妊娠期脂多糖暴露通过激活子代小胶质细胞诱导大鼠孤独症样行为

目的:探讨妊娠期脂多糖(LPS)诱导的孤独症样行为仔鼠脑组织Toll样受体4(TLR4)及小胶质细胞分型的变化。方法:24只孕鼠随机平分为2组(n=12),分别于怀孕9.5 d时腹腔注射LPS(100μg/kg)或等体积磷酸盐缓冲液(PBS),所产子代大鼠即为LPS组(n=72)及PBS组(n=72)仔鼠。采用real-time PCR和Western blot技术测定仔鼠TLR4、离子钙结合衔接分子1(IBA-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg-1)的表达水平。免疫荧光染色检测仔鼠前额叶皮质小胶质细胞的形态学改变。ELISA试剂盒测定孕鼠血清脂多糖结合蛋白(LBP)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)及仔鼠脑组织TNF-α和白细胞介素10(IL-10)含量。三箱社交实验、嗅觉适应/去适应实验和旷场实验检测子代大鼠社交行为、探索行为及刻板行为。体外培养N9小胶质细胞,予以TLR4阻断剂瑞沙托维(TAK242)处理后,观察LPS诱导的N9细胞TLR4、iNOS及Arg-1表达水平的变化。结果:妊娠期LPS处理可诱导母鼠血清LBP及TNF-α显著升高(P<0.01或P<0.05),呈免疫激活态,其子代大鼠出现社会交往障碍、重复刻板行为等孤独症样行为。LPS组仔鼠前额叶皮质中TLR4、IBA-1和iNOS的mRNA及蛋白表达水平显著增加(P<0.05或P<0.01),而Arg-1的mRNA及蛋白表达水平却显著下降(P<0.05或P<0.01),M1型小胶质细胞增多,M2型减少,TNF-α表达水平升高(P<0.01),而IL-10表达水平降低(P<0.01)。形态学显示LPS组小胶质细胞分支减少,胞体增大、松散,呈激活态。体外实验结果显示,TLR4抑制剂TAK242显著减少了LPS诱导的M1型小胶质细胞转化。结论:妊娠中期LPS暴露激活仔鼠TLR4信号通路,诱导前额叶皮质小胶质细胞向M1型极化,这可能是子代大鼠孤独症样行为的一个发病风险因素。     

β-石竹烯通过作用于HMGB1 / TLR4 / NF鄄资B 通路减轻小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤

目的:研究β-石竹烯(β-caryophyllene,BCP)对脑缺血再灌注损伤(Cerebral ischemia-reperfusion,CIR)小鼠的保护作用及可能的机制。方法:将C57BL/6 小鼠随机分组为假手术组(Sham)、模型组(CIR)、β-石竹烯组(62、124、248mg/ kg)。采用线栓法建立小鼠CIR 损伤模型,缺血1 h,再灌注24 h 后,进行神经行为学评分和脑梗死体积测定;TUNEL 法观察CIR 后缺血区神经细胞的死亡情况;Western blot 法检测脑组织中TLR4 和NF-κB(p65)蛋白表达情况;免疫组织化学法检测缺血侧脑NF-κB(p65)的表达;ELISA 法检测CIR 小鼠血清中HMGB1 和缺血侧脑组织中IL-1α、TNF-α的含量变化。结果:与模型组相比,BCP(248 mg/ kg)可明显改善小鼠神经功能,减少脑梗死体积,降低缺血区神经元的死亡率(P<0.01);降低血清中HMGB1 浓度、TLR4 的蛋白表达量(P<0.01),抑制炎症通路NF-κB 的激活并减少TNF-α、IL-1茁的释放(P<0.01)。结论:BCP 能够减轻CIR 诱导的小鼠脑组织损伤,其保护作用可能是通过抑制HMGB1/ TLR4/ NF-κB 介导的炎症反应。     

血管生成素4对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

 目的：观察血管生成素4（Ang-4）对脂多糖(LPS）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：EnVision法免疫组化鉴定HUVECs。LPS诱导细胞损伤,不同剂量的Ang-4干预。显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,ELISA法检测von Willebrand因子（vWF）和肿瘤坏死因子（TNF-α）含量,real-time PCR检测Toll样受体4（TLR4）、核因子κB（NF-κB） p65和TNF-α mRNA含量变化。结果：免疫组化示胞浆内人Ⅷ因子相关抗原呈阳性;与正常组比,LPS组细胞增殖活力降低（P<0.01）,vWF及TNF-α分泌增多(P<0.01),且TLR4、NF-κB p65和TNF-α mRNA表达升高(P<0.01);Ang-4（100 μg/L）组可恢复细胞活力,降低vWF及TNF-α含量(P<0.01),抑制LPS所致TLR4、NF-κB p65和TNF-α mRNA的表达(P<0.01)。结论：Ang-4可拮抗LPS诱导的HUVECs损伤,这可能与抑制TLR4-NF-κB p65-TNF-α信号通路的活化有关。     

RNAi沉默NF-κB p65对小鼠巨噬细胞细胞因子表达的影响

目的: 探讨RNA干扰(RNAi)技术在抑制NF-κB p65表达、调控LPS活化后巨噬细胞细胞因子表达中的应用。方法: 利用阳离子脂质体将NF-κB p65小干扰RNA(siRNA)瞬时转染入Ana-1细胞,RT-PCR及Western blotting法检测其沉默效率,ELISA法检测LPS(1 mg/L)刺激下0 h、4 h、12 h和24 h Ana-1细胞培养上清中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10浓度。结果: NF-κB p65 siRNA转染24 h后,NF-κB p65在基因水平及蛋白水平表达均被明显抑制(P<0.05)。RNA干扰组Ana-1细胞培养上清中细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达在相应时点内均较对照组明显降低(P<0.05),IL-10表达显著升高,在12 h和24 h差异显著(P<0.05)。结论: 体外实验初步证实RNAi技术能有效沉默小鼠巨噬细胞NF-κB p65 基因的表达,下调其下游调控的促炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6及上调抑炎症细胞因子IL-10的表达,从而抑制过度的炎症反应。     

PbGPI16在C57BL/6小鼠脑疟发病过程中作用的研究

目的：PbANKA原虫PbGPI16在小鼠实验性脑疟（ECM）发生和发展过程中的作用。方法：采用pbgpi16基因敲除的PbANKA原虫（△pbgpi16）和PbANKA原虫（WT）感染C57BL/6小鼠建立ECM模型。动态监测原虫血症和生存期;HE染色检测ECM小鼠脑组织炎性细胞浸润。qPCR观察感染后小鼠脑组织中CXCL9、CXCL10和CXCR3及脾细胞中TNF-α、IFN-γ和IL-1β转录水平。ELISA检测血清和脾细胞培养上清中TNF-α、IFN-γ和IL-1β表达水平。FACS检测感染后小鼠脾脏DCs细胞MHCⅡ和TLR4表达水平。结果：与WT组相比,△pbgpi16感染C57BL/6小鼠脑微血管壁损伤减轻,CXCL9、CXCL10、CXCR3、TNF-α、IFN-γ和IL-1β转录水平,小鼠血清和脾细胞培养上清中TNF-α、IFN-γ和IL-1β表达水平和脾DCs表达MHCⅡ及TLR4数量均显著下降（P<0.05）。结论：PbGPI16缺失通过减轻小鼠脑组织中趋化因子和脾脏中前炎症细胞因子转录水平,降低血清和脾细胞中前炎症细胞因子表达水平,降低DCs活化水平而抑制ECM发生。本研究旨在为疟疾感染后脑疟病理研究提供理论基础。     

C反应蛋白对人外周血CD14单核细胞TLR4信号转导的影响

目的: 观察C反应蛋白(CRP)对CD14⁺单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达的影响,以探讨CRP在急性冠脉综合征(ACS)致炎机制中的作用。方法: 不同浓度(5、25、50、100 mg/L)和不同作用时间(6、12、24、48 h)的CRP刺激正常人外周血CD14⁺单核细胞,或者不同浓度TLR4抑制剂预先干预CD14⁺单核细胞后,再给予CRP刺激。应用流式细胞仪检测细胞表面TLR4蛋白的表达,定量PCR方法检测TLR4 mRNA和髓样分化蛋白2(MD-2)mRNA表达,ELISA检测刺激前后细胞上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、金属蛋白酶9(MMP-9)水平。结果: CRP可剂量依赖和时间依赖地增加CD14⁺单核细胞表达TLR4和MD-2,高浓度TLR4抑制剂可完全阻断CRP对TLR4、MD-2的影响。TNF-α、IL-6、MMP-9与TLR4、MD-2也呈现相同的变化。结论: CRP可激活正常人CD14⁺单核细胞TLR4信号转导途径,并诱导产生TNF-α、IL-6、MMP-9,提示CRP可作为病原相关分子模式(PAMP),通过TLR4模式受体介导而产生炎症反应,参与动脉粥样硬化形成,促进ACS炎症的发展。     

IL-38 抑制LPS / TLR4 诱导炎症减轻类风湿关节炎的机制研究

目的:探讨IL-38 和TLR4 在类风湿关节炎中的潜在关联及其在类风湿性关节炎中致病的机制。方法:选取2013 年1 月至2016 年2 月间本院收治的41 例类风湿关节炎患者(观察组)及45 例本院实施创伤后滑膜切除术的患者(对照组)为研究对象。收集观察组和对照组的外周血单个核细胞(PBMCs)、滑膜组织及血清。荧光定量PCR 检测PBMCs 及滑膜组织中IL-38 及TLR4 的mRNA 水平。ELISA 检测滑膜液及血清中IL-38 的表达,Western blot 检测滑膜组织中IL-38 及TLR4的表达。LPS 和/ 或IL-38 刺激RAW264.7 细胞,ELISA 检测RAW264.7 细胞上清中IL-6、IL-8 及TNF-α的含量,荧光定量PCR检测RAW264.7 细胞TLR4、IL-6、IL-8 及TNF-α的表达。NF-κB 激活-核转运试剂盒及Western blot 检测NF-κB 信号的激活水平。结果:与对照组相比,类风湿关节炎患者PBMCs、血清及滑膜组织和滑膜液中IL-38 水平显著升高,而TLR4 水平也显著升高,Pearson 相关分析显示二者呈负相关。LPS 和/ 或IL-38 刺激RAW264.7 细胞后,IL-38 能够抑制LPS 诱导的TLR4、IL-6、IL-8 及TNF-α表达,进一步的分析显示,IL-38 能抑制NF-κB 信号途径激活,因此推测IL-38 可能是通过抑制NF-κB 信号途径激活从而抑制LPS/ TLR4 信号诱导的炎症因子表达。结论:IL-38 能抑制LPS/ TLR4 诱导炎症减轻类风湿关节炎,其机制可能是通过抑制NF-κB 信号途径的激活。     

刺五加多糖对Lewis 荷瘤小鼠抗肿瘤免疫调节作用及机制的研究

目的:探讨刺五加多糖(ASPS)对Lewis 荷瘤小鼠TLR4 信号转导通路的调控机制。方法:用C57BL/6 建立 Lewis 实体型荷瘤小鼠模型,随机分为生理盐水组(NS 组)、阿霉素组(ADM 组)和ASPS 低、中、高剂量组,灌胃给药25 d 后,称 重计算瘤重、抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数。收集荷瘤小鼠眼球血,ELISA 检测外周血中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6 和IL- 12p70 的分泌情况。采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)和Western blot 法分别检测荷瘤小鼠脾细胞中TLR4 相关节点TLR4、 MyD88、TRAM、TRAF6、NF-κB p65、AP-1 基因和蛋白的表达水平。结果:与NS 组相比,ASPS 中剂量组荷瘤小鼠的瘤重明显降 低,抑瘤率和免疫器官指数显著升高(P<0.05)。与NS 组相比,ASPS 显著促进荷瘤小鼠外周血TNF-α、IL-1β和IL-6 的分泌 (P<0.05),对IL-12p70 的产生无显著影响(P>0.05)。ASPS 显著上调TLR4 信号通路中TLR4、MyD88、TRAF6、NF鄄资B p65、 AP-1 基因和蛋白在荷瘤小鼠脾脏中的表达(P<0.05),而对TRAM 无显著作用(P>0.05)。结论:TLR4 信号通路可能是ASPS 在Lewis 荷瘤小鼠体内发挥免疫调节及抑制肿瘤作用的通路之一。     

p38蛋白激酶对大鼠肺泡巨噬细胞活化机制的调控

目的:探讨p38蛋白激酶对LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞激活机制的作用。方法:提取细胞核蛋白,采用Western印迹分析p38蛋白激酶水平。用放射免疫法检测细胞上清TNF-α、IL-8的含量。结果:LPS显著增加肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-8的合成,呈剂量依赖性诱导p38的活化。特异性p38蛋白激酶抑制剂SB203580能显著降低LPS诱导的肺泡巨噬细胞核蛋白p38的含量及细胞上清TNF-α、IL-8水平。结论:LPS刺激肺泡巨噬细胞释放炎性细胞因子TNF-α、IL-8受p38蛋白激酶调控。     

NOD8对LPS诱导巨噬细胞释放NO、TNF-α和IL-1β的影响

 目的： 探讨NOD8对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞释放一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的影响。方法： pEGFP-C2及pEGFP-NOD8重组质粒分别转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,以LPS刺激RAW264.7细胞0、6、12、24 h后,采用Griess reagent法测定观察细胞分泌的NO水平;ELISA法检测IL-1β 和 TNF-α 的含量;荧光法测定活化的caspase-1水平; Western blotting检测NOD8蛋白表达及NF-κB  p65亚基的核转位情况。结果： (1)与转染pEGFP-C2空质粒组比较,转染pEGFP-NOD8质粒组NOD8蛋白表达明显增加。(2) LPS刺激6、12、24 h后,RAW264.7细胞释放NO、IL-1β及TNF-α均明显增加;而在pEGFP-NOD8+LPS组RAW264.7细胞, NO于12、24 h 的释放显著降低,IL-1β于6、12、24 h的释放也明显降低,TNF-α的释放则无明显变化。（3）在LPS刺激6、12、24 h后, RAW264.7细胞caspase-1活化水平均明显升高,胞浆NF-κB p65亚基表达明显减少,表明p65核转位增加;而pEGFP-NOD8+LPS组可显著抑制caspase-1的活化以及NF-κB p65亚基的核转位,差异有统计学意义。结论： NOD8可抑制LPS诱导的巨噬细胞NO与IL-1β释放,其作用机制可能与NOD8抑制caspase-1及NF-κB 的活化有关。     

过氧化物酶增殖体激活受体α在急性肺损伤大鼠肺组织的表达及其意义

目的: 观察内毒素(LPS)复制的急性肺损伤（ALI）大鼠肺组织过氧化物酶增殖体激活受体α（PPARα）表达的变化,探讨PPARα在ALI中可能的作用。方法: 将40只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、LPS致伤1 h组、2 h组、4 h组和8 h组。用LPS(5 mg/kg) 静脉注射复制大鼠ALI模型，分别在LPS致伤后1 h、2 h、4 h、8 h时处死大鼠，测定各组肺组织湿/干重比（W/D）及肺组织病理变化；采用RT-PCR法检测肺组织中PPARα mRNA的表达；采用免疫组化法检测肺组织中PPARα的表达。结果: LPS致伤后2 h、4 h、8 h肺组织W/D均显著高于对照组（均P< 0.01）；LPS致伤后2h、4h PPARα mRNA表达分别显著低于对照组（均P < 0.01）；而LPS致伤4h和8h组PPARα表达阳性细胞数显著低于对照组（均P< 0.05）。结论: PPARα在ALI大鼠肺组织表达降低。表明PPARα在急性肺损伤的发病机制中具有重要作用。     

基于细胞因子分泌对人混合淋巴细胞反应中的T淋巴细胞进行测定和纯化

目的:对同种异体外周血单个核细胞(PBMNCs)刺激后分泌细胞因子的T 淋巴细胞进行测定和纯化,为研究介导同种异体反应的T淋巴细胞提供新的途径。方法: 利用新颖的细胞因子分泌检测方法(CKSA)从单细胞水平定量测定人混合淋巴细胞反应中分泌IFN-γ,IL-4 和IL-10的T 淋巴细胞; 对分泌IFN-γ 的T细胞进行磁性纯化。结果: 同种异体PBMNCs刺激后检测到分泌IFN-γ 的T淋巴细胞水平明显升高(1.12%±0.13%),而分泌IL-4 和IL-10的T淋巴细胞则无升高(分别为0.12%±0.03%和0.10%±0.03%);分泌IFN-γ 的T淋巴细胞可以被进一步纯化(93.8±22.1)倍。结论: 利用CKSA从单细胞水平定量测定同种异体PBMNCs刺激后分泌IFN-γ 的T淋巴细胞水平显著升高,这些细胞可以被有效地纯化。     

高同型半胱氨酸诱导血管内皮功能障碍促进微循环障碍和微血栓形成

目的：采用蛋氨酸灌胃复制高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia,HHcy)致内皮功能障碍,在此基础上，联合脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和角叉菜胶（carrageenan，Ca）造成大鼠体内广泛微血栓形成，观察血管内皮损伤和功能障碍对大鼠体内微血栓形成的促进作用。方法: ①内皮损伤模型的建立。SD大鼠随机分为对照组（control）、内皮功能障碍组（HHcy）。HHcy组采用蛋氨酸灌胃4周复制HHcy致内皮功能障碍模型，对照组以等量纯净水灌胃。4 周后检测血浆同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）水平，并取大鼠胸主动脉段进行血管舒张功能检测，同时检测血浆一氧化氮（NO）和血管性假血友病因子（von Willebrand factor，vWF）水平，以评价血管内皮功能状况。②Ca/LPS诱导微血栓形成。SD大鼠随机分为对照组（control）、微血栓组（Ca/LPS）、内皮功能障碍加微血栓组（HHcy＋Ca/LPS）。Ca/LPS组大鼠腹腔注射Ca，16 h再腹腔注射LPS。注射LPS 20 h后心脏采血检测凝血功能和血小板计数，镜下观测肠系膜微循环，24 h大鼠颈动脉采血结束实验，检测血浆NO和vWF值。对照组腹腔注射等量生理盐水，检测指标同模型组。HHcy＋Ca/LPS组大鼠经蛋氨酸灌胃持续4周后，再按照上述方法注射Ca/LPS，观察内皮功能障碍对大鼠微循环障碍和微血栓形成的影响。结果： ①蛋氨酸灌胃4周导致HHcy,血浆vWF水平显著升高，NO水平降低，内皮依赖性血管舒张功能显著降低，提示血管内皮功能受损，大鼠内皮功能障碍模型复制成功。②Ca/LPS组肠系膜微循环可见广泛微血栓形成，注射LPS后20 h ，通过检测凝血指标可见血液处于高凝状态。而与之比较，HHcy＋Ca/LPS组微循环障碍进一步加强，血小板计数减少，血浆NO值降低，vWF升高；注射LPS 20 h后可见血液处于继高凝状态之后的消耗性低凝状态。结论： 蛋氨酸灌胃4周导致HHcy,诱导血管内皮功能障碍。联合Ca/ LPS 造模可建立微循环障碍和微血栓形成的动物模型，而内皮功能障碍能加速加重微循环障碍和微血栓形成。     

DJ-1缺失增加出生前脂多糖暴露引起的出生后小鼠多巴胺能神经元丢失(英文)

目的:观察DJ-1缺失和出生前脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)暴露对出生后小鼠多巴胺能(dopam-inergic,DA)系统和神经炎症的影响。方法:妊娠第10.5 d DJ-1基因敲除的小鼠腹腔注射脂多糖(10,000 EU/kg体重)后自然分娩的后代在4月和14月龄时处死。免疫组织化学染色结合体视学计数定量黑质酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)和CD11b阳性细胞数量。高效液相色谱法测定纹状体DA代谢物水平。免疫荧光法测定TNF-α和IL-1β蛋白水平。结果:4月和14月龄的DJ-1基因敲除的小鼠均没有明显的DA神经元减少和脑内神经炎症改变。出生前接触过LPS的4月和14月龄野生型小鼠,黑质DA能神经元分别减少13.6%和23.1%,纹状体DA含量分别减少19.0%和26.2%,同时神经炎症改变明显。出生前接触过LPS的4月和14月龄DJ-1基因敲除小鼠,黑质DA能神经元分别减少22.5%和35.4%,纹状体DA含量分别减少34.3%和39.3%,同时脑内炎症反应更明显。结论:以上结果提示遗传因素缺失和环境因素可能共同引发帕金森病发生,进一步验证了帕金森病多因素损伤引发的发病假说。     

Ketamine inhibits polymorphonuclear leucocyte CD11b expression and respiratory burst activity in endotoxemic rats

Objective and design: To observe the effect of ketamine on polymorphonuclear leucocytes (PMN) adhesion and respiratory burst activity in endotoxemia rats. Materials: 30 rats were randomly allocated to five groups: rats challenged with intraperitoneal injection of saline (saline group); challenged with intraperitoneal injection of LPS 10 mg/kg (LPS group); challenged with intraperitoneal injection of LPS 10 mg/kg and treated by intraperitoneal injection of ketamine 5, 25, 50 mg/kg at 0, 1, 2, 3, 4, 5 h after the injection of LPS, respectively (three ketamine treatment groups). Methods: PMN respiratory burst and CD11b expression were measured with flow cytometry at the end of 1 h, 4 h, and 6 h. Results: LPS challenge significantly increased PMN respiratory burst activity and CD11b expression when compared with the saline group (p < 0.01). There was a significant decrease in LPS-induced PMN respiratory burst activity and CD11b expression in three ketamine treatment groups when compared with LPS group (p < 0.01). Conclusions: Ketamine significantly inhibits PMN CD11b expression and respiratory burst activity in endotoxemic rats. Received 31 May 2006; returned for revision 21 July 2006; returned for final revision 10 October 2006; accepted by M. Katori 5 November 2006     

Combined toxicity of prenatal bacterial endotoxin exposure and postnatal 6-hydroxydopamine in the adult rat midbrain

We previously reported that injection of the Gram (-) bacteriotoxin, lipopolysaccharide (LPS), into gravid females at embryonic day 10.5 led to the birth of animals with fewer than normal dopamine (DA) neurons when assessed at postnatal days (P) 10 and 21. To determine if these changes continued into adulthood, we have now assessed animals at P120. As part of the previous studies, we also observed that the pro-inflammatory cytokine tumor necrosis factor alpha (TNFalpha) was elevated in the striatum, suggesting that these animals would be more susceptible to subsequent DA neurotoxin exposure. In order to test this hypothesis, we injected (at P99) 6-hydroxydopamine (6OHDA) or saline into animals exposed to LPS or saline prenatally. The results showed that animals exposed to prenatal LPS or postnatal 6OHDA alone had 33% and 46%, respectively, fewer DA neurons than controls, while the two toxins combined produced a less than additive 62% loss. Alterations in striatal DA were similar to, and significantly correlated with (r(2)=0.833) the DA cell losses. Prenatal LPS produced a 31% increase in striatal TNFalpha, and combined exposure with 6OHDA led to an 82% increase. We conclude that prenatal exposure to LPS produces a long-lived THir cell loss that is accompanied by an inflammatory state that leads to further DA neuron loss following subsequent neurotoxin exposure. The results suggest that individuals exposed to LPS prenatally, as might occur had their mother had bacterial vaginosis, would be at increased risk for Parkinson's disease.     

油酸-脂多糖介导大鼠急性肺损伤及肺组织AP-1活性的变化

本文探讨了在油酸－内毒素（OA＋LPS）介导的大鼠急性肺损伤（ALI）模型肺组织中，转录因子AP－1活性变化的意义。有用OA＋LPS序贯性两次致伤，复制ALI大鼠模型；采用凝胶迁移率分析法（EMSA）检测肺组织AP－1活性。结果显示：OA＋LPS模型组大鼠呼吸窘迫，PaO2早期低于8kPa，死亡率升高，肺含水量显著增加，肺水肿、浸润等病变严重，伴透明膜形成，肺组织AP－1活性显著升高；并且，间隔4h两次致伤后，P aO2降低幅度最大，死亡率高达78.57%，肺含水量最大，肺病理改变最重，肺组织AP－1活性最高。结果表明：OA＋LPS序贯性两次致伤，可以介导大鼠发生严重的ALI；ALI的发生、发展与AP－1活性异常升高有关。     

内源性CO在CCK-8减轻脂多糖所致的急性肺损伤中的作用

目的：探讨内源性一氧化碳（CO）在八肽胆囊收缩素（CCK-8）减轻LPS所致急性肺损伤（ALI）中的作用。 方法： 将56只大鼠随机分为正常对照组、LPS组、LPS+ZnPP（HO-1特异性阻断剂）组、LPS+Hm（CO供体）组、CCK-8+LPS组、CCK-8+LPS+ZnPP组、CCK-8组7组，每组8只。各组给药后2 h，6 h，12 h行支气管肺泡灌洗、检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中中性粒细胞（PMN）数目，并进行肺组织的形态学观察；计算大鼠死亡率；测定肺组织中MDA、CO含量。 结果： 给药2 h和6 h后，各组大鼠死亡率均为0，LPS 注入12 h后大鼠死亡率高于相应对照组，LPS+Hm和CCK-8+LPS组大鼠死亡率均低于LPS组，LPS+ZnPP和CCK-8+LPS+ZnPP组大鼠死亡率分别高于LPS和CCK-8+LPS组；LPS组肺组织均出现损伤变化，同时BALF中PMN数目和肺组织中MDA和CO含量高于相应对照组；LPS+Hm和CCK-8+LPS组肺组织损伤程度、BALF中PMN数目和肺组织中MDA含量低于相应LPS组，但肺组织中CO含量高于相应LPS组；LPS+ZnPP和CCK-8+LPS+ZnPP组肺组织损伤程度、BALF中PMN数目和肺组织中MDA含量分别高于相应LPS和CCK-8+LPS组，而肺组织中CO含量分别低于相应LPS组和CCK-8+LPS组。 结论： CCK-8可通过内源性CO介导的抗氧化、抑制PMN聚集等效应来发挥改善LPS所致的肺损伤作用。     

LPS对新生大鼠肺组织MMP-2和t-PA,PAI-1表达影响的研究

目的制备新生大鼠肺损伤模型,探讨MMP-2和t-PA, PAI-1mRNA在新生大鼠肺损伤中的作用.方法腹腔注射LPS致新生大鼠肺损伤的病理改变,应用免疫组化和RT-PCR的方法分别检测肺组织MMP-2蛋白和t-PA, PAI-1 mRNA的表达改变.结果病理改变证实了新生大鼠肺出血的发生,注射LPS后8h,MMP-2蛋白表达达高峰(P<0.01),差异显著.t-PA mRNA表达高峰为给药后2h(P<0.01),之后表达逐渐下降.PAI-1 mRNA表达高峰为给药后2h至8h(P<0.01).结论用LPS制备了新生大鼠肺出血(1种严重的肺损伤)的动物模型,肺组织t-PA表达的增加可能导致MMP-2的降解作用明显增加,PAI-1表达的增加使局部肺组织处于1种高凝状态,可能导致肺出血的发生.     

内毒素性急性肺损伤大鼠内源性H2S/CSE体系的变化

目的：观察内毒素性急性肺损伤（ALI）大鼠内源性硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶（H2S/CSE）体系、IL-1β和IL-10的动态变化。方法:健康雄性SD大鼠共80只，随机分为Ⅰ（对照）组；Ⅱ（LPS 1 h）组；Ⅲ（LPS 3 h）组；Ⅳ（LPS 6 h）组；Ⅴ（LPS 9 h）组；Ⅵ（LPS 12 h）组。给予LPS复制内毒素性ALI大鼠模型，分别于1、3、6、9、12 h处死，观察光镜和电镜下肺组织形态学改变，检测肺系数、肺湿/干重比、血浆中H2S含量、肺组织CSE活性、血清中IL-1β和IL-10的动态变化。结果:⑴LPS 1 h组，光镜和电镜下肺组织形态学无明显改变，肺系数、肺湿/干重比、血浆中H2S的含量和肺组织CSE活性与对照组比较无明显变化，血清中IL-1β和IL-10含量明显高于对照组(IL-1β，P<0.05；IL-10，P<0.01)。⑵LPS 3、6、9、12 h组，光镜和电镜下肺组织明显受损，超微结构明显改变，肺系数和肺湿/干重比明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)，血浆中H2S的含量和肺组织CSE活性明显低于对照组（P<0.05 或P<0.01) ，血清中IL- 1β和IL-10的含量明显高于对照组(P<0.01)。结论:内源性H2S/CSE体系、IL-β和IL-10参与内毒素性ALI的病理生理过程。