救脑宁注射液对神经细胞凋亡

目的:研究神经细胞经缺氧/缺糖培养诱导的凋亡发生、胞内钙离子变化及救脑宁注射液的治疗作用。方法:碘化丙啶染色,流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率;Fluo-3负载,流式细胞仪检测胞内钙平均荧光值变化。结果:缺氧/缺糖培养可诱导神经细胞凋亡和引起细胞内钙离子增高。救脑宁注射液能抑制细胞凋亡、降低细胞内游离钙离子浓度。结论:救脑宁注射液能抑制缺氧/缺糖诱导的神经细胞凋亡及钙超载,有神经细胞保护作用。     

家蝇幼虫抗茵肽粗提物对人肝癌HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响

本文从肿瘤细胞凋亡及作用机制的角度出发初步探讨了家蝇幼虫抗菌肽粗提物对人肝癌HepG2细胞的影响.采用Hoechst 33258荧光染色法在荧光显微镜下观察家蝇抗菌肽对HepG2细胞形态学的影响.并通过流式细胞术分别观察家蝇抗菌肽粗提物对HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响.Hoechst 33258荧光染色法结果显示家蝇抗菌肽粗提物作用于HepG2细胞48h后能够引起细胞核发生核凝聚、染色质趋边化、核碎裂等凋亡形态学的改变;流式细胞仪检测结果显示家蝇抗菌肽粗提物能够诱导HepG2细胞发生凋亡、线粒体膜电位下降、细胞内钙离子浓度增加的现象.因此,我们推测家蝇抗菌肽可能通过增加HepG2细胞内钙离子,降低线粒体膜电位,进而诱导细胞凋亡的发生.     

氧化应激诱导HepG2肝癌细胞凋亡的研究(英)

目的：直接暴露细胞于活性氧能诱导发生凋亡，本文研究氧化应激诱导HepG2肝癌细胞的死亡及其机制。方法：暴露细胞于2 mmol/L过氧化氢产生氧化应激，用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡，用荧光染色法检测细胞线粒体膜电位变化，Western blotting检测细胞浆中细胞色素c变化，fluorometric assay kit检测caspase活性变化。结果：氧化应激作用于HepG2细胞后12 h开始发生凋亡；氧化应激作用后4 h，细胞线粒体膜电位明显下降；胞浆中细胞色素c浓度呈时间依赖性增高；氧化应激作用8 h、12 h后细胞内caspase-3、caspase-9活性分别升高6.7及3.6倍，但caspase-8活性无变化。结论：氧化应激能诱导HepG2肝癌细胞发生凋亡，其途径与线粒体通路及caspase激活有关。     

家蝇幼虫抗菌肽粗提物对人肝癌HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响

本文从肿瘤细胞凋亡及作用机制的角度出发初步探讨了家蝇幼虫抗菌肽粗提物对人肝癌HepG2细胞的影响。采用Hoechst 33258荧光染色法在荧光显微镜下观察家蝇抗菌肽对HepG2细胞形态学的影响。并通过流式细胞术分别观察家蝇抗菌肽粗提物对HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响。Hoechst 33258荧光染色法结果显示家蝇抗菌肽粗提物作用于HepG2细胞48h后能够引起细胞核发生核凝聚、染色质趋边化、核碎裂等凋亡形态学的改变;流式细胞仪检测结果显示家蝇抗菌肽粗提物能够诱导HepG2细胞发生凋亡、线粒体膜电位下降、细胞内钙离子浓度增加的现象。因此,我们推测家蝇抗菌肽可能通过增加HepG2细胞内钙离子,降低线粒体膜电位,进而诱导细胞凋亡的发生。     

Changes of calcium release in myocardial sarcoplasmic reticulum during heart failure

目的:探讨慢性心力衰竭时心肌细胞肌浆网内钙离子释放的变化.方法:采用冠状动脉左前降支结扎法制备大鼠慢性心衰模型,酶解法分离成年大鼠心室肌细胞.用全细胞模式膜片钳技术和共聚焦显微镜钙成像技术同步实时记录心肌细胞的L-型钙电流以及胞质内的钙瞬变.结果:心衰组的钙诱导钙瞬变幅度小于对照组,并且心衰组的咖啡因诱导钙瞬变幅度也低于对照组.结论:心力衰竭的发生与心肌细胞内钙离子释放变化有着十分密切的关系.     

内质网应激与prion疾病

1 引言 内质网(endoplasmic reticulum, ER)是真核细胞中钙离子贮存库,也是调节蛋白质合成及合成后加工、折叠和聚集的场所,是一种重要的细胞器.近年来,在生物医学研究领域中出现了一个新概念-"内质网应激"(ER stress),即:在饥饿、影响钙离子平衡的药物、影响蛋白质翻译后修饰、结构异常蛋白堆积以及一些有害因素等的诱发下,导致细胞内质网内稳态失衡、生理功能发生紊乱的一种亚细胞器的病理过程[1].     

低温存活猫肾亚细胞Ca2+浓度变化的X-射线微区分析

随着肾离体低温保存时间的延长，细胞内钙离子沉积而导致细胞损伤，影响肾脏整体功能的保存情况以及移植后肾脏的存活率，本地家猫肾脏离体后冲洗至灰白，然后置于改良Collins II保存液中低温存活，保存0，24，48，72h以后，应用Ca^2 细胞化学探针（Calcium cytochemical probe)及X－射线微区分析技术（X－ray microanalysis of microsections)检测肾小管上皮细胞亚细胞水平的钙离子浓度变化，肾脏经过不同时间体外存活以后，细胞核和内质网中钙离子浓度没有明显的变化，而线粒体和细胞溶质中钙离子浓度显著地呈现出线性升高，结果表明，随着肾脏保存时间延长，细胞溶质钙离子浓度升高源于细胞内储存的钙离子释放，正常生理条件下在细胞信息传递中充当“钙库”的线粒体和内质网在低温导致的细胞溶质内钙离子浓度上升中不表现出钙源特性。     

应激颗粒功能的研究进展

应激颗粒（stress granules,SGs）是应激时在细胞浆内形成的RNA颗粒聚集。尽管已经报道了许多类型的应激能够诱导SGs形成,但SGs在人类疾病发展中的作用知之甚少。GTP酶激活蛋白SH3结合蛋白1能够调节信号传导和RNA代谢,在SGs的装配及功能中发挥了关键作用。SGs具有降低钙超载,抑制炎症与氧化应激,抑制凋亡与纤维化的作用。此外,还可能参与房颤的病理生理过程,这为进一步探究房颤机制和治疗靶点提供了新的思路。     

橙皮素通过抑制钙超载减轻低氧/复氧诱导的心肌 H9c2细胞凋亡

目的:本研究旨在探讨橙皮素对低氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的心肌H9c2细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:建立心肌H9c2细胞H/R模型,使用橙皮素进行预处理,利用CCK-8和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒分别测定细胞活力和损伤情况;Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Fluo-3AM孵育后观察细胞内的钙离子荧光强度;细胞Ca~(2+)-ATP酶活性与三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)水平测定利用相应的ELISA试剂盒;利用JC-1染色检测线粒体膜电位;采用Western blot测定Bcl-2、Bax和细胞色素C(cytochrome C, Cyt-C)的蛋白表达水平。结果:橙皮素预处理可明显逆转H/R所致心肌H9c2细胞活力降低,并且减少细胞的凋亡率,降低细胞内钙离子的荧光强度,提高细胞Ca~(2+)-ATP酶活性,抑制线粒体膜电位去极化并提升ATP的水平(P0.05),同时抑制Cyt-C蛋白从线粒体释放入胞浆并增加线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的比值(P0.05);而给予钙离子拮抗剂尼莫地平后,与H/R组相比,线粒体膜电位去极化程度减轻,ATP获得提升并且线粒体凋亡相关蛋白表达降低(P0.05)。结论:橙皮素可抑制H/R诱导的心肌H9c2细胞凋亡,其机制可能与减轻钙超载从而改善线粒体功能有关。     

心肌细胞钙稳态失调在心力衰竭中作用的研究进展

心肌细胞的钙稳态依赖于质膜、肌/内质网(SR)、线粒体等对钙(Ca2+)转运的调节.胞质钙超载、SR钙渗漏等在内的钙稳态失调,使心肌细胞钙瞬变减低,收缩力下降是心力衰竭的主要特征之一.     

重组灵芝免疫调节蛋白抑制HL60细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的:探讨重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)对HL60细胞抑制作用及诱导凋亡的研究。方法:采用MTT法检测rLZ-8对HL60细胞的体外杀伤作用;通过Annexin V/PI双染检测细胞凋亡率;应用钙离子荧光探针Fluo-3/AM染色,检测rLZ-8作用HL60细胞后细胞内钙离子浓度变化;分光光度法测定细胞caspase-3活性。结果:rLZ-8可明显抑制HL60细胞增殖,随着rLZ-8浓度增加,细胞凋亡率也增加;激光共聚焦检测细胞内钙离子水平明显升高,并且细胞内caspase-3活性增高。结论:rLZ-8可诱导HL60细胞发生凋亡,细胞内钙超载及caspase-3活性增高可能是rLZ-8诱导HL60细胞凋亡的途径之一。     

内质网应激反应介导细胞凋亡的机制研究进展

内质网是细胞内重要的细胞器 ,参与蛋白质翻译后的修饰、折叠和寡聚化 ,还参与脂质代谢和类固醇激素的合成、钙的储存 ,未折叠或错误折叠蛋白的增多、胞内钙的失衡引起的内质网的应激反应 ,以及由过强的内质网应激反应诱导的细胞凋亡 ,这是与死亡受体和线粒体介导细胞凋亡不同的一条途径 ,主要由caspase 12活化引起caspase级联反应所介导。     

用共聚集显微镜测量细胞内游离钙

钙离子是细胞内的第二信使， 在细胞的生命活动中起着重要作用， 它参与调节细胞功能， 如肌肉收缩、细胞运动、信息传递、物质代谢等。胞内钙离子大部分为结合钙， 主要贮存于肌浆网、内质网和线粒体等细胞器的钙库内。 胞浆内的游离钙作为第二信使，广泛参与、调节多种生理和病理过程，测定胞浆内游离钙在生理、病理和药理学上均具有重要意义。 用共聚焦显微镜可以对胞内游离钙进行定位、定量分析， 并能监测其动态变化。 本文主要介绍用共聚焦显微镜测量细胞内游离钙的原理、方法和意义。     

钙离子超载对低温保存人肝细胞的损伤作用

目的　研究分离培养的成人肝细胞在低温保存状态下 (0～ 4℃ )的钙离子代谢特点和钙离子超载的损伤作用机理。方法　成人肝脏细胞分离和培养 ,用钙离子荧光探针检测保存液的钙离子浓度。结果　低温保存下 ,细胞内游离钙离子迅速升高 ,逐渐达到稳态水平 ,随细胞内钙离子的升高 ,细胞的存活率也逐渐下降 ,但在含0 .5 m MCa Cl2 的保存液组 ,保存效果明显好于其它两组 ;在含 1.5 m MCa Cl2 的保存液组 ,继发的钙离子超载峰值出现早而且要高于原发的钙超载峰。结论　低温保存可以引起成人肝细胞的钙超载 ,细胞外钙是细胞钙超载的主要来源 ,继发超载是缺血再灌注损伤的主要原因     

蒺藜皂苷对缺氧/复氧诱导大鼠皮层神经元凋亡及细胞内钙变化的作用

目的： 观察蒺藜皂苷(TTLS)对缺氧/复氧诱导的大鼠皮层神经元凋亡及细胞内游离钙离子浓度变化的影响。方法： 原代培养大鼠皮层神经元，建立缺氧/复氧损伤的皮层神经元凋亡模型。比色法测定细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放漏出率；Annexin V-FITC/PI双染，流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率；Fluo-3荧光染色，激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙平均荧光值变化。结果： 缺氧3 h复氧12 h可诱导出皮层神经元凋亡，引起细胞内钙离子浓度增高,高于对照组（P<0.01）。蒺藜皂苷(0.025 g/L)能明显降低缺氧/复氧诱导的神经元凋亡，并可降低细胞内钙浓度,与模型组比较有显著差异（P<0.01）。结论： 蒺藜皂苷可降低由缺氧/复氧诱导的皮层神经元的凋亡，减轻细胞损伤，这种作用机制可能与其抑制神经细胞内钙超载有关。     

软骨细胞凋亡与内质网应激

背景：软骨细胞的凋亡最终会导致骨关节炎的发生。目前发现的软骨细胞凋亡机制有很多,但内质网应激引起其凋亡的机制尚处于初始阶段。目的：综述分析内质网应激如何引起软骨细胞凋亡,并探寻骨关节炎治疗的新方法。方法：第一作者通过计算机检索,检索了PubMed、CNKI、万方数据库2000年1月至2015年1月的相关文献。使用PubMed检索时,输入检索词“endoplasmic reticulum stress,chondrocyte,apoptosis”之间以“AND”形式连接,使用CNKI、万方数据库检索时,输入主题词“内质网应激,软骨细胞,凋亡”之间以“并且/与”连接,选择模糊查询进行检索。选择文章内容涉及骨关节炎的文献,较多采用近期发表在权威杂志上的相关文献。结果与结论：初检得到中英文文献共计62篇,其中57篇符合纳入标准,对其进行综述。PERK、IRE1和ATF6三条信号通路对软骨细胞同样有重要作用。内质网应激介导的细胞凋亡机制有未折叠蛋白质反应和Ca²⁺起始信号2种,但具体机制及凋亡途径间的交叉作用还未明了。若从上述信号通路中探索软骨细胞凋亡效应的抑制分子,并将其作为治疗骨关节炎的靶点,可能会为治疗骨关节炎提供新的方法。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

慢性心衰大鼠心肌细胞内雷尼丁受体及集钙蛋白的表达

目的:研究慢性心衰大鼠心肌细胞内雷尼丁受体(RyR2)及其调节蛋白集钙蛋白的表达,探讨心衰心肌细胞内钙容量降低的机制。方法:雄性SD大鼠被随机分为心衰组和假手术组,运用激光扫描共聚焦显微镜、透射电子显微镜、免疫印迹等方法研究2组大鼠心肌细胞肌浆网内钙容量、心肌细胞超微结构及心肌细胞内肌浆网钙释放通道RyR2和其调节蛋白集钙蛋白表达的变化。结果:慢性心衰大鼠心功能左心室舒张末期压力、左室压力最大上升速率均显著低于假手术组。假手术组大鼠心肌细胞的肌小节完整,肌丝排列整齐,线粒体结构正常;心衰组大鼠部分心肌细胞肌丝溶解,线粒体肿胀,嵴断裂。慢性心衰大鼠心肌细胞肌浆网内钙容量显著低于假手术组。慢性心衰大鼠心肌细胞内RyR2的表达量无明显变化,集钙蛋白表达明显下降。结论:慢性心衰大鼠心肌细胞内集钙蛋白表达下调,可能是导致心肌细胞肌浆网钙容量减少的原因之一。     

纳秒级陡脉冲电场诱导癌细胞凋亡的实验及作用机理研究

观察纳秒级陡脉冲电场诱导人浆液囊腺性卵巢癌SKOV3癌细胞凋亡效应,及其对细胞内钙离子浓度即[Ca2＋]i的影响并探讨其作用机理。采用场强为10kV/cm、脉宽为100ns、重复频率为1Hz的纳秒级陡脉冲电场作用于SKOV3癌细胞悬液5min。4h后采用Annexin V-FITC/PI双标记并结合流式细胞仪分析SKOV3癌细胞的凋亡率,采用扫描和透射电子显微镜观察癌细胞凋亡的超微结构变化;以Fluo-3/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用激光扫描共聚焦显微镜检测纳秒级陡脉冲电场对SKOV3癌细胞[Ca2＋]i的影响,及[Ca2＋]i变化时的Ca2＋来源。结果显示,流式细胞术检测到癌细胞的早期凋亡率为（22.21&#177;2.71）%,明显高于对照组的（3.04&#177;0.44）%（P〈0.01）,扫描和透射电子显微镜均观察到典型的凋亡细胞形态,证实纳秒级陡脉冲电场能够有效诱导SKOV3癌细胞发生凋亡;同时纳秒级陡脉冲电场可明显升高细胞[Ca2＋]i（P〈0.01）,而与细胞外钙离子浓度无关（P〉0.05）。由于纳秒级陡脉冲电场的等值频率很高,容易穿透细胞膜,其诱导凋亡的机制之一可能是通过激活细胞内钙库（内质网、线粒体）,引起细胞内钙离子升高,从而介导凋亡信号通路。     

钙网蛋白在心肌组织细胞氧化应激与缺血损伤构建中的表达与应用

背景：生物体内钙网蛋白具有调节细胞凋亡、应激、心血管炎症反应等多种生理和病理生理过程的功能。 目的：分析钙网蛋白在缺血再灌注损伤中的表达与应用。 方法：由作者检索1996/2010 PubMed数据库与中国知网数据库有关钙网蛋白结构、功能及在自身免疫、心脏发育中的作用、在缺血缺氧过程中表达的变化等方面的文献后,对钙网蛋白在氧化应激与缺血损伤中的表达变化进行了实验观察。 结果与结论：钙网蛋白通过协助蛋白质正确折叠和维持细胞内Ca2+稳态而参与调节细胞凋亡、黏附、类固醇敏感基因表达等,在心脏发生、发育和病理变化中发挥着重要作用。作者应用大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,通过酶联免疫吸附试验、免疫组织化学及RT-PCR 3种不同的检测方法,观察了钙网蛋白在心肌缺血再灌注损伤中的表达,结果显示缺血再灌注损伤诱导钙网蛋白高表达,进而激活内质网凋亡信号途径,诱导细胞损伤,加重心肌损伤。     

活性氧影响牙周炎发生发展及牙周组织再生

背景：活性氧在牙周炎发生发展和牙周组织再生过程中发挥双刃剑作用，低浓度的活性氧诱导牙周膜成纤维细胞的分化，过量的活性氧会造成牙周组织损伤。炎症发生时，牙周组织中的活性氧聚集，通过多种细胞信号通路或通过氧化还原反应诱导细胞和组织的损伤。目的：对活性氧在牙周炎发生发展及牙周组织再生中的双刃剑效果进行综述，为临床治疗牙周炎及促进牙周组织再生提供潜在靶点及治疗思路。方法：通过检索1990年4月至2023年4月PubMed及中国知网数据库，英文检索词为“periodontal tissue engineering,periodontal defect,regeneration of periodontal tissue,chronic periodontitis,reactive oxygen species,oxidative stress,antioxidative stress,oxidative injuries,free radicals,reactive nitrogen species”，中文检索词为“牙周组织工程，牙周缺损，牙槽骨丧失，牙周组织再生，牙周炎，破骨细胞，氧化应激，抗...