晚期非小细胞肺癌循环肿瘤细胞的测定及其意义

摘 要：［目的］ 分析晚期非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）与临床特征、肿瘤标志物间的相关性。［方法］ 收集2016年7月至2017年4月徐州医科大学第二附属医院经病理证实的36例晚期非小细胞肺癌患者的临床、病理等资料以及10位健康志愿者。所有研究对象均行外周血循环肿瘤细胞检测,采用免疫磁珠阴性富集技术分离CTCs,利用荧光原位杂交和免疫荧光染色鉴别CTCs,在荧光显微镜下观察并统计CTCs。［结果］ 36例非小细胞肺癌患者的循环肿瘤细胞水平明显高于健康志愿者（P=0.000）。单因素分析结果显示,晚期非小细胞肺癌外周血CTCs与临床分期(P=0.010)、远处转移(P=0.006)以及远处转移个数(P=0.018 )相关。多因素回归分析结果则显示,仅远处转移与 CTCs 的阳性表达具有相关性(P=0.011)。CTCs阳性表达与CEA、SCCA、NSE无关( P＞0．05),但CYFRA21-1组的CTCs阳性率明显高于正常组(P=0.034)。［结论］ CTCs在晚期非小细胞肺癌中的表达与远处转移密切相关,且CTCs与传统肿瘤标志物的联合应用可为疾病复发和转移提供依据。     

20例肝癌初治患者外周血循环肿瘤细胞计数及其临床意义

摘 要：［目的］ 探讨外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)计数与肝癌初治患者基线临床资料的关系。［方法］ 选取20 例肝癌患者的外周血液样本,每例7.5ml,通过ClearCell CTC分离仪分离出具有完整生物学活性的CTCs进行DAPI、CD45、CK18染色,然后对DAPI+、CK18+、CD45-的CTCs细胞进行计数,并结合患者的巴塞罗那 (BCLC)分期、有无远处转移、有无门静脉癌栓、甲胎蛋白(AFP)水平等基线临床资料进行分析。［结果］ 20例肝癌患者平均（24.8±17.2）个CTCs/7.5ml外周血。CTCs计数与甲胎蛋白≥400ng/ml(P<0.05),远处转移(P<0.05)及BCLC分期B(P<0.05)有关。［结论］ 外周血CTCs数目的多少与肝癌初治患者的AFP水平、BCLC分期、远处转移等有关。临床上检测患者的外周血CTCs可作为一种辅助诊断工具,但其与患者转移风险及预后的关系有待进一步研究及大规模的样本验证。     

晚期肿瘤患者503例循环肿瘤细胞阳性率分析

摘 要：［目的］ 探讨晚期肿瘤患者外周血循环肿瘤细胞( circulating tumor cells,CTCs)的水平。［方法］ 收集 2014年11月至 2015年10月上海市市东医院收治503例肿瘤晚期患者的CTCs结果,包括肺癌、肝癌、乳腺癌、胃癌、肠癌和胰腺癌等肿瘤。患者标本均为空腹时抽取静脉血 3.2 ml,采用CyttelTM染色体扩增型方法检测血液中的CTCs。［结果］ 503例患者外周血中CTCs阳性率为59.84%(301/503);男性患者CTCs阳性率为60.5%(167/276),女性患者CTCs阳性率为59.03%(134/227) (P＜0.05)。不同年龄、不同肿瘤类型CTCs阳性率比较差异有统计学意义(P＜0.05)。［结论］ 晚期肿瘤患者外周血中 CTCs 水平在性别、年龄、癌种中有差异。     

负性富集食管鳞癌患者外周血中循环肿瘤细胞的检测及其意义

目的:负性富集并鉴定食管鳞癌患者外周血循环肿瘤细胞(CTCs)的数量及表型特征,探讨CTCs在食管鳞癌临床疗效评价和预后判断等方面的应用价值.方法:通过免疫磁珠偶联CD45抗体除去外周血白细胞,富集外周血CTCs的“负性策略”,用荧光鉴定CTCs上皮标志及细胞核特征,用统计学方法分析CTCs数量改变与患者临床参数与治疗效果、预后的相关性.结果:59例食管鳞癌患者术前外周血CTCs的阳性率为79.7％ (47/59),7.5ml外周血CTCs平均检出数目为7.83(0～ 72)个.其中淋巴结是否转移、肿瘤TNM分期、肿瘤浸润程度和分化程度、不同各组CTCs检出的差异,具有统计学意义(P＜0.05).采用多因素Cox回归分析,术前CTCs≥5及淋巴结转移是影响预后的显著因素.结论:免疫磁珠负性富集结合免疫荧光鉴定的方法可以有效地分离和鉴定食管癌外周血CTCs.初步研究提示,外周血中CTCs与食管鳞癌分期、进展及其预后相关.     

8号和20号染色体拷贝数改变辅助食管癌外周血循环肿瘤细胞鉴定

[目的]建立基于细胞学鉴定食管鳞癌（ESCC）外周血循环肿瘤细胞（CTCs）的技术。[方法]通过偶联CD45抗体的免疫磁珠去除白细胞，富集食管癌外周血稀有细胞的“负性富集”策略，结合抗CK8／18／19免疫荧光染色（IF）和8／20号染色体荧光原位杂交（FISH）鉴定CTCs。[结果]食管癌外周血CK8／18／19^＋／CD45^-的CTCs检出率为43馏％（7／16），其中80％伴有8／20号染色体非整倍体的改变（AC）。食管癌细胞WHCO1、EC0156和KYSE250的8号AC分别为77．3％、78，6％和75％；KYSE150的20号AC为77．9％。外周血一些胞浆胞膜小完整、具有异型性的细胞核伴有8／20号AC改变。[结论]食管癌8／20号AC可以作为判断食管癌外周血CTCs恶性表型的标准，结合CK8／18／19^＋／CD45标准，不但可以鉴定具有完整细胞结构的CTCs,还可以鉴定胞浆、胞膜不完整或裸核样的CTCs的恶性表型。     

放疗对非小细胞肺癌患者循环肿瘤细胞数目的影响

摘 要：［目的］ 探讨放疗对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者循环肿瘤细胞（CTCs）的影响。［方法］ 选取42例NSCLC患者为研究对象,比较放疗前后CTCs数目的变化情况,并分析各亚组治疗前后CTCs数目的改变。［结果］ 放疗前CTCs数目与患者性别、年龄、吸烟状况及临床分期的无关。与放疗前比较,放疗后CTCs数目下降明显（P＜0.001）;男性、年龄＞60岁及吸烟患者治疗后CTCs数目下降有统计学意义。［结论］ 放疗可以在不同程度上降低CTCs数目,但不同患者异质性较大,需个体化分析和判断。     

一种高通量循环血液富集循环肿瘤细胞的装置

目的:通过具有生物相容性的微滤膜和外周血循环单通道闭合环路装置的结合来有效富集循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）。方法:使用均匀分布有直径为10 μm大小微孔的派瑞林微滤膜；采用肺癌H1975细胞系，以不同浓度混入健康受试者外周血，体外免疫荧光实验检测微滤膜对肿瘤细胞的捕获率；进一步二代测序实验验证了基于微滤膜捕获肿瘤细胞行基因突变检测的敏感性。体内实验在猪模型中，验证该单通道闭合环路装置的安全性。结果:使用微滤膜可以在肺癌H1975细胞系样本中获得85.00％的捕获率。在一定的细胞浓度下，基于微滤膜捕获的肿瘤细胞可有效实现基因突变的检测，并且通过猪模型初步确定了装置的安全性。结论:基于微滤膜的单通道闭合环路装置是一种可实现高通量、高效的CTCs捕获设备，为后续CTCs的高效富集及基于CTCs的相关分子生物学检测、实时个体化治疗的探索奠定了基础。     

非小细胞肺癌循环肿瘤细胞检测进展

肺癌是世界范围内发病率最高的恶性肿瘤, 约有18%的癌症相关死亡与肺癌有关。循环肿瘤细胞(CTCs)的出现可看做是肿瘤细胞播散入血的直接体现, 而这正是导致非小细胞肺癌患者预后较差的最重要因素之一。检测外周血中循环肿瘤细胞有望成为诊断肺癌的辅助方法, 使肺癌患者得到最佳的个体化治疗。研究者们已尝试多种不同的方法从外周血中分离CTCs。虽然有关CTCs检测的研究众多, 但不同检测方法的敏感度、特异性及重复性限制了其临床意义, 本文就现有的各项技术进行综述。      

循环肿瘤细胞的富集分离和检测

循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）与恶性肿瘤的复发和转移有密切关系。CTCs 是指自发或因诊疗操作由实体瘤或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞。但是,CTCs 在癌症患者外周血中含量极少而且其在血液循环中往往相互聚集或者与其他细胞黏附集聚,另外循环肿瘤细胞还可能发生一些转变。例如上皮－间质转化（epithelial －mesenchymal transition,EMT）,造成的 CTCs 表面标志物的改变,因此CTCs 的富集分离、检测十分困难。诸多技术各有各的优缺点,至今还没有统一的标准。本文就当今正使用的一些富集分离和检测技术进行总结并分析其优缺点。     

联合应用抗CK及EpCAM抗体检测食管癌外周血循环肿瘤细胞

目的:探讨联合应用抗细胞角蛋白抗体（cytokeratin，CK）及抗上皮特异性黏附分子(epithelial cell adhesion molecule，EpCAM)免疫磁珠富集循环肿瘤细胞（circulating tumor cells，CTCs）的方法，用于提高食管癌患者外周血循环肿瘤细胞检测率。方法:将不同数量的食管癌细胞系（KYSE-170、KYSE-180、EC0156）分别与健康志愿者外周血混合后，比较单独使用抗体磁珠及联合使用双抗免疫磁珠时肿瘤细胞的检出率；并应用优化的方法对20例食管癌患者外周血中的CTCs进行富集鉴定。结果:联合应用抗CK和EpCAM抗体用于富集外周血中CTCs的方法能够提高肿瘤细胞的检出率，其差异具有统计学意义（P<0.05）；应用优化的方法富集食管癌外周血中的CTCs检出率为75%。结论:联合应用抗CK和EpCAM抗体的免疫磁珠检测体系能够用于检测食管癌外周血中的CTCs，对指导患者的个体化治疗有较高的临床意义。