利用膜片钳技术对急性分离小鼠螺旋神经节神经元的电生理研究

目的 探讨小鼠螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons，SGN)的电生理特性。方法 应用全细胞电压钳技术对急性酶分离的小鼠耳蜗SGN细胞膜上的离子通道电流进行记录和分析。结果 在SGN细胞膜上记录到对氯化四乙胺、4-氨基吡啶敏感的外向延迟整流钾电流和瞬时钾电流，以及对河豚毒素敏感的内向钠电流。并且离子通道活动具有明显的电压依赖性，在没有记录到钠电流的细胞记录到延迟整流钾电流。结论 急性酶分离的小鼠耳蜗SGN细胞的电生理特性可为听觉传导机制的研究提供了重要的参考，并指导下一步通道药理学的研究。     

利用膜片钳技术对急性分离小鼠螺旋神经节神经元的电生理研究

目的 探讨小鼠螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons SGN)的电生理特性。方法 应用全细胞电压钳技术对急性酶分离的小鼠耳蜗SGN细胞膜上的离子通道电流进行记录和分析。结果 在SGN细胞膜上记录到对氯化四乙胺、4-氨基吡啶敏感的外向延迟整流钾电流和瞬时钾电流,以及对河豚毒素敏感的内向钠电流。并且离子通道活动具有明显的电压依赖性,在没有记录到钠电流的细胞记录到延迟整流钾电流。结论 急性酶分离的小鼠耳蜗SGN细胞的电生理特性可为听觉传导机制的研究提供了重要的参考,并指导下一步通道药理学的研究。     

豚鼠耳蜗血管纹边缘细胞钾离子通道特性的研究

目的 研究单个豚鼠耳蜗血管纹边缘细胞的基本电生理特性。方法 应用耳蜗血管纹组织块培养技术和全细胞膜片钳技术，观察单个培养的豚鼠血管纹边缘细胞在电压钳模式下的电流特性。结果 边缘细胞上记录到钾离子电流，该钾通道有以下特性：①具有电压依赖性；②通道的活动可被4-氨基吡啶（4-aminopyridine，4-AP）和四乙铵（tetraethylammonium，TEA）在相对高浓度下阻滞；③细胞外钙离子浓度的减少可导致该钾通道电流的降低。结论 豚鼠耳蜗血管纹边缘细胞钾离子通道电流包括钙离子依赖性钾电流、外向延迟整流钾电流和A型钾电流。     

豚鼠耳蜗单离Deiters细胞的钾电流

目的　研究豚鼠耳蜗单离Deiters细胞的钾电流及其特性。方法　运用膜片钳技术 ,在全细胞模式下记录正常细胞外液中钾电流 ,不同K 浓度的细胞外液对细胞反转电位和外向钾电流的影响 ,四氨基吡啶 (4 aminopyridine ,4 AP)和四乙基胺 (tetraethylammonium ,TEA)对钾电流成分的阻滞作用 ,探讨外向钾电流通道的激活和失活动力学。结果　单离Deiters细胞具有电压依赖的外向整流离子选择性通道 ;钾通道阻滞剂 4 AP和TEA可使峰电流和迟电流幅度下降 ,表明存在两种类型的钾通道 ,或者这种通道有两种不同的状态 ;通道的激活和失活符合Boltzmann方程。未记录到Deiters细胞的内向钙电流。结论　Deiters细胞外向整流钾电流的作用可能是缓冲细胞周围间隙钾离子浓度     

小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电生理学特性的研究

目的：应用膜片钳技术记录小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的全细胞电流,了解电压依赖性离子通道的基本电生理学特性,并比较耳蜗顶、底转螺旋神经节细胞电生理学特性的差异。方法：应用全细胞构型电压钳制技术,采用不同的电极内液及阻断剂,在不同的刺激参数下记录耳蜗顶、底转螺旋神经节细胞的电压依赖性离子通道电流,并进行分析比较。结果：实验记录到了内向的钠电流、延迟整流钾电流、超极化激活内向阳离子通道电流及瞬时外向钾电流,并发现耳蜗顶、底转螺旋神经节细胞的延迟整流钾电流及瞬时外向钾电流的电生理学特性具有显著性差异（P〈0．05）。结论：实验记录到的各种离子电流数据表明耳蜗螺旋神经节细胞具有完成动作电位的形成、传导并对其功能进行调节的离子通道基础;耳蜗顶、底转螺旋神经节细胞电生理学特性的差异有助于听觉的形成过程。     

利诺吡啶对豚鼠耳蜗外毛细胞和支持细胞钾电流的影响

目的　观察KCNQ家族钾通道特异性阻滞剂利诺吡啶 (linopirdine)对豚鼠耳蜗单离外毛细胞和Deiters细胞 (支持细胞 )总钾电流的影响 ,初步探讨KCNQ家族钾通道在耳蜗外毛细胞和Deiters细胞的分布。方法　运用膜片钳技术 ,在全细胞模式下记录正常细胞外液中 8个外毛细胞和5个Deiters细胞的总钾电流 ,并观察 10 0 μmol/L利诺吡啶对外毛细胞和Deiters细胞总钾电流的影响。结果　在正常细胞外液中 ,单离外毛细胞可记录到四乙基二乙胺敏感的外向性钾电流和静息膜电位附近激活的内向性钾电流 (theK+ currentactivatedatnegativepotential,IKn)两种钾电流 ,而单离Deiters细胞中只记录到外向整流性钾电流。加入 10 0 μmol/L利诺吡啶后 ,外毛细胞中的四乙基二乙胺敏感的钾电流减小 ,IKn被完全抑制 ;而Deiters细胞中的外向整流性钾电流大小无变化。结论KCNQ家族钾通道存在于豚鼠耳蜗外毛细胞 ,其介导的钾电流是四乙基二乙胺敏感的钾电流的组成部分 ,并构成全部的IKn;但KCNQ家族钾通道不存在于豚鼠耳蜗Deiters细胞。     

顺铂对大鼠耳蜗螺旋神经节细胞外向延迟整流钾电流的影响

目的:观察记录顺铂作用下急性分离新生大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(SGNs)延迟整流钾通道的电流曲线,分析顺铂对SGNs钾电流激活动力学的影响,并初步探讨其耳毒性机制。方法:采用全细胞膜片钳技术记录SGNs外向延迟整流钾电流及顺铂对此电流的影响。结果:钳制电压为-60mV,刺激电压从-60mV到 80mV逐渐去极化,阶跃电压为10mV,持续时间为500ms,可在SGNs上记录到外向钾电流,该电流对TEA-Cl(4-乙基胺)敏感,具有延迟整流特性;在细胞外液中加入10μmol/L顺铂,能明显抑制SGNs延迟整流钾电流;顺铂对此电流的抑制作用与细胞外液中顺铂的浓度呈剂量依赖性;外液洗脱后SGNs电流可基本恢复正常。结论:钾通道与SGNs动作电位的产生密切相关,顺铂可抑制SGNs钾通道电流,导致听觉功能障碍。     

豚鼠耳蜗单离Deiters细胞的钾电流

目的 研究豚鼠耳蜗单离Ｄｅｉｔｅｒｓ细胞的钾电流及其特性。方法 运用膜片钳技术,在全细胞模式下记录正常细胞外液中钾电流,不同Ｋ＾＋浓度的细胞外液对细胞反转电位和外向钾电流的影响,四氨基吡啶（４－ａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｉｎｅ,４－ＡＰ）和四乙工胺（ｔｅｔｒａｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ,ＴＥＡ）对钾电流成分的阻滞作用,探讨外向钾流通道的激活和失活动力学。结果 单离Ｄｅｉｔｅｒｓ细胞具有电压依赖的外向整流     

豚鼠耳蜗单离外毛细胞的外向整流钾电流

目的 :观察豚鼠耳蜗单离外毛细胞 (OHC)的电生理特性 ,记录不同长度OHC的外向整流钾电流 ,分析区分外向整流钾电流所包含的通道电流成分 ,研究外向整流钾电流的动力学特征。方法 :采用酶消化法及机械分离OHC。运用全细胞膜片钳技术 ,在电压钳下记录K+ 通道电流。结果 :OHC的全细胞膜电容为 (30 .96±2 .79) pF(n =2 9) ,零电流电位 (30± 2 .1)mV(n =16 ) ,反转电位为 (- 5 1.6 7± 1.84 )mV(n =9)。不同长度OHC的外向整流钾电流存在系统差异 ,短OHC表现出大的钾电导 ,长OHC则相反。 10 0 μmol/L的氯化镉 (Cd Cl2 )抑制了OHC外向整流钾电流的最大电流幅度的 6 0 % ,且改变了电流的动力学特征 ,对峰电流的影响明显大于稳态电流 (P<0 .0 1,n =5 ) ;1mmol/L的四氨基吡啶 (4 AP)抑制了最大电流幅度的 4 3% ,没有改变电流的动力学特征。外向整流钾电流的激活符合Boltzmann方程 ,V1/ 2 =(- 11.0 7± 0 .2 6 )mV ,S =(6 .6 2± 1.74 )mV(n=13)。结论 :外向整流钾电流包含有钙离子激活的钾离子电流、外向延迟整流钾电流和A型电流     

利诺吡啶对豚鼠耳蜗外毛细胞和支持细胞钾电流的影响

目的 观察KCNQ家族钾通道特异性阻滞剂利诺吡啶(linopirdine)对豚鼠耳蜗单离外毛细胞和Deiters细胞(支持细胞)总钾电流的影响，初步探讨KCNQ家族钾通道在耳蜗外毛细胞和Deiters细胞的分布。方法 运用膜片钳技术，在全细胞模式下记录正常细胞外液中8个外毛细胞和5个Deiters细胞的总钾电流，并观察100μmol／L利诺吡啶对外毛细胞和Deiters细胞总钾电流的影响。结果 在正常细胞外液中，单离外毛细胞可记录到四乙基二乙胺敏感的外向性钾电流和静息膜电位附近激活的内向性钾电流(the K^ current activated at negative potential，IKn)两种钾电流，而单离Deiters细胞中只记录到外向整流性钾电流。加入100μmol／L利诺吡啶后，外毛细胞中的四乙基二乙胺敏感的钾电流减小，IKn被完全抑制；而Deiters细胞中的外向整流性钾电流大小无变化。结论 KCNQ家族钾通道存在于豚鼠耳蜗外毛细胞，其介导的钾电流是四乙基二乙胺敏感的钾电流的组成部分，并构成全部的IKn；但KCNQ家族钾通道不存在于豚鼠耳蜗Deiters细胞。     

牛蛙球囊毛细胞钙离子通道

用细胞贴附式膜片钳技术在牛蛙内耳球囊的单离毛细胞侧膜记录到两种单通道钙电流。Ｌ型钙通道的电导为２６ｐＳ，在去极化电压下仍可激活，活化范围为－１０～＋４０ｍＶ，硝苯吡啶类药物对其有特异性激活或抑制作用。另一种钙通道的电导为２０ｐＳ，在－８０ｍＶ或－４０ｍＶ均可激活，活化范围为－５０～＋１０ｍＶ，硝苯吡啶类药物无作用。此通道的性质待定，疑系Ｎ型钙通道。     

Nicotine-induced Endocytosis of Amiloride-sensitive Sodium Channels in Human Nasal Epithelium

In previous studies we developed and introduced a method to examine the transport mechanisms of ions in primary cell cultures of human nasal epithelium. In the current study, substances, especially nicotine, that influence these mechanisms are investigated. Specimens of nasal and paranasal epithelium of patients treated by endonasal surgery because of chronic sinusitis (     

去氨加压素对耳蜗功能及上皮钠通道表达的调节作用

目的研究去氨加压素DDAVP调节豚鼠耳蜗功能及上皮钠通道蛋白α亚基(α-ENaC)的表达,探讨其在内淋巴积水中的作用。方法将24只豚鼠随机分为3组,分别给予0、5、10天DDAVP,通过耳蜗电图(ECochG)检测耳蜗功能学改变。应用苏木素-伊红染色(HE)确定各组耳蜗组织形态学改变,并用免疫组化法确定α-ENaC蛋白在耳蜗定位表达。采用蛋白印迹实验(WesternBlot)分别检测不同给药时间豚鼠耳蜗α-ENaC蛋白表达水平。结果DDAVP注射后,ECochG提示部分豚鼠耳蜗出现内淋巴积水,HE证实豚鼠内淋巴积水。α-ENaC蛋白在耳蜗血管纹、螺旋韧带、Reissner膜、Corti器、螺旋缘、螺旋神经、耳蜗神经表达。与未给予DDAVP相比,10天组豚鼠耳蜗α-ENaC蛋白表达升高(P<0.05);。结论 DDAVP调节豚鼠耳蜗α-ENaC蛋白表达升高,进而调节内淋巴代谢,诱导内淋巴积水,影响内耳功能。     

大电导钙激活钾通道参与缺氧致前庭内侧核神经元兴奋性异常

目的：探讨大电导钙激活钾通道（large conductance calcium－ activated potassium channels，BKCa）对缺氧致前庭内侧核神经元兴奋性异常的作用及可能机制。方法选用6～9周龄C57BL／6小鼠6只，随机分为常氧组（吸入常氧，21％O2／5％CO21 h）和缺氧组（吸入低氧，5％O2／5％CO21 h），每组3只，缺氧组制备前庭内侧核神经元缺氧损伤模型后，与常氧组小鼠均断头处死取脑，冠状切取脑片，并将缺氧组小鼠的脑片随机分为无NS1619（特异性BKCa诱导剂）预处理组9张脑片，NS1619预处理组8张脑片。用膜片钳技术检测小鼠脑片前庭内侧核神经元兴奋性的变化及 BKCa 通道电流幅值的变化；免疫组化检测小鼠前庭内侧核（medial vestibular nuclei，MVN）BKCa通道α亚单位的表达。结果 NS1619预处理能显著性延缓缺氧致MVN神经元动作电位频率增加至峰值的达峰时间（P＜0．05）、降低缺氧3 min后 MVN 神经元动作电位频率增加幅值（P＜0．05），降低缺氧10 min后 MVN神经元静息膜电位去极化幅值（P＜0．05）。缺氧可导致 MVN 中BKCa通道α亚单位阳性细胞数明显降低（P＜0．01）。结论急性缺氧损伤后，前庭内侧核神经元兴奋性增加，BKCa 通道的减少参与缺氧致前庭内侧核神经元兴奋性异常。     

一氧化氮对豚鼠耳蜗外毛细胞L-型钙通道电流影响的实验研究

目的观察一氧化氮(NO)供体L-精氨酸(L-Arg)对豚鼠耳蜗外毛细胞L型钙通道电流(ICa-L)的影响。方法以40只杂色或白色豚鼠为研究对象,采用急性酶分离方法分离豚鼠耳蜗外毛细胞,根据溶液中加入的L-Arg浓度分为0.5×10-6 mol/L组(A组)、1.0×10-6 mol/L组(B组)、1.5×10-6 mol/L组(C组),采用全细胞膜片钳技术分别记录不同浓度L-Arg组外毛细胞L-型钙通道电流。结果低浓度的NO供体L-Arg可以抑制ICa-L,此作用具有电压依赖性,对反转电位无明显影响。在指令电压0mV时,峰值电流密度增幅最大值A组为-2.12%,用药前后差异无统计学意义(P>0.05);B组增幅为-30.69%,用药前后差异有统计学意义(P<0.01);C组增幅为-65.08%,用药前后差异有统计学意义(P<0.01)。结论低浓度的NO可以抑制ICa-L。     

Systemic Fluorescent Gentamicin Enters Neonatal Mouse Hair Cells Predominantly Through Sensory Mechanoelectrical Transduction Channels

Journal of the Association for Research in Otolaryngology - Systemically administered aminoglycoside antibiotics can enter inner ear hair cells and trigger apoptosis. However, the in vivo route(s)...     

Deleting the HCN1 Subunit of Hyperpolarization-Activated Ion Channels in Mice Impairs Acoustic Startle Reflexes,Gap Detection,and Spatial Localization

It has been proposed that the high temporal and spatial acuities of human listeners and animals tested in the hearing laboratory depend in part on the short time constants of auditory neurons that are able to preserve or sharpen the information conveyed in the timing of firing of auditory nerve fibers. We tested this hypothesis in a series of in vivo experiments, based on previous in vitro experiments showing that neuronal time constants are raised in brainstem slices when HCN1 channels are blocked or in slices obtained from Hcn1 ^?/? null mutant mice. We compared Hcn1 ^?/? and Hcn1 ^+/+ mice on auditory brainstem responses (ABRs) and behavioral measures. Those measures included temporal integration for acoustic startle responses (ASRs), ASR depression by noise offset, and ASR inhibition by gaps in noise and by shifts of a noise source along the azimuth as measures of temporal and spatial acuity. Hcn1 ^?/? mice had less sensitive ABR thresholds at 32 and 48 kHz. Their wavelet P1b was delayed, and wave 2 was absent in the 16 kHz/90 SPL waveform, indicating that groups of neurons early in the auditory pathways were delayed and fired asynchronously. Baseline ASR levels were lower in Hcn1 ^?/? mice, temporal integration was delayed, time constants for ASR depression by noise offset were higher, and their sensitivity to brief gaps and spatial acuity was diminished. HCN1 channels are also present in vestibular, cutaneous, digestive, and cardiac neurons that variously may contribute to the deficits in spatial acuity and possibly in ASR levels.     

The Perception of Multiple Simultaneous Pitches as a Function of Number of Spectral Channels and Spectral Spread in a Noise-Excited Envelope Vocoder

Journal of the Association for Research in Otolaryngology - Cochlear implant (CI) listeners typically perform poorly on tasks involving the pitch of complex tones. This limitation in performance is...