金钠多对缺氧所致内皮细胞内钙离子浓度和线粒体膜电位改变保护作用的研究

目的：观察缺氧对血管内皮细胞[Ca^2＋]i和线粒体膜电位的变化及金钠多的保护作用。方法：血管内皮细胞分为6组，用激光共聚焦显微镜测量各组细胞内[Ca^2＋]i和线粒体膜电位。结果：①单纯缺氧组同对照组比较细胞内[Ca^2＋]i明显升高（P〈0．01）、线粒体膜电位明显降低（P〈0．01）；②缺氧加金钠多组同单纯缺氧组比较[Ca^2＋]i显著降低（P〈0．01）、线粒体膜电位显著升高（P〈0．01）。结论：缺氧可导致血管内皮细胞[Ca^2＋]i升高、线粒体膜电位降低；金钠多对缺氧所致的[Ca^2＋]i和线粒体膜电位的损伤具有保护作用。     

紫芪方对缺氧复氧所致大鼠小肠上皮细胞损伤的保护作用

目的观察缺氧复氧对大鼠小肠上皮细胞（intestinal epithelial cell，IEC）-6培养液中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量及细胞内Ca^2＋浓度和线粒体膜电位的影响，探讨复方中药-紫芪方对IEC-6肠上皮细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制。方法复制IEC-6细胞缺氧复氧损伤模型，采用紫外分光法测定缺氧复氧后及紫芪方血清治疗后细胞培养液中SOD活性及MDA含量；采用激光共聚焦显微镜测定细胞Ca^2＋浓度和线粒体膜电位变化。结果细胞缺氧复氧损伤后，可导致细胞培养液中SOD活性显著降低、MDA含量显著升高、线粒体膜电位明显降低及细胞内Ca^2＋浓度明显升高（P〈0．01）。紫芪方药物血清治疗后，可提高细胞培养液中SOD活性并降低其MDA含量，同时稳定了线粒体膜电位并降低细胞内Ca^2＋浓度（P〈0．05）。结论缺氧复氧可导致IEC-6肠上皮细胞损伤；紫芪方血清对IEC-6小肠上皮细胞缺氧复氧损伤具有显著的保护作用。     

血管紧张素-2对血管内皮细胞[Ca~(2+)]i的影响及合贝爽的保护作用

目的：观察血管紧张素-2（A增-2）对血管内皮细胞[Ca^2＋]i的影响及合贝爽的保护作用。方法：将血管内皮细胞分为空白对照组、Ang-2组、Ang-2＋合贝爽组。Ang-2组加入10^-7mogl/L Ang-2，Ang-2组＋合贝爽组加入10^-7mol／L Ang-2和1mg／L合贝爽。各组在药物作用60min后，用激光共聚焦显微镜测量各组细胞的[Ca^2＋]i。结果：①Ang-2组的细胞内[Ca^2＋]i显著高于空白对照组（P〈O．01）；②Ang-2＋合贝爽组的细胞内[Ca^2＋]i显著低于Ang-2组（P〈0．01）。结论：Ang-2可引起细胞内[Ca^2＋]i的显著增加，而合贝爽对Ang-2所致的[Ca^2＋]i增加具有保护作用。     

肼致心肌成纤维细胞凋亡作用机制的研究

目的观察肼作用于体外培养心肌成纤维细胞的凋亡情况并探讨其机制。方法将新生大鼠心肌成纤维细胞培养标本分为对照组和肼处理组。用2mmol／L浓度的肼处理细胞72h后Hoeehst33258染色，荧光显微镜下观察凋亡细胞核的变化；膜蛋白V／磺化丙啶双染流式细胞仪检测细胞凋亡率和坏死率；Rodamine123荧光染色流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位的变化；Western blot检测凋亡相关蛋白Bax／Bob2和Caspase-3表达的变化。结果肼处理后的细胞与对照组相比，出现明显的细胞凋亡的核浓缩、核聚集形态；细胞凋亡率和坏死率与对照组比较差异均有显著性；细胞内线粒体膜电位降低；Bax表达增高、Bcl-2表达降低、Caspase-3表达增高。结论肼可引起心肌成纤维细胞凋亡，并可能通过线粒体通路即肼损伤线粒体引起Bcl-2表达降低，Bax表达增加致使线粒体膜通透性转换孔开放，膜电位降低，细胞色素C释放入胞浆，激活Caspase-3，引起细胞凋亡。     

金钠多与茶多酚对缺氧联合Ang Ⅱ所致内皮细胞分泌内皮素保护作用的比较研究

目的：观察缺氧联合AngⅡ对血管内皮细胞分泌内皮素的影响及金钠多与茶多酚保护作用的比较。方法：将培养的血管内皮细胞分为4组，每组8个样本，用放射免疫法测定作用前、作用后0．5、6、24h各组内皮素含量。结果：缺氧＋AngⅡ组与对照组比较，血管内皮素明显升高（P〈O．01）；金钠多组与缺氧＋AngⅡ组比较，血管内皮素显著降低（P〈O．01）；茶多酚组与缺氧＋AngⅡ组比较，血管内皮素显著降低（P〈0．01）；金钠多组与茶多酚组比较，血管内皮素浓度降低在0．5h无差异（P〉O．05），但在6h和24h有显著差异（P〈O．01）。结论：缺氧联合AngⅡ可导致血管内皮细胞分泌内皮素功能增强；金钠多和茶多酚对缺氧联合AngⅡ对内皮细胞的损害有保护作用，但金钠多的保护作用更强于茶多酚。     

缺氧及缺氧复合运动大鼠骨骼肌线粒体功能的变化

目的：观察缺氧及在缺氧条件下运动对骨骼肌线粒体呼吸功能的影响，探讨在缺氧习服过程中，适当的运动锻炼促进机体高原习服的机制。方法：Wistar大鼠分为4组：平原对照组、缺氧组、平原运动组和缺氧复合运动组。缺氧复合运动组大鼠持续暴露于模拟海拔5000m高原5w，每天降至4000rn的高原进行游泳运动1h（6d／w），运动结束后回升至5000m；缺氧组大鼠同时在低压舱内相同海拔高度饲养，但不进行游泳运动；平原运动组和平原对照组在舱外同时饲养，其中平原运动组每天进行游泳运动1h（6d／w）。在末次运动结束后24h处死大鼠，分离大鼠腓肠肌提取线粒体。用Clark氧电极法测定线粒体呼吸功能，Western Blotting法测ATP合成酶d亚基蛋白表达。结果：与平原对照组比较，缺氧组腓肠肌线粒体ST3显著降低；缺氧复合运动组与缺氧组比较ST3、ST4、膜电位显著增高，ATP合成酶a亚基表达显著增加；平原运动组与对照组比较无显著差异。结论：慢性缺氧骨骼肌线粒体ATP合成能力降低，而缺氧复合运动后，骨骼肌线粒体ATP合成能力增强，这可能是缺氧复合运动促进高原习服的线粒体适应机制。     

缺氧复氧对IEC-6肠上皮细胞膜电位的影响及紫芪方的保护作用

目的观察缺氧复氧对IEC-6肠上皮细胞线粒体膜电位的影响,探讨抗休克复方中药-紫芪方对IEC-6肠上皮细胞缺氧复氧损伤的保护作用机制。方法建立IEC-6细胞缺氧复氧损伤模型;采用血清药理学方法,在细胞培养液中加入不同给药剂量获取的“紫芪方”药物血清(分别以10、20g·kg-1分为1次给药和间隔1h、2次给药,DJ-1,SJ-2);参附药物血清(间隔1h,2次给药20g·kg-1SF)及生理氯化钠血清(S)。采用紫外分光光度分析法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,以及采用激光共聚焦显微镜测定线粒体膜电位(MMP)变化。结果IEC-6细胞缺氧复氧损伤后,可致细胞LDH的漏出量明显升高,线粒体膜电位明显降低。紫芪方药物血清明显减轻上述损伤,与对照组比较,SJ-2组制备的药物血清能明显减少IEC-6细胞LDH的漏出量(P<0.01);并具有保护IEC-6肠上皮细胞线粒体膜电位的作用(P<0.01)。结论缺氧复氧可导致IEC-6肠上皮细胞LDH漏出量升高和线粒体膜电位降低,“紫芪方”药物血清可减少细胞LDH漏出量及保护线粒体膜电位,从而发挥细胞的保护作用。     

阿米洛利对家兔心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

目的：观察H^＋-Na^＋泵受体拮抗剂对家兔心肌缺血一再灌注损伤中心肌细胞损伤及细胞凋亡的影响。方法：将实验动物随机分为手术模型组，阿米洛利组，氨苯蝶啶组，正常对照组。观察血清CK—MB和LDH含量和细胞凋亡及坏死情况。结果：阿米洛利组心肌细胞凋亡率明显下降，氨苯蝶啶组未见明显改变。结论：在心肌细胞缺血一再灌注过程中，细胞凋亡是首要的病理改变，阿米洛利可降低细胞凋亡率，其机理可能与细胞内Ca^2＋浓度的调节有关。     

高压氧对沙鼠脑缺血海马神经细胞Ca2+-ATP酶活力的影响

目的探讨高压氧（HBO）作用后对脑缺血海马神经细胞Ca^2＋-ATP酶活力的影响。方法用蒙古种沙土鼠，采用双侧颈总动脉结扎制作前脑缺血模型，动物随机分为正常对照组、缺血再灌注组（夹闭双侧颈总动脉30min制作全脑缺血模型，随后放开动脉夹使再灌流80min）、0．1MPa纯氧组、0．25MPa高压氧组、0．25MPa常氧高氮组共5个组。采用定磷法测定海马神经细胞Ca^2＋-ATP酶活力。结果急性脑缺血再灌注后，Ca^2＋-ATP酶活力显著下降（P〈0．01），经0．1MPa纯氧和0．25MPa高压氧作用后，Ca^2＋-ATP酶活力均明显恢复，与急性脑缺血再灌注组相比，差异有统计学意义（P〈0．01），而且以0．25MPa高压氧组作用更为显著，0．25MPa常氧高氮组Ca^2＋．ATP酶活力无明显改变，结论高压氧可通过恢复Ca^2＋-ATP酶活力以恢复细胞内游离Ca^2＋浓度。     

Rg1对失血性休克大鼠肠上皮细胞保护作用的实验研究

目的观察失血性休克对大鼠肠黏膜组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）、细胞线粒体膜电位、大鼠存活情况、肠上皮黏膜组织病理改变的影响，探讨人参皂苷单体Rg1对大鼠肠道损伤的保护作用及机制。方法采用失血性休克大鼠模型，紫外分光法测定各组动物处理后肠黏膜组织中SOD活性、MDA含量、LDH活力；以激光共聚焦显微镜检测肠上皮细胞线粒体膜电位的变化；观察各组动物存活情况及肠黏膜组织病理形态改变。结果失血性休克导致实验大鼠肠黏膜组织SOD活性显著降低、MDA含量显著升高、LDH活力显著降低、线粒体膜电位显著降低（P〈0．01）。Rg1治疗显著提高肠黏膜组织中SOD活性、降低MDA含量、提高LDH活力；稳定肠上皮细胞线粒体膜电位（P〈0．01），显著改善动物存活情况及病理形态改变。结论Rg1对失血性休克大鼠肠道上皮细胞损伤具有保护作用，其机制可能与抑制异常凋亡、抗脂质过氧化、保护线粒体功能及结构完整有关。     

LPS和TNFα对肺微血管内皮细胞内游离钙的影响

目的探讨脂多糖（LPS）、肿瘤坏死因子α（TNFα）对大鼠肺微血管内皮细胞（RPMVEC）内游离钙浓度（[Ca^2＋]i）的影响。方法将细胞接种于盖玻片上,细胞单层汇合后进行实验。实验分组：LPS组（用10ug/mlLPS）,LPS＋山莨菪碱组（用10ug／mlLPS＋10ug/ml山莨菪碱）,TNFα组（用5000u／mlTNFα）,TNFα＋山莨菪碱组（用5000u／mlTNFα＋10ug／ml山莨菪碱）,正常对照组加等量稀释液。作用15、90min后按照试剂盒提供的方法,并参照文献测定[Ca^2＋]i。结果与正常对照组比较,LPS组、LPS＋山莨菪碱组15min和90min两个时相点[Ca^2＋]i均显著升高（P〈0．01）;LPS组与LPS＋山莨菪碱组比较,15min和90min两个时相点[Ca^2＋]无明显差异（P〉0．05）。同样,与正常对照组比较,TNFα组、TNFα＋山莨菪碱组15min和90min两个时相点[Ca^2＋]i均显著升高（P〈0．01）;TNFα组与TNFα＋山莨菪碱组比较,15min和90min两个时相点[Ca^2＋]i无明显差异（P〉0．05）。结论LPS、TNFα作用可使RPMVEC[Ca^2＋]i显著升高,山莨菪碱对LPS、TNFα诱导的RPMVEC[Ca^2＋]i升高无显著抑制作用;LPS、TNFα引起的[Ca^2＋]i浓度升高与β—AR介导的信号转导通路无关;[Ca^2＋]i升高可能参与了G蛋白偶联受激酶的活性调节。     

白藜芦醇预处理对心肌细胞缺血/再灌注损伤的保护作用

目的观察白藜芦醇预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法培养乳鼠心肌细胞,模拟I/R损伤,随机分为阴性对照组、缺血再灌组及白藜芦醇预处理组,采用台盼蓝穿透法及MTT比色法测定细胞活力,检测细胞培养液中LDH活性及心肌细胞Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-ATP酶活力。结果Res预处理可提高心肌细胞活力;稳定心肌细胞膜,抑制LDH释放;保护心肌细胞钠泵和钙泵功能,减轻再灌注损伤。结论白藜芦醇预处理对心肌缺血再灌注损伤有明显保护作用。     

环维黄杨星D对急性分离大鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的研究环维黄杨星D（CVB-D）对急性分离大鼠心肌细胞内游离Ca^2＋浓度的影响。方法急性分离大鼠心肌细胞,应用特异性荧光指示剂Fluo^-3/AM负载细胞,用激光共聚焦显微镜检测胞内游离钙的变化。结果在台氏液中,CVB-D浓度为10^-7、10^-6、10^-5mol·L^-1时,心肌细胞内[Ca^2＋]i逐步升高,其峰值分别为（52.78±1.41）、（59.86±4.17）、（62.99±2.66）,并呈剂量依赖性;在有外钙和无外钙时,环维黄杨星D对胞内钙的升高有显著性差异（P〈0.05）;在无外钙并加入内罗啶孵育后,环维黄杨星D引起的胞内[Ca^2＋]i轻度升高,但与无钙组相比无显著性差异（P〉0.05）。结论环维黄杨星D具有升高心肌细胞内游离钙离子浓度的作用,[Ca^2＋]i的升高既源于内钙释放又源于外钙内流。     

体外培养星形胶质细胞缺氧／复氧后EAAT2、谷氨酰胺合成酶的表达

目的对体外培养的星形胶质细胞（AC）进行缺氧／复氧及亚低温干预。观察兴奋性氨基酸转运体2（EAAT2）、谷氨酰胺合成酶（GS）的表达及亚低温干预对其的影响。方法选用新生大鼠的大脑皮层组织培养的AC。分为对照组（C）、缺氧／复氧组（H／R）、亚低温组（H／M＋R）,缺氧12h后H／R组及H／M＋R组分别于37℃及32℃复氧。每组设复氧2h、4h、8h、12h、24h、48h等时间点。MTT测定细胞活力,Western—blot半定量分析EAAT2、GS的表达情况。结果①MTT法检测细胞活力：H／R组与H／M＋R组的细胞活力均比C组的细胞活力低,而H／M＋R组的细胞活力较H／R组高,差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）Western—blot检测结果：H／R组与H／M＋R组的EAAT2表达与C组相比较,均先减少,后随着复氧时间延长逐渐增多,差异有统计学意义（P〈0．05）,H／M＋R组的EAAT2表达与H／R组相比较,表达量下降趋势小,差异有统计学意义（P〈0．05）;H／R组与H／M＋R组的GS表达量随着复氧时间延长。均呈现增高趋势,与C组比较增高显著,差异有统计学意义（P〈0．05）,H／M＋R组的GS表达量与H／R组比较增高趋势更加明显,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论缺氧／复氧及亚低温干预可引起星形胶质细胞EAAT2、GS表达的改变：32℃～35℃亚低温干预可以抑制缺氧／复氧损伤后兴奋性氨基酸的释放,这可能是脑保护作用的重要机制之一。     

bFGF对慢性酒精中毒大鼠肝组织ATP酶活力的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对慢性酒精中毒大鼠肝组织Na^＋-K^＋-ATP酶活力和Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶活力的影响,探讨bFGF对慢性酒精中毒所致的肝损伤的保护作用。方法选择成年Wistar雄性大鼠,采用白酒灌胃建立慢性酒精中毒模型,慢性酒精中毒模型建立成功的大鼠随机抽签法分为酒精中毒对照组、生理盐水（NS）对照组和bFGF治疗组。另10只不灌白酒作为正常对照组。bFGF治疗组大鼠白酒灌胃的同时,1h后按12μg/kg剂量肌肉注射,共14d。各组大鼠到相对应的时间点取出肝组织制成匀浆,测定肝组织匀浆中Na^＋-K^＋-ATP酶活力和Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶活力。结果与正常对照组相比,慢性酒精中毒后大鼠肝组织中Na^＋-K^＋-ATP酶活力及Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶活力均明显降低（P〈0.05）;经bFGF治疗后肝组织中Na^＋-K^＋-ATP酶活力和Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶活力均明显高于酒精中毒对照组及NS对照组（P〈0.05）。结论 bFGF能提高慢性酒精中毒肝组织中Na^＋-K^＋-ATP酶活力及Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶活力,提示bFGF对慢性酒精中毒所致的肝损伤具有保护作用。     

缺氧对体外培养的大鼠肾成纤维细胞PEDF和VEGF表达的影响

目的：探讨缺氧对不同浓度葡萄糖培养的大鼠肾成纤维细胞（NRK细胞）血管内皮生长因子（VEGF）与色素上皮衍生因子（PEDF）表达和变化情况。方法：将NRK细胞分为：正常组、甘露醇组、缺氧对照组、高糖A、B组、缺氧A、B组。用四唑盐比色实验法检测各组NRK细胞的数目,用ELISA法测定NRK细胞VEGF与PEDF蛋白的表达情况。结果：与正常对照组相比,高糖组和缺氧组的NRK细胞数目显著减少（P〈0．01）。在缺氧条件下NRK细胞VEGF蛋白含量明显升高（P〈0．01,P〈0．05）,PEDF蛋白含量明显下降（P〈0．01）,并呈剂量依赖性;随着时间的延长,各组NRK细胞的VEGF蛋白含量呈上升趋势（P〈0．01）,PEDF蛋白含量呈下降趋势（P〈0．01）。结论：缺氧使不同浓度的高糖诱导的肾成纤维细胞VEGF与PEDF的表达失衡,这可能是糖尿病肾病发生的重要机制。     

心理应激对模拟高原环境下大鼠肺损伤影响的实验研究

目的：探讨心理应激对模拟高原低压低氧环境下大鼠肺损伤的影响。方法：雄性SD大鼠随机分为对照组（Con组）、低氧组（Hy组）、心理应激（2次／d）组（Ps1组）、心理应激（2次／d×2d）组（Ps2组）、心理应激（2次／d）＋低氧组（Ps1＋Hy组）和心理应激（2次／d×2d）＋低氧组（Ps2＋Hy组）。通过测定大鼠右肺湿／干比值、全湿肺／体重比值、右肺含水比值、血管“袖套”面积和血管“袖套”面积／血管面积的比值来评定肺损伤的程度。结果：与Con和Hy组比较，Ps2＋Hy组的右肺湿／干比值、肺湿重／体重比值、血管“袖套”面积和血管“袖套”面积／血管面积比值均显著增高（P分别〈0．01，0．05）。结论：心理应激可加重急性低压低氧环境导致的大鼠肺损伤。     

广藿香醇对β-淀粉样蛋白神经毒性的抑制作用

目的研究雌激素受体卢亚型（estrogen receptor β，ERβ）选择性激动剂广藿香醇（patchouli alcohol，PA）对β-淀粉样蛋白（β-amyloidpe ptide，Aβ）片段神经毒性的体外抑制作用。方法Aβ25-35位氨基酸片段（Aβ25-35）作用于人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）之前不同浓度PA预防给药，荧光探针法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平和细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]；），流式细胞术检测细胞凋亡率。结果PA（0．05、0．5、5μg·ml^-1）能够抑制Aβ25-35引起的细胞内ROS水平和[Ca^2＋]；升高，使细胞凋亡减少。结论PA对Aβ25-35的神经毒性具有抑制作用。     

大黄素甲醚对神经细胞缺氧性损伤保护作用的实验研究

目的:研究大黄素甲醚对缺氧引起的PC12神经细胞损伤的保护作用。方法:培养PC12细胞,建立神经细胞缺氧损伤模型,观察组细胞在缺氧损伤前采用大黄素甲醚进行预处理。MTT检测PC12细胞增殖活性,光学显微镜观察PC12细胞形态学、测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量、荧光免疫组化法测定c-fos蛋白表达、RT-PCR检测nNOS、iNOS mRNA表达。结果:细胞形态学研究提示大黄素甲醚明显提高PC12细胞的抗缺氧活性。大黄素甲醚处理后,细胞存活率明显提高,上清液LDH水平明显下降,c-fos表达明显降低(P<0.05)。RT-PCR结果分析显示nNOS mRNA在缺氧早期表达,iNOS mRNA主要在缺氧中晚期表达。结论:大黄素甲醚能减轻缺氧所致的神经元损伤,对神经元起保护作用。