放线菌素D引起HEPG2细胞的核仁蛋白移位

目的：观察放线菌素D作用下HEPG2细胞中与增殖相关的核仁蛋白B23（nucleophosmin or NPM，numatrin，NO38）定位和表达水平的改变，并探讨其可能机制和意义。方法：应用低浓度的放线菌素D处理HEPG2细胞，采用流式细胞仪技术、免疫印迹、免疫荧光、双向电泳及免疫共沉淀等实验方法检测HEPG2生长周期、B23蛋白表达水平及其定位、B23的等电点及磷酸化状态变化。结果：放线菌素D处理后，HEPG2细胞出现生长抑制，细胞周期阻滞于S／G2期；B23蛋白表达量没有变化，但定位改变，即从核仁移位到核浆，撤药后，B23又从核浆回到核仁上；B23在加药前后未检测到等电点和磷酸化状态改变。结论：低浓度放线菌素D抑制HEPG2细胞生长、阻滞细胞在S／G2期并引起可逆性的B23蛋白移位，而B23蛋白的表达量及磷酸化水平没有改变，这些实验结果对肿瘤药物治疗及分子肿瘤学研究可提供参考的研究模型。     

Roscovitine和Mimosine在Fas介导白血病细胞凋亡中的作用及其可能机制

摘 要 目的: 探讨细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclindependent kinases,CDKs)抑制剂roscovitine和DNA合成阻滞剂含羞草碱（mimosine）在Fas介导的白血病细胞凋亡过程中的作用及其可能的机制。 方法：以急性成淋巴细胞白血病细胞Molt4和急性T细胞白血病细胞Jurkat为靶细胞，用rhFasL、Roscovitine、Mimosine分别单独作用Molt4细胞18 h（Jurkat细胞8 h）、24 h、24 h，或rhFasL分别与后两者联合作用靶细胞，用流式细胞术检测cyclins的表达和细胞凋亡率,Western blotting法检测CDK2和CDK1的磷酸化水平。 结果： Fas介导的细胞凋亡定位于G1期，Roscovitine和Mimosine作用后均可使Fas介导的细胞凋亡率明显增加（P<0.05）。Roscovitine作用后G1期的cyclin D3和cyclin E表达升高，靶细胞被阻滞在G1期的比例明显升高，并下调CDK2 Thr160位点的磷酸化水平；Roscovitine和rhFasL共同作用后，CDK2 Thr160位苏氨酸磷酸化水平进一步减弱。Mimosine作用后 cyclin D3的表达下降和CDK2 Thr160位点磷酸化水平明显下降，靶细胞被完全阻滞在G1期。Mimosine和rhFasL共同作用后cyclin D3、E、A和B1均有所下降，CDK2 Thr160位苏氨酸和CDK1 Thr161位苏氨酸的磷酸化水平明显减弱。结论：Roscovitine和Mimosine均有协同rhFasL促进白血病细胞凋亡的作用，其机制与该两制剂阻滞细胞于G1期、抑制CKD2活性以及影响细胞周期蛋白表达有关。     

丁酸钠对人子宫内膜癌细胞系HHUA细胞增殖影响的研究

目的 :探讨丁酸钠 (NaB)对人子宫内膜癌细胞系HHUA细胞体外增殖的影响及机制。方法 :不同浓度的NaB作用于体外培养的人子宫内膜癌细胞系HHUA ,通过绘制细胞生长曲线观察NaB对细胞生长的抑制作用 ;用流式细胞仪定量分析细胞周期分布 ;用WesternBlot分析p2 1、p5 3、pRb和E2F1蛋白表达。结果 :NaB能诱导HHUA细胞周期G1期阻滞 ,上调p2 1蛋白表达 ,促进pRb去磷酸化 ,下调E2F1和p5 3蛋白表达。结论 :NaB能抑制HHUA细胞体外生长 ,其诱导细胞周期G1期阻滞可能与p2 1等细胞周期调节蛋白的表达改变有关。     

细胞周期蛋白cyclin B1与肿瘤

细胞周期蛋白cyclin B1与细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶（cyclin-dependent protein kinases,CDKs）结合,受磷酸化、去磷酸化调节,所形成的活性复合物为MPF即细胞促分裂因子或M期促进因子,能转位入核,磷酸化其核内底物,促进细胞的G2/M期转变;并能通过磷酸化调节多种蛋白的活性与分布而参与纺锤体的形成和染色体的分离。cyclin B1在许多肿瘤中异常表达,呈现出癌基因的特性,cyclin B1过表达与定位的改变受p53、c-myc、H-Ras、Aurora A、Gadd45等多个基因的调节,而且与肿瘤发生发展、预后、诊断和治疗密切相关。     

低温等离子体在肿瘤治疗中的应用

研究表明,低温等离子体对肝癌、黑色素瘤、脑肿瘤、大肠癌、肺癌等具有一定的治疗作用.主要机制为：等离子体作用后使癌细胞内一氧化氮和活性氧水平增高,导致DNA损伤和线粒体功能障碍,细胞内线粒体凋亡通路被激活,改变了Bax/Bcl-2比例,活化凋亡蛋白caspase3、9,伴有细胞周期阻滞（G2-M期或S期）,最终导致细胞生长阻滞和细胞凋亡;增加β-catenin磷酸化,导致β-catenin降解,抑制整合蛋白2、4以及细胞表面局部黏着斑激酶的表达,破坏细细胞黏附,降低细胞的迁移和侵袭活性.     

N端截短的视网膜母细胞瘤基因对人骨肉瘤细胞株SaOS一2生长的影响

目的研究N端截短的视网膜母细胞瘤基因(Rb66)对骨肉瘤细胞Saos-2生长的影响.方法构建携带Rb66cDNA片段的真核细胞表达载体pcDNA3-1-Rb,用脂质体LIPOFECTAMIMETM2000将真核表达载体pcDNA3-1-Rb、空载体对照pcDNA3-1转染至SaOS-2细胞中.RT-PCR及免疫细胞化学检测转染后SaOS-2中Rb66mRNA及蛋白的表达;观察细胞形态的改变;测定细胞倍增时间及生长曲线的改变;流式细胞仪检测对细胞周期的影响.结果成功地将N端截短的Rb66cDNA导入骨肉瘤细胞SaOS-2中,并在mRNA及蛋白水平获得了表达.转染后的SaOS-2细胞胞浆展开,细胞核浆比例变小;Rb66导入后,SaOS-2细胞生长减慢,群体倍增时间延长,细胞周期呈现G1期阻滞.结论Rb66可通过阻止细胞G,→S期进展而抑制骨肉瘤细胞SaOS-2的增殖.     

姜黄素阻断NF-κB信号通路抑制人卵巢癌细胞株3AO增殖

目的:探讨姜黄素(curcumin)对体外培养人卵巢癌细胞株3AO细胞增殖抑制及其作用机制.方法:选用人卵巢癌细胞株3AO进行体外培养,以20μg/L、40μg/L、80μg/L姜黄素分别处理3AO细胞24-48h,MTT比色法检测细胞生长活性,流式细胞仪检测细胞周期时相变化,Western blot法检测NF-κB、P-NF-κB、IκB、P-IκB蛋白的变化.结果:姜黄素对人卵巢癌细胞株3AO生长的抑制作用,呈剂量、时间依赖性.流式细胞仪分析证实姜黄素能使3AO细胞周期阻滞于G0/G1期,Western blot结果显示随姜黄素作用浓度的增加,NF-κB、P-NF-κB蛋白表达水平明显下降,IκB、P-IκB蛋白表达没有明显改变.结论:姜黄素对3AO细胞有明显的增殖抑制作用,此作用可以通过下调NF-κB蛋白表达及磷酸化实现,这是姜黄素抑制卵巢癌细胞生长的分子机制之一.     

紫铆因抑制膀胱癌细胞增殖的体内外研究

目的 观察紫铆因对膀胱移行细胞癌细胞BLS增殖的影响以及对膀胱癌裸鼠移植瘤生长的 影响。方法 不同浓度紫铆因处理细胞,四甲基偶氮唑蓝比色实验（MTT）及平板克隆形成实验观 察细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,蛋白印迹检测核转录因子κB (NF-κB)p65核内表达及 细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）的磷酸化程度,并检测NF-κB下游靶基因细胞周期素D1（Cyclin D1）及环氧合酶-2（COX2）的表达。建立膀胱癌裸鼠皮下移植瘤,采用腹腔注射的给药途径,测 量移植瘤的体积和重量。结果 紫铆因抑制了膀胱癌细胞增殖并诱导G2/M期细胞周期阻滞。紫铆因 处理后NF-κB p65的核内表达及ERK1/2的磷酸化程度下降（P<0.05）,Cyclin D1及COX2基因表达下 调（P<0.05）,体内实验发现紫铆因治疗组较对照组皮下移植瘤的生长明显受抑制（P<0.05）。结 论 紫铆因具有抗膀胱癌细胞增殖作用,可能与其抑制ERK及NF-κB信号激活有关。     

蛋白4.1家族在不同乳腺癌细胞株中的表达与定位

背景与目的:目前,已在多种人类肿瘤中发现蛋白4.1家族成员表达异常.本研究旨在通过检测蛋白4.1家族成员(4.1R/B/G/N)在3株转移能力不同的人乳腺癌细胞株MCF-7、T-47D和MDA-MB-231中的表达和定位,探讨蛋白4.1家族成员与乳腺癌细胞转移能力之间的关系.方法:采用Western blot检测蛋白4.1家族成员在MCF-7、T-47D和MDA-MB-231细胞中的表达;免疫荧光标记对蛋白4.1家族成员在3株细胞中的表达进行定位.结果:4.1R/B/G在3种细胞系中均有表达,在T-47D细胞中的表达量均明显高于在MCF-7细胞中的表达量(P<0.05):但在高转移性的MDA-MB-231细胞中它们的表达水平转而下降.4.1N在T-47D细胞中的表达量明显低于在MCF-7细胞中的表达量(P<0.01),而在MDA-MB-231细胞中的表达则几乎检测不到,提示4.1N表达下调或缺失与乳腺癌细胞转移能力密切相关.4.1R/B/G/N在MCF-7和T-47D细胞中均主要定位于细胞膜及胞间连接处,同时4.1B在细胞核中也有表达;而在高转移的MDA-MB-231细胞中蛋白4.1家族成员均定位于细胞质中,提示蛋白4.1家族成员亚细胞定位的改变可能是乳腺癌细胞转移过程中的重要事件.结论:4.1N表达缺失和蛋白4.1家族成员亚细胞定位的改变与乳腺癌细胞MDA-MB-231的高转移性密切相关.     

野生型RASSF1A基因抑制肝癌细胞增殖的分子机制

背景与目的:RASSF1A(ras association domain family 1A)基因抑制肿瘤增殖的分子机制目前尚未完全明确,本文将探讨野生型RASSF1A基因抑制肝癌细胞增殖的分子机制.方法:利用已构建成功的稳定表达野生型和突变型RASSF1A基因的肝癌细胞株QGY-7703,使用流式细胞仪对其进行细胞周期的测定,Western blot分析其cyclin D1、cyclin E及P21蛋白的表达水平,通过检测荧光素酶报告基因活性及RT-PCR检测野生型RASSFIA基因的表达来分析RASSF1A基因对cyclin D1启动子和mRNA表达水平的影响.结果:野生型RASSF1A基因的表达可使QGY-7703细胞的细胞周期发生G1/S期阻滞,使其cyclin D1蛋白的表达水平下调,但不影响cyclin E和P21蛋白的表达水平.外源性cyclin D1的表达可使野生型RASSF1A基因引起的QGY-7703细胞G1/S期阻滞消失.野生型RASSF1A基因表达不影响QGY-7703细胞cyclin D1启动子的活性和cyclin D1 mRNA的表达水平.结论:野生型RASSF1A基因通过转录后机制负性调控cyclin D1蛋白的表达,使肝癌细胞株QGY-7703细胞周期阻滞在G1/S期.     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。