NIV毒素和硒对软骨细胞CD_（44）代谢的影响

目的进一步探讨大骨节病（KBD）的发病机制。方法取4月龄引产胎儿软骨细胞原代分离、培养并随机分为四组。对照组不处理,加硒组加入硒浓度为0.1 mg/L,雪腐镰刀菌烯醇毒素（NIV）组加入NIV毒素使终质量浓度为0.1 mg/L,联合组加硒和NIV毒素,浓度同上。RT-PCR法检测各组CD44 mRNA在软骨细胞中的表达;流式细胞仪检测各组软骨细胞表面CD44蛋白的表达;酶联免疫吸附法检测细胞培养液中可溶性CD44（sCD44）水平。结果 NIV组、联合组软骨细胞CD44 mRNA及蛋白表达水平均明显高于对照组和加硒组（P均〈0.05）。与NIV组比较,联合组CD44表达有所降低,但不明显。NIV组细胞培养液中溶解的sCD44水平最高,其次为联合组,对照组水平最低。结论 NIV毒素和硒能影响软骨细胞CD44的代谢,这可能是造成软骨细胞损伤的机制。     

T-2毒素和硒对人软骨蛋白聚糖酶的影响

目的 研究T-2毒素和硒对人软骨蛋白聚糖代谢的影响.方法 体外培养胎儿软骨细胞,根据施加的实验措施将其分为8组,对照组(T-2毒素:0 mg/L,硒:0 mg/L)、1、10、20μg/L T-2毒素组、加硒(0.1mg/L)组、1、10、20 μg/L T-2毒素加硒(0.1 mg/L)组,每组设3个平行样.在T-2毒素和(或)硒作用5d后,采用免疫蛋白印迹法检测软骨细胞蛋白聚糖的蛋白表达水平,用RT-PCR方法检测软骨细胞蛋白聚糖酶-1和蛋白聚糖酶-2的mRNA表达水平.结果 硒、T-2毒素对蛋白聚糖的蛋白表达量、蛋白聚糖酶-1 mRNA表达水平、蛋白聚糖酶-2的mRNA表达水平有影响(F=0.294、27.71,107.45、362.25,34.68、22.26,P均＜0.05),硒与T-2毒素存在交互作用(F=79.99、230.76、388.33,P均＜0.05),表现为拮抗作用.在硒水平为0 mg/L时,1、10、20 μg/L的T-2毒素组蛋白聚糖的蛋白表达(0.278±0.015、0.235±0.029、0.195±0.028)均低于0 mg/L的T-2毒素组(0.472±0.0358,P均＜0.05);在硒水平为0.1 mg/L时,1、10、20 μg/L的T-2毒素组的蛋白聚糖的蛋白表达(0.399±0.028、0.299±0.020、0.263±0.019)均高于0 mg/L的T-2毒素组(0.197±0.018,P均＜0.05).在T-2毒素分别为1、10、20μg/L时,0.1 mg/L硒组的蛋白聚糖的蛋白表达均高于0 mg/L硒组(P均＜ 0.05).在硒水平为0 mg/L时,1、10、20μg/L的T-2毒素组蛋白聚糖酶-1 mRNA表达(0.535±0.033、1.071±0.043、1.454±0.058)均高于0 mg/L的T-2毒素组(0.481±0.023,P均＜0.05);在硒水平为0.1 mg/L时,1、10、20μg/L的T-2毒素组的蛋白聚糖酶-1 mRNA表达(1.057±0.048、0.555±0.036、0.902±0.045)均高于0 mg/L的T-2毒素组(0.346±0.020,P均＜0.05).在硒水平为0 mg/L时,1、10、20μg/L的T-2毒素组蛋白聚糖酶-2 mRNA表达(0.596±0.038、0.656±0.033、0.949±0.049)均高于0 mg/L的T-2毒素组(0.387±0.020,P均＜0.05);在硒水平为0.1 mg/L时,1、10、20μg/L的T-2毒素组的蛋白聚糖酶-2 mRNA表达(0.600±0.040、0.453±0.031、0.164±0.011)均低于0 mg/L的T-2毒素组(1.021±0.046,P均＜0.05);在T-2毒素分别为10、20μg/L时,0.1 mg/L硒组的蛋白聚糖酶-1和蛋白聚糖酶-2 mRNA表达均低于0 mg/L硒组(P均＜ 0.05).结论 T-2毒素通过上调蛋白聚糖的主要代谢酶蛋白聚糖酶-1和蛋白聚糖酶-2达到降解蛋白聚糖的作用,微量元素硒对T-2毒索引起的软骨细胞蛋白聚糖降解有一定保护作用.     

T-2毒素致低硒低蛋白大鼠心肌损伤实验观察

目的 探讨低硒低蛋白条件下T-2毒素对大鼠心肌的损伤作用以及补硒对该损伤的保护作用。方法 应用人工合成的低硒低蛋白饲料喂养Wistar大鼠，达到低硒状态后(6周)给予T-2毒素，按0．2mg／kg体重隔日灌胃24周，取大鼠心肌组织进行常规HE染色和电镜观察．并利用免疫组化技术检测心肌中的T-2毒素的含量。利用末端标记法检测心肌细胞凋亡发生情况。结果 T-2毒素灌胃组大鼠心肌T-2毒素表达明显，但灌胃各组之间差异不明显；低硒低蛋白组心肌损伤明显重于常硒常蛋白组．补硒保护作用明显。结论 T-2毒素能够在心肌组织中残留。低硒低蛋白能够加重T-2毒素对心肌的损伤作用．补硒能够起到一定的保护作用。     

低硒与T-2毒素致大鼠的大骨节病动物模型实验研究

目的建立低硒饲料与T-2毒素染毒致SD大鼠的大骨节病动物模型。方法断乳SD大鼠随机分为常规饲料组和低硒饲料组,饲养1个月,全血硒和血清GSH-Px测定,确定大鼠处于低硒状态后,再将大鼠随机分为6组,T-2毒素灌胃饲养1个月后处死,进行常规HE染色,光镜下观察大鼠膝关节软骨病理改变。结果在低硒饲料加低T-2毒素组和低硒饲料加高T-2毒素组,部分病例可见在骨质交界处的软骨组织深层有片状坏死,软骨细胞死亡变为红染的＂细胞影子＂,或红染的无结构区域;以及软骨的营养不良性变化,如＂原纤维显现＂、波纹状钙化线和横骨梁形成等。结论本结果为低硒条件下T-2毒素在大骨节病病因中的作用提供了实验依据。     

雪腐镰刀菌烯醇和硒对培养软骨组织CD44表达的影响

目的 研究大骨节病(KBD)有关病因因素对靶组织细胞的损伤和保护作用;探索引起软骨细胞变性坏死的机制。方法 采用细胞培养法于体外再建软骨组织模型,并加入KBD可疑致病因子雪腐镰刀菌烯醇(NIV)和保护因子硒,检测软骨细胞膜上透明质酸受体CD44和细胞培养液中可溶性CD44(SoCD44)。结果 软骨细胞膜上CD44的表达随着,NIV浓度的增加而减少,加硒后有增加趋势;细胞培养液中SoCD44浓度随NIV浓度升高逐渐降低,但高浓度组出现了增高,加硒后趋势不变;除对照组与加硒对照组外,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NIV能干扰软骨细胞表面粘附分子CD44表达,进而引起软骨细胞外基质代谢紊乱;补硒能够拮抗NIV对软骨细胞的损伤,但作用有限。     

T-2毒素致大鼠心肌损伤的实验研究

目的 对低硒条件下,T-2毒素损伤大鼠心肌的机制进行实验研究,探讨克山病的发病原因。方法 采用低硒饲料喂养大鼠,用T-2毒素亚急性损伤心肌的动物模型,应用原位末端标记法和免疫组化技术检测大鼠心肌细胞凋亡和检测心肌中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。结果 低硒加T-2毒素组大鼠心肌损伤较重,凋亡细胞检出较多,常硒饲料加T-2毒素与低硒饲料加T-2毒素组均可见心肌坏死;这2个组心肌组织GSH-Px活性降低,心肌中可检出凋亡细胞;而后者损伤严重。结论 T-2毒素可使大鼠心肌损伤,在低硒条件下,这种损伤加重。低硒条件下,T-2毒素损伤大鼠心肌的机制与脂质过氧化和细胞凋亡有关。     

低剂量T-2毒素对大鼠关节骺板软骨损伤的组织病理和超微结构观察

目的观察低剂量T-2毒素对机体的损伤作用，从而探讨粮食中T-2毒素的最大允许量，为将来制订粮食中T-2毒素含量卫生标准奠定理论基础。方法利用大鼠进行短期毒性实验和亚慢性毒性实验，通过透明软骨的组织病理改变来观察低剂量T-2毒素对软骨的损伤作用。结果T-2毒素组大鼠胫骨近端骺板软骨增殖层细胞柱排列紊乱．软骨细胞变形、数量明显增多，细胞的堆积造成骺板软骨向干骺端嵌入，亚慢性毒性试验高剂量T-2毒素组．在增殖层和过渡层之间还出现了大面积的软骨细胞坏死。超微结构可见，T-2毒素组软骨细胞固缩．细胞器空泡变性．数量减少。结论低剂量T-2毒素可致大鼠关节骺板软骨出现“骨软骨病”改变，而且T-2毒素与大鼠关节骺板软骨损伤之间存在剂量和时间效应。     

T-2毒素对软骨细胞P53、Bcl—xL和Caspase-3表达的影响

目的 观察T-2毒素对软骨细胞P53、Bcl-xL和caspase-3表达的影响.方法 采用胎儿软骨细胞体外培养,培养基中加入不同浓度的T-2毒素(1～20μ/L)连续培养5 d.采用Western blot检测软骨细胞P53、Bcl-xL和Caspase-3蛋白表达水平;用RT-PCR法检测软骨细胞P53、Bcl-xL和Caspase-3 mRNA的表达.结果 与对照组比较,不同浓度(1～20μL)的T-2毒素均能引起Caspase-3蛋白表达水平升高而Bcl-xL蛋白表达水平下降(P＜0.05);当T-2毒素浓度达到10～20μg/L时,P53蛋白和Caspase-3 mRNA表达水平明显升高(P＜0.05)而Bcl-xLmRNA的表达水平无显著性下调(P＞0.05);T-2毒素浓度达到20μ/L可以引起P53 mRNA表达水平明显升高(P＜0.05).结论 T-2毒素诱导软骨细胞发生的凋亡可能与T-2毒素上调软骨细胞P53、caspase-3表达,同时下调Bcl-xL表达有关.     

T-2毒素对体外培养大鼠软骨细胞中基质金属蛋白酶13表达的影响

目的观察T-2毒素对体外培养Wistar大鼠软骨细胞中基质金属蛋白酶13（MMP13）表达的影响。方法培养新生Wistar大鼠关节软骨细胞，按不同质量浓度T-2毒素（0．4、0．8、1．6、3．2μg／L）将实验组分为4组，同时设立对照组（不加T-2毒素）。运用免疫细胞化学方法和免疫印迹方法观察软骨细胞中MMP13的表达水平。结果无论是免疫细胞化学法还是免疫印迹法，各实验组的MMP13表达水平均高于对照组（P〈0．01），且随着T-2毒素剂量的逐渐增加，MMP13的表达量也相应增加，各组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论T-2毒素可增加体外培养软骨细胞中MMP13的表达水平，且呈现剂量依赖关系。这可能是T-2毒素致关节软骨损伤的重要机制之-。     

T-2毒素致胎儿软骨细胞凋亡的观察

目的 探讨T-2毒素与软骨细胞凋亡的关系。方法 水囊引产胎儿的软骨细胞体外单层培养。T-2毒素浓度分为0,5,10,20和40ug/L5组,第1代软骨细胞接种后培养4d,加入没浓度的T-2毒素,作用16h。应用TUNEL法和流式细胞技术定性和定量检测软骨细胞凋亡。同时观察T-2毒素对软骨细胞增殖的影响。结果 各组细胞在加入T-2毒素后,胞体明显皱缩,T-2毒素浓度越大,皱缩越严重。流式细胞仪检测与TdT中介脱氧尿苷三磷酸末端标记（TUNEL）法检测均发现,当T-2毒素在0～12ug/L之间时,T-2毒素浓度越大,凋亡细胞越多。结论 T-2毒素地软骨细胞的增殖有明显的抑制作用,并与T-2毒素浓度呈剂量--效应关系。T-2毒素可以引起体外培养的软骨细胞凋亡,且与T-2毒素浓度有一定关系。     

Increased levels of IL-6, IL-1β, and TNF-α in Kashin–Beck disease and rats induced by T-2 toxin and selenium deficiency

The objective of this study is to investigate the possible role of inflammatory mediators such as IL-6, IL-1β, and TNF-α in Kashin–Beck disease (KBD) children and rats fed with T-2 toxin under a selenium-deficient nutrition status in order to determine possible mechanism underlying KBD. Sprague–Dawley rats were administered a selenium-deficient diet for 4 weeks prior to their exposure to T-2 toxin for 4 weeks. The morphology of joint cartilages of KBD children and rats was examined by light microscopy, and the expression of proteoglycans was determined by histochemical staining. The serum levels of IL-6, IL-1β, and TNF-α were determined by enzyme-linked immunosorbent assay. IL-6, IL-1β and TNF-α were localized by immunohistochemistry, and their mRNA levels were detected by real-time RT-PCR. The serum levels of IL-6 were significantly elevated in rats fed with selenium-deficient, T-2 toxin, and T-2 toxin plus selenium-deficient diets compared to those in the normal diet, while the serum levels of IL-1β and TNF-α were significantly increased only in the T-2 toxin plus selenium-deficient diet group. IL-6, IL-1β and TNF-α protein and mRNA levels in cartilage were significantly higher in rats with diets of T-2 toxin and T-2 toxin plus selenium deficiency than in rats fed normal or selenium-deficient diet. While staining for the cytokines in cartilages of KBD children was significantly higher than that in controls. T-2 toxin under a selenium-deficient nutritional status induces increased levels of IL-6, IL-1β, and TNF-α in serum and cartilages, which may account for the pathological mechanism underlying the cartilage damage in KBD.     

T—2毒素致小型猪关节软骨的毒性实验研究

本研究表明Ｔ－２毒素对软骨组织具有较强的毒怀作用，能致小型猪关节软骨发生类似人类大骨节病样的深层坏死，并此起基质中蛋白聚糖代谢改变，硒能在一定程度上拮抗Ｔ－２毒素的作用。Ｔ－２毒素致小型猪关节软骨实验模型是与大骨节极类似的动物模型。Ｔ－２毒素与大骨节病的病因关节需作地一步的临充和病和实验室的验证。     

Histopathology of chondronecrosis development in knee articular cartilage in a rat model of Kashin–Beck disease using T-2 toxin and selenium deficiency conditions

The objective of this study is to observe pathogenic lesions of joint cartilages in rats fed with T-2 toxin under a selenium deficiency nutrition status in order to determine possible etiological factors causing Kashin–Beck disease (KBD). Sprague–Dawley rats were fed selenium-deficient or control diets for 4 weeks prior to their being exposed to T-2 toxin. Six dietary groups were formed and studied 4 weeks later, i.e., controls, selenium-deficient, low T-2 toxin, high T-2 toxin, selenium-deficient diet plus low T-2 toxin, and selenium-deficient diet plus high T-2 toxin. Selenium deficiencies were confirmed by the determination of glutathione peroxidase activity and selenium levels in serum. The morphology and pathology (chondronecrosis) of knee joint cartilage of experimental rats were observed using light microscopy and the expression of proteoglycans was determined by histochemical staining. Chondronecrosis in deep zone of articular cartilage of knee joints was seen in both the low and high T-2 toxin plus selenium-deficient diet groups, these chondronecrotic lesions being very similar to chondronecrosis observed in human KBD. However, the chondronecrosis observed in the rat epiphyseal growth plates of animals treated with T-2 toxin alone or T-2 toxin plus selenium-deficient diets were not similar to that found in human KBD. Our results indicate that the rat can be used as a suitable animal model for studying etiological factors contributing to the pathogenesis (chondronecrosis) observed in human KBD. However, those changes seen in epiphyseal growth plate differ from those seen in human KBD probably because of the absence of growth plate closure in the rat.     

大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2表达分布的特点

目的　探讨大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子 Bcl- 2表达分布的特点。方法　采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记法 (TUNEL氏法 )检测凋亡阳性细胞 ,利用单克隆抗体免疫组化检测 Bcl- 2在关节软骨中的表达。结果　 1TU NEL法染色的大骨节病儿童关节软骨凋亡阳性细胞数较正常关节软骨增多 ,且主要分布在中层。 2大骨节病儿童关节软骨 Bcl- 2的表达显著高于正常关节软骨中的表达 ,以表层最多 ,其次为中层 ;成人晚期大骨节病患者剥蚀的关节软骨表层 Bcl- 2的表达聚集在软骨细胞团中。结论　大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子 Bcl- 2表达较正常人显著增多。     

T—2毒素,MON和硒对中国小型猪罹患骨软骨病的影响

中国小型猪在低硒（３５ｎｇ／ｋｇ）饲料喂养条件下投给Ｔ－２毒素（１．５ｍｇ／ｋｇ饲料）成串珠镰刀菌素（ＭＯＮ，１ｍｇ／ｋｇ体重）１０５天，观察了动物前、后肢软骨的病理变化，首次证实所用的纯系农大Ｉ号小型猪可以发生与家猪相同的骨软骨病（ＯＣ），出现三种类型ＯＣ损害。其中第三型损害（关节软骨深层带状、片状坏死）与Ｔ－２毒素和ＭＯＮ的投给关系明显，与单纯的低硒饲养无关；给毒的同时补给亚硒酸钠（使饲料含硒     

硒对体外培养大骨节病软骨细胞生长及凋亡的影响

目的 观察硒对体外培养大骨节病(KBD)患者和正常人关节软骨细胞增殖和凋亡的影响,探索补硒防治KBD的作用,并为硒对正常软骨细胞生长的影响提供依据.方法 依据<大骨节病临床诊断标准>(GB 16003-1995),选择Ⅱ度和Ⅲ度KBD患者5例和非病区正常人意外事故者5例的关节软骨进行体外分离、培养.KBD组和对照组分别给予不同剂量的硒(0、0.0125、0.0250、0.0500、0.1000、0.2500、0.5000、1.0000 mg/L)进行干预,采用四氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪和免疫组化法观察细胞生长和凋亡情况.结果 对照组第6天时各剂量组的细胞增殖率(0.086±0.025、0.077±0.012、0.073±0.027、0.071±0.017、0.058±0.028、0.052±0.028和0.046±0.037)比0 mg/L组(0.138±0.026)明显降低(P均＜0.05);0.1000～1.0000 mg/L剂量组的平均细胞增殖率为负值(-0.001±0.001、-0.003±0.000、-0.003±0.001和-0.004±0.001),显著低于0 mg/L组(0.025±0.003,P均＜0.05);KBD组,与0 mg/L组(0.115±0.011)比较,0.2500 mg/L剂量组促进细胞增殖(0.128±0.037,P＜0.05),1.0000 mg/L剂量组细胞生长受到抑制(0.071±0.019,P＜0.05).对照组0.0500～1.0000mg/L剂量组的细胞凋亡率[(18.88±0.02)%、(17.58±0.01)%、(17.09±0.04)%、(56.00±0.02)%、(57.85±0.03)%]比0 mg/L组[(13.51±0.01)%]增高(P均＜0.05);KBD组,与0 mg/L组[(25.84±0.02)%]比较,0.0250～0.2500 mg/L剂量组的细胞凋亡率[(13.69±0.02)%、(15.96±0.03)%、(16.68±0.03)%、(16.67±0.02)%]降低,0.5000、1.0000 mg/L剂量组的细胞凋亡率[(59.58±0.03)%、(73.48±0.04)%]明显增高(P均＜0.05).KBD组0.0500～0.2500 mg/L剂量组的Fas表达[(41.2±1.5)%、(40.3±2.0)%、(50.2±2.5)%]低于同剂量硒干预的对照组[(52.4±1.0)%、(67.2±4.0)%、(75.1±5.0)%,P均＜0.05],0.0500、0.1000 mg/L剂量组的Caspase-3表达[(40.8±1.1)%、(45.1±2.1)%]低于同剂量硒干预的对照组[(68.0±3.0)%、(70.6±3.5)%,P均＜0.05].结论 适宜的补硒剂量(0.1000～0.2500 mg/L)具有促进KBD软骨细胞生长的作用,降低细胞凋亡率,但补硒剂量＞0.5000 mg/L时具有损伤作用;促进KBD软骨细胞生长的硒剂量并非也能促进正常人活体软骨细胞的生长.