长链非编码RNA UCA1 靶向调控miR-185-5p 对非小细胞肺癌A549 细胞的作用及其机制

[摘要] 目的：探究长链非编码RNA（ long non-coding RNA,lncRNA)尿路上皮癌抗原1 ( urothelial carcinoma associated 1,UCA1) 调控非小细胞肺癌(NSCLC) A549 细胞增值、侵袭和迁移的作用及其机制。方法：NSCLC A549 细胞培养及慢病毒转染完成后,RT-PCR检测A549 细胞UCA1 表达水平,荧光素酶实验验证UCA1 和miR-185-5p 的靶向关系,MTT检测A549 细胞活性,Transwell 和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;Western blotting 检测Wnt1/β-catenin 信号通路蛋白的表达。结果：sh-UCA1 能显著抑制UCA1 表达并促进miR-185-5p 表达(均P<0.05),miR-185 inhibitor 可减弱sh-UCA1 对miR-185-5p 表达的促进作用(P<0.05),UCA1 能明显抑制miR-185-5p 表达(P<0.05),miR-185 mimic 可减弱UCA1 对miR-185-5p 表达的抑制作用(P<0.05)。荧光素酶报告实验表明UCA1 序列上有miR-185-5p 的结合位点。sh-UCA1 能显著抑制A549 细胞增殖、侵袭和迁移(均P<0.05),并能降低信号通路蛋白Wnt1、β-catenin 信号和TCF-4 表达水平(均P<0.05);miR-185 inhibitor 能显著减弱sh-UCA1 对A549 细胞的增殖、侵袭、迁移及对Wnt1/β-catenin 通路蛋白表达的抑制作用(P<0.05)。结论：UCA1 可通过靶向miR-185-5p 促进NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移,其作用机制与Wnt1/β-catenin信号通路激活有关。     

HK2通过Wnt/β-catenin信号通路上调Cyclin D1、MMP7和Slug表达促进宫颈癌细胞增殖和迁移CSCD

目的研究己糖激酶2(HK2)对宫颈癌细胞HeLa增殖和迁移的影响及其作用机制。方法G418压力筛选获取HK2稳定表达的HeLa细胞系;细胞计数法、MTT法、流式细胞仪检测HK2对HeLa细胞增殖、细胞活力及细胞周期的影响;细胞划痕和Transwell小室检测HK2对HeLa细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot和免疫细胞化学检测β-catenin、Cyclin D1、MMP7和Slug蛋白的表达;TOP/FOP实验检测HK2对Wnt/β-catenin信号转导通路活性的影响;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV-939观察在HK2过表达HeLa细胞中抑制Wnt/β-catenin信号通路活性后细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果成功构建HK2稳定表达的HeLa细胞系;过表达HK2可以促进HeLa细胞的增殖和细胞活力、促进细胞周期从G_0/G_1期向S期转换、增强细胞迁移和侵袭能力、增强Wnt/β-catenin信号转导通路活性,上调Cyclin D1、MMP7和Slug的表达;XAV-939抑制Wnt/β-catenin信号通路在HK2过表达HeLa细胞中的活性后,可以抑制HK2对细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。结论HK2通过Wnt/β-catenin信号转导通路上调Cyclin D1、MMP7和Slug蛋白表达促进HeLa细胞增殖、迁移和侵袭。     

lncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌T24细胞生物学特性的影响

目的探究lncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌组织中的表达和对膀胱癌T24细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。方法QPCR检测膀胱癌组织和细胞系中lncRNA ZFPM2-AS1的表达;将阴性对照siRNA和lncRNA ZFPM2-AS1 siRNA转染至膀胱癌T24细胞中,qPCR检测转染后细胞中lncRNA ZFPM2-AS1表达,MTT检测细胞增殖,克隆形成检测细胞克隆形成能力,细胞划痕检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,Western blot检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。结果膀胱癌组织中lncRNA ZFPM2-AS1的水平高于癌旁组织;与正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1相比,T24、J82、56373种膀胱癌细胞株中lncRNA ZFPM2-AS1表达水平均高于正常膀胱上皮细胞,且差异有统计学意义(P<0.01)。与沉默对照组相比,沉默ZFPM2-AS1组T24细胞中lncRNA ZFPM2-AS1表达显著降低(P<0.01),细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.01),细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin及其下游蛋白c-Myc和Cyclin D1表达显著降低,p-β-catenin蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论LncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌中高表达,沉默LncRNA ZFPM2-AS1能够抑制膀胱癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

Wnt10a及Wnt/β-catenin信号通路促进宫颈癌细胞增殖及其机制研究

目的:探讨Wnt10a及其Wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌中的作用及其机制。方法:qPCR检测Wnt10a在正常宫颈细胞和不同宫颈癌细胞系中的表达,选取Wnt10a高表达细胞进行后续实验。构建Wnt10a过表达质粒,将细胞分为对照组、Wnt10a过表达组、LGK-974(Wnt抑制剂)组和Wnt10a过表达+LGK-974组。qPCR和Western blot检测细胞中Wnt10a mRNA和蛋白的表达,CCK-8检测细胞增殖能力,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、c-Myc的表达。结果:Wnt10a在C-33 A、Ca Ski、HeLa、HeLa 229宫颈癌细胞中的表达均显著高于正常宫颈细胞(P<0.05),且在C-33 A细胞中的表达水平最高。与对照组相比,Wnt10a过表达组细胞增殖能力、细胞中Wnt10a mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.01),Bcl-2、Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、c...     

miRNA-101通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化

目的 探讨miRNA-101（miR-101）通过靶向CDK8对结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路激活的影响。方法 采用qRT-PCR和Western blot测定结肠癌组织、癌旁正常组织及五种结肠癌细胞株中miR-101和CDK8的表达。双荧光素酶报告实验测定其相互作用关系。通过miR-101 mimic、pBabe-CDK8转染调控CDK8表达并测定其对肿瘤细胞侵袭和Wnt/β-catenin激活的影响。结果 与癌旁正常组织相比,miR-101在结肠癌组织中表达水平显著降低,而CDK8的表达显著增加。双荧光素酶报告实验证实miR-101可直接与CDK8 3'UTR的结合位点作用调节荧光素酶的活性。转染miR-101 mimic组细胞的侵袭能力比阴性对照组和CDK8组明显下降。转染miR-101 mimic后TOP/FOP荧光素酶活性显著降低,β-catenin的蛋白表达也出现下降。CDK8过表达载体转染能显著减弱miR-101 mimic对荧光素酶活性和β-catenin蛋白表达的作用。结论 miRNA-101可通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化。     

Wnt/β-catenin信号通路在白藜芦醇抗急性T淋巴细胞白血病中的作用机制研究

目的:通过细胞水平和动物模型探讨Wnt/β-catenin信号通路在白藜芦醇体内外抗急性T淋巴细胞白血病（T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL）中的作用及其可能机制。方法:细胞实验（人淋巴细胞白血病Molt-4和Jurkat细胞）分为空白对照组（Control组）、二甲基亚砜组（DMSO组）和白藜芦醇处理组（Res组）,动物实验分为正常对照组（Control组）、T-ALL模型组（T-ALL组）和白藜芦醇处理组（Res组）。采用CCK-8法检测白藜芦醇对Molt-4和Jurkat细胞增殖能力的影响,选取适合的给药浓度进行后续实验;尾静脉注射ICN1-GFP+ T-ALL细胞建立T-ALL小鼠模型;采用流式细胞术检测小鼠外周血中ICN1-GFP+ T-ALL细胞百分比,监测T-ALL小鼠造模后的一般情况;应用实时荧光定量PCR（RT-PCR）分别检测细胞和小鼠脾脏组织中c-Myc和Cyclin D1 mRNA的表达水平;应用蛋白免疫印迹法（Western Blot法）分别检测细胞和小鼠脾脏组织中β-catenin、TCF-1、LEF-1、c-Myc和Cyclin D1的蛋白表达水平。结果:白藜芦醇明显抑制Molt-4和Jurkat细胞增殖能力（P＜0.01）,抑制作用随白藜芦醇浓度增加逐渐增强（P＜0.01）;经白藜芦醇处理后,Molt-4和Jurkat细胞中c-Myc和Cyclin D1 mRNA表达水平明显降低（P＜0.01）,β-catenin、TCF-1、LEF-1及其靶蛋白c-Myc和Cyclin D1表达水平均显著降低（P＜0.05）;T-ALL小鼠脾脏组织中c-Myc和Cyclin D1 mRNA表达水平显著增高（P＜0.01）,β-catenin、TCF-1、LEF-1及靶蛋白c-Myc和Cyclin D1表达水平显著升高（P＜0.01）;经白藜芦醇处理后,小鼠外周血中GFP+白血病细胞比例明显下降（P＜0.01）,c-Myc和Cyclin D1 mRNA表达水平明显降低（P＜0.01）,各蛋白表达水平明显下调（P＜0.01）。结论:在T-ALL细胞株和动物模型中,白藜芦醇可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、TCF-1和LEF-1的表达进而抑制靶蛋白c-Myc和Cyclin D1水平,发挥抗急性T淋巴细胞白血病作用。     

尼日菌素对前列腺癌DU145细胞Wnt/β-catenin信号传导的影响

目的 研究尼日菌素对前列腺癌DU145细胞的作用及其对Wnt/β-catenin信号传导的影响。方法 体外使用5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L的尼日菌素处理前列腺癌DU145细胞,同时以DMSO处理作为对照组。用细胞增殖-毒性检测试剂盒（CCK-8）检测尼日菌素对DU145细胞增殖活力的影响。以Transwell迁移侵袭实验检测药物对细胞的迁移侵袭能力的影响。用Western免疫印迹技术、免疫荧光及TOP/FOP-flash荧光报告试验检测尼日菌素对DU145细胞中β-catenin蛋白的表达及其下游靶基因c-myc及cyclin D1的表达以及对TCF/LEF转录因子活性的影响。结果 尼日菌素对前列腺癌DU145细胞有明显的细胞毒性作用,可以抑制其侵袭和转移;尼日菌素可以降低DU145细胞中β-catenin蛋白的表达,从而阻断Wnt信号的传导,抑制下游转录因子的活性、降低靶基因的表达水平。结论 尼日菌素可显著抑制前列腺癌细胞的侵袭与转移,可能与其抑制Wnt/β-catenin信号传导相关。     

miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制

目的:探究miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制。方法:在四株结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中,通过转染miR-302a mimic构建miR-302a过表达模型,RT-PCR检测过表达效果;CCK-8法检测转染48 h后高表达miR-302a细胞的增殖能力及对奥沙利铂的敏感性;蛋白质印迹法检测转染后P-gp蛋白及Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的变化。结果:相比正常小肠上皮细胞HIEC,miR-302a在结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中的表达较低。转染mimic后,miR-302a的表达明显上调（P<0.001）。增殖实验发现miR-302a的上调并不影响结直肠癌细胞的增殖,而在转染miR-302a的细胞中加入奥沙利铂,miR-302a组HT29、HCT8、SW480和SW1463细胞存活率相比miR-NC组分别降低2.46、1.89、2.39、2.86倍。进一步探究miR-302a增加奥沙利铂敏感性的机制,发现miR-302a可抑制P-gp蛋白的表达,并且抑制Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的表达。结论:miR-302a可增加结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性,其机制可能是通过抑制P-gp的蛋白表达,并抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达而实现。     

miR-153-3p通过靶向FZD3调控胃癌SGC7901细胞的增殖、侵袭与迁移

目的：探讨miR-153-3p对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭和迁移的作用及其机制。方法：收集2018年5月至2020年6 月宁夏医科大学总医院收治的60例胃癌患者的癌和配对癌旁组织标本,以及人胃癌细胞系NCI-N87、AGS、SNU-5、SGC7901和胃上 皮细胞 GES-1,qPCR 法检测 miR-153-3p 在胃癌组织与细胞中的表达水平。将 miR-153-3p mimic 及 mimic 对照序列转染至 SGC7901细胞,用CCK-8、克隆形成、流式细胞术、TUNEL、Transwell和划痕愈合实验分别检测上调miR-153-3p对SGC7901细胞 增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。构建裸鼠SGC7901细胞移植瘤模型,观察miR-153-3p对肿瘤生长的影响。通过生物信息学数 据库和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-153-3p与FZD3靶向关系,WB法检测miR-153-3p对FZD3蛋白及Wnt/β-catenin 通路相关蛋白表达的影响。结果：miR-153-3p在胃癌组织和细胞中表达水平分别显著低于癌旁组织和GES-1细胞（均P<0.01）,以SGC7901细胞中表达水平最低。上调 miR-153-3p 显著抑制 SGC7901 细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并提高细胞凋亡率 （均P<0.01）,同时上调细胞中E-cadherin表达而下调N-cadherin、MMP2和MMP9表达（均P<0.01）。在体内实验表明,静脉注射 miR-153-3p mimic显著降低移植瘤体积和瘤组织中Ki-67表达而上调P57表达（均P<0.01）。机制分析表明 ,miR-153-3p 靶向 结合FZD3基因的3′UTR区域,上调 miR-153-3p 会抑制FZD3表达并上调β-catenin、TCF-4和cyclin D1水平（均P<0.01）。结论： miR-153-3p靶向FZD3并通过Wnt/β-catenin信号通路调控胃癌SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移。     

miR-640通过抑制SLIT1介导Wnt/β-catenin通路促进脑胶质瘤对替莫唑胺的耐药

摘 要：［目的］评价miR-640介导Wnt/β-catenin通路对脑胶质瘤耐药细胞增殖、侵袭及替莫唑胺(temazolamide,TMZ)敏感性的影响。［方法］ 利用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）测定脑胶质瘤细胞内miR-640的表达。U87/TMZ细胞分为NC inhibitor组、 miR-640 inhibitor组和miR-640 inhibitor+si-SLIT1组。用不同浓度（15、30、60、120、240 、480和960 μmol/L）TMZ处理细胞,检测细胞对TMZ的耐药性;运用细胞计数试剂盒8（CCK-8）、Transwell实验检测U87/TMZ细胞增殖活力和侵袭力;用双荧光素酶报告基因实验验证miR-640与SLIT1的靶向关系。采用Western blot检测Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白表达水平。［结果］ miR-640在脑胶质瘤细胞中高表达,转染后miR-640 inhibitor组的miR-640表达水平、侵袭细胞数目（57±23 vs 153±31）、IC50值（131.61±8.97 vs 293.33±11.28）、增殖率（18.48±4.23 vs 43.84±8.94）均比NC inhibitor组低（P<0.05）。miR-640靶向调控SLIT1的表达,miR-640 inhibitor+si-SLIT1组β-catenin、c-myc、Cyclin D1蛋白表达水平均高于miR-640 inhibitor组（P<0.05）。［结论］miR-640通过SLIT1介导Wnt/β-catenin通路促进脑胶质瘤增殖、侵袭及对替莫唑胺的耐药性。     

微小RNA-223-3p靶向调控TGFBR3影响肺癌细胞上皮间质转化及Wnt/β-catenin通路

目的:探讨微小RNA-223-3p（miR-223-3p）对转化生长因子Ⅲ型受体（TGFBR3）的靶向调控及对肺癌上皮间质转化（EMT）及Wnt/β-catenin通路相关指标的影响。方法:采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测肺癌细胞（95D、LTEP-α-2、A549及NCI-H460）以及人肺上皮细胞BEAS-2B的miR-223-3p和TGFBR3水平,经双荧光素酶报告基因实验验证miR-223-3p和TGFBR3的靶向关系。将A549细胞分成3组:对照组、miR-223-3p NC组（转染miR-223-3p NC）、miR-223-3p mimic组（转染miR-223-3p mimic）,MTT法、划痕实验及Transwell小室实验分别检测3组细胞的增殖及迁移能力。接着收集3组转染后的细胞,分别制备裸鼠移植瘤,处死裸鼠并剥离肿瘤组织,测量肿瘤体积及重量,免疫组化法对比各组镜下TGFBR3蛋白的表达情况,Western blotting实验检测EMT相关指标上皮钙黏蛋白（E-Cadherin）、神经型钙黏蛋白（N-Cadherin）、波形蛋白（Vimentin）及Wnt/β-catenin通路相关因子（Wnt1和β-catenin）的表达。结果:与BEAS-2B细胞对比,肺癌细胞miR-223-3p及TGFBR3的表达水平均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-223-3p能靶向调控TGFBR3的表达。miR-223-3p mimic组A549细胞的增殖活力、划痕愈合率及穿膜细胞数均较miR-223-3p NC组明显降低（P＜0.05）;此外,miR-223-3p mimic组裸鼠瘤体体积及重量均明显低于miR-223-3p NC组。免疫组化结果显示,miR-223-3p mimic组TGFBR3阳性表达率上升,与miR-223-3p NC组相比,差异具有统计学意义（P＜0.05）;Western blotting结果提示,与miR-223-3p NC组相比,miR-223-3p mimic组肿瘤组织中TGFBR3、E-Cadherin表达水平升高,而N-Cadherin、Vimentin、Wnt1和β-catenin表达水平均下降（P＜0.05）。对照组与miR-223-3p NC组的增殖活力、划痕愈合能力以及EMT和Wnt/β-catenin通路相关因子水平的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-223-3p在肺癌中异常低表达,miR-223-3p通过靶向调控TGFBR3来抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移侵袭、EMT过程并阻断Wnt/β-catenin通路,在肺癌进展中发挥抑癌作用。     

LINC01140 通过 miR-452-5p/Wnt/β -catenin 轴调控食管鳞状细胞癌 Eca109细胞的增殖与侵袭

目的：探讨长链非编码RNA（lncRNA）LINC01140在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）组 织及细胞中的表达及其对Eca109细胞增殖与侵袭的影响及其分子机制。方法：选取2012年3月至2015年5月河北医科大学第 四医院收治的 133 例 ESCC 患者的临床资料和 GEPIA 数据库中收集的 182 例 ESCC 组织及 286 例食管正常黏膜组织的 LINC01140表达数据,以及 ESCC 细胞系 Kyse150、Eca109 和 TE13。用 qPCR 法检测癌组织和细胞中LINC01140的表达水平, 分析其表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。分别将pcDNA3.1-LINC01140、阴性对照（pcDNA3.1-NC）或 miR-452-5p mimic及阴性对照（miR-NC）转染到Eca109细胞,MTS、Transwell实验分别检测细胞的增殖与侵袭能力。用双荧光报告基因实验 及 TOP/FOP 报告基因系统检测 LINC01140 与 miR-452-5p 的靶向结合作用及 LINC01140 对 Wnt/β-catenin 通路活化水平的影 响。结果：LINC01140在ESCC组织和细胞中表达均显著下调（均P<0.01）,LINC01140 低表达与 ESCC 患者年龄、淋巴结 转移、TNM分期及OS密切相关（均P<0.05）。LINC01140过表达明显抑制 Eca109 细胞的增殖及侵袭能力（均P<0.01）。机制 研究表明,LINC01140可能通过竞争结合miR-452-5p影响Wnt/β-catenin信号通路的活化水平继而调控Eca109细胞的恶性生物学 行为。结论：LINC01140通过靶向miR-452-5p/Wnt/β-catenin轴促进ESCC细胞的增殖与侵袭能力,其有望成为ESCC患者靶向 治疗的潜在靶点及预后评估的标志物。     

miR-1471对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制探讨

目的:探讨miR-1471对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法:体外培养人胶质瘤细胞U251,将miR-1471模拟物或阴性对照分别转染至细胞中,记为miR-1471组和阴性对照（NC组）,同时设置对照组。qRT-PCR检测转染效果。CCK8检测各组细胞增殖能力。Transwell实验检测各组细胞侵袭能力。划痕实验检测各组细胞迁移能力。qRT-PCR和Western blot检测转移黏附基因（metadherin, MTDH）及Wnt/β-catenin信号通路相关基因和蛋白的表达。结果:与对照组和NC组比较,miR-1471组细胞增殖活性均显著降低（P＜0.05）,侵袭细胞数均显著减少（P＜0.05）,划痕间距明显较大,细胞中MTDH、Wnt1和β-catenin mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。结论:miR-1471能抑制人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调MTDH表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

塔斯品碱衍生物TPD7对乳腺癌细胞迁移和侵袭的抑制作用

目的:探讨塔斯品碱衍生物TPD7对乳腺癌细胞MCF-7和ZR-75-30细胞迁移和侵袭的影响,阐明TPD7抑制细胞迁移和侵袭可能的作用机制。方法:采用细胞划痕法、Transwell小室侵袭法检测MCF-7和ZR-75-30细胞的迁移和侵袭。采用Western blot法检测MMP9、β-catenin及c-Myc的蛋白表达。RT-PCR法检测β-catenin及c-Myc的mRNA表达。结果:TPD7对MCF-7细胞和ZR-75-30细胞迁移和侵袭均有显著抑制作用,且下调MMP9、β-catenin、c-Myc的蛋白表达和mRNA表达,呈剂量依赖性。结论:TPD7抑制乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞迁移和侵袭,可能是通过Wnt信号通路抑制上皮-间质转化。     

鞘磷脂合成酶2通过Wnt/β-catenin通路调控卵巢癌TOV-21G细胞的恶性生物学行为

目的：探讨鞘磷脂合成酶2(SMS2)是否通过Wnt/β-catenin信号通路调控卵巢癌（OC）TOV-21G细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及其机制。方法：收集武汉市第三医院2022年7月至2023年5月间确诊的21例OC患者的癌及癌旁组织标本,免疫组化法检测OC组织SMS2表达水平。体外培养TOV-21G细胞,将细胞分为对照组、shRNA慢病毒阴性对照组（sh-NC组）、SMS2 shRNA慢病毒组（sh-SMS2组）、Wnt/β-catenin通路激活剂组LiCl(LiCl组)和sh-SMS2+LiCl组。Edu染色法、Transwell法、流式细胞术分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力及凋亡水平,WB法检测细胞中SMS2、Ki67、cyclin D1、BAX、c-caspase3、Bcl-2及Wnt/β-catenin通路蛋白（β-catenin、c-Myc、MMP-9）的表达。构建TOV-21G细胞裸鼠移植瘤模型,观察敲低SMS2对移植瘤生长和SMS2、β-catenin表达的影响。结果：与癌旁组织比较,OC组织中SMS2呈高表达（P<0.01）。转染sh-SMS2后,TO...     

沉默ACY-1基因表达对结直肠癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的:初步探索氨基酰化酶1（ACY-1）与结直肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭的关系以及作用机制。方法:小干扰RNA（siRNA）技术沉默结直肠癌细胞中ACY-1基因的表达,转染至SW480细胞中,分为对照组、si-NC组、si-ACY-1组,荧光实时定量PCR（qRT-PCR）和免疫印迹试验（Western Blot）检测转染效果;用四甲基偶氮唑盐微量（MTT）实验检测干扰ACY-1基因表达对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Transwell法检测细胞的侵袭,Western Blot检测Ki-67、Caspase-3、β-连环蛋白（β-catenin）、c-Myc、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的蛋白水平。结果:Western Blot检测结果显示si-ACY-1组细胞中ACY-1蛋白的表达量显著低于对照组（P<0.05）。干扰ACY-1表达显著抑制细胞的增殖（P<0.05）和Ki-67蛋白水平,促进其凋亡（P<0.05）,增加Caspase-3蛋白水平,降低细胞的侵袭能力（P<0.05）。si-ACY-1组细胞中β-catenin、c-Myc、Cyclin D1的蛋白水平显著降低（P<0.05）。结论:沉默ACY-1抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭,诱导其凋亡,其作用与Wnt/β-catenin信号通路及其下游靶基因的激活有关,为结直肠癌的治疗提供新的治疗靶点。     

miR-181b在前列腺组织中的表达及对前列腺癌细胞PC-3生物学功能的影响

目的：探讨miR-181b在前列腺癌组织中的表达及miR-181b对前列腺癌PC-3细胞生物学功能的影响。方法：收集27例前列腺癌手术标本及30例正常前列腺组织标本,提取总微小RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测miR-181b的表达情况。选取人前列腺癌细胞株PC-3细胞为研究对象,转染miR-181b ASO。应用实时荧光定量PCR技术检测转染miR-181b ASO PC-3细胞中miR-181b的表达情况;流式细胞术检测转染miR-181b ASO PC-3细胞的凋亡变化情况;MTT实验及细胞生长曲线检测转染miR-181b ASO PC-3细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测转染miR-181b ASO PC-3细胞侵袭能力的影响。结果：miR-181b在前列腺癌组织中高表达。转染miR-181b ASO使PC-3细胞中miR-181b的表达降低;促进了PC-3细胞凋亡;miR-181b的表达降低导致前列腺癌细胞株PC-3增殖能力的减弱;miR-181b的表达降低导致前列腺癌细胞PC-3侵袭能力减弱。结论：miR-181b在前列腺癌组织中高表达,封闭前列腺癌细胞中miR-181b的表达,可以促进细胞凋亡及抑制细胞的增殖及侵袭,可能在前列腺肿瘤的基因治疗中起到积极作用。     

miR-181b在前列腺组织中的表达及对前列腺癌细胞PC-3生物学功能的影响

目的:探讨miR-181b在前列腺癌组织中的表达及miR-181b对前列腺癌PC-3细胞生物学功能的影响。方法:收集27例前列腺癌手术标本及30例正常前列腺组织标本,提取总微小RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测miR-181b的表达情况。选取人前列腺癌细胞株PC-3细胞为研究对象,转染miR-181b ASO。应用实时荧光定量PCR技术检测转染miR-181b ASO PC-3细胞中miR-181b的表达情况;流式细胞术检测转染miR-181b ASO PC-3细胞的凋亡变化情况;MTT实验及细胞生长曲线检测转染miR-181b ASO PC-3细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测转染miR-181b ASO PC-3细胞侵袭能力的影响。结果:miR-181b在前列腺癌组织中高表达。转染miR-181b ASO使PC-3细胞中miR-181b的表达降低;促进了PC-3细胞凋亡;miR-181b的表达降低导致前列腺癌细胞株PC-3增殖能力的减弱;miR-181b的表达降低导致前列腺癌细胞PC-3侵袭能力减弱。结论:miR-181b在前列腺癌组织中高表达,封闭前列腺癌细胞中miR-181b的表达,可以促进细胞凋亡及抑制细胞的增殖及侵袭,可能在前列腺肿瘤的基因治疗中起到积极作用。     

dsP21-625 通过激活P21 基因表达抑制前列腺癌细胞的增殖

目的:探讨人工合成小分子双链RNA-625（double-stranded RNA-625,dsP21-625）对前列腺癌细胞P21 基因的激活作用及对细胞增殖的影响。方法: 将人工合成的dsP21-625（dsP21-625 组）和dsCtrl 质粒（dsCtrl 组）分别转染至前列腺癌细胞株PC-3 和DU-145。用实时荧光定量PCR和Western blotting 分别检测转染后各组前列腺癌细胞中P21、细胞周期素E（Cyclin E）和细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）mRNA及蛋白的表达水平,流式细胞术、MTT实验和克隆形成实验分别检测细胞周期分布、细胞增殖和克隆形成能力。结果: 与dsCtrl 组比较,dsP21-625 组PC-3 和DU-145 细胞中P21 mRNA水平升高(均P<0.01),Cyclin E和CDK2 mRNA表达水平下调（均P<0.01）;dsP21-625 组PC-3 和DU-145 细胞中P21 蛋白表达上调(均P<0.01),Cyclin E和CDK2 蛋白表达下调（均P<0.01）;dsP21-625 组细胞S 期和G2/M 期的细胞比例减少（均P<0.05）,G0/G1 期的细胞比例增加（均P<0.01）;dsP21-625 组细胞增殖活力降低（均P<0.05）、克隆形成数减少（均P<0.05）。结论: dsP21-625 上调前列腺癌细胞中P21 mRNA及蛋白的表达,下调Cyclin E和CDK2 mRNA及蛋白的表达,抑制前列腺癌细胞的增殖能力。     

lncRNA FLJ26245 通过 miR-200a-3p/PTPRG 轴调控前列腺癌 PC-3 细 胞的增殖与迁移

目的：探讨lncRNA FLJ26245在前列腺癌组织和细胞中的表达及其对PC-3细胞增殖与迁移能力的影响及其分子机 制。方法：选用2017年3月至2019年5月在洛阳中心医院手术切除的52例前列腺癌及相应的癌旁组织标本,以及前列腺细胞系 LNCaP、C4-2B、PC-3、DU-145和正常前列腺上皮细胞RWPE-1,用qPCR法检测前列腺癌组织和细胞中FLJ26245的表达水平。分 别将FLJ26245 mimic和阴性对照质粒（lncR-NC）转染到PC-3细胞中,用MTT法、细胞划痕愈合实验分别检测细胞的增殖和迁移 能力。生物信息学技术预测和双荧光素酶基因报告实验验证FLJ26245与miR-200a-3p、酪氨酸磷酸酶受体G（PTPRG）三者之间 的靶向关系。用qPCR 和 WB 法分别检测 FLJ26245 下游基因及增殖与迁移相关蛋白的表达。结果：FLJ26245 在前列腺癌组 织和细胞中的表达水平分别显著低于癌旁组织（P<0.01）和 RWPE-1细胞（P<0.01或P<0.05）,以PC-3细胞中的表达水平为最低（P<0.01）。FLJ26245过表达可明显抑制PC-3细胞的增殖和迁移能力（P<0.05或P<0.01）。FLJ26245可与miR-200a-3p靶向结 合,miR-200a-3p可与PTPRG靶向结合（均P<0.01）。FLJ26245过表达的PC-3细胞中miR-200a-3p表达水平显著降低（P<0.01）、PTPRG mRNA和蛋白表达水平均明显升高（均P<0.01）,细胞中增殖和迁移相关蛋白cyclin A、CDK2和Twist、N-cadherin均显著 降低（均P<0.01）。结论：FLJ26245在前列腺癌组织及细胞中均低表达,其可能通过miR-200a-3p/PTPRG轴调控前列腺癌PC-3 细胞的增殖与迁移能力。