白花蛇舌草对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡、活性氧水平的影响研究

目的探讨白花蛇舌草注射液( HDI)对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞( HRCECs)增殖、凋亡、氧化应激的影响及机制。方法 2019年 10月至 2020年 6月,体外培养 HRCECs。将 HRCECs分为对照组( 5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞)、高渗对照组( 19.5 mmol/L甘露醇及 5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞)、高糖对照组( 25 mmol/L葡萄糖处理细胞)、白花蛇舌草组( HDI组)(6.25 mL/L、12.5 mL/L、25 mL/L、50 mL/L HDI和 25 mmol/L的葡萄糖处理细胞)。处理细胞 48 h,通过 CCK8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;激光扫描共聚焦显微镜检测活性氧水平。蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原( PCNA)、细胞周期蛋白 A1(CyclinA1)和活化胱天蛋白酶 -3(cleaved caspase-3)蛋白表达。结果与对照组比较,高糖组细胞活性明显升高［(1.116±0.105)比( 0.684±0.072)］(P<0.05)。与高糖组比较, 12.5 mL/L、25 mL/L和 50 mL/L的白花蛇舌草组细胞活性明显降低［( 0.847±0.076)、(0.639±0.058)、(0.421±0.042)比( 1.116±0.105)］(P<0.05)。选择 50 mL/L的白花蛇舌草作为研究对象。与对照组比较,高糖组 G0/G期细胞百分比［( 60.02±5.01)%比( 54.72±4.31)%］、细胞凋亡率［( 17.11±1.01)%比( 3.32±0.47)%］、活性氧水平［( 96.18±5.22)比( 42.14±3.56)］及 PCNA、CyclinA1和 cleaved caspase-3表达均明显升高, G2/M期和 S期细胞百分比明显降低( P<0.05)。与高糖组比较, HDI组 G0/G期细胞百分比［( 32.31±3.42)%比( 60.02±5.01)%］、细胞凋亡率［( 9.72±0.73)%比     

波动性高糖对人脐静脉内皮细胞炎症因子表达的影响

目的研究体外波动性和持续性高糖对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）炎症因子表达的影响。方法分别在正常葡萄糖（5.5 mmol/L,NG）、持续性高糖（25 mmol/L,PHG）、波动性高糖（5.5 mmol/L和25 mmol/L葡萄糖每24 h交替,OHG）和波动性高渗环境（不加入葡萄糖,加入不同量甘露醇控制渗透压与波动性高糖组一致,OC）中连续培养HUVEC 7d。采用ELISA法和实时定量PCR法分别检测HUVEC在不同血糖环境中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和细胞间黏附因子-1（ICAM-1）中蛋白和mRNA的表达。结果与NG组和OC组比较,发现持续性高糖可以显著升高HUVEC的IL-6、TNF-α和ICAM-1蛋白表达（P〈0.05）,而波动性高糖可以进一步放大这种差异（P〈0.05）。在mRNA水平,PHG组较NG组和OC组显著增加IL-6、TNF-α和ICAM-1表达（P〈0.05）,而这一趋势在波动性高糖组最为明显（P〈0.05）。结论持续性高糖可以显著增强HUVEC炎症反应,而波动性高糖进一步放大这一效应。     

二甲双胍对高糖诱导的肾小管上皮细胞TGF-β/ERK/MMP-9通路及上皮间质转化的影响

目的探讨二甲双胍对高糖诱导的肾小管上皮HK-2细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其机制。方法以0、7.5、15.0、30.0、60.0、120.0mmol/L二甲双胍作用48h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测HK-2细胞活力以筛选合适的二甲双胍作用浓度;将体外培养的HK-2细胞分为对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高渗组(24.5 mmol/L甘露醇和5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)、高糖+7.5 mmol/L二甲双胍组(30 mmol/L D-葡萄糖+7.5 mmol/L二甲双胍)和高糖+15 mmol/L二甲双胍组(30 mmol/L D-葡萄糖+15 mmol/L二甲双胍),倒置显微镜观察各组HK-2细胞形态,免疫印迹法(Western blotting)检测各组HK-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、转化生长因子-β(TGF-β)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化(p)-ERK、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测α-SMA、E-cadherin、TGF-β、ERK、MMP-9 mRNA表达水平。结果与对照组相比,30.0、60.0mmol/L二甲双胍作用后HK-2细胞活力明显升高,120.0mmol/L二甲双胍作用后HK-2细胞活力明显降低(P0.05),而7.5、15.0mmol/L二甲双胍作用后HK-2细胞活力差异无统计学意义(P0.05);与对照组比较,高渗组细胞形态无明显改变,且细胞中α-SMA、E-cadherin、TGF-β、MMP-9蛋白和mRNA表达水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表达水平差异均无统计学意义(P0.05),但高糖组细胞失去原有形态变为长梭形,且细胞中α-SMA、TGF-β蛋白和mRNA表达水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表达水平明显升高,而MMP-9、E-cadherin蛋白和mRNA表达水平明显降低(P0.05);与高糖组比较,高糖+7.5mmol/L二甲双胍组、高糖+15.0mmol/L二甲双胍组细胞形态由长梭形逐渐变成圆形或椭圆形,且α-SMA、TGF-β蛋白和mRNA表达水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表达水平明显降低,而MMP-9、E-cadherin蛋白和mRNA表达水平明显升高(P0.05),且高糖+15.0 mmol/L二甲双胍组细胞上述指标变化幅度大于高糖+7.5 mmol/L二甲双胍组。结论二甲双胍可抑制高糖诱导的肾小管上皮HK-2细胞EMT,其作用机制可能与抑制TGF-β/ERK/MMP-9通路活化有关。     

脑出血急性期血糖升高与患者胰岛素敏感性的关系

目的探讨高血压性脑出血急性期血糖升高患者是否存在胰岛素抵抗现象。方法将84例高血压性脑出血患者,以急性期血糖值分为血糖升高组和血糖正常组各42例;治疗1个月后测定其糖耐量试验前及后30、60、120、180min时血糖(BG)、血胰岛素(Ins)水平,计算其胰岛素敏感性指数(ISI)和神经功能缺损评分(NDS)。结果服糖后30、60min时血糖升高组的BG(10.76±2.41、9.51±0.94mmol/L)比血糖正常组(8.25±1.64、7.13±0.28mmol/L)高(P<0.05);血糖升高组的空腹Ins水平(12.37±11.25mmol/L)比血糖正常组(8.76±12.13mmol/L)高(P<0.05),服糖后30、60、120、180min时血糖升高组的Ins水平(96.42±30.58、83.64±24.05、74.63±20.46、35.48±11.32mmol/L)均明显高于血糖正常组相应时段的Ins(57.34±21.34、46.31±17.52、39.37±14.32、20.14±7.28mmol/L)水平(P<0.01);血糖升高组空腹ISI(-1.82±0.74)则低于血糖正常组(-1.34±0.56)(P<0.05),服糖后30、60、120、180min时血糖升高组的ISI(-3.45±1.59、-2.97±1.34、-2.74±1.05、-2.24±0.65)均低于血糖正常组相应时段的ISI(-2.97±1.25、-2.65±1.07、-2.36±0.84、-1.87±0.58)(P<0.05)。治疗30d后血糖升高组的NDS(23.16±10.78)高于血糖正常组(19.43±11.26)(P<0.05)。?     

个体化营养干预联合益气养阴方对妊娠糖尿病病人血糖、血脂、胰岛 β细胞功能指标的影响

目的探讨个体化营养干预联合益气养阴方对妊娠糖尿病( GDM)病人血糖波动、血脂指标、胰岛 β细胞功能的影响。方法选择 2018年 1月至 2019年 12月邢台医学高等专科学校第二附属医院收治的 120例 GDM病人,采用随机数字表法将病人分为两组。对照组( 60例)采用西医常规治疗联合益气养阴方治疗,观察组( 60例)在对照组基础上增加个体化营养干预。观察两组治疗前后血糖波动、血脂指标和胰岛 β细胞功能差异。结果两组治疗后日内平均血糖波动幅度( MAGE)、血糖水平标准差( SDBG)、平均餐后血糖波动幅度( MPPGE)、日间血糖波动幅度( MODD)、血清总胆固醇( TC)、载脂蛋白 B(ApoB)、胰岛素抵抗指标［HOMA-IR(C-P)］均下降(P<0.05)载脂蛋白 A1(ApoA1)ApoA1/ApoB比值、精氨酸刺激 3 min C肽( C-P)、C-P峰值/空腹 C肽( FC-P)、胰岛β细胞功能指数［HOMA-β,(C-P)］升高(P<0.05)。、观察组治疗后 MAGE［( 3.62±0.51)mmol/L比( 4.25±0.69)mmol/L］、 SDBG［( 1.91±0.16)mmol/L比( 2.12±0.21)mmol/L］、 MPPGE、MODD、血清 TC、ApoB、HOMA-IR(C-P)低于对照组(P<0.05)ApoA1［( 1.43±0.65)g/L比( 1.12±0.36)g/L］、 ApoA1/ApoB比值［( 1.47±0.26)比( 0.97±0.20)］、精氨酸刺激 3 min C-P［( 6.97±1.06,)μg/L比( 5.09±0.76)μg/L］、 C-P峰值 /FC-P［( 2.91±0.85)比( 1.91±0.72)］、 HOMA-β(C-P)［( 2.16±0.77)比( 1.92±0.62)］高于对照组( P<0.05)。结论个体化营养干预联合益气养阴方更有助于维持妊娠期间血糖稳定,降低血脂水平,改善胰岛 β细胞储备功能,降低胰岛素抵抗。     

α-硫辛酸对高糖 高同型半胱氨酸诱导的小鼠足细胞凋亡的影响

目的探讨α-硫辛酸对高糖、高同型半胱氨酸(Hcy)作用下小鼠足细胞凋亡及Nephrin mRNA表达的影响。方法将体外培养的足细胞用高糖(25mmol/L)、Hcy(1mmol/L)、α-硫辛酸(0.5mmol/L)干预,分别在干预24、48、72h时收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Nephrin mRNA表达。结果 24h时,高糖组、高Hcy组及混合组未见明显细胞凋亡(P>0.05);48h时,上述3组可见明显的细胞凋亡,且混合组凋亡更加明显(P<0.01);72h时,上述差异更加明显(P<0.01);α-硫辛酸可对抗高糖、高Hcy引起的足细胞凋亡(均P<0.05),且有一定的时间依赖性;高糖、高Hcy环境下,足细胞Nephrin mRNA表达呈下降趋势,且有一定的时效性;α-硫辛酸可对抗上述趋势。结论α-硫辛酸可减弱高糖、高Hcy对足细胞促凋亡作用,还可对抗其下调Nephrin mRNA的表达。     

基于AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路研究香青兰总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护机制

目的:研究香青兰总黄酮(TFDM)对腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)信号通路的影响,探究其保护大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用机制。方法:将50只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、TFDM组[60 mg/(kg·d),以提取物计]、Compound C+TFDM组[灌胃60 mg/(kg·d)TFDM+再灌注前15 min尾静脉注射250μg/kg Compound C(AMPK抑制剂)]、EX-527+TFDM组[灌胃60 mg/(kg·d)TFDM+再灌注前20 min腹腔注射5 mg/kg EX-527(SIRT1抑制剂)],每组10只。每天灌胃给药1次,连续7 d。末次灌胃给药后,假手术组大鼠行假手术,其余4组大鼠均采用结扎冠状动脉左前降支缺血30 min、再灌注2 h构建MIRI模型。再灌注结束后,采用苏木精-伊红染色法观察大鼠心肌组织病理学变化;采用反相高效液相色谱法测定其心肌组织中腺苷三磷酸(ATP)、腺苷二磷酸(ADP)、腺苷一磷酸(AMP)及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^+)的含量;采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法检测大鼠心肌组织中AMPK、SIRT1和PGC-1αmRNA表达水平;采用Western blotting法检测大鼠心肌组织中AMPK蛋白的磷酸化水平和SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌纤维排列紊乱、横向条纹消失,细胞肿胀破裂、坏死,细胞核变形移位;心肌组织中ATP、NAD^+含量和AMPK、SIRT1、PGC-1αmRNA表达水平以及SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),ADP、AMP含量及AMPK蛋白的磷酸化水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,TFDM组大鼠心肌病理学形态明显改善;心肌组织中ATP、NAD^+含量和AMPK、SIRT1、PGC-1αmRNA表达水平以及AMPK蛋白的磷酸化水平和SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01),ADP、AMP含量均显著降低(P<0.01)。与TFDM组比较,Compound C+TFDM组和EX-527+TFDM组大鼠上述指标的改善作用均被逆转(P<0.05或P<0.01)。结论:TFDM可能是通过激活AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路,调节能量代谢,从而发挥其对心肌的保护作用。     

萝卜硫素调节腺苷酸活化蛋白激酶 /沉默信息调节器 1/过氧化物酶体增殖活化受体 γ辅助活化因子 1α信号通路对妊娠高血压大鼠妊娠结局的影响

目的探究萝卜硫素( SFN)通过调节腺苷酸活化蛋白激酶( AMPK)/沉默信息调节器 1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖活化受体 γ辅助活化因子 1α(PGC-1α)信号通路对妊娠期高血压疾病( HDP)大鼠妊娠结局的影响。方法 2021年 3月至 2022年 6月, 70只雌性大鼠受孕后分为对照组、 HDP组、 SFN-L组( SFN 5 mg/kg)、 SFN-M(SFN 15 mg/kg)、 SFN-H(SFN 30 mg/kg)、硫酸镁组(硫酸镁注射液 100 mg/kg)、 Compound C组( SFN 30 mg/kg+AMPK抑制剂 Compound C 0.25 mg/kg),各组 10只。在妊娠第 13天起除对照组,其余各组妊娠大鼠尾静脉注射 7 mg/kg L-NAME,连续注射 4d,建立 HDP大鼠模型,对照组大鼠尾静脉注射0.9%氯化钠溶液。从造模成功后第 1天(妊娠第 17天)起,各给药组注射相应剂量的药物,对照组、 HDP组注射 0.9%氯化钠溶液,连续给药至妊娠第 20天。检测妊娠第 17天和第 20天各组大鼠尾动脉压和 24 h尿蛋白定量水平;试剂盒法检测大鼠血肌(SCr)和血尿素氮(BUN)水平;观察检测大鼠妊娠结局指标; HE染色观察胎盘组织和肾脏组织病理情况;蛋白质印迹法检测胎酐盘组织可溶性血管内皮生长因子受体 -1(sFLT-1)、胎盘生长因子( PLGF)、内皮型一氧化氮合酶( eNOs)、磷酸化 eNOs(peNOs)、磷酸化 AMPK(p-AMPK)、 AMPK、SIRT1、PGC-1ɑ蛋白水平。结果 HDP组大鼠血压［( 152.52±4.79)mmHg比( 101.63±4.15)mmHg］、 24 h尿蛋白定量水平［( 679.38±64.32)mg/L比( 123.17±20.19)mg/L］、胎鼠病死率［( 28.57±2.08)%比( 0.96±0.11)%］、血清 SCr和 BUN水平、胎盘组织 sFLT-1表达水平高于对照组( P<0.05),而胎鼠质量［( 2.32±0.19)g比( 4.75±0.43)g］、产仔数［( 11.70±0.69)个比( 7.10±0.57)个］、胎盘质量［( 0.32±0.06)g比( 0.58±0.12)g］、胎盘组织 PLGF、p-eNOs、p-AMPK、SIRT1和 PGC-1ɑ蛋白表达低于对照组( P<0.05)另外, HDP大鼠胎盘组织绒毛数量减少,胎盘结构缩小,部分绒毛显示纤维蛋白样坏死,肾脏组织内肾小球数目减少,结常; SFN-L组、 SFN-M组、 SFN-H组和硫酸镁组大鼠血压［( 136.91±5.16)mmHg、构异,(129.25±4.54)mmHg、(117.33±4.19)mmHg、(121.72±4.61)mmHg比( 152.52±4.79)mmHg］、 24 h尿蛋白定量水平［( 595.91±53.05)mg/L、(532.23±49.76)mg/L、(461.16±35.15)mg/L、(482.74±39.58)mg/L比( 679.38±64.32)mg/L］、胎鼠病死率、血清 SCr和 BUN水平、胎盘组织 sFLT-1表达水平低于 HDP组( P<0.05),胎鼠质量、产仔数、胎盘质量、胎盘组织 PLGF、p-eNOs、p-AMPK、 SIRT1和 PGC-1ɑ蛋白表达高于 HDP组( P<0.05),胎盘组织和肾脏组织结构异常程度减轻; AMPK抑制剂 Compound C减弱了 SFN对 HDP大鼠血压、肾损伤和妊娠结局的保护作用。结论 SFN通过激活 AMPK/SIRT1/PGC-1ɑ信号通路改善 HDP大鼠妊娠结局。     

基于 NOD样受体热蛋白结构域 3/胱天蛋白酶 -1通路探讨鱼腥草注射液缓解脂多糖诱导的小鼠急性肺炎肺损伤的作用机制

目的探究鱼腥草注射液( HHI)对急性肺炎小鼠的保护作用及对 NOD样受体热蛋白结构域 3(NLRP3)/胱天蛋白酶 -1(caspase-1)通路的调控作用。方法 2019年 7月至 2020年 6月,将购自广东省医学实验动物中心的 90只 BALB/c雄性小鼠分为正常对照组、模型组、 HHI低( 10 mL/kg)及高( 30 mL/kg)剂量组、 NLRP3激动剂( DDC)组( 300 mg/kg)、 HHI+DDC组( 30 mL/ kg+300 mg/kg),每组 15只。除正常对照组外,其余各组均通过雾化吸入脂多糖( LPS)2.5 g/L建立急性肺炎模型。末次给药后检测支气管肺泡灌洗液( BALF)中白细胞介素 -6(IL-6)、肿瘤坏死因子( TNF-α)水平、中性粒细胞数目;取右肺,检测右肺湿重 /干重( W/D);左肺组织病理损伤情况,肺组织凋亡相关斑点样蛋白( ASC)mRNA及蛋白、 NLRP3 mRNA及蛋白、 TNF-α、IL-6、 caspase-1蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组小鼠出现肺泡破坏及炎性细胞浸润等病理损伤现象, W/D、IL-6［( 1 692.06±95.26)μg/L比( 569.91±50.89)μg/L］、 TNF-α［( 1 846.24±99.26)μg/L比( 506.99±55.48)μg/L］水平及中性粒细胞数目［(66.24±2.56)×106个/毫升比( 5.09±1.98)×106个/毫升］、肺组织 NLRP3 mRNA及蛋白( 1.01±0.13比 0.22±0.12)、 ASC mRNA及蛋白( 1.03±0.13比 0.29±0.11)、 caspase-1(1.06±0.14比 0.25±0.12)、 TNF-α、IL-6蛋白表达升高( P<0.05);与模型组相比, HHI低、高剂量组肺泡破坏及炎性细胞浸润等现象缓解, W/D、小鼠 BALF中炎性因子 IL-6［(1 069.13±75.12)μg/L、(889.02±65.13)μg/L比(1 692.06±95.26)μg/L］、 TNF-α［( 1 225.33±84.02)μg/L、(806.63±69.12)μg/L比( 1 846.24±99.26)μg/L］含量及中性粒细胞数目［(45.33±2.22)×106个/毫升、(22.63±2.02)×106个/毫升比( 66.24±2.56)×106个/毫升］、肺组织中 NLRP3 mRNA及蛋白( 0.83±0.11、0.52±0.12比 1.01±0.13)、 ASC mRNA及蛋白( 0.82±0.12、0.54±0.11比 1.03±0.13)、 caspase-1(0.80±0.15、0.59±0.12比 1.06±0.14)、 TNF-α、IL-6蛋白表达降低( P<0.05); DDC组小鼠上述指标与 HHI低、高剂量组相反( P<0.05)。结论 HHI可通过抑制 NLRP3/ caspase-1通路激活,改善肺炎小鼠炎症反应,缓解肺损伤。     

人参皂苷Rb1抑制间歇性高糖诱导的雪旺细胞凋亡

目的探讨人参皂苷Rb1对间歇性高糖培养条件下雪旺细胞凋亡的影响。方法无菌剥取新生Sprague-Dawley乳鼠坐骨神经,体外制备雪旺细胞,分为对照组(培养液葡萄糖浓度为5.6 mmol/L,Con组)、间歇性高糖组(培养液葡萄糖浓度为5.6 mmol/L和50 mmol/L,每8小时交替,IHG组)、干预组(在间歇性高糖基础上加入100μmol/L人参皂苷Rb1,IHG+Rb1组)分别培养48 h。采用Annexin V/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡,ELISA法检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)水平,实时荧光定量PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的mRNA表达,蛋白印迹法检测Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果与对照组相比,间歇性高糖促进了雪旺细胞凋亡(P<0.05),增加了8-OHd G的生成(P<0.01),IHG组细胞凋亡率和8-OHd G水平分别是Con组的7.69倍、3.24倍;间歇性高糖上调了Bax的mRNA和蛋白表达,下调了Bcl-2的mRNA和蛋白表达。与IHG组相比,人参皂苷Rb1抑制了IHG导致的雪旺细胞凋亡和8-OHd G生成,IHG+Rb1组细胞凋亡率和8-OHd G水平较IHG组分别下降了54.1%和32.7%(P<0.05);同时下调了Bax的mRNA和蛋白表达,上调了Bcl-2的mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论间歇性高糖可促进雪旺细胞凋亡,人参皂苷Rb1能够减轻间歇性高糖造成的凋亡,具有一定的神经保护作用。     

三仁汤联合常规疗法对糖尿病周围神经病变的临床疗效及血清胰岛素样生长因子 -1、肿瘤坏死因子 -α水平的影响

目的分析三仁汤联合常规疗法治疗糖尿病周围神经病变( DPN)的临床疗效及对病人血清胰岛素样生长因子 -1(IGF-1)、肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)水平的影响。方法选取 2018年 6月至 2020年 12月广东省中医院收治的 DPN病人 76例,按随机数字表法分成对照组( n=38,予常规疗法)与研究组( n=38,予三仁汤联合常规疗法)。经 4周治疗后,评价两组临床疗效、中医症候积分,对比血清 IGF-1水平、血清 TNF-α水平、空腹血糖、餐后 2h血糖( 2hPG)、糖化血红蛋白( HbA1c)、胰岛素抵抗指数( HOMA-IR)、神经传导速度。结果研究组总有效率 89.47%高于对照组 71.05%(P<0.05);治疗后,两组中医症候积分［( 20.45±4.11)分、(16.22±3.48)分］均低于治疗前［( 24.78±2.59)分、(23.93±2.62)分］(P<0.05)且研究组中医症候积分均低于对照组( P<0.05);治疗后,两组血清 IGF-1水平［(165.69±10.86)μg/L、(182.85±8.49)μg/L］均高于,治疗前［( 153.35±13.42)μg/L、(155.54±14.17)μg/L］(P<0.05),血清 TNF-α水平［( 3.58±0.27)μg/L、(3.14±0.35)μg/L］均低于治疗前［( 3.92±0.38)μg/L、(3.87± 0.44)μg/L］(P<0.05),且研究组血清 IGF-1水平高于对照组( P<0.05),血清 TNF-α水平低于对照组( P<0.05);治疗后,两组空腹血糖［( 7.14±0.23)mmol/L、(6.02±0.15)mmol/L］、 2hPG［(9.34±0.32)mmol/L、(7.63±0.19)mmol/L］、 HbA1c［(7.02±0.23)%、(5.99±0.14)%］、 HOMA-IR［( 6.46±1.87)、(5.53±1.62)］均低于治疗前［( 9.06±0.27)mmol/L、(8.98±0.24)mmol/L、(11.95±0.38)mmol/L、(12.07±0.42)mmol/L、(8.45±0.18)%、(8.51±0.15)%、(8.57±2.68)、(8.73±2.59)］(P<0.05),且研究组空腹血糖、 2hPG、HbA1c、 HOMA-IR均低于对照组( P<0.05);治疗后,研究组腓总神经、胫后神经、正中神经的神经传导速度均高于治疗前( P<0.05)且均高于对照组( P<0.05)。结论三仁汤联合常规治疗 DPN具有显著的临床疗效,能减轻病人中医临床症状,调节血清 IGF-1、TNF-α水平,改善糖代谢与胰岛素抵抗,提高神经传导速度。     

调节性核糖核酸酶 1对高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的探讨调节性核糖核酸酶 1(Reg1)对高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用及机制。方法 2018年 8月至 2020年 2月构建高糖诱导的 RGC-5视网膜神经节细胞损伤模型,实验分为四组: Con组(正常糖 +未转染的 RGC-5细胞)HG组(高糖 +未转染的 RGC-5细胞)、 pcDNA3-Reg1组(高糖 +转染 Reg1过表达质粒的 RGC-5细胞)、 pcDNA3-NC组(高糖 +转染对、照质粒的 RGC-5细胞)。实时荧光定量聚合酶链式反应检测 Reg1、白细胞介素( IL)-1β、IL-6、IL-12、肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)的表达;蛋白质免疫印迹检测 Reg1、B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、活化的胱天蛋白酶 3(cleaved caspase-3)、磷酸化 p65(p-p65)、磷酸化核因子 κB抑制蛋白 α(p-IκBα)的表达;免疫荧光染色检测 Reg1、p-p65的表达; TUNEL染色检测凋亡水平;酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中各炎性因子的含量。结果 Con组中 Reg1的相对荧光强度、 mRNA相对表达量、蛋白质相对表达量分别为 1.00±0.21、1.00±0.15、1.00±0.18,HG组 Reg1的相对荧光强度、 mRNA相对表达量、蛋白质相对表达量分别为 2.49±0.36、3.86±0.42、3.17±0.39,pcDNA3-Reg1组 Reg1的相对荧光强度、 mRNA相对表达量、蛋白质相对表达量分别为6.77±0.72、8.18±0.67、6.30±0.51,pcDNA3-NC组 Reg1的相对荧光强度、 mRNA相对表达量、蛋白质相对表达量分别为 2.75±0.40、3.59±0.38、2.85±0.34,HG组、 pcDNA3-NC组 Reg1相对荧光强度、 mRNA和蛋白质相对表达量高于 Con组,且低于 pcDNA3Reg1组( P<0.05)。 Con组 TUNEL+细胞比例、 Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3分别为( 1.73±0.22)%、1.00±0.28、1.00±0.20、1.00±0.17,HG组 TUNEL+细胞比例、 Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3分别为( 14.79±0.83)%、0.29±0.11、5.25±0.66、4.93±0.52,pcDNA3Reg1组 TUNEL+细胞比例、 Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3分别为( 3.77±0.34)%、0.58±0.43、2.51±0.45、2.58±0.33,pcDNA3-NC组 TUNEL+细胞比例、 Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3分别为( 14.55±0.90)%、0.21±0.14、5.14±0.59、4.77±0.46,Con组、 pcDNA3-Reg1组 TUNEL+细胞比例、 Bax、cleaved caspase-3蛋白质相对表达量低于 HG组、 pcDNA3-NC组,而 Bcl-2蛋白质相对表达量高于 HG组、 pcDNA3-NC组( P<0.05)。 Con组、 pcDNA3-Reg1组细胞 IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α mRNA相对表达量,及上清液蛋白质含量低于 HG组、 pcDNA3-NC组( P<0.05)。 Con组、 pcDNA3-Reg1组 p-p65相对荧光强度,及 p-p65、p-IκBα蛋白质相对表达量低于 HG组、 pcDNA3-NC组( P<0.05)。结论高糖状态下 RGC-5视网膜神经节细胞高表达 Reg1,上调 Reg1表达可以降低细胞凋亡及炎症,可能与抑制 NFκB信号通路活化有关。     

重症颅脑损伤病人血糖波动对炎症指标和继发性肺炎的影响

目的探讨重症颅脑损伤病人血糖波动对体内炎症指标及继发性肺炎的影响及意义。方法选择 2015年 10月至 2017年 12月广西壮族自治区人民医院首次诊断发病 ≤24 h的重症颅脑损伤病人 47例,采用动态血糖监测系统(CGMs)对病人进行 72 h的血糖监测,记录血糖波动指标包括初始血糖值(GluAdm)、血糖平均值(GluMean)、最低血糖值(GluMin)、最高血糖值(GluMax)、血糖标准差(GluSD)、最大血糖波动幅度(LAGE)、平均血糖波动幅度(MAGE)和血糖不稳定指数(GLI);同时检测血清白细胞介素 ?6(IL?6)、 C?反应蛋白(CRP)及降钙素原(PCT)水平,并采用高分辨率胸部 CT明确病人肺炎情况,根据是否存在肺部感染分为感染组和非感染组。采用 Spearman法分析血糖波动指标与病人临床资料的相关性,采用 logistic回归法分析病人出现肺炎的影响因素。结果感染组与非感染组入院时性别、年龄、全身性感染相关性器官功能衰竭评分(SOFA)评分、激素使用例数比较均差异无统计学意义(均 P＞0.05)。非感染组病人 GluMean、GluSD、LAGE、GLI、MAGE水平明显低于感染组［(9.69±0.86)比(10.54±0.86)mmol/L,(1.92±0.77)比(2.52±0.55)mmol/L,(8.10±1.60)比(11.12±1.83)mmol/L,(33.34±9.20)比(54.28±6.25)mmol/L,(3.66±0.75)比(5.16±0.95)mmol/L］血清 RP、IL?6、PCT水平明显高于非感染组［(15.17±0.96)比(17.82±     

芒果苷对胰岛素抵抗HepG2细胞糖脂代谢的影响

目的:分析芒果苷(MGF)对胰岛素抵抗HepG2细胞(IR-HepG2细胞)糖脂代谢的影响,并探讨潜在机制。方法:以人肝癌HepG2细胞为对象,以1 mmol/L棕榈酸+2 mmol/L油酸联合培养建立IR-HepG2细胞模型。以盐酸二甲双胍为阳性对照,分别检测低、中、高浓度MGF(125、250、500μmol/L)作用24 h对IR-HepG2细胞中校正葡萄糖耗氧量和三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)含量的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测细胞中腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路上游关键因子脂联素(APN)、脂联素受体2(AdipoR2)、APPL1、AMPK以及下游胰岛素信号通路关键因子胰岛素受体底物1(IRS-1)、蛋白激酶B(Akt)、葡萄糖转运体4(GLUT4)mRNA的相对表达量;采用Western blot法检测AMPK蛋白的磷酸化水平。结果:与对照组比较,模型组细胞校正葡萄糖消耗量和APN、AdipoR2、APPL1、AMPK、IRS-1、GLUT4 mRNA的相对表达量以及AMPK蛋白磷酸化水平均显著降低,TG、TC含量均显著升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,各药物组校正葡萄糖消耗量和APN(MGF中、高浓度组除外)、AdipoR2、APPL1、AMPK(MGF中、高浓度组除外)、IRS-1(MGF中、高浓度组除外)、Akt(阳性对照组除外)、GLUT4(MGF高浓度组除外)mRNA的相对表达量以及AMPK蛋白磷酸化水平均显著升高,TG、TC含量均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:芒果苷可能通过激活通路上游靶点APN,进而调控AMPK信号通路,从而促进IR-HepG2细胞对葡萄糖的摄取,降低TG、TC含量,发挥改善胰岛素抵抗及糖脂代谢异常状态的作用。     

基于缺氧诱导因子?1α/Bcl2/腺病毒 E1B相互作用蛋白 3通路探讨速效救心丸对冠心病大鼠的保护机制

目的探究速效救心丸对冠心病大鼠的保护作用,初步探究其可能作用机制。方法将 40只 SD大鼠分为健康组、单纯模型组、速效救心丸组、缺氧诱导因子 ?1α(HIF?1α)激活剂奥替普拉( Oltipraz)组、速效救心丸 +奥替普拉组,每组 10只大鼠。对大鼠心电图 ST段、 T波变化进行检测,采用酶法测定一氧化氮及血脂指标总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白( HDL)、低密度脂蛋白( LDL)水平,酶联免疫吸附试验( ELISA)检测大鼠肿瘤坏死因子 α(TNF?α)、单核细胞趋化蛋白 ?1(MCP?1)、细胞间黏附分子?1(ICAM?1)、内皮素 ?1(ET?1)、前列环素 I2(PGI2)水平, HE染色观察心肌组织病理形态学变化情况; DNA断裂的原位末端标记法( TUNEL法)检测心肌组织细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测心肌组织中 HIF?1α、Bcl2/腺病毒 E1B相互作用蛋白 3(BNIP3)、 B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)、 Bcl?2相关 X蛋白( Bax)、半胱氮酸天冬氨酸蛋白酶 ?3(caspase?3)蛋白表达。结果与健康组相比,单纯模型组 ST段( 0.36±0.05)mV、T波( 0.26±0.05)mV升高,三酰甘油( 1.08±0.14)mmol/L、总胆固醇升高, HDL(0.59±0.05)mmol/L降低, TNF?α(38.27±1.36)pg/mL、ET?1(11.63±1.84)ng/L升高,一氧化氮( 28.58±1.53)μmol/L降低,心肌组织细胞凋亡率( 46.72±4.37)%升高, HIF?1α(1.12±0.15)、 caspase?3(0.54±0.05)蛋白表达升高, Bcl?2(0.36±0.05)蛋白表达降低( P＜ 0.05)。速效救心丸组 ST段( 0.23±0.04)mV、T波( 0.15±0.04)mV、三酰甘油( 0.85±0.07)mmol/L、TNF?α(24.69±1.53)pg/mL、ET?1(7.18±1.57)ng/L、细胞凋亡率( 15.66±3.51)%、HIF?1α(0.49±0.06)、 caspase?3(0.42±0.04)蛋白表达低于单纯模型组,一氧化氮(36.43±1.65)μmol/L、Bcl?2(0.67±0.07)高于单纯模型组( P＜0.05)。奥替普拉组 ST段( 0.41±0.05)mV、T波( 0.35±0.03)mV、三酰甘油( 1.27±0.12)mmol/L、TNF?α(43.42±1.59)pg/mL、ET?1(12.76±1.45)ng/L、细胞凋亡率( 62.88±8.35)%、HIF?1α(1.37±0.26)、 caspase?3(0.91±0.09)蛋白表达高于单纯模型组,一氧化氮( 23.52±1.84)μmol/L、Bcl?2(0.25±0.04)低于单纯模型组( P＜0.05)。速效救心丸 +奥替普拉组 ST段( 0.34±0.06)mV、T波( 0.24±0.05)mV、三酰甘油( 1.06±0.13)mmol/L、总胆固醇、 TNF?α(35.23± 1.65)pg/mL、ET?1(11.24±1.73)ng/L、细胞凋亡率( 42.76±5.16)%、HIF?1α(1.06±0.17)、 caspase?3(0.52±0.06)蛋白表达低于奥替普拉组,一氧化氮( 27.24±1.32)μmol/L、Bcl?2(0.38±0.06)高于奥替普拉组( P＜0.05)。结论速效救心丸可改善冠心病大鼠血脂、内皮功能,降低机体炎症反应,其可能是通过抑制 HIF?1α/BNIP3通路、降低心肌细胞凋亡实现的。     

麦芽糖注射液对2型糖尿病糖脂代谢和胰岛素分泌影响的研究

目的探讨麦芽糖注射液对2型糖尿病血糖、脂质代谢及胰岛素分泌的影响,并评价其供能的有效性。方法59例2型糖尿病患者随机分为麦牙糖组和氯化钠组,分别静脉输注10%麦芽糖注射液或0.9%氯化钠注射液各500 ml。观察输注前后血糖(BG)、血C肽、血游离脂肪酸(FFA)、血酮体、尿糖及尿酮变化。结果①麦芽糖组(A组)用药后1、2、3、5h静脉血糖均较用药前有所增加,其增量分别为(0.04±0.82)mmol/L、(0.39±1.19)mmol/L、(0.50±1.37)mmol/L、(0.14±1.24)mmo1/L,氯化钠组(B组)则较用药前有所下降,其血糖下降值各为(0.93±1.05)mmol/L、(1.12±1.05)mmol/L、(1.28±1.05)mmol/L、(1.66±1.20)mmol/L,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);②两组用药后5 h内血浆游离脂肪酸(FFA)及血酮体均有下降,但氯化钠组下降不如麦芽糖果组明显,两组比较差异有统计学意义;③麦芽糖组用药后C肽及尿糖水平有所增加,尿酮治疗前后变化两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论麦芽糖注射液用于2型糖尿病患者,在提供能量时未引起血、尿酮体升高,还能降低血FFA浓度,虽然开始治疗5h内血糖水平有所提高,但其升值幅度不大,故在监测血糖情况下,使用是安全的。     

白杨素对高糖损伤血管内皮的影响

目的探讨急性高糖条件下,白杨素(chrysin,Ch)对血管内皮舒张功能的影响。方法 (1)采用离体血管环实验,设立正常对照组(control)、白杨素处理组(Ch),观察正常糖浓度时,白杨素对大鼠离体主动脉的舒张作用;设立正常糖浓度组(NG,11 mmol·L~(-1) Glu)、高糖实验组(HG,44 mmol·L~(-1) Glu)、甘露醇对照组(M,11 mmol·L~(-1) Glu+33 mmol·L~(-1) Man)和白杨素急性给药组(HG+Ch,44 mmol·L~(-1) Glu+chrysin 1.0μmol·L~(-1) ),观察急性高糖孵育后,白杨素对大鼠离体主动脉舒张功能的影响。(2)采用HUVEC细胞系,设立正常糖浓度组(NG,5.5 mmol·L~(-1) Glu)、高糖实验组(HG,33.3 mmol·L~(-1) Glu)、甘露醇对照组(M,5.5 mmol·L~(-1) Glu+27.8 mmol·L~(-1) Man)以及不同浓度白杨素处理组(Ch 25、50μmol·L~(-1) ),观察白杨素对高糖孵育HUVEC细胞存活率的影响,并检测各组NO释放量。结果 (1)正常糖浓度时,白杨素能浓度依赖性地舒张大鼠主动脉环,其Emax和EC50为(58.94±9.61)%、51.9μmol·L~(-1) (P<0.01);高糖浓度时,HG组ACh诱导的血管舒张反应性明显降低,其Emax与EC50值分别下降至(32.12±3.92)%、78.0μmol·L~(-1) (P<0.01),但硝普钠(SNP)诱导的血管舒张无变化;白杨素急性干预后,可以明显改善高糖对ACh诱导的血管内皮依赖性舒张功能的损伤,其Emax与EC50值分别为(70.7±3.87)%和0.852μmol·L~(-1) (P<0.01)。(2)HUVEC高糖处理后,细胞存活率降低至(82.56±3.97)%,白杨素(25、50μmol·L~(-1) )干预后能浓度依赖地增强HUVEC的细胞存活率,其细胞存活率可分别增至(103.4±4.78)%、(107.6±11.58)%;并且能提高高糖处理后细胞培养液NO的释放量。结论白杨素可以保护急性高糖损伤的血管内皮舒张功能,并增加内皮NO释放。     

糖肾方抑制TGF-β1/Smad3通路促进小鼠肾小管上皮细胞胆固醇流出

目的:利用高糖诱导的小鼠肾小管上皮细胞(mouse tubular epithelial cells,mTECs)观察中药糖肾方颗粒及Smad3抑制剂SIS3对于TGF-β1/Smad3通路及细胞胆固醇流出通路的影响。方法:25 mmol/L高糖诱导mTECs细胞后,分别给予糖肾方及Smad3抑制剂SIS3干预,利用ELISA试剂盒检测细胞中脂质含量,利用Western blot和Real-time PCR检测细胞中TGF-β1/Smad3通路及过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator 1α,PGC-1α)、肝脏X受体(liver X receptor,LXR)、ATP-结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ATP-结合盒转运蛋白G1(ABCG1)的表达。结果:糖肾方可以降低高糖诱导mTECs细胞中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酸酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)含量,上调高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)含量(P<0.05);糖肾方及Smad3抑制剂SIS3可下调高糖诱导mTECs细胞中TGF-β1、Smad3、CollagenⅠ和Fibronectin的表达,上调PGC-1α、LXR、ABCA1、ABCG1的表达(P<0.05)。结论:糖肾方可通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路促进细胞胆固醇流出,减轻肾损害。     

糖耐量受损Wistar大鼠模型的实验研究

目的建立糖耐量受损的动物模型。方法60只Wistar雄性大鼠随机分为对照组(30只)和高脂组(30只)。每周记录体重变化,每2周作一次糖耐量实验,12周成模时测定血脂、胰岛素,用HOMA胰岛素抵抗(HOMA-IR)指数评价胰岛素抵抗程度。结果①12周时高脂组有22只大鼠成模,其2 h血糖均值达到了糖耐量受损的诊断标准,空腹血糖高于对照组[(4.38±0.69)mmol/L vs(3.03±0.19)mmol/L,P<0.05],但未达到空腹血糖受损的诊断标准;②成模组大鼠的体重、腹内脂肪量与体重的比值明显高于对照组[(556±25)g vs(373±11)g,(6.72±0.41)%vs(2.86±0.10)%,P均<0.01];胰岛素和HOMA-IR指数明显高于对照组[(32.2±4.2)mU/L vs(11.4±0.9)mU/L,(1.82±0.29)mmol.mU/L2 vs(0.42±0.03)mmol.mU/L2,P均<0.01];血脂谱:总胆固醇高于对照组[(1.75±0.53)mmol/L vs(0.87±0.01)mmol/L,P<0.05],甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇明显高于对照组[(1.70±0.41)mmol/Lvs(0.62±0.05)mmol/L,(0.93±0.23)mmol/L vs(0.20±0.29)mmol/L,P均<0.01],高密度脂蛋白胆固醇明显低于对照组[(0.87±0.04)mmol/L vs(1.13±0.14)mmol/L,P<0.01]。结论通过12周的高脂饲养成功建立了伴有胰岛素抵抗的Wistar大鼠糖耐量受损动物模型,其成模率为73.3%。     

雷诺嗪对高脂高糖诱导的胰岛β细胞NIT-1功能损伤的保护作用

目的 观察雷诺嗪对高糖高脂诱导的胰岛β细胞NIT-1三酰甘油(TG)含量及脂肪酸转位酶(FAT/CD36)表达的增加和胰岛素分泌功能损伤的保护作用. 方法 用放免法检测高糖高脂及5 μmol.L^-1雷诺嗪共同作用后细胞基础胰岛素分泌(BIS)和葡萄糖刺激后胰岛素分泌(GSIS)水平的变化,酶法检测胞内TG含量,Western blot检测细胞FAT/CD36蛋白的表达. 结果正常组、高糖高脂组和雷诺嗪组的胞内TG含量分别为(2.31±0.05),(5.17±0.03)和(3.63±0.01) mmol.L^-1;BIS分别为(0.67±0.03),(0.32±0.07),(0.51±0.03)ng.mL^-1,GSIS分别为(1.68±0.17),(1.35±0.08),(1.47±0.11)ng.mL-1;FAT/CD36的相对表达量比值A1分别为(0.53±0.08),(1.78±0.05)和(1.07±0.06). 与正常组比较,高糖高脂组GSIS降低,细胞内TG含量增多. FAT/CD36蛋白表达显著增加(P<0.05). 而雷诺嗪与高糖高脂的共同作用24 h后可以显著升高GSIS,同时降低胞内TG含量,减少FAT/CD36蛋白. 结论 雷诺嗪对高糖高脂导致的胰岛细胞NIT-1分泌功能损伤有保护作用,同时可以减少胞内脂质沉积,其分子机制可能是通过脂肪酸转位酶FAT/CD36蛋白表达的改变.