Survivin siRNA对卵巢癌细胞侵袭的影响

目的：探讨survivin靶向小分子干扰RNA（siRNA）对卵巢癌细胞侵袭的影响。方法：在survivin基因的编码区内根据干涉位点的设计原则,体外转录合成survivin siRNA,转染人卵巢上皮性癌细胞株SKOV3细胞,用Westernblot方法鉴定干涉位点对survivin基因蛋白的干扰效果;细胞侵袭实验（transwell）检测细胞体外侵袭能力的变化。结果：survivin siRNA能有效抑制survivin蛋白的表达,siRNA组survivin蛋白的相对表达水平分别与空白对照组、非特异性组相比,差异均有统计学意义（P〈0.05）。特异性干涉组细胞的侵袭能力明显低于非特异性干涉组及空白对照组,差异均具有统计学意义（P〈0.001）。结论：特异性的survivin siRNA能有效降低卵巢癌细胞survivin的表达,抑制细胞侵袭能力,这为卵巢癌的基因治疗提供了一种新策略。     

siRNA干扰LOXL2基因对人胃癌细胞株BGC823侵袭的影响及机制

目的 研究小干扰RNA(siRNA)抑制胃癌细胞中LOXL2的表达情况,并探讨LOXL2基因对人胃癌细胞株BGC823侵袭能力影响及机制.方法 QRTPCR及蛋白印迹(Western blot)技术检测人胃癌细胞株BGC823、正常胃上皮细胞株GES-1中LOXL2表达;合成针对LOXL2的siRNA,并转染胃癌细胞株BGC823;应用Transwell实验检测BGC823细胞侵袭能力;检测转染前后BGC823侵袭相关基因基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达变化.结果 LOXL2在BGC823细胞中的表达明显高于胃上皮细胞株(P<0?.01);与未转染和转染阴性对照质粒组相比转染组胃癌细胞BGC823中LOXL2 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05),侵袭实验显示LOXL2-siRNA转染组胃癌细胞BGC823穿膜细胞数显著低于阴性对照质粒组和未转染组(P<0.05);转染后BGC823中MMP-2、MMP-9表达均较转染前降低(均P<0.05).结论 抑制胃癌细胞BGC823 LOXL2表达可降低细胞的侵袭能力.     

泰素抑制涎腺腺样囊性癌远处转移的机制研究

目的:观察泰素(Taxol)对涎腺腺样囊性癌细胞远处转移的作用及其对肺转移灶血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP-9)表达的影响.方法:用涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株(ACC-M)裸鼠肺转移模型观察泰素体内抗转移效果,免疫组化法检测转移灶肿瘤细胞VEGF和MMP-9的表达.结果:对照组与Taxol治疗组相比,2组之间瘤结节数差异有统计学意义(P＜0.05);Taxol治疗组VEGF及MMP-9表达明显弱于对照组(P＜0.05).结论:泰素对涎腺腺样囊性癌肺转移有较好的抑制效果,这可能与其抑制血管生成及基质金属蛋白酶表达有关.     

大黄素对结肠癌模型鼠两种细胞因子影响

目的探讨大黄素对结肠癌裸鼠移植瘤模型的抗癌作用及其对血管内皮生长因子C(VEGF-C)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的影响。方法建立结肠癌裸鼠移植瘤模型,随机分成模型组,大黄素低、中、高剂量组和阳性对照组,每组10只。大黄素各剂量组分别给予大黄素50,100,150 mg·kg-1腹腔注射;阳性对照组给予氟尿嘧啶20.0 mg·kg-1腹腔注射,模型组给予等量0.9%氯化钠溶液。观察抑瘤率,TUNEL法检测凋亡指数,免疫组化法检测MMP-9和VEGF-C表达情况。结果与模型组比较,大黄素各剂量组结肠癌裸鼠移植瘤瘤体积、瘤质量、肿瘤抑制率和凋亡指数明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);VEGF-C和MMP-9表达均不同程度降低。VEGF-C阳性表达大黄素中、高剂量组(0.68±0.36),(0.22±0.41)低于模型组(2.11±0.45),差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);MMP-9阳性表达(1.11±0.41),(0.38±0.44)低于模型组(2.31±0.39),差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论大黄素具有较好的抑瘤效果,可能与诱导细胞凋亡和抑制VEGF-C、MMP-9表达有关。     

ML-9调节STIM1在下咽癌中的表达及作用机制

目的 分析ML-9调节STIM1在下咽癌中的作用机制。方法 选取90只饲养裸鼠作为研究对象,应用随机法分为对照组及ML-9组,各45例。比较两组治疗前后细胞增殖、凋亡、侵袭、裸鼠体重、瘤体大小、细胞转移、蛋白表达量情况。结果 治疗前,两组裸鼠各项指标比较,差异无统计学意义（P> 0.05）;治疗后,ML-9组裸鼠蛋白表达量、瘤体体积、瘤体重量情况均低于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）;ML-9组细胞增殖、凋亡、侵袭情况低于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 敲减下咽癌FaDu细胞中的STIM1基因后,下咽癌细胞的增殖、侵袭、转移能力也被显著抑制,并能够抑制下咽癌的细胞生物学行为,说明STIM1是调控下咽癌发生发展的关键因子。     

小白菊内酯通过下调NOX4抑制结肠癌SW480细胞增殖和侵袭

目的:探讨小白菊内酯对人结肠癌细胞SW480增殖及侵袭的影响,并探讨其抗肿瘤的可能作用机制。方法:以不同浓度(5,10,15μmol·L^-1)小白菊内酯作用于体外培养的人结肠癌SW480细胞,以环磷酰胺(30μmol·L^-1)作为阳性对照。采用CCK8法以及平板克隆法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移及侵袭;免疫印迹法(Western blotting)检测NOX4蛋白以及增殖相关蛋白[β-连环蛋白(β-catenin)、G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、侵袭相关蛋白金属基质蛋白酶2(MMP-2)、金属基质蛋白酶9(MMP-9)蛋白]表达情况。结果:随着小白菊内酯浓度的增加,对SW480细胞增殖抑制率明显升高,与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);同一浓度作用下,随作用时间的延长,增殖抑制率显著升高(P<0.05),小白菊内酯10,15μmol·L^-1浓度组与阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组相比,小白菊内酯组克隆细胞形成数、侵袭、迁移细胞数、增殖相关蛋白β-catenin、Cyclin D1、侵袭迁移关蛋白MMP-2、MMP-9以及NOX4蛋白水平显著下降(P<0.05),且小白菊内酯各组间呈浓度依赖(P<0.05);与阳性对照组相比,小白菊内酯10,15μmol·L^-1浓度组以上各指标差异有统计学意义(P<0.05)。结论:小白菊内酯可能通过下调NOX4表达,抑制结肠癌细胞SW480细胞增殖、侵袭能力。     

siRNA 靶向沉默 Lipocalin-2基因下调 MMP-9表达对降低人肺癌 A549细胞的侵袭、迁移能力的影响

目的：利用针对 Lipocalin-2的小干扰 RNA（siRNA）,观察 Lipocalin-2基因沉默对人肺癌 A549细胞MMP-9表达及侵袭、迁移能力的影响。方法采用 Real-time PCR 和 Western blot 检测 Lipocalin-2在3种肺癌细胞株（A549、NCI-H661、NCI-H446）及正常人支气管上皮细胞（HBE）的表达情况。设计并构建靶向 Lipocalin-2的 siRNA 转染 A549细胞,采用 Real-time PCR 和 Western blot 检测转染效率及 Lipocalin-2基因沉默对 MMP-9 mRNA 和蛋白表达的影响。Transwell 小室检测细胞侵袭能力。细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 Lipocalin-2 mRNA 和蛋白在肺癌A549、NCI-H661、NCI-H446细胞株中的表达水平均显著高于 HBE 细胞,差异有统计学意义（ P ＜0.05）。siRNA-Li-pocalin-2转染组 Lipocalin-2 mRNA 和蛋白表达水平与阴性对照组和空载体对照组比较,差异有统计学意义（ P ＜0.05）;siRNA-Lipocalin-2转染组 MMP-9 mRNA 和蛋白表达水平与阴性对照组和空载体对照组比较,差异有统计学意义（ P ＜0.05）;siRNA-Lipocalin-2转染组穿膜细胞数、平均迁移距离与阴性对照组和空载体对照组比较,差异有统计学意义（ P ＜0.05）。结论 Lipocalin-2基因沉默通过下调 MMP-9表达降低了人肺癌 A549细胞的侵袭和迁移能力。     

FAK反义寡核苷酸对卵巢癌细胞凋亡、黏附和侵袭性的影响

目的观察黏着斑激酶的反义寡核苷酸对卵巢腺癌细胞株OVCAR-3凋亡、黏附和侵袭性的影响。方法实验分4组,反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、脂质体组、空白对照组。用脂质体介导的方法,将黏着斑激酶的反义寡核苷酸转入OVCAR-3卵巢癌细胞株,应用流式细胞仪AnnexinV/PI双染色法检测细胞的凋亡率,应用基质胶细胞黏附实验和Boyden小室法检测卵巢癌细胞的体外黏附和侵袭能力。结果 ASODN组卵巢癌细胞的凋亡率与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;ASODN组癌细胞与基质胶的粘附率与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;ASODN组癌细胞穿透Matrigel胶的细胞数目与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论抑制黏着斑激酶的表达能增加卵巢癌细胞株OVCAR-3的凋亡,并降低其黏附和侵袭转移能力。     

靶向MMP-9的siRNA抑制人类SGC7901胃腺癌细胞侵袭和迁移的研究

目的:探讨基质金属蛋白酶(MMP-9)siRNA对胃腺痛细胞系SGC7901中MMP-9表达的影响以及siRNA干扰后对SGC7901细胞侵袭和迁移的抑制作用.方法:设计合成针对MMP-9的siRNA,采用oligofectamine转染SGC7901胃腺癌细胞,分别采用实时定量聚合酶链反应(realtime PCR)和蛋白印迹法分别检测转染细胞后MMP-9mRNA及蛋白的表达.Matrgel 3D生长实验和Transwell实验检测细胞侵袭情况,Matrgel 2D生长实验和划痕实验检测细胞迁移情况.结果:realtime PCR和蛋白印迹法显示转染MMP-9 siRNA后细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的表达较空白组和对照组明显降低.RNA干扰MMP-9基因后SGC7901细胞的侵袭和迁移能力也有明显下降.结论:靶向MMP-9的siRNA不仅能特异性的降低MMP-9 mRNA及蛋白的表达,且能抑制人SGC7901胃腺癌细胞的侵袭和迁移.     

基质金属蛋白酶-9及基质金属蛋白酶-2与卵巢上皮性癌血管生成的关系

目的探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在卵巢上皮性癌血管生成中的作用。方法采用免疫组织化学（SP法）检测75例卵巢上皮性癌组织中MMP-9及MMP-2的表达,并检测其中微血管密度（MVD）。结果卵巢癌组织和卵巢良性肿瘤中MMP-9及MMP-2阳性表达率明显高于正常卵巢组织（P〈0．01）。MMP-9及MMP-2在卵巢癌组织中表达与MVD显著正相关（r=0．286,P〈0．05）。结论MMP-9及MMP-2可能在卵巢上皮性癌血管生成中起重要作用,MMP-9及MMP-2表达增强,其血管生成能力可能显著增强,但并非唯一决定因素。检测卵巢上皮性癌中MMP-9表达对进一步了解卵巢上皮性癌局部血管生成情况有一定应用价值。     

羟基喜树碱对人胆管癌QBC939裸鼠移植瘤MMP-2、TIMP-2的影响

目的探讨羟基喜树碱对人胆管癌QBC939裸鼠移植瘤的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)的影响,分析MMP-2及TIMP-2与肿瘤发生、发展的关系.方法建立人胆管癌QBC939细胞株裸鼠皮下移植瘤模型,将24只裸鼠随机分成对照组、干预组和实验组,分析移植瘤体生长情况,免疫组化法结合图像分析系统半定量检测瘤体内MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2的比值.结果与对照组比,实验组可使移植瘤体的MMP-2、TIMP-2含量增高,后者差异有统计学意义(P＜0.01);实验组可降低MMP-2/TIMP-2的比值和抑制移植瘤生长,差异有统计学意义(P＜0.01).结论实验组可降低移植瘤MMPV2/TIMP-2比值,对人胆管癌裸鼠移植瘤细胞外基质的降解可能具有抑制作用,进而抑制移植瘤的生长.     

下调 HOX转录反义 RNA对三阴性乳腺癌细胞 MDA-MB-231增殖、周期及侵袭能力的影响

目的 研究下调HOX转录反义RNA(HOTAIR)水平对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231增殖、周期及侵袭能力的影响.方法 si-HOTAIR对MDA-MB-231细胞转染,实验分为对照组、si-阴性对照组、si-HOTAIR组,实时荧光定量法测定转染后MDA-MB-231细胞中HOTAIR表达水平;分别用MTT法、流式细胞仪、Transwell小室实验测定转染后MDA-MB-231细胞活性、周期、侵袭能力;蛋白印迹法(WB)测定转染后MDA-MB-231细胞中c-myc、Ki-67、PCNA、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达水平.结果 与MCF-10A细胞组相比,对照组MDA-MB-231细胞中HOTAIR表达水平升高[(1.85±0.21)比(1.06±0.13),P<0.05].与对照组、si-阴性对照组相比,si-HOTAIR组MDA-MB-231细胞中HOTAIR表达水平(1.34±0.15)、细胞活性(98.04±6.28)％、侵袭能力(35.66±8.04)降低(P<0.05),细胞G0/G1期下调,阻滞在G2/M期;与对照组、si-阴性对照组相比,si-HOTAIR组MDA-MB-231细胞中c-myc、Ki-67、PCNA、MMP-9、MMP-2表达水平降低(P<0.05).结论 HOTAIR在MDA-MB-231细胞中高表达,下调HOTAIR表达水平可抑制MDA-MB-231细胞增殖、阻滞细胞周期、降低肿瘤细胞侵袭能力.     

MMP-9 的表达与胃癌浸润转移的相关性研究

目的探讨MMP-9的表达与胃癌浸润转移的关系。方法采用原位杂交法和免疫组化法,检测80例胃癌组织与60例癌旁正常胃粘膜组织中MMP-9mRNA及其蛋白的表达,根据组织学类型、浸润深度和有无淋巴结转移分类分析其与MMP-9表达水平的相关性。结果胃癌组织中MMP-9mRNA的阳性表达率为75%,MMP-9蛋白的阳性表达率为71.25%,而癌旁正常胃粘膜组织中MMP-9mRNA的阳性表达率为43.33%,MMP-9蛋白的阳性表达率为41.67%。胃癌组织中MMP-9mRNA及蛋白的阳性表达率均明显高于癌旁正常胃黏膜组织(P<0.05)。未侵及浆膜层的胃癌组织中MMP-9的mRNA和蛋白的阳性表达率分别为63.2%和57.9%;而侵及浆膜层的胃癌组织中MMP-9的mRNA和蛋白的阳性表达率分别为85.7%和83.3%,分别明显高于未侵及浆膜层的胃癌组织(P<0.05)。无淋巴结转移的胃癌组织中MMP-9的mRNA和蛋白的阳性表达率分别为64.4%和60.0%;而有淋巴结转移的胃癌组织中MMP-9的mRNA和蛋白的阳性表达率分别为88.6%和85.7%,分别明显高于无淋巴结转移的胃癌组织(P<0.05)。结论胃癌组织中MMP-9的mRNA和蛋白表达明显高于癌旁正常胃粘膜,MMP-9的阳性表达与胃癌的浸润和淋巴结转移均存在明显的相关性,可作为胃癌的诊断和预后评估的备选指标。     

miR-15a在子宫内膜癌组织中的表达变化及临床意义

目的 探讨miR-15a在子宫内膜癌组织中表达变化及临床意义,分析miR-15a在子宫内膜癌发生发展过程中的可能机制.方法 通过荧光定量PCR法测定68例子宫内膜癌组织和68例癌旁组织的miR-15a表达情况;分别将无关序列模拟物(非转染组)、miR-15a模拟物(转染组)转染入RL95-2人子宫内膜癌细胞,设立阴性对照组,比较3组的miR-15a和基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达情况;并通过Transwell肿瘤细胞侵袭试验和Transwell肿瘤细胞迁移试验检测RL95-2细胞的侵袭力和迁移能力.结果 子宫内膜癌组织miR-15a相对表达量明显低于癌旁组织(P<0.05);miR-15a相对表达量与子宫内膜癌患者的FIGO分期、淋巴结转移、肌层浸润程度、分化程度相关(P<0.05);转染组miR-15a相对表达量明显高于未转染组和对照组,MMP-2相对表达量明显低于未转染组和对照组(P<0.05);转染组侵袭力与迁移力均明显低于未转染组和对照组(P<0.05).结论 在子宫内膜癌患者中miR-15a以低表达为主,且与淋巴结转移、分化程度、肌层浸润程度、FIGO分期有关,miR-15a作为抑癌基因可能是通过抑制MMP-2蛋白发挥抑制癌细胞转移及侵袭的作用.     

VEGF及其受体与MMP-9在卵巢上皮性癌中的表达

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）及其受体、MMP-9的表达在卵巢上皮性癌侵袭转移方面的作用。方法：免疫组化SABC法检测VEGF及其受体、MMP-9蛋白的表达，并对VEGF、MMP-9蛋白表达及其相互关系进行秩和检验、Spearman等级分析，采用Kaplan-Meier分析进行生存分析。结果：VEGF广泛表达于卵巢上皮性癌的瘤细胞胞浆中，疾病晚期、分化差、腹水量多、残余瘤组织多的患者表达增强；VEGF受体表达于卵巢癌血管内皮细胞的胞浆．尤其是靠近癌巢处的内皮细胞；MMP-9表达于卵巢上皮性癌的间质细胞，疾病晚期、分化差的患者表达增强：VEGF与MMP-9在卵巢上皮性癌中的表达呈正相关。结论：VEGF与MMP-9在血管生长和局部侵袭及远处转移中可能有协同作用。     

GnRH激动剂对人卵巢癌裸鼠移植瘤抑制作用及不良反应的研究

目的 研究GnRH激动剂对人卵巢癌裸鼠移植瘤抑制作用及副作用.方法 将人卵巢癌细胞OVCAR3注射入裸鼠腹腔内,构建移植瘤模型.将裸鼠随机分为3组,OVCAR3对照组、低剂量曲普瑞林组(75μg)和高剂量曲普瑞林组(150 μg).镜下观察曲普瑞林对全身及腹腔各脏器的毒副作用并测定对内分泌的影响.结果 高剂量曲普瑞林组...     

上皮性卵巢癌Rac1b表达水平与TP方案新辅助化疗疗效的相关性研究

目的分析上皮性卵巢癌组织中Rac1b表达水平与TP方案新辅助化疗临床疗效的关系。方法收集上皮性卵巢癌组织标本20例,按照是否采用新辅助化疗手段治疗分为实验组与对照组,其中实验组9例,对照组11例。比较采用TP方案新辅助化疗后手术切除上皮性卵巢癌组织与直接手术切除上皮性卵巢癌组织中Rac1b表达水平,并对两组患者开展为期18个月的随访观察,比较两组患者临床疗效与Rac1b表达水平之间的关系。结果实验组Rac1b阳性面积百分率(%)为37.2±5.3,对照组Rac1b阳性面积百分率(%)为6.9±1.1,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组中位生存时间为15.9±2.7个月,对照组中位生存时间为16.7±3.1个月,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。对两组患者在随访12个月进行临床疗效分析,结果显示实验组有效率为55.6%,对照组有效率为54.5%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Rac1b的表达水平与化疗药物的使用间存在较为明确的关联。     

MBP-1 C-myc及MMP-9在大肠癌组织中的表达及意义

目的 探讨大肠癌组织中MYC启动子结合蛋白1（MBP-1）的表达与临床病理学特征的关系，分析MBP-1蛋白和C-myc、基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的相互关系。方法 应用免疫组织化学法检测84例大肠癌组织和40例大肠腺瘤组织中MBP-1、C-myc、MMP-9的表达情况，并从84例大肠癌患者中取40例癌旁组织作为对照。结果 大肠癌组织中MBP-1阴性表达率高于腺瘤组织和癌旁对照组织（P<0.05），表达强度也低于腺瘤组织和癌旁对照组织（P<0.05）；腺瘤组织中MBP-1阳性表达率和表达强度与癌旁对照组织相比差异无统计学意义（P>0.05）。大肠癌组织中C-myc阳性表达率和表达强度高于癌旁对照组织（P<0.05）；大肠癌组织中MMP-9蛋白阳性表达率（58.3%）高于癌旁对照组织（12.5%），差异有统计学意义（P<0.05）。MBP-1表达和C-myc表达呈负相关，与MMP-9表达无相关性。TNM分期低、有淋巴结转移的组织MBP-1表达强度低于TNM分期高、无淋巴结转移的组织（P<0.05）。结论 MBP-1、C-myc和MMP-9可能共同参与了大肠癌的发生发展。     

上皮性卵巢癌患者溶血磷脂酸与MMP-2表达及相关性研究

目的:评价溶血磷脂酸(LPA)对上皮性卵巢癌(EOC)的诊断价值及可能的机制。方法:选取80例确诊的EOC患者、40例良性卵巢瘤患者和30例健康女性,检测其血浆LPA和CA-125水平并进行比较;采用双抗体夹心(ELISA)法检测血清基质金属蛋白酶(MMP)-2水平,对LPA和MMP-2表达进行相关分析。结果:EOC患者LPA与CA-125水平均高于良性卵巢肿瘤患者和正常对照者;LPA检测EOC的敏感性和特异性均高于CA-125(P<0.05);MMP-2在上皮性卵巢癌患者表达高于良性卵巢肿瘤患者和正常对照者(P<0.05),且两者存在正相关(r=3.54,P<0.05)。结论:LPA对上皮性卵巢癌的早期诊断具有重要价值,其介导卵巢癌的发病与转移可能通过影响MMP-2的途径。     

骨桥蛋白在人膀胱癌细胞迁移、侵袭和对阿霉素敏感性中的作用

目的探讨骨桥蛋白在人膀胱癌细胞迁移、侵袭和对阿霉素敏感性中的作用。方法运用MTT比色法比较瞬时转染骨桥蛋白编码基因siRNA的T24细胞(实验组)、转染空质粒的T24细胞(阴性对照组)以及正常T24细胞(正常对照组)对阿霉素的敏感性。通过粘附实验、划痕实验和Transwell法比较各组细胞粘附、迁移和侵袭能力。结果实验组骨桥蛋白编码基因的mRNA水平显著低于阴性对照组和正常对照组(P<0.05)。阿霉素对实验组细胞的IC50约为0.0571mg·L-1,阴性对照组细胞的IC50为3.756mg·L-1,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组细胞粘附能力明显低于阴性对照组,在48h内的迁移距离显著大于阴性对照组,侵袭细胞的数量是对照组的3.6倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论骨桥蛋白对膀胱癌的侵袭、转移能力及其对阿霉素的敏感性均起着重要的调节作用。