补肾调冲方含药血清对高雄激素培养大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌的影响

目的 运用血清药理学方法观察补肾调冲方对高雄激素培养的大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌功能的影响。方法 根据血清药理学方法,用6周龄的未成年SD大鼠制备促卵泡生成素（FSH）及大、中、小剂量补肾调冲方含药血清,分别加入过量丙酸睾丸酮处理的颗粒细胞培养体系中。培养48h后,测定^3H-TdR掺入DNA的量,并用流式细胞仪检测细胞周期分布及增殖指数（PI）,放免法测定颗粒细胞培养液中雌二醇（E2）、孕酮（P）水平及细胞内环磷酸腺苷（cAMP）含量。结果 高雄激素明显抑制颗粒细胞的增殖与分泌功能,并明显降低了细胞内cAMP的含量;而补肾调7中方含药血清可改善高雄激素对颗粒细胞功能的抑制状态,促进细胞增殖及E2、P的分泌,其作用呈剂量依赖性。结论 补肾调冲方含药血清可有效拮抗高雄激素对颗粒细胞功能的抑制作用,推测补肾调冲方通过促卵泡发育、提高雌、孕激素水平,改善雌／雄激素比值来调节卵巢功能。     

补肾调冲方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖、激素分泌和mRNA表达的影响

目的 运用血清药理学方法观察补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖、激素分泌功能以及抑制素B (INHB)、胰岛素样生长因子-1 (1GF-1) mRNA表达的影响.方法向培养的SD大鼠卵巢颗粒细胞中分别加入10％空白血清(对照组)、人转基因重组促卵泡激素(hFSH)含药血清(阳性对照组)、补肾调冲方含药血清(补肾调冲方组),培养48 h,以闪烁计数器测定3H-TdR掺入DNA的量,流式细胞仪测定细胞周期分布,放射免疫法测定培养液中雌二醇(E2)和孕激素(P)水平,并采用RT-PCR法测定1NHB、IGF-1 mRNA的表达量.结果补肾调冲方含药血清可剂量相关地促进3H-TdR掺入颗粒细胞DNA的量.与对照组相比,补肾调冲方各含药血清组G0/G1期细胞均明显减少,而S期细胞则明显增多;E2、P的量明显升高;颗粒细胞INHB、IGF-1 mRNA表达量均明显增多,且呈剂量相关性.结论补肾调冲方含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞的增殖、增强甾体激素的分泌功能,该作用可能通过增强INHB、IGF-1基因的表达,从内分泌和自分泌两条途径调节卵巢功能而实现的.     

补肾调冲方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌及其FSHR mRNA表达的影响

目的：运用血清药理学方法观察补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌功能及其FSHR mRNA表达的影响.方法：在大鼠卵巢颗粒细胞培养体系中加入空白或含药血清,培养48小时后,用放免法测定各组颗粒细胞培养液中E2、P含量,流式细胞仪测定各组颗粒细胞的细胞周期分布及增殖指数（PI）,用Real-time RT-PCR方法实时定量测定颗粒细胞FSHR mRNA的表达量.结果：补肾调冲方血清组E2、P含量较空白血清组均明显升高,G0/G1期细胞均明显减少,而S期细胞及PI值则明显增高;颗粒细胞FSHR mRNA表达量明显增多,且随剂量增加而作用增强.结论：补肾调冲方含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞的增殖与甾体激素分泌功能以及FSHR mRNA的表达,从而增强含药血清中所含促性腺激素对颗粒细胞的作用及颗粒细胞对促性腺激素的反应性.这也是补肾调冲方调节卵巢功能的作用机理之一.     

补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌及其IGF-1 mRNA表达的影响

目的:观察补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌功能及其IGF-1 mRNA表达的影响。方法:制备原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞,预培养24h后,分别加入FSH(50ng/mL)和不同浓度的补肾调冲方(100、10、1、0.1μg/mL),继续培养48h后,放免法测定颗粒细胞培养液中E2、P水平及细胞内cAMP含量,用Real-tim e RT-PCR方法实时定量测定颗粒细胞IGF-1 mRNA的表达量。结果:①补肾调冲方可明显增加3H-TdR掺入颗粒细胞DNA中的数量,并促进颗粒细胞分泌E2、P,增加颗粒细胞中cAMP的含量;②补肾调冲方可促进基础状态下颗粒细胞IGF-1 mRNA的表达,在一定范围内呈剂量依赖性。结论:补肾调冲方在无FSH作用的条件下,可直接促进颗粒细胞内IGF-1 mRNA的表达,使细胞内cAMP的含量增加,从而调节颗粒细胞增殖与分泌功能。     

补肾调周法对PCO大鼠高雄激素血症影响的实验研究

目的:探讨自拟补肾调周系列方药(补肾Ⅰ号方、补肾Ⅱ号方)单独应用、补肾调周(补肾Ⅰ号方与补肾Ⅱ号方)循环应用对多囊卵巢(PCO)大鼠高雄激素血症的影响。方法:将50只大鼠随机分为5组,空白对照组、模型对照组、补肾Ⅰ号方组、补肾Ⅱ号方组、补肾调周组,每组10只。除空白对照组外其余各组采用孕激素加人绒毛膜促性腺激素进行造模。采用放射免疫法对补肾调周系列方药治疗后的PCO大鼠进行血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)的测定,并对卵巢形态学作光镜观察。结果:在降低血清T、LH水平与LH/FSH比值,升高血清FSH水平上,补肾调周组优于补肾Ⅰ号方组、补肾Ⅱ号方组(P0.05)。补肾调周组与补肾Ⅰ号方组、补肾Ⅱ号方组及模型对照组比较,其颗粒细胞层数明显增多,黄体组织数量显著增加。结论:应用补肾调周法可对PCO大鼠雄激素进行良性调节,此可能是其临床治疗多囊卵巢综合征高雄激素血症和高LH血症机制之一。     

补肾调冲方对去卵巢大鼠性激素水平及下丘脑雌激素受体α、雌激素受体β mRNA表达的影响

[目的]探讨补肾调冲方对去卵巢大鼠血清性激素水平及下丘脑雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)mRNA表达的影响。[方法]以假手术组为对照,将去卵巢大鼠随机分为去卵巢空白组,补肾调冲方高、中、低剂量组,已烯雌酚组。采用放射免疫分析法测定血清雌二醇(E2)、促卵泡生成激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)水平,采用逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)检测下丘脑ERα、ERβmRNA表达。[结果]去卵巢大鼠血清FSH、LH水平升高,E2及下丘脑ERα、ERβmRNA水平降低,补肾调冲方大鼠血清E2有升高趋势,FSH有降低趋势,补肾调冲方能降低去卵巢大鼠血清LH水平,升高下丘脑ERα、βmRNA的表达。[结论]补肾调冲方在改善去卵巢大鼠性激素水平同时,可能通过影响ERα、ERβmRNA的表达,提高ER的生物效应,从而降低更年期综合征的发生。     

补肾调肝方对少精症大鼠的精子成活率及激素影响的研究

目的:探讨补肾调肝方中药治疗少精症的作用机理。方法:大鼠少精症用棉子油造模,将大鼠随机分成给药造模组、给药正常组、单纯造模组、正常组,每组20只,连续给补肾调肝方21天后,处死大鼠,测定大鼠附睾精子成活率及血清LH(黄体生成素)和FSH(促卵泡激素)含量。结果:给药造模组、给药正常组、正常组与单纯造模组,在精子成活率、血清LH、FSH等方面比较,差异有显著性意义(P<0.05),说明补肾调肝方能够有效提高少精症大鼠的精子活动率,而对正常大鼠的精子数无明显的影响,同时能够稳定大鼠少精症FSH和LH的含量,达到正常大鼠的激素水平。结论:补肾调肝方对于机体可能有直接生精的作用,有效防止机体性激素水平的病理升高,维持机体性激素水平的平衡。     

中药补肾调冲方对卵巢储备功能低下大鼠的影响

目的:观察中药补肾调冲方对环磷酰胺所致卵巢储备功能低下(DOR)大鼠性激素水平和免疫因子TNF-α、IFN-γ含量的影响,探讨补肾调冲方对DOR的预防、改善和调节作用。方法:将SD雌性大鼠40只,随机分为对照组、模型组、补肾调冲方预防组、补肾调冲方治疗组各10只。运用ELISA法检测大鼠血清中雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)与黄体生成素(LH)比值、抗苗勒激素(AMH)水平。采用Real Time PCR法检测大鼠卵巢组织相关细胞因子TNF-α、IFN-γmRNA转录水平的变化情况。结果:补肾调冲方可升高DOR大鼠的E2、AMH水平,降低FSH/LH比值和TNF-α、IFN-γmRNA表达,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:中药补肾调冲方对卵巢损伤具有一定的预防保护作用,可以预防DOR的发生,其作用机制可能与补肾调冲方中某些中药能够调节卵巢性激素水平,抑制TNF-α、IFN-γ分泌,降低卵泡闭锁的速度,抑制卵泡过度凋亡,进而改善卵巢功能。     

补肾调经汤对多囊卵巢综合症大鼠模型性激素水平的影响

目的:观察补肾调经汤对多囊卵巢综合征大鼠模型血清T、LH、FSH、E2等激素水平的影响,探讨补肾调经汤改善多囊卵巢综合征大鼠模型高雄激素血症的作用机制。方法:采用Poresky法进行造模,将50只雌性大鼠随机分为正常对照组、模型组、中药组、西药组及联合用药组,观察治疗后大鼠血清T、LH、FSH、E2激素含量水平的变化。结果:补肾调经汤能显著降低PCOS大鼠模型血清T、LH含量,改善LH/FSH(P<0.05)。结论:补肾调经汤可调节LH/FSH,控制LH异常增高,改善多囊卵巢综合征高雄激素血症。     

补肾调周法对多囊卵巢大鼠性激素和胰岛素样生长因子-1的影响

目的 观察补肾调周法对造模大鼠性激素和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的影响.方法 将60只大鼠随机分为6组,即空白组,模型组,补肾调周低、中、高剂量组,阳性对照组,每组各10只.除空白组外其余各组采用HCG+胰岛素(INS)建立多囊卵巢(Polycystic Ovary,PCO)动物模型.补肾调周法序贯治疗16 d后测定血清T、LH、E_2、INS含量,免疫组化法检测胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在卵巢组织的表达,并在光镜下观察卵巢组织形态.结果 补肾调周法能显著降低PCO模型大鼠血清T,LH,E_2,INS含量,减少IGF-1在卵巢组织的表达,增加卵巢颗粒细胞层数,增加黄体组织数量.结论 补肾调周法可改善多囊卵巢综合征高胰岛素血症和高雄激素血症,且具有多途径、多环节、多靶点的特点.     

养精种玉汤对多囊卵巢综合征大鼠模型卵巢颗粒细胞分泌功能的影响

目的观察养精种玉汤对母体高雄激素环境建立的子代实验性多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠血清雌二醇(E2)、睾酮(T)、17-羟孕酮(17-OHP)水平及卵巢内促卵泡激素受体(FSHR)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、类固醇激素急性调节蛋白(StAR)mRNA表达的影响。方法 PCOS大鼠50只,分为对照组(正常大鼠)、模型组、中药低剂量、中剂量、高剂量组,每组10只,运用放射免疫法测定血清激素水平的变化;HE染色法观察卵巢形态学的改变;RT-PCR法检测卵巢FSHR、IGF-1、StAR mRNA的表达。结果与对照组比较,模型组血清T、17-OHP显著升高(P<0.01),E2显著降低(P<0.01),卵巢组织FSHR、IGF-1、StAR mRNA的表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,中药高剂量组T显著降低(P<0.01)、17-OHP降低(P<0.05)、E2显著升高(P<0.01),中药低剂量、中剂量、高剂量组FSHR、IGF-1、StAR mRNA的表达均有所上升,尤其是高剂量组的升高最为明显(P<0.01)。结论养精种玉汤可改善PCOS大鼠的高雄激素血症,并能促进卵巢FSHR、IGF-1、StAR mRNA的表达,改善卵巢的功能,促进卵泡发育。     

逍遥散加减方对高催乳素血症大鼠卵巢自分泌及旁分泌机制的影响

目的:探讨逍遥散加减方对高催乳素血症大鼠模型卵巢自分泌及旁分泌机制的影响。方法:采用腹腔注射甲氧氯普胺制成高催乳血症大鼠模型,随机分为6组:空白组、模型组、逍遥散加减方高、中、低剂量组(分别予以逍遥散加减方60、30、15g·kg^-1·d^-1)、溴隐亭组0.001g·kg^-1·d^-1,药物治疗30d后通过免疫组化检测大鼠卵巢组织胰岛素样生长因子1(IGF-1)、胰岛素样生长因子2(IGF-2)阳性结果的表达;采用MTT检测卵巢颗粒细胞存活率及增殖率;采用ELISA法测定卵巢抗苗勒试管激素(AMH)的含量;采用PCR检测血清促卵泡激素受体(FSHR)的含量。结果:与空白组比较,模型组IGF-1、AMH、FSHR、卵巢颗粒细胞存活率、细胞增殖显著减少(P<0.05,P<0.01);逍遥散加减方中、低剂量组IGF-1显著降低(P<0.01),逍遥散加减方低剂量组AMH及卵巢颗粒细胞存活率显著降低(P<0.05),溴隐亭组IGF-1、卵巢颗粒细胞存活率显著降低(P<0.05);与模型组比较,逍遥散加减方高剂量组AMH、IGF-1、卵巢颗粒细胞存活率显著升高(P<0.01,P<0.05),逍遥散加减方高剂量组细胞增殖率及FSHR升高(P<0.05,P<0.01)。结论:逍遥散加减方高剂量组通过提高IGF-1、FSHR及AMH的含量调节卵巢自分泌/旁分泌机制,进而提高动物模型卵巢颗粒细胞存活率。     

中药何首乌饮对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白bcl-2,bax表达的影响

目的通过测定不同剂量的中药何首乌饮含药血清作用后的大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达及caspase-3活性,探讨何首乌饮对卵巢自身功能的影响。方法制备排卵前卵巢模型,收集颗粒细胞分别与雌性SD幼鼠空白血清及含不同剂量何首乌饮的药物血清在体外共同培养,Western blotting检测GC内凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达情况;分光光度法检测颗粒细胞内caspase-3活性。结果何首乌饮含药血清可上调颗粒细胞bcl-2蛋白表达,下调bax蛋白表达,中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,可明显上调bcl-2蛋白表达(P均<0.01),中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,明显下调bax蛋白表达(P均<0.01)。何首乌饮含药血清可下调颗粒细胞caspase-3活性,中、高剂量何首乌饮含药血清组与对照组比较有显著性差异(P均<0.01)。结论何首乌饮增加GC内凋亡抑制蛋白bcl-2表达及减少凋亡促进蛋白bax表达的作用,可能是其抑制GC凋亡,防止卵泡闭锁的作用途径之一;同时何首乌饮可能是在凋亡的较早阶段,通过阻断caspase-3的级联裂解即可开始起效,而发挥凋亡抑制作用。     

补肾活血祛痰方对高雄激素多囊卵巢综合征大鼠类固醇激素合成急性调节蛋白质因子的影响

目的:探讨补肾活血祛痰方对高雄激素多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)的影响。方法:选择SD雌性大鼠60只,采用脱氢表雄酮注射建立高雄激素PCOS模型,并随机分为对照组(30只)和中药组(30只),中药组给予补肾活血祛痰方灌胃治疗,对照组给予等量的0.9%氯化钠溶液灌胃,观察治疗后两组大鼠卵巢组织形态学情况,比较治疗后两组大鼠血清激素水平情况; Western blot法检测治疗后两组大鼠StAR蛋白的表达情况。结果:治疗后,卵巢组织形态学观察结果显示,对照组仍存在多个囊泡,其囊泡即空卵泡,中药组卵巢组织形态明显改善; 与对照组相比,卵泡及黄体数较多(均P<0.05); 治疗后,中药组血清促黄体生成素(LH)和雄激素(T)水平比对照组明显降低(均P<0.05)。治疗22 d后,中药组血清胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和肿瘤坏死因子(TNF-α)水平比对照组明显降低(均P<0.05)。Western blot结果显示,治疗后中药组StAR蛋白表达明显比对照组降低(P<0.05)。 结论:补肾活血祛痰方可改善高雄激素PCOS大鼠卵巢功能,促进激素水平趋于正常,并可降低卵泡膜细胞的细胞膜附近StAR蛋白质,改善大鼠的生殖功能。     

更年汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞PI3K/Akt/m TOR通路的影响

目的研究更年汤对围绝经期模型大鼠颗粒细胞磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(m TOR)信号通路的影响。方法 10～14月龄雌性SD大鼠150只,筛选出围绝经期模型大鼠,随机分为模型组、替勃龙组(0.22 mg/kg)和更年汤低、中、高剂量(1.0、2.0、4.0 g/kg)组,连续ig给药15 d,1次/d,第15天后采血,制备大鼠含药血清;3～4月龄雌性SD大鼠120只,筛选出动情前期老鼠,剔出卵巢行体外颗粒细胞原代培养,分别用各组含药血清培养液培养颗粒细胞,72～120h后用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测颗粒细胞中PI3K、Akt、m TOR、生长分化因子9(GDF9)、翼状螺旋转录因子2(FOXL2)mRNA表达水平;Western blotting法检测PI3K、Akt、mTOR、GDF9、FOXL2蛋白表达。结果与模型组比较,替勃龙组和更年汤各剂量组卵巢颗粒细胞中PI3K、m TORm RNA和蛋白表达水平均显著升高(P0.05、0.01),Akt mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01),GDF9、FOXL2 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P0.01)。结论更年汤含药血清在临床剂量上可提高卵巢颗粒细胞PI3K、mTOR的表达,抑制Akt及其下游的GDF9、FOXL2表达,从而推测更年汤可调节卵泡的生长发育,抑制卵泡闭锁、改善卵巢功能。     

何首乌饮含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞端粒酶活性的影响

目的观察不同剂量的中药何首乌饮对大鼠卵巢颗粒细胞端粒酶活性的影响,探讨其在调节卵泡微环境过程中所起的作用。方法制备大鼠排卵前卵巢模型,收集颗粒细胞(GC)分别与雌性SD幼鼠空白血清及含不同剂量何首乌饮的药物血清在体外共同培养。用TRAP-ELISA方法分析GC的端粒酶活性;运用流式细胞术分析GC凋亡、坏死情况。结果各剂量组何首乌饮含药血清可明显上调GC端粒酶活性,与对照组比较,中、高剂量何首乌饮含药血清能够显著提高GC端粒酶活性(P均<0.05)。随着中药血清药物剂量的增加,颗粒细胞凋亡率逐渐下降,与对照组比较,中、高剂量组何首乌饮含药血清均能够显著降低离体GC的凋亡率(P均<0.01),各含药血清组细胞坏死率虽较对照组高,但与各组比较差别无统计学意义。结论何首乌饮通过上调离体培养的大鼠卵巢GC端粒酶活性、抑制凋亡从而对卵泡局部微环境的调节,可能是其调节下丘脑-垂体-卵巢轴的重要靶点之一。     

针刺对围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞Fas、Bcl-2 mRNA表达的影响

目的从细胞凋亡角度研究针刺治疗围绝经期综合征的作用机制。方法将围绝经期大鼠随机分为围绝经期组、针刺组和药物组,并设青年对照组。围绝经期组大鼠不治疗,作为空白对照;针刺组大鼠针刺肾俞、足三里、三阴交治疗;药物组大鼠采用更年安药物治疗;青年对照组大鼠不治疗。应用原位杂交法检测卵巢颗粒细胞Fas、Bcl-2 mRNA表达,并进行图像分析。结果与青年对照组比较,围绝经期组大鼠卵巢颗粒细胞Fas mRNA表达明显升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达明显降低(P<0.01);针刺治疗后围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞Fas mRNA表达明显降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达明显提高(P<0.01)。结论针刺能够下调围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞Fas mRNA表达,上调Bcl-2 mRNA表达。     

月经病寒凝血瘀证大鼠卵巢HO/CO变化及与生殖内分泌的关系

目的:观察月经病寒凝血瘀模型大鼠血红素氧合酶/一氧化碳(HO/CO)系统的变化及与生殖内分泌的关系,探讨HO/CO系统在寒凝血瘀妇科疾病的发生中的作用。方法:20只大鼠,随机分为模型组和正常组。模型组大鼠置于0℃-1℃冰水中20分钟,每日1次,连续2周,2周后断头处死,取血,采用放射免疫法测定血清E2、P活性,采用血红蛋白结合及联二亚硫酸盐还原法测定血浆CO水平;剖取卵巢,采用免疫组织化学SP法检测卵巢组织HO-1、HO-2蛋白表达;采用原位杂交法检测卵巢组织HO-1、HO-2 mRNA表达。结果:模型组大鼠血清E2、P下降,血浆COHb活性降低,与正常组比较有统计学意义。模型组大鼠卵巢颗粒细胞、黄体细胞HO-1、HO-2蛋白及mRNA表达均下降,与正常组比较差异有统计学意义。并且血浆COHb活性、卵巢组织HO-1、HO-2表达与血清E2、P呈正相关。结论:寒凝血瘀大鼠HO/CO系统抑制,生殖内分泌紊乱,卵巢功能失常从而引发月经病。