycin-Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)慢病毒颗粒分别感染BGC-823细胞,建立稳定细胞株,再将pCMV6-SHIP2质粒分别转染空载体和稳定干扰Bim表达细胞株。结果与SGC-7901细胞相比,BGC-823细胞对紫杉醇诱导的凋亡相对不敏感,0.3μmol·L-1紫杉醇诱导BGC-823 48 h后细胞凋亡率仅为(25.6±1.6)%,在紫杉醇作用不同时间点Bim蛋白和mRNA表达均无明显变化;与对照组相比,转染SHIP2基因能明显增加Bim的表达,紫杉醇作用48 h后,细胞凋亡率上升到(50.8±0.9)%;GV112-Puromycin-Bim慢病毒颗粒感染的BGC-823细胞,Bim的表达明显被抑制,在GV112-Puromycin-Bim慢病毒颗粒感染的稳定BGC-823细胞中转入pCMV6-SHIP2,紫杉醇作用48 h后,凋亡率为(27.6±1.6)%。结论转染外源性SHIP2基因能有效提高BGC-823细胞内Bim的表达,诱导BGC-823细胞凋亡,明显增加BGC-823细胞对紫杉醇的敏感性。     

银杏达莫注射液联合鼠神经生长因子治疗重型急性颅脑损伤的临床研究

目的 探讨消岩汤逆转肺癌顺铂（DDP）耐药的可能机制。方法 MTT检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞侵袭能力;siRNA转染细胞获取稳定低表达基因的细胞株;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Werstern blotting检测mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 MTT检测A549/DDP,在72、96 h,消岩汤能够明显抑制细胞增殖,而在48、72、96 h,DDP联合消岩汤能够明显抑制细胞增殖。划痕实验显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株迁移距离明显缩短。MTT显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株增殖能力减低,Western blotting显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞P-糖蛋白（P-gp）和肺耐药相关蛋白（LRP）蛋白表达降低,MTT检测A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞,在72、96 h,DDP和消岩汤能明显抑制细胞增殖;而在24、48、72、96 h,DDP联合消岩汤明显抑制细胞增殖。结果显示DDP联合消岩汤使A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株中YES关联蛋白1（YAP1）、P-gp和LRP蛋白表达明显降低。结论 消岩汤可能通过影响Beclin 1-YAP1分子通路进而改变肺癌细胞对DDP的敏感性。     

靶向Ang-1的siRNA片段逆转人胃腺癌细胞株BGC-823侵袭表型的研究

【摘要】目的 利用RNA干扰技术沉默人胃腺癌细胞株BGC-823中血管生成因子1（Ang-1）的表达,观察其对肿瘤侵袭性的抑制效果。方法 设计靶向Ang-1的siRNA片段并转染人胃腺癌细胞株BGC-823;RT-PCR方法检测Ang-1的mRNA水平;Western Blot和细胞免疫荧光方法检测整合素β1、CD44V6和Ang-1的蛋白表达量和细胞定位;细胞黏附试验检测转染前后细胞黏附能力;Matrigel胶及Transwell双室培养体系检测癌细胞侵袭能力。结果 RTPCR结果显示所设计的siRNA片段可有效沉默Ang-1的mRNA表达;整合素β1、CD44V6和Ang-1蛋白主要定位于肿瘤细胞胞浆和胞膜,其表达水平较转染siRNA片段前均有不同程度降低;细胞黏附能力和侵袭能力均明显降低（P<0.01）。结论 靶向Ang-1的siRNA技术可有效降低人胃腺癌细胞株BGC-823的侵袭能力,为胃癌基因治疗提供了新的思路。     

全反式维甲酸对胃癌BGC-823细胞增值和凋亡的影响及其机制研究

目的探讨全反式维甲酸（a11．transretinoicacid,ATRA）对体外培养的胃癌BGC-823细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法不同浓度全反式维甲酸处理培养的胃癌BGC-823细胞后,采用MTT法检测细胞的增殖活性,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,采用RT．PCR检测细胞Survivin基因mRNA的变化。结果全反式维甲酸对胃癌BGC-823细胞的生长具有明显的抑制作用,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性（P〈0．05）。TUNEL检测显示：以5Ixmol／L的全反式维甲酸对BGC-823细胞处理0、24、48、72h后细胞凋亡率逐渐增加（P〈0．05）,呈时间依赖性。RT-PCR检测显示BGC-823细胞Survivin基因的mRNA表达呈时间依赖性下调。结论全反式维甲酸对胃癌BGC-823细胞株具有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能与下调Survivin基因表达有关。     

去甲斑蝥素降低人胃癌细胞程序性细胞死亡因子4的表达

目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)降低程序性细胞死亡因子4(PDCD4)表达的机制。方法MTT法测定NCTD 5~640 μmol·L^-1与人胃癌BGC-823细胞作用24,48和72 h细胞存活率;Western蛋白质印迹法测定NCTD 0, 6, 30和60 μmol·L^-1作用BGC-823细胞24 h PDCD4蛋白表达水平;NCTD 60 μmol·L^-1作用20 h后加入MG132 10 μmol·L^-1作用4 h对PDCD4蛋白表达的影响;逆转录PCR法测定NCTD 60 μmol·L^-1作用BGC-823细胞24 h后PDCD4 mRNA表达的变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定NCTD 60 μmol·L^-1作用BGC-823细胞6, 12和24 h后microRNA-21(miR-21)的表达。Western蛋白质印迹法测定细胞转染miR-21抑制剂对PDCD4蛋白表达的影响。结果 NCTD作用后BGC-823细胞存活率明显下降,NCTD作用BGC-823细胞24, 48和72 h IC₅₀分别为74.5, 35.0和10.3 μmol·L^-1。NCTD 6, 30和60 μmol·L^-1作用于BGC-823细胞24 h,PDCD4蛋白分别降低9%, 47%和62%。NCTD对PDCD4 mRNA表达无影响。与NCTD处理组相比,MG132和NCTD共处理对PDCD4蛋白表达无明显影响。NCTD 60 μmol·L^-1作用BGC-823细胞12和24 h后,细胞中miR-21的表达显著升高(P<0.01)。细胞转染miR-21抑制剂后,可抑制NCTD降低PDCD4蛋白表达的作用。结论 NCTD通过调控miR-21降低PDCD4蛋白的表达。     

新化合物（Z）-7-氟-6-甲基-3（哌嗪-1-亚甲基）硫色满-4-酮体外抗肿瘤作用

目的：研究（Z）-7-氟-6-甲基-3（哌嗪-1-亚甲基）硫色满4-酮（FMTK）对人宫颈癌HeLa细胞系,肺癌A549细胞系,肝细胞癌HepG2细胞系,低分化胃腺癌BGC-823细胞系的抗肿瘤活性,为深入研究FMTK抗肿瘤作用提供实验依据。方法：4种肿瘤细胞培养于含有不同浓度的FMTK培养液中,实验设受试药物组、阴性对照组、阳性对照组、空白对照组、溶剂对照组,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶比色法（MTF法）检测FMTK对以上4种肿瘤细胞增殖的影响;采用大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6检测FMTK对正常细胞的毒性。结果：通过检测以上细胞的增殖情况,得出FMTK半数抑制浓度（IC50）如下：HeLa（80．09±1．48μg·ml^-1）,BGC-823（55．87±1．14μg·ml^-1）,HePG2（35．06±2．68μg·ml^-1）,FMTK对A549几乎没有抑制作用。FMTK对人宫颈癌HeLa细胞系,肝细胞癌HepG2细胞系,低分化胃腺癌BGC-823细胞系抑制作用随着剂量和时间的增加而增高,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;FMTK对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6没有抑制作用。结论：FMTK具有体外抗肿瘤活性,对正常细胞IEC-6无毒性。     

靶向调控AQP4对非小细胞肺癌细胞化疗敏感性的调控作用

摘要：目的 探讨靶向沉默水通道蛋白4（AQP4）基因对非小细胞肺癌细胞化疗敏感性影响,并研究其分子作用 机制。方法 实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）和 Western blot 分别检测非小细胞肺癌 A549 细胞以及顺铂耐药菌株 A549/DDP中AQP4 mRNA和蛋白的表达。设计靶向AQP4的siRNA-1和siRNA-2,采用siRNA抑制A549/DDP细胞 中AQP4的表达,筛选出最优siRNA,将其转染A549/DDP细胞,设立siRNA-NC组和空白对照组。CCK-8法检测细胞 增殖能力并计算各组细胞的半数抑制浓度（IC50）;流式细胞术检测细胞凋亡。Western blot检测P53和Bcl-2蛋白的 表达。结果 AQP4 mRNA和蛋白在A549/DDP细胞中的表达水平显著高于A549细胞,AQP4表达沉默后A549/DDP 细胞增殖抑制,细胞凋亡增加,对顺铂的敏感性增加,凋亡相关蛋白P53表达增加,而Bcl-2蛋白表达降低。结论 通 过靶向调控AQP4的表达可以增加非小细胞肺癌细胞对化疗药物的敏感性。     

转染血管生成素1对胃癌细胞在低氧环境下整合素β1表达的影响

目的 探讨低氧环境下血管生成素1(Ang-1)对人胃癌细胞中整合素β1的影响.方法 利用腺病毒作为载体将已构建成功含Ang-1基因的重组腺病毒(Ad-Ang-1)瞬时转染人胃癌细胞株BGC-823,利用低氧诱导剂氯化钴进行低氧干预低氧转染(D)组,以单纯转染(B)组及单纯低氧干预(C)组作为对照,以未转染未行低氧干预的正常细胞作为空白对照(A)组,利用半定量RT-PCR,免疫细胞化学和Western blot方法对4组细胞中整合素β1的mRNA和蛋白表达水平进行分析.结果 D纽整合素β1的mRNA及蛋白表达明显高于A、B、C组(P<0.05).结论 低氧环境下转染Ang-1能够明显提高人胃癌细胞BGC-823中整合素β1 mRNA及蛋白的表达,表明低氧环境下Ang-1促进肿瘤细胞的侵袭转移.     

肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立

目的探讨肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立方法,为克服肿瘤多药耐药新药的筛选提供体内研究的模型。为进行肿瘤的体内相关研究和抗癌药物的筛选提供实验基础。方法使用顺铂诱导肺癌A549细胞,以建立其多药耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验检测细胞对顺铂的敏感性;皮下接种法建立裸鼠移植瘤模型;绘制移植瘤生长曲线,观察其增值特性。结果经过8个月的诱导建立了肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验结果显示与A549细胞比较,A549/DDP细胞对顺铂约耐药8倍,并且A549/DDP耐药细胞建立的裸鼠移植瘤仍然保持对顺铂的耐药性;生长曲线结果显示A549/DDP细胞裸鼠移植瘤的增殖速度与A549细胞之间没有显著性差异。结论成功建立了肺癌A549/DDP耐药细胞裸鼠移植瘤模型,可为肺癌耐药的研究提供较理想的动物模型。     

沉默己糖激酶结构域蛋白1表达对胃癌细胞增殖、侵袭、转移和上皮间充质转化的影响

目的探讨己糖激酶结构域蛋白1(HKDC1)成为胃癌潜在治疗靶点的可能性。方法用脂质体法向胃癌细胞NCI-N87,BGC-823和HGC-27转染沉默HKDC1表达的小干扰RNA(siRNA)(siRNA-1和siRNA-2),同时设阴性对照siRNA(siRNA-NC)组,分别获得NCI-N87-siRNA-NC,NCI-N87-siRNA-1和NCI-N87-siRNA-2细胞,BGC-823-siRNA-NC,BGC-823-siRNA-1和BGC-823-siRNA-2细胞,HGC-27-siRNA-NC,HGC-27-siRNA-1和HGC-27-siRNA-2细胞,用Western印迹法检测siRNA对HKDC1表达的抑制效果,并计算抑制率。将上述细胞接种入96孔板,孵育72 h后,磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测细胞存活,计算细胞存活率。将上述细胞分别接种入无基质胶和铺有基质胶的Transwell小室,24 h后计数小室下室细胞数,分别检测细胞迁移和侵袭能力。收集上述细胞提取蛋白质,用Western印迹法检测上皮间充质转化相关蛋白E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和Snail的表达。结果分别转染siRNA-1和siRNA-2,对NCIN87-siRNA-1和NCI-N87-siRNA-2细胞HKDC1表达的抑制率分别为(20.5±0.1)%和(48.6±0.1)%,对BGC-823-siRNA-1和BGC-823-siRNA-2细胞的抑制率分别为(56.5±0.1)%和(58.9±0.1)%,对HGC-27-siRNA-1和HGC-27-siRNA-2细胞的抑制率分别为(63.5±0.1)%和(85.9±0.1)%。与对应的阴性对照组细胞相比,NCI-N87-siRNA-1和NCI-N87-siRNA-2细胞的存活率分别为(68.2±2.5)%和(70.4±2.1)%(P<0.01),BGC-823-siRNA-1和BGC-823-siRNA-2细胞的存活率分别为(77.0±0.1)%和(73.7±0.1)%(P<0.05),HGC-27-siRNA-1和HGC-27-siRNA-2细胞的存活率分别为(63.2±0.6)%和(70.4±0.1)%(P<0.01,P<0.05)。NCI-N87-siRNA-NC,NCI-N87-siRNA-1和NCI-N87-siRNA-2细胞的迁移数分别为488±43,319±27和262±37(P<0.01),侵袭数分别为143±8,68±2和30±2(P<0.01);BGC-823-siRNA-NC,BGC-823-siRNA-1和BGC-823-siRNA-2细胞的迁移数分别为1131±69,830±159和579±57(P<0.01),侵袭数分别为1127±113,781±97和565±96(P<0.01);HGC-27-siRNA-NC,HGC-27-siRNA-1和HGC-27-siRNA-2细胞的迁移数分别为453±36,190±25和57±16(P<0.01),侵袭数分别为645±53,462±62和264±47(P<0.01)。与对应阴性对照组相比,3种细胞HKDC1 siRNA-1和HKDC1 siRNA-2组细胞内E-钙黏蛋白的表达显著升高(P<0.05),N-钙黏蛋白和Snail的表达显著下降(P<0.05)。结论沉默HKDC1表达可抑制胃癌细胞增殖、侵袭和转移,并抑制上皮间充质转化。