CCK-8抑制LPS诱导大鼠肺间质巨噬细胞TNF-α转录及NF-κB活性

目的:观察硫酸化八肽胆囊收缩素(CCK-8)对体外脂多糖(LPS)诱导大鼠肺间质巨噬细胞(PIMs)TNF-α基因表达的影响,探讨核因子κB(NF-κB)是否参与这一过程,以揭示CCK-8抗炎作用的信号转导机制。方法:分离大鼠肺PIMs,经LPS、CCK-8、CCK受体拮抗剂丙谷胺及溶剂单独或联合应用孵育3h,用RT-PCR技术检测细胞TNF-αmRNA的表达,孵育1h,用电泳迁移率改变分析方法检测NF-κB活性,孵育30min,用Westernblot技术检测胞浆IκBα蛋白表达情况。结果:CCK-8(10^-8-10^-6mol·L^-1)明显降低了LPS诱导的TNF-αmRNA表达及NF-κB活性,增加了胞浆中IκBα蛋白水平,呈剂量依赖性,并可被丙谷胺所拮抗。结论:对LPS激活的肺PIMs,CCK-8通过抑制NF-κB活性而抑制其TNF-αmRNA表达,该作用由CCK受体介导,并与CCK-8减少IκBα蛋白降解有关,此为CCK-8抗炎作用的机制之一。     

脂多糖刺激对牛单核细胞由来的巨噬细胞Toll样受体表达的影响

目的:研究牛末梢血中单核细胞由来的巨噬细胞在受到LPS刺激后细胞表面Toll样受体表达的变化.方法:试验采取3头日本黑牛外周血,进行分离得到外周血单核细胞,并用Repcell进行巨噬细胞的分离培养,7天后用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激细胞24小时后,通过RT-PCR测定巨噬细胞表面Toll样受体mRNA的表达以及细胞因子mRNA的表达.结果:在LPS刺激24小时后,IL-6、 TNF-α和IL-1βmRNA的表达量显著升高(P＜0.05),与此同时IL-8和IL-12p40 mRNA的表达量相对提高;TLR1和TLR10的转录物显著下降(P＜0.05),然而TLR2、4和6保持稳定.结论:巨噬细胞在受到病原刺激后通过提高IL-6、 TNF-α和IL-1β mRNA的表达量,从而提高了天然免疫的作用.该研究为探讨巨噬细胞在无然免疫中的作用奠定了基础.     

CCK-8降低LPS诱导的小鼠单核细胞RAW264.7 CHOP/caspase-11/caspase-1的表达

目的探讨CCK-8对LPS激活RAW264.7细胞CHOP/caspase-11/caspase-1信号通路的影响。方法用LPS和(或)CCK-8和(或)CCK-8的1受体阻滞剂孵育RAW 264.7细胞,用Western blot法检测CHOP、caspase-11蛋白表达,用试剂盒检测caspase-1活性,用ELISA技术检测细胞培养上清中IL-1β水平。结果与对照组相比,LPS组CHOP、caspase-11表达水平均显著升高(P0.05),给予CCK-8可有效抑制LPS诱导的CHOP、caspase-11表达升高(P0.05),而预先给予CCK-8的1受体阻滞剂可明显抑制CCK-8的作用。caspase-1活性变化、IL-1β含量变化趋势均与CHOP、caspase-11表达水平变化趋势一致(P0.05)。结论 CCK-8通过受体1抑制CHOP/caspase-11/caspase-1表达,减少LPS诱导IL-1β的生成,发挥抗炎作用。     

苦参碱抑制LPS诱导巨噬细胞IL-1β、TNF-α分泌及机制研究

目的:探讨苦参碱抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导巨噬细胞分泌炎症因子包括肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)对Toll样受体4(TLR4)、c-Jun表达的影响。方法:购买并培养小鼠RAW264.7巨噬细胞株,分成四组,即空白对照组、苦参碱组、LPS组、苦参碱干预组,通过浓度为100μg/L的LPS DMEM孵育1 h,之后将LPS弃去,然后加入不含血清的DMEM或125.25 mg/L苦参碱DMEM继续培养。分别收集上述四组细胞处理完毕后5、30、60、120min的细胞及培养液。通过PCR法检测小鼠RAW264.7巨噬细胞TLR4及c-Jun mRNA的表达,通过免疫细胞化学法检测小鼠RAW264.7巨噬细胞c-Jun蛋白的表达;通过ELISA法测定各组培养液中TNF-α、IL-1β的分泌。结果:苦参碱诱导组与空白对照组相比,TLR4 mRNA、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白的表达量和TNF-α及IL-1β分泌量各项指标差异无统计学意义(P0.05);LPS组各个时间点TLR4 mRNA、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白的表达量和TNF-α及IL-1β分泌量明显高于空白对照组,且高水平能够维持2 h以上(P0.05);苦参碱干预组能够有效的抑制LPS诱导的巨噬细胞TLR4 mRNA、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白的表达量,降低炎症因子TNF-α、IL-1β的分泌量。结论:苦参碱可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞丝裂原活化的蛋白激酶信号通路上TLR4、c-Jun的过表达从而有效的降低终末炎症因子TNF-α及IL-1β的释放,进而有效的抑制炎症反应,减轻内毒素炎症反应的程度。     

紫茎泽兰精油化学分离物抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎性反应

目的探究紫茎泽兰精油化学分离物对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞抗炎活性和Toll样受体4(TLR4)蛋白表达的影响。方法将巨噬细胞分为空白对照组、 LPS组、 LPS联合紫茎泽兰精油化学分离物组。CCK-8法检测紫茎泽兰精油化学分离物的细胞毒性,实时定量PCR检测RAW264.7细胞白细胞介素6(IL-6)、 IL-10的mRNA水平, ELISA检测IL-6、 IL-10的蛋白水平, Western blot法检测RAW264.7细胞TLR4蛋白水平。结果剂量20 mg/mL的紫茎泽兰精油化学分离物对RAW264.7细胞无细胞毒性。LPS处理可引起RAW264.7细胞TLR4蛋白水平升高、 IL-6 mRNA和蛋白水平增加、 IL-10水平降低,分离产物可逆转以上作用。结论紫茎泽兰精油化学分离物抑制RAW264.7细胞TLR4蛋白表达和IL-6的分泌,促进IL-10表达,发挥抗炎作用。     

过表达SIRT1抑制脂多糖诱导的胰岛β细胞炎症因子表达及NF-κB信号通路激活

目的研究沉默信息调节因子1(SIRT1)对脂多糖(LPS)诱导的胰岛β细胞炎症因子表达及核因子-κB(NF-κB)信号通路激活的影响。方法用LPS处理胰岛β细胞,qRT-PCR和Western blot测定细胞中SIRT1表达变化。用pcDNA3.1-SIRT1慢病毒感染胰岛β细胞,qRT-PCR检测细胞中白细胞介素-6(IL-6)mRNA和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平,流式细胞术测定细胞凋亡变化,Western blot检测细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、核因子-κBp65亚型(NF-κBp65)、Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平。结果 LPS处理后的胰岛β细胞中SIRT1表达水平降低。pcDNA3.1-SIRT1慢病毒感染可以提高LPS条件下胰岛β细胞中SIRT1表达水平。LPS处理后的胰岛β细胞中IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达水平升高,凋亡率升高,细胞中Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κBp65、TLR4蛋白表达升高。过表达SIRT1可以降低LPS条件下胰岛β细胞中IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达水平,抑制细胞凋亡,减少细胞中Bax、cleaved Caspase-3、NF-κBp65、TLR4蛋白表达。结论 SIRT1减少LPS诱导的胰岛β细胞炎症因子表达并下调细胞中NF-κB信号激活水平。     

血小板表达TLR4调节LPS刺激血小板释放细胞因子的作用

目的 证实人类血小板表面是否表达Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4),探讨脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激血小板后TLR4表达变化及其对细胞因子白细胞介素-8(interlukine-8,IL-8)、β血小板球蛋白(β-thromboglobulin,β-TG)、可溶性CD40配体(soluble CD40 ligand,sCD40L)释放的凋节作用.方法 流式细胞技术测定不同浓度LPS刺激后血小板TLR4表达情况;ELISA法测定TLR4单克隆抗体封闭或不封闭LPS刺激的人血小板释放的细胞因子IL-8、β-TG、sCD40L的变化.结果 人血小板表达TLR4,LPS刺激后血小板对TLR4表达检出率降低(P<0.01),血小板对sCD40L、β-TG释放显著升高(P<0.001),但LPS在1～5μg/ml内不同浓度之间,sCD40L、β-TG浓度差异无统计学意义(P>0.05),LPS诱发血小板释放sCD40L、β-TG增加效应被TLR4单克隆抗体削弱.LPS刺激前后,反应体系中IL-8浓度无明显变化(P>0.05).结论 血小板TLR4与LPS相互作用诱发血小板大量释放sCD40L、β-TG,而血小板对IL-8的释放不依赖于TLR4-LPS途径.     

TLR4在LPS诱导的结肠炎症恢复中的作用

目的:研究Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR-4)在结肠炎症中的作用,探讨LPS在炎症性肠病中的治疗作用。方法:取正常肠上皮细胞进行体外脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)干预培养。采用慢病毒转染技术,构建TLR4低表达、正常表达及高表达的肠上皮细胞亚组。正常表达组(normal组)及高表达组(high组)培养基中加入LPS诱导细胞炎症,刺激时间分别为0、2、4 h。Western blot法检测TLR4的表达;收集细胞上清液,ELISA检测各亚组细胞炎症因子TNF-α、IL-6和IL-8的水平。收集细胞,qPCR检测细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10和IL-1βmRNA的表达水平。划痕试验观察对比2组细胞的迁移能力。结果:LPS干预培养细胞后,TLR4的表达量显著增加(P0.05)。ELISA和qPCR检测高表达组与正常表达组组间细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10和IL-1β的蛋白和mRNA水平的差异均有统计学意义(P0.05)。划痕试验提示TLR4高表达组的细胞迁移能力明显高于正常对照组。结论:LPS影响TLR4炎症通路的活化,促进前炎症因子及辅助刺激分子的释放,起到调节炎症反应的作用。     

CCK-8对LPS攻击小鼠IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10表达的影响

目的： 观察LPS攻击小鼠IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10的动态变化规律及八肽胆囊收缩素（CCK-8）对其表达的影响。方法: 将小鼠分为4组：对照组、LPS组（腹腔注射LPS）、LPS+CCK-8组（注射LPS前 30 min 腹腔注射CCK-8）及CCK-8组（单独注射CCK-8）。用ELISA及PT-PCR方法检测各组小鼠血清、肺组织中IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10的含量及mRNA的表达情况。结果: LPS攻击可使小鼠血清及肺组织中 IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10蛋白及mRNA的表达增加，预先注入CCK-8可显著抑制IL-1β、IL-6的表达，并使 IL-4、IL-10的表达进一步增加。结论: CCK-8可能通过抑制LPS攻击小鼠IL-1β、IL-6的表达和进一步增加 IL-4、IL-10的表达参与抗炎反应过程，从而减轻LPS引起的肺组织炎症反应。     

栀子苷下调Toll样受体4表达并拮抗脂多糖诱导的小胶质细胞炎性反应

目的:观察栀子昔对细菌脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞炎性反应的影响并探讨其作用机制。方法:LPS诱导BV2小胶质细胞活化,CCK-8方法检测细胞存活率,Griess法测定NO释放量,ELISA测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)含量,免疫印迹检测Toll样受体4(TLR4)蛋白表达。结果:栀子苷在10～100μg/ml浓度范围内对小胶质细胞活力影响不显著,此浓度范围内,栀子苷剂量依赖性的减少LPS诱导的NO、TNF-α和IL-1β释放。此外,栀子苷还可抑制LPS诱导的BV2细胞形态活化改变,并降低LPS诱导的TLR4蛋白表达。结论:栀子苷可以拮抗LPS诱导的BV2小胶质细胞炎性反应,其机制可能与下调TLR4信号通路有关。     

天抗(TK)对脂多糖诱导小鼠炎症模型的抗炎作用及其机制

目的研究天抗(TK)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠炎症模型的抗炎作用及机制研究。方法将42只昆明小鼠随机分为正常对照(NC)组、模型对照(LPS)组、地塞米松(DXM)组、天抗低(TK-L)、中(TK-M)和高(TK-H)剂量组(0.2,0.8和3.2 g/kg)。各组分别灌胃给药7 d后,腹腔注射30 mg/kg的LPS诱导小鼠急性炎性模型,6 h后处死小鼠,检测小鼠脾脏指数,ELISA测定小鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平;生化法检测小鼠血清中SOD和MDA的表达;qRT-PCR检测小鼠脾脏TLR4、MyD88、TRAF6、p65、IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达水平;Western blot检测小鼠脾脏TLR4、MyD88、TRAF6、p-p65和p65蛋白表达水平。结果与LPS组相比,TK组小鼠的脾脏指数明显降低,血清和脾脏组织中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA水平显著下降,SOD水平明显升高,小鼠脾脏组织的TLR4、MyD88、TRAF6和p-p65等蛋白及mRNA表达水平均明显降低。结论天抗对LPS诱导的小鼠急性炎症模型具有抗炎作用,其作用机制可能是通过TLR4/MyD88/NF-κB(p-65)信号通路抑制炎症因子的释放。     

LPS急性肺损伤大鼠肺巨噬细胞TL R4与IL-18 mRNA表达的变化

目的: 观察LPS急性肺损伤(ALI)大鼠肺巨噬细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)及IL-18mRNA表达的变化,探讨TLR4与IL-18在ALI中的作用。方法: 运用RT-PCR与ELISA检测TLR4和IL-18 mRNA的表达及肺巨噬细胞培养液上清TNF-α浓度。结果: LPS急性肺损伤组TLR4与IL-18 mRNA表达显著高于正常对照组(0.43±0.07 vs 0.25±0.03, 0.38±0.02 vs 0.16±0.03), TNF-α分泌显著多于正常对照组(0.74±0.02 vs 0.41±0.02)。结论:LPS急性肺损伤时肺巨噬细胞TLR4功能及其介导的信号转导作用加强, IL-18分泌增加, 表明二者在急性肺损伤中起重要作用。     

Fasudil通过TLR4通路抑制脂多糖诱导的小鼠BV-2小胶质细胞TNF-α和IL-1β的表达

目的探讨Fasudil对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞系促炎细胞因子表达中的作用。方法体外培养BV-2小胶质细胞系,实验分为PBS对照组、LPS刺激组、LPS联合Fasudil干预组,ELISA检测细胞TNF-α、IL-1β的释放,Griess法检测NO释放水平,流式细胞术检测Toll样受体4(TLR4)、TLR2蛋白表达。结果 LPS刺激BV-2细胞可导致TNF-α、IL-1β和NO的释放明显增加,还可导致炎性信号通路中的受体TLR4表达明显增加。Fasudil能明显抑制炎性因子的释放和TLR4的表达。结论 Fasudil可抑制LPS诱导的小胶质细胞NO、TNF-α和IL-1β释放,其作用机制可能与Fasudil下调TLR4通路有关。     

海马注射米诺环素对CCI大鼠热痛阈以及海马炎症因子表达的影响

目的:观察海马CA1区注射米诺环素对坐骨神经缩窄性损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠海马小胶质细胞激活、Toll样受体2(Toll like receptor 2,TLR2)、Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、IL-1β、TNF-α和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)表达的影响。方法:成年SD大鼠随机分为3组(n=8):(1)sham组(假手术组+0.01 mol/L PBS)、(2)CCI组(CCI+0.01 mol/L PBS)、(3)CCI+米诺环素组。大鼠海马CA1区置管7 d后行坐骨神经结扎,CA1区注射0.01 mol/L PBS或米诺环素(2μg/μl),每日2次,连续7 d。于CCI术前1 d,术后1、3、5和7 d测定海马给药1 h后热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL);术后第7 d取海马,荧光定量PCR检测Iba-1、TLR2、TLR4、IL-1β、TNF-α和i NOS m RNA表达;酶联免疫吸附试验测定海马IL-1β和TNF-α含量。结果:大鼠CCI术后即形成稳定的热痛敏,与假手术组相比,TWL明显缩短(P0.01);与CCI组相比,海马CA1区注射米诺环素可明显延长CCI大鼠的TWL(P0.05)。与假手术组相比,CCI大鼠海马Iba-1、TLR2、TLR4、IL-1β、TNF-α和i NOS m RNA表达明显上调(P0.01);与CCI组相比,海马CA1区注射米诺环素几乎完全抑制海马Iba-1、TLR2、TLR4和TNF-αm RNA表达上调(P0.01),仅部分阻断IL-1β和i NOS m RNA表达上调(P0.05)。与假手术组相比,CCI大鼠海马IL-1β和TNF-α含量明显增多(P0.01);与CCI组相比,注射米诺环素后几乎完全抑制海马TNF-α水平上升(P0.01),仅部分抑制IL-1β水平上升(P0.05)。结论:海马CA1区注射米诺环素可明显缓解CCI大鼠热痛敏症状,其机制可能与抑制海马小胶质细胞激活和TLR2、TLR4表达,进一步抑制IL-1β、TNF-α及i NOS表达有关。     

敲减TLR4表达减少LPS诱导的胰腺腺泡AR42J细胞分泌炎症因子

目的:研究Toll样受体4(TLR4)对脂多糖(LPS)诱导的胰腺腺泡AR42J细胞分泌炎症因子的影响。方法:用LPS处理大鼠胰腺腺泡AR42J细胞,real-time PCR和Western blot测定细胞中TLR4表达的变化。将携带TLR4 siRNA的慢病毒感染AR42J细胞,给予LPS处理,real-time PCR和Western blot检测干扰效率,MTT法检测细胞活力,二硝基苯肼法测定乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,ELISA法检测细胞分泌白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,硫代巴比妥酸法测定上清中丙二醛(MDA)的含量,用黄嘌呤氧化法测定上清中超氧化物歧化酶(SOD)活力,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性。结果:LPS处理后的AR42J细胞中TLR4的mRNA和蛋白水平明显升高(P0.01)。携带TLR4 siRNA的慢病毒可以明显下调LPS刺激下AR42J细胞中TLR4的mRNA和蛋白水平(P0.01)。LPS处理后的AR42J细胞活力降低,LDH漏出率升高,细胞分泌的IL-1β和TNF-α增多,培养上清中MDA含量升高,SOD、GSH-Px和CAT活性降低(P0.01)。敲减TLR4表达可以提高LPS刺激下AR42J细胞的活力,降低细胞的LDH漏出率及分泌IL-1β和TNF-α的水平,减少细胞培养液中MDA的含量,提高SOD、GSH-Px和CAT的水平(P0.01)。结论:LPS诱导胰腺腺泡AR42J细胞TLR4表达,敲减其表达可以减少LPS诱导的AR42J细胞分泌IL-1β、TNF-α等炎症因子,减轻氧化损伤。     

栀子苷通过抑制TLR4/NF-κB信号通路减轻睡眠剥夺大鼠认知功能障碍

目的:探究栀子苷(Gen)对睡眠剥夺大鼠Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)信号通路及认知功能障碍的影响。方法:120只Wistar大鼠随机分为对照(NC)组、模型(M)组、Gen低剂量(Gen-L,5 g·kg~(-1)·d~(-1))、Gen中剂量(Gen-M,10 g·kg~(-1)·d~(-1))、Gen高剂量(Gen-H,20 g·kg~(-1)·d~(-1))组和Gen-H+LPS(0.4 mg·kg~(-1)·d~(-1),尾静脉注射)组,每组20只,干预7 d后,M组、Gen-L、Gen-M、Gen-H组和Gen-H+LPS组采用改良小平台水环境法制备大鼠剥夺睡眠模型。检测Morris水迷宫实验的逃避潜伏期及Y迷宫实验的行为正确率;HE染色检测大脑海马区神经元形态变化;ELISA检测各组大鼠血清S100B和神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达水平,以及海马白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;RT-qPCR检测海马TLR4及NF-κB p65 mRNA水平;Western blot检测海马TLR4及NF-κB p65蛋白表达量。结果:与NC组比较,M组大鼠逃避潜伏期,血清S100B和NSE表达水平,海马IL-1β、IL-6和TNF-α含量,以及TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达量均显著增加(P0.01),行为正确率显著降低(P0.01);与M组比较,Gen-L、Gen-M和Gen-H组大鼠逃避潜伏期,海马IL-1β、IL-6和TNF-α含量,以及TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达量依次降低(P0.01),行为正确率依次增加(P0.01);与Gen-H组比较,Gen-H+LPS组大鼠逃避潜伏期,血清S100B和NSE表达水平,海马IL-1β、IL-6和TNF-α含量,以及TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达量均显著增加(P0.01),行为正确率显著降低(P0.01)。结论:栀子苷可能通过抑制TLR4/NF-κB p65信号通路减轻海马炎症反应从而改善睡眠剥夺大鼠认知功能。     

p38 MAPK 和STAT3参与CCK-8抑制LPS诱导的大鼠促炎症细胞因子生成

 目的：观察八肽胆囊收缩素（CCK-8）是否改善脂多糖（LPS）引起的大鼠细胞因子的变化,并探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)和信号转导子及转录激活子3(STAT3)的信号转导作用,以及CCK受体（CCK-R）的作用。方法：4组大鼠尾静脉分别注入生理盐水（对照）、LPS (8 mg/kg)、CCK-8(40 μg/kg)和CCK-8(40 μg/kg)+LPS (8 mg/kg), 酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清、肺脏及脾脏中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）和IL-6的变化,Western blotting和免疫荧光双标激光共聚焦显微镜检测肺脏和脾脏磷酸化p38 MAPK和磷酸化STAT3的表达,RT-PCR检测脾脏CCK-R亚型的mRNA表达。结果：CCK-8可显著抑制LPS诱导的TNF-α、IL-1β和IL-6的增加。CCK-8可增加LPS诱导的大鼠肺脏和脾脏磷酸化p38 MAPK和磷酸化STAT3的表达。LPS有诱导CCK-AR及CCK-BR mRNA表达量增加的作用。结论：CCK-8对LPS刺激的大鼠促炎症细胞因子过量产生有抑制作用,p38 MAPK和STAT3可能参与了其信号转导机制。LPS刺激时,CCK-R受体发生正向调节,CCK-8有可能用于治疗全身性感染及其它的炎症性疾病。     

HIF-1α抗心肌缺血再灌注炎性损伤的作用

目的:本文旨在通过稳定低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达,探讨其在大鼠心肌缺血再灌注(I/R)所致炎性损伤中的作用及可能的机制。方法:60只清洁级雄性Wistar大鼠随机分为4组:假手术(sham)组、I/R组、HIF-1α稳定剂二甲基乙二酰甘氨酸(DMOG)+I/R组和HIF-1α抑制剂YC-1+I/R组。各组分别予相应处理后,用Western blot法检测心肌组织的Toll样受体4(TLR4)和核因子κB(NF-κB)的蛋白表达;real-time PCR检测白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、TLR4和NF-κB的mRNA水平;并利用试剂盒检测心肌组织的髓过氧化物酶(MPO)活性;HE染色观察炎性细胞浸润情况。结果:HIF-1α可明显降低心肌组织中炎性细胞的浸润、MPO活性及炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平,同时降低TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白水平(P0.05)。结论:HIF-1α可减轻心肌I/R引起的炎性损伤,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路激活有关。     

IL-38 抑制LPS / TLR4 诱导炎症减轻类风湿关节炎的机制研究

目的:探讨IL-38 和TLR4 在类风湿关节炎中的潜在关联及其在类风湿性关节炎中致病的机制。方法:选取2013 年1 月至2016 年2 月间本院收治的41 例类风湿关节炎患者(观察组)及45 例本院实施创伤后滑膜切除术的患者(对照组)为研究对象。收集观察组和对照组的外周血单个核细胞(PBMCs)、滑膜组织及血清。荧光定量PCR 检测PBMCs 及滑膜组织中IL-38 及TLR4 的mRNA 水平。ELISA 检测滑膜液及血清中IL-38 的表达,Western blot 检测滑膜组织中IL-38 及TLR4的表达。LPS 和/ 或IL-38 刺激RAW264.7 细胞,ELISA 检测RAW264.7 细胞上清中IL-6、IL-8 及TNF-α的含量,荧光定量PCR检测RAW264.7 细胞TLR4、IL-6、IL-8 及TNF-α的表达。NF-κB 激活-核转运试剂盒及Western blot 检测NF-κB 信号的激活水平。结果:与对照组相比,类风湿关节炎患者PBMCs、血清及滑膜组织和滑膜液中IL-38 水平显著升高,而TLR4 水平也显著升高,Pearson 相关分析显示二者呈负相关。LPS 和/ 或IL-38 刺激RAW264.7 细胞后,IL-38 能够抑制LPS 诱导的TLR4、IL-6、IL-8 及TNF-α表达,进一步的分析显示,IL-38 能抑制NF-κB 信号途径激活,因此推测IL-38 可能是通过抑制NF-κB 信号途径激活从而抑制LPS/ TLR4 信号诱导的炎症因子表达。结论:IL-38 能抑制LPS/ TLR4 诱导炎症减轻类风湿关节炎,其机制可能是通过抑制NF-κB 信号途径的激活。     

八肽胆囊收缩素抑制脂多糖诱导的大鼠肺间质巨噬细胞CD14的表达

目的:初步探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对体外脂多糖(LPS)激活大鼠肺间质巨噬细胞(IM)的调节作用。方法:分离大鼠肺IM,经LPS、CCK-8、CCK受体拮抗剂丙谷胺及溶剂单独或共同孵育后,测定细胞CD14的表达及上清中TNF-α含量。 结果:LPS(1 mg/L)孵育12 h,肺IM mCD14表达上调,上清中sCD14及TNF-α含量均明显增加;CCK-8(10^-7-10^-6 mol/L)抑制了LPS的上述效应,且可被丙谷胺所拮抗。结论:CCK-8对LPS激活的肺IM的部分功能具有抑制性调节作用,该作用是由其受体介导的,可能是CCK-8减轻内毒素血症时肺组织炎性变化的重要机制之一。