NDUFA4过表达对人结直肠癌细胞体外生长的影响

 目的 探讨过表达NDUFA4对人结直肠癌细胞体外生长的影响及其机制。方法 将p-NDUFA4重组质粒（p-NDUFA4组）和p-Cont对照质粒（p-Cont组）体外分别转染人结直肠癌HCT116细胞；采用Real-time PCR和Western blot检测细胞中NDUFA的表达；CCK-8法和克隆形成实验分别检测HCT116细胞增殖活性和克隆形成能力；实时荧光定量PCR法检测HCT116细胞中CDK2、CDK3、CDK4、CDK6的mRNA水平；Western blot法检测细胞中蛋白总AKT、ERK1/2以及磷酸化AKT（p-AKT）、ERK1/2（p-ERK1/2）的表达水平。结果 与p-Cont对照组相比，p-NDUFA4组中NDUFA4的表达水平显著升高（均P<0.01）；细胞增殖和克隆形成能力明显增强（均P<0.05）；CDK2、CDK3等的mRNA水平显著上调（均P<0.05）；p-NDUFA4组中p-AKT和p-ERK1/2蛋白的表达水平明显上调（均P<0.05）。结论 过表达NDUFA4能明显促进人结直肠癌细胞的体外生长，其机制可能与AKT和ERK信号通路的变化相关。     

miR-194靶向EZH2抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究miR-194、EZH2对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，并探讨其作用机制。方法:采用qRT-PCR法检测甲状腺癌组织、癌旁正常组织及甲状腺癌细胞和正常甲状腺上皮细胞中miR-194和EZH2的mRNA表达；将miR-194（转染miR-194 mimics）、miR-NC（未转染细胞）、inhibitor-NC（转染空inhibitor）、miR-194 inhibitor（转染miR-194 inhibitor）、si-EZH2（转染si-EZH2）、miR-194+Vector（miR-194 mimics和pcDNA 3.1共转染）、miR-194+EZH2（miR-194 mimics和pcDNA 3.1-EZH2共转染）均以脂质体法转染到SW579、IHH-4细胞；Western blot检测细胞中EZH2的蛋白表达；MTT法检测细胞的增殖；Transwell检测细胞的迁移和侵袭；双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光素酶活性。结果:与正常组相比，甲状腺癌组EZH2的表达显著升高，miR-194的表达显著降低；与人正常甲状腺上皮细胞相比，甲状腺癌细胞中EZH2表达显著升高，miR-194的表达显著降低，且过表达miR-194和沉默EZH2均可抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。EZH2为miR-194的靶标，且EZH2可逆转过表达miR-194对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:miR-194可抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，可能与靶向EZH2有关，将可为miR-194靶向治疗甲状腺癌提供依据。     

miR-145通过靶向AP4对非小细胞肺癌A549细胞迁移侵袭的影响

 目的 探讨miR-145对非小细胞肺癌迁移与侵袭能力的影响及其可能的作用机制。方法 qRTPCR法检测非小细胞肺癌组织中miR-145和激活增强子结合蛋白4（activating enhancer binding protein4, AP4）mRNA的表达。A549细胞转染miR-145 mimic或者AP4 siRNA后，划痕实验与Transwell小室法分别检测A549细胞的迁移与侵袭能力，qRT-PCR法与免疫印迹法（Western blot）检测A549细胞中AP4 mRNA与蛋白表达水平；双荧光素酶报告基因法检测AP4 mRNA与miR-145的关系。结果 与癌旁正常组织相比，非小细胞肺癌组织中miR-145表达明显降低（P<0.05），而AP4 mRNA和蛋白表达均明显升高（均P<0.05）；与对照组相比，转染miR-145 mimic后，A549细胞中miR-145表达明显升高（P<0.05），AP4 mRNA和蛋白水平明显降低（P<0.05）；A549细胞的迁移数与侵袭能力均显著下降（均P<0.05）；双荧光素酶报告基因法验证AP4 mRNA是miR-145的靶基因。A549细胞转染AP4siRNA后，A549细胞的迁移数与侵袭数显著下降（均P<0.05）。结论 上调miR-145能抑制A549细胞的迁移与侵袭能力，可能与其抑制靶基因AP4表达有关。     

人绒毛膜促性腺激素对甲状腺乳头状癌的细胞增殖及周期的影响

目的 研究人绒毛膜促性腺激素（hCG）对甲状腺乳头状癌细胞增殖活力及细胞周期的影 响。方法 选用甲状腺乳头状癌细胞株IHH-4为研究对象,采用细胞增殖活性实验MTT（四甲基偶氮 唑盐比色法）及流式细胞术检测不同浓度、不同作用时间hCG对IHH-4细胞增殖活力、细胞周期的影 响。结果 hCG能刺激IHH-4细胞的活力,浓度为100 IU/ml时最为明显;在100 IU/ml的hCG作用48 h 后, IHH-4细胞G2M+S期的百分比为67.1%,显著高于对照组。结论 人绒毛膜促性腺激素对甲状腺 乳头状癌细胞的生长活力有促进作用,并能加快其细胞周期。     

miR-6775-3p在乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的：微小RNA（microRNA，miRNA）与肿瘤的发生、发展过程密切相关。探讨miR-6775-3p在乳腺癌细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法：通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）检测4种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453、MDA-MB-468和BT-549中miR-6775-3p的表达水平，选取miR-6775-3p表达水平最低的乳腺癌细胞系过表达miR-6775-3p后，采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）法检测细胞的增殖情况，同时采用transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的变化。通过RTFQ-PCR和蛋白［质］印迹法（Western blot）检测miR-6775-3p过表达的乳腺癌细胞系中细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4（cyclin-dependent protein kinase 4，CDK4）和CDK6，以及侵袭转移标志物基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）17和MMP24 mRNA以及蛋白的表达变化。结果：RTFQ-PCR结果显示，乳腺癌细胞系MDA-MB-453中miR-6775-3p的表达最低，在MDA-MB-453细胞中转染miR-6775-3p mimics后，miR-6775-3p的表达水平明显升高（P<0.001）。CCK-8实验结果显示，MDA-MB-453细胞过表达miR-6775-3p后，细胞的增殖能力明显降低（P<0.01）。Transwell迁移和侵袭实验结果显示，MDA-MB-453细胞过表达miR-6775-3p后，细胞的迁移（P<0.001）和侵袭能力（P<0.01）明显降低。RTFQ-PCR和Western blot实验结果显示，CDK4、CDK6及MMP17、MMP24的mRNA表达和蛋白水平均显著降低（P<0.01）。结论：miR-6775-3p可能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

下调ALK2对人乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的:通过表达siALK2的重组腺病毒Ad-siALK2，下调人乳腺癌MDA-MB-468细胞ALK2的表达，研究其对MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:以重组腺病毒Ad-siALK2感染MDA-MB-468细胞为实验组，空载病毒（RFP）作为感染对照，并设空白对照组，通过倒置荧光显微镜观察和RT-PCR检测病毒在MDA-MB-468细胞中的表达水平，通过MTT、平板集落形成、细胞划痕和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力。结果:倒置荧光显微镜观察显示Ad-siALK2感染MDA-MB-468细胞的荧光效率高；RT-PCR证实Ad-siALK2感染的MDA-MB-468细胞ALK2的mRNA表达显著下降；MTT法、平板集落形成实验、细胞划痕实验及Transwell侵袭实验证实MDA-MB-468细胞Ad-siALK2组相比对照组细胞的增殖活力、集落形成率及划痕愈合率均显著降低（P<0.05），穿膜细胞数也明显减少（P<0.05）。结论:下调ALK2表达后可以在体外抑制人乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖、迁移与侵袭，为后续实验研究奠定了基础。     

miR-182靶向NUMB调控结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:研究miR-182对结直肠癌细胞HT-29增殖、迁移和侵袭的影响，并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测人正常结肠上皮细胞HCoEpiC、结直肠癌细胞HT-29中miR-182、NUMB的表达；将anti-miR-con组（转染anti-miR-con）、anti-miR-182组（转染anti-miR-182）、pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-NUMB组（转染pcDNA-NUMB）、anti-miR-182+si-con组（anti-miR-182和si-con共转染）、anti-miR-182+si-NUMB组（anti-miR-182和si-NUMB共转染）均用脂质体法转染HT-29细胞；Western blot检测各组细胞中NUMB的蛋白表达；Transwell检测各组细胞的迁移和侵袭；MTT法检测各组细胞的增殖；双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光素酶活性。结果:与人正常结肠上皮细胞HCoEpiC相比，结直肠癌细胞HT-29中miR-182表达显著升高，NUMB表达显著降低（P<0.05）；抑制miR-182、过表达NUMB均可下调HT-29细胞的增殖、迁移、侵袭；NUMB是miR-182的靶标。敲减NUMB可逆转抑制miR-182对HT-29细胞增殖、迁移、侵袭的下调作用。结论:miR-182可促进结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭，其机制可能与靶向NUMB有关，将可为miR-182靶向治疗结直肠癌提供依据。     

HOTAIRM1靶向miR-129-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:研究长链非编码RNA HOTAIRM1（lncRNA HOTAIRM1）与微小RNA-129-5p（miR-129-5p）的靶向关系及其对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响。 方法:荧光定量PCR（qPCR）检测HOTAIRM1和miR-129-5p在人正常脑组织和胶质瘤组织中的表达。建立抑制HOTAIRM1表达细胞株，研究其对U251细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。MTT法检测细胞增殖；流式细胞仪检测细胞凋亡；Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭；蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）、上皮钙黏素（E-cadherin）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）水平。生物学信息预测和双荧光素酶报告基因法分析HOTAIRM1和miR-129-5p之间的靶向关系。共转染si-HOTAIRM1和anti-miR-129-5p，观察抑制miR-129-5p表达对抑制HOTAIRM1表达诱导的U251细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。 结果:HOTAIRM1在胶质瘤组织中的表达明显上调（P<0.05），miR-129-5p表达下调（P<0.05）。抑制HOTAIRM1表达显著降低U251细胞24 h、48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量（P<0.05），明显增加U251细胞凋亡率和p21、Bax、E-cadherin蛋白表达量（P<0.05）。miR-129-5p是HOTAIRM1的靶基因。上调或下调HOTAIRM1表达明显调控miR-129-5p表达（P<0.05）。抑制miR-129-5p表达逆转了抑制HOTAIRM1表达对U251细胞24 h、48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Cyclin D1、MMP-2、Bcl-2蛋白表达的抑制作用，并逆转了抑制HOTAIRM1表达对U251细胞p21、E-cadherin、Bax蛋白表达和细胞凋亡率的促进作用。 结论:lncRNA HOTAIRM1通过靶向miR-129-5p影响胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。     

干扰素诱导蛋白-10 对人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株增殖、侵袭性及耐药性的影响

目的:研究干扰素诱导蛋白-10（interferon induced protein 10，IP-10）对人弥漫大B细胞淋巴瘤SU-DHL-4细胞株增殖、侵袭性及耐药性的影响。方法:SU-DHL-4细胞被分为3个实验组和1个对照组，3个实验组根据IP-10的刺激浓度，分别为10、100、1 000 ng/ml组，对照组不予刺激。24、48和72 h 后通过噻唑蓝（MTT）法分别检测4组细胞的增殖情况；IP-10刺激24 h后通过Transwell法检测SU-DHL-4细胞的迁移和侵袭能力；IP-10刺激48 h后通过流式细胞染色测定P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）和多药耐药相关蛋白1（multidrug resistance-associated protein 1,MRP1）的表达情况。结果:与对照组相比，24 h和48 h时，10、100和1 000 ng/ml浓度的IP-10均能够促进SU-DHL-4 细胞的增殖（P＜0.05）；在24 h时，与对照组相比，3组细胞迁移和侵袭能力均显著增强（P＜0.05）；在48 h时，与对照组相比，3组细胞P-gp和MRP1表达均无显著变化（P＞0.05）。结论:IP-10 既能促进SU-DHL-4细胞的增殖，又能增强其迁移和侵袭能力，但对SU-DHL-4细胞耐药蛋白表达没有影响。     

LncRNA SNHG6调控miR-186表达对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的:研究SNHG6通过调控miR-186表达对人肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响。方法:通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测57名肝癌患者癌组织和肝癌细胞系中SNHG6和miR-186的表达；双荧光素酶报告实验验证SNHG6和miR-186的靶向调控关系；将SNHG6的小干扰RNA（si-SNHG6组）、阴性无意义对照序列（si-con组）、si-SNHG6与anti-miR-186抑制剂（si-SNHG6+anti-miR-186组）、si-SNHG6与miR-186抑制物阴性对照（si-SNHG6+anti-miR-con组），均以脂质体法转染至肝癌HepG2细胞，MTT法检测细胞增殖；Transwell检测肝癌细胞迁移和侵袭；Western blot实验检测肝癌细胞CDK4、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9及EMT的标志物（E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）表达。结果:与癌旁正常组织或正常肝细胞相比，SNHG6在肝癌患者和肝癌细胞系中的表达升高，而miR-186表达降低，两者存在负相关性。与si-con组比较，si-SNHG6组HepG2细胞活力明显下降，迁移和侵袭细胞数明显减少，CDK4、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、N-cadherin和Vimentin蛋白表达降低，E-cadherin蛋白表达增加。SNHG6靶向负调控miR-186表达，抑制miR-186表达可部分逆转下调SNHG6对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:下调SNHG6可能通过负调控miR-186表达和调控细胞EMT过程抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

长链非编码RNA MT1JP通过FBXW7调控口腔鳞癌细胞生物学活性

目的:探讨长链非编码RNA-MT1JP(long non-coding RNA-MT1JP，LncRNA-MT1JP)通过FBXW7对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等生物学活性的影响。方法:qRT-PCR检测LncRNA-MT1JP在Cal-27、SCC-4、TSCCA口腔鳞癌细胞系和正常口腔上皮细胞系HOK中的表达，将TSCCA细胞系分成LncRNA-MT1JP基因沉默组和对照组，随后采用LipofectamineTM 2000分别转染LncRNA-MT1JP-shRNA及对照序列LncRNA-MT1JP-NC；MTT法检测两组TSCCA细胞增殖；Transwell小室实验检测两组TSCCA细胞系迁移、侵袭能力；流式细胞仪检测两组TSCCA细胞系凋亡能力；Western blot法检测FBXW7基因蛋白的表达。结果:与正常口腔上皮细胞系HOK比较，LncRNA-MT1JP的相对表达量在口腔鳞癌细胞系Cal-27、SCC-4及TSCCA中显著增高(P<0.01)。TSCCA细胞系在转染24及48 h后，MT1JP基因沉默组与对照组比较OD值无显著的统计学差异(P>0.05)；但在72及96 h后OD值显著降低（P<0.05）。与对照组比较，MT1JP基因沉默组TSCCA细胞迁移与侵袭数目显著降低（P<0.01）、凋亡率以及FBXW7基因蛋白相对表达量均显著升高（P<0.05）。结论:LncRNA-MT1JP在口腔鳞癌细胞系呈高表达，MT1JP基因沉默有效抑制了TSCCA细胞系的增殖、迁移、侵袭，促进其凋亡，该作用可能与MT1JP基因沉默后上调抑癌基因FBXW7的表达有关。     

过表达CHD5基因对肝癌细胞SMMC-7721生物学行为的影响

目的:探讨过表达CHD5基因对人肝癌细胞SMMC-7721生物学行为的影响。方法:采用脂质体法将CHD5过表达质粒及对照质粒分别转染SMMC-7721细胞,Western blotting检测SMMC-7721细胞中CHD5蛋白的表达情况,CCK-8法检测SMMC-7721细胞生长增殖能力的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:转染CHD5过表达质粒后,SMMC-7721细胞CHD5蛋白表达水平显著增高（P<0.01）,抑制了细胞增殖、迁移和侵袭（P<0.05）,促进了细胞凋亡（P<0.05）。结论:过表达CHD5基因可抑制SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭并诱导其凋亡。     

蔓荆子黄素对人非小细胞肺癌细胞H322的作用及机制研究

目的:探究蔓荆子黄素对人非小细胞肺癌细胞H322增殖和周期的影响及机制。方法:选择体外培养的人非小细胞肺癌H322细胞，给不同浓度（0，1，10，20，40 μmol/L）蔓荆子黄素溶液作用不同时间（24 h，48 h，72 h）后，采取MTT法检测细胞的增殖情况、流式细胞仪检测细胞周期、Western blot法检测CDK1、c-myc和survivin 基因的表达情况。结果:不同浓度组的蔓荆子黄素溶液作用H322细胞（24 h，48 h，72 h）后均能抑制其增殖（P<0.05），且表现出剂量、时间依赖性；蔓荆子黄素通过影响H322细胞的增殖，使得细胞周期阻滞在G2/M期，同时发现c-myc和survivin 的表达与蔓荆子黄素浓度成负相关，CDK1的表达随着蔓荆子黄素浓度的升高先升高后降低。结论:蔓荆子黄素可能通过抑制CDK1、c-myc和survivin 的表达，阻滞细胞周期在G2/M期，进而抑制人非小细胞肺癌细胞H322的增殖并促进凋亡。     

miR-142-5p通过影响上皮间质转化抑制肺腺癌H1650细胞的侵袭与迁移

目的：探讨肺腺癌组织中miR-142-5p的表达及其对H1650细胞增殖、侵袭、迁移及上皮间质转化（epithelieal-mesenchymal transition，EMT）的影响及其作用机制。方法：收集2014年1月至2015年1月在河北医科大学第四医院胸外科行肿瘤切 除并经病理证实的107例肺腺癌患者的癌组织及其癌旁组织标本，以及人肺腺癌细胞系H1650、HCC827、 A549、 H1975、PC9和人 支气管上皮细胞BEAS-2B， 用qPCR实验检测肺腺癌组织及细胞中miR-142-5p的表达水平及其与患者临床特征的关系。分别用 miR-142-5p模拟物（mimics）、miR-阴性对照质粒（miR-NC）转染H1650细胞后， 用CCK8、细胞划痕愈合和Transwell侵袭实验分 别检测H1650细胞的增殖、侵袭和迁移能力。使用生物信息学工具预测miR-142-5p的靶基因，通过双荧光素酶报告基因实验验 证miR-142-5p对靶基因的调控作用，Western blotting检测细胞周期蛋白依赖性激酶5（cyclin-dependent kinase 5，CDK5）及EMT 相关蛋白的表达水平。结果：肺腺癌组织及细胞系中miR-142-5p表达水平显著低于癌旁组织及BEAS-2B细胞（均P<0.01）；107 例肺腺癌组织中， 61例（57.01%）低表达miR-142-5p，其表达水平与患者的TNM分期、淋巴结转移密切相关（均P<0.01）。转染 miR-142-5p模拟物后， H1650细胞中miR-142-5p高表达，细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著降低（均P<0.05或P<0.01）。生物信息 学工具预测CDK5是miR-142-5p的靶基因，经双荧光素酶报告基因验证，miR-142-5p可显著降低H1650细胞中CDK5的表达水 平，显著提高E-cadherin表达，降低N-cadherin和Snail的表达水平（均P<0.01）。结论：miR-142-5p在肺腺癌组织和细胞中呈低表 达状态，其通过下调CDK5表达影响EMT抑制H1650细胞的侵袭与迁移能力。     

环状RNA hsa_circ_0050900在乳腺癌中的表达及其对细胞生物学行为影响的机制研究

背景与目的：环状RNA（circular RNA，circRNA）作为特殊的非编码RNA，一般在体内低表达，且不易被RNA酶降解，结构与表达稳定。随着测序技术的进步，目前发现多种肿瘤的发生、发展与circRNA有关。但未见乳腺癌的发生、发展与hsa_circ_0050900的异常表达相关的报道。探究乳腺癌组织中hsa_circ_0050900的表达以及其影响乳腺癌细胞生物学行为的机制。方法：选取在重庆医科大学附属第一医院经手术切除的4例女性乳腺癌组织及对应的癌旁组织，采用RNA测序（RNA sequencing，RNA-seq）进行测序分析，并运用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）验证乳腺癌中hsa_circ_0050900的表达，其中包括30例乳腺癌组织及其癌旁组织（在重庆医科大学附属第一医院经手术切除），正常人乳腺上皮细胞系即对照组细胞MCF-10A以及两种乳腺癌细胞系MCF-7、SK-BR-3。通过RTFQ-PCR验证乳腺癌细胞中hsa_circ_0050900被敲低后的表达水平；分别运用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）实验和EdU实验、细胞划痕实验、transwell实验验证细胞的增殖、迁移功能；细胞凋亡的检测采用TUNEL一步法；Hoechst 33342实验通过对细胞核染色确定细胞的状态以检测细胞凋亡；细胞周期蛋白D2（cyclin D2，CCND2）和周期蛋白依赖性激酶4（cyclin-dependent kinase 4，CDK4）的表达采用蛋白质印迹法（Western blot）检测。结果：根据测序结果，挑选出在乳腺癌和细胞中明显高表达的circRNA hsa_circ_0050900；构建的si-circ质粒可显著降低hsa_circ_0050900在乳腺癌细胞中的表达，转染si-circ的细胞增殖能力降低，并促进细胞凋亡，且降低细胞周期相关蛋白CCND2、CDK4的表达。结论：circRNA hsa_circ_0050900在乳腺癌组织中的表达显著高于癌旁组织，敲低hsa_circ_0050900对细胞增殖、迁移能力、细胞凋亡及细胞周期有调控作用。     

miR-21通过靶基因ZNF326调控乳腺癌细胞侵袭、迁移的分子机制研究

目的:探讨微小RNA-21（miR-21）靶向锌指蛋白326(ZNF326)对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响及其分子机制。方法:采用qRT-PCR与Western blot法检测乳腺癌细胞株HCC70、MDA-MB-231、BT549、MDA-MB-468与正常细胞株HBL-100中miR-21与ZNF326的表达。以miR-21表达量最高的乳腺癌HCC70细胞为研究对象，分为NC组、anti-miR-con组、anti-miR-21组、pcDNA-control组、pcDNA-ZNF326组；共转染分组为anti-miR-21+si-con组、anti-miR-21+si-ZNF326组。MTT法检测细胞增殖能力，Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。双荧光素酶报告基因系统验证miR-21与ZNF326的靶向调控关系。Western blot法检测CDK1、MMP-2蛋白的表达。结果:与正常细胞株HBL-100相比，乳腺癌细胞株HCC70、MDA-MB-231、BT549、MDA-MB-468中miR-21高表达，ZNF326 mRNA及蛋白表达水平均显著下降；分别与anti-miR-con组、pcDNA-control组比较，anti-miR-21组与pcDNA-ZNF326组HCC70细胞增殖能力显著下降，细胞迁移及侵袭能力明显降低，CDK1、MMP-2的表达水平明显降低；双荧光素酶实验结果表明miR-21能靶向结合ZNF326的3' UTR并调控其表达；与anti-miR-21+si-con组相比，anti-miR-21+si-ZNF326组HCC70细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显增强，促进CDK1、MMP-2表达。结论:miR-21可靶向抑制ZNF326基因的表达，进而促进乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

下调基因PTTG1 对人胶质瘤细胞SHG44增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响

背景与目的：研究表明垂体瘤转化基因1（pituitary tumor-transforming gene 1，PTTG1）在多种癌症中高表达。该研究旨在探讨其对胶质瘤细胞SHG44增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。方法：用PTTG1 siRNA干扰胶质瘤细胞SHG44的基因表达，通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）分别在mRNA和蛋白质水平上评估PTTG1沉默效率，进一步检测其对SHG44细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。结果：沉默PTTG1基因表达可以显著抑制SHG44细胞增殖（P<0.05）、迁移（P<0.01）和侵袭（P<0.001）能力，增加细胞凋亡（P<0.05）。结论：下调PTTG1的表达可以降低神经胶质瘤的恶化程度，有望成为临床胶质瘤治疗的新靶点。     

沉默单羧酸转运体4对前列腺癌PC3细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨沉默单羧酸转运体4（monocarboxylate transporter 4，MCT4）对前列腺癌PC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响 及其可能的分子机制。方法：利用RNA干扰技术分别将siRNA-MCT4（si-MCT4）和阴性对照质粒（si-NC）转染进PC3细胞，培养 96 h后用乳酸测定法检测转染后PC3细胞培养液中乳酸含量， 用CCK-8法、Transwell小室法分别检测PC3细胞的增殖、迁移和侵 袭能力， 用Western blotting检测沉默效果及细胞中 integrin β4-FAK-SRC-MEK-ERK 信号通路相关蛋白（integrin β4、p-FAK、 p-SRC、p-ERK1/2、p-MEK1/2）和EMT相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin）的表达水平。结果：成功构建沉默MCT4的PC3细胞株。 与对照组比较，si-MCT4组PC3细胞培养液中乳酸含量显著降低（P<0.01)，细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低（P<0.05或 P<0.01）；si-MCT4组PC3细胞中integrin β4、p-FAK、p-SRC、p-ERK1/2、p-MEK1/2 及 N-cadherin 水平显著降低（均 P<0.01）， 而 E-cadherin表达水平显著升高（P<0.01）。结论：沉默MCT4表达可显著抑制前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力，其机制 可能与抑制细胞培养液中的乳酸水平和细胞中integrin β4-FAK-SRC-MEK-ERK信号通路及EMT相关蛋白的表达有关。     

miR-526b-3p通过靶基因TNKS2调控肝癌细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制探讨

目的:探讨miR-526b-3p对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其潜在的作用机制。方法:运用qRT-PCR检测人肝癌细胞HepG2、SMMC-7721、BEL-7402和正常肝细胞L02中miR-526b-3p和TNKS2的mRNA表达水平。建立miR-526b-3p过表达和TNKS2抑制表达的HepG2细胞株,采用MTT法检测细胞增殖活力,Transwell小室检测细胞的迁移及侵袭能力,Western blot检测TNKS2蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因分析法验证miR-526b-3p可能的靶基因。结果:与正常肝细胞L02相比,肝癌细胞HepG2、SMMC-7721及BEL-7402中miR-526b-3p的表达显著降低（P<0.05）,TNKS2的表达显著升高（P<0.05）。过表达miR-526b-3p或抑制表达TNKS2均可抑制HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭（P<0.05）。TNKS2是miR-526b-3p的靶基因。过表达TNKS2可部分逆转过表达miR-526b-3p对HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论:miR-526b-3p可通过下调TNKS2的表达,从而抑制肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。     

茯苓多糖对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移、促凋亡的影响及其机制

目的 探讨茯苓多糖（Pachymaran）对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移、促凋亡的作用及其相关机制。方法 MTT法检测细胞增殖率并筛选出适宜的茯苓多糖低、中、高浓度用于后续实验；不同浓度的茯苓多糖处理细胞后，倒置相差显微镜观察细胞形态学变化；Hoechst 33342染色观察细胞核的变化；平板克隆实验检测细胞克隆形成能力；细胞划痕实验检测细胞迁移能力；流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期；Western blot法检测凋亡、迁移及ERK通路相关蛋白的表达。结果 茯苓多糖浓度对HeLa细胞活力的影响实验得出，取30、40、50 mg/ml茯苓多糖作为低、中、高浓度进行后续实验；中、高浓度茯苓多糖处理细胞后，细胞和细胞核发生显著的凋亡形态学变化，低浓度下形态学变化不显著；不同浓度茯苓多糖均能降低细胞克隆形成能力；降低细胞迁移率（P<0.05）；使细胞凋亡率增加（P<0.05）；使S期细胞减少并阻滞于G₂/M期（P<0.05）；Cleaved Caspase 3、Cleaved Caspase 8、Cleaved Caspase 9、Bax表达较对照组明显增多，Bcl-2、MMP-9、VEGFA、p-ERK1/2表达明显减少（P<0.05）。ERK1/2表达无明显变化。结论 茯苓多糖能显著抑制HeLa细胞增殖，并诱导其凋亡。其促凋亡机制可能与下调p-ERK1/2表达，抑制ERK信号通路磷酸化有关。同时，茯苓多糖对抑制HeLa细胞的迁移也有一定的作用。