何首乌不同成分与肝细胞凋亡的相关性研究

目的:研究何首乌不同成分对大鼠肝脏细胞凋亡的影响。方法:将何首乌中不同成分提取物大黄素、大黄酸、大黄酚,以及制首乌分别按不同剂量给予大鼠每天灌胃一次,连续3个月,检测大鼠肝脏细胞凋亡情况,用AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒给予凋亡细胞染色,利用荧光显微镜检测细胞凋亡的发生。结果:大鼠肝脏细胞凋亡的测定结果制首乌组及大黄酚组与空白对照组比较有显著差异(P<0.05)。     

制何首乌及大黄酚对小鼠肝细胞凋亡的影响

目的:研究制何首乌、大黄酚对小鼠肝脏细胞凋亡的影响。方法:制何首乌、大黄酚按一定剂量ig小鼠,1次/d,连续4周,检测转氨酶,用AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒给予凋亡细胞染色,利用流式细胞仪检测细胞凋亡的情况。结果和结论:制何首乌组、大黄酚组均能提高小鼠肝细胞凋亡率,与空白对照组比较有显著差异。     

“有故无陨”法则下基于线粒体能量代谢途径的制首乌肝毒性机制研究

目的:以中医证候为基础,研究制首乌致肝损伤的发生与中医肾虚证候的相关性,探讨制首乌致肝损伤的作用机制以及其与中医证候的关联性。方法:对不同肾虚证候模型大鼠灌胃给予制首乌药液,制备含药血清,流式细胞仪和MTT检测制首乌含药血清作用不同时间诱导L02肝细胞凋亡的情况;建立不同肾虚证候的整体动物模型,提取各组大鼠肝细胞线粒体,用分光光度计检测肝线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)、线粒体呼吸链复合物I活性、Na~+-K~+-ATP酶含量、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶,使用紫外分光光度计和多功能酶标仪检测细胞色素氧化酶(COX)活性以及PTP开放程度。结果:在体外试验中,与空白组相比,肾阳虚24 g/kg制首乌组15%含药血清对L02肝细胞增殖具有明显的抑制作用;整体动物实验中,用制首乌治疗肾阳虚证候时,大鼠的肝功能出现明显损伤;与空白组比较,制首乌12 g/kg组SDH活性显著降低;线粒体呼吸链复合物I活性明显下降;Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性显著降低;肾阳虚大鼠给药后PTP通透性较肾阴虚显著增大,COX活力显著降低。而制首乌6.12 g/kg治疗肾阴虚证候时,各项指标较空白组无统计学差异,说明大鼠肝功能无明显损伤。结论:制首乌引起的肝脏损害程度与中医肾虚证有关,其中制首乌治疗肾阳虚证候时其肝毒性明显强于对证治疗肾阴虚证候。     

麻黄碱对TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的研究麻黄碱对TNF-α诱导的永生化角质形成细胞HaCaT细胞的增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法倒置显微镜下观察细胞生长情况,MTT法检测TNF-α诱导下HaCaT细胞增殖情况、800μg/ml麻黄碱对TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖的影响。在流式细胞仪上使用Annexin-V/PI和PI单标试剂盒分别检测HaCaT细胞的凋亡及细胞周期。结果 25ng/ml的TNF-α能明显促进HaCaT细胞的增殖。800μg/ml麻黄碱作用于TNF-α诱导增殖下的HaCaT细胞24 h后,悬浮细胞数目变多、贴壁细胞分布较前稀疏,细胞内空洞变多。MTT显示800μg/ml麻黄碱能够明显抑制TNF-α诱导的细胞增殖,与空白对照组比价有显著性差异(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示:麻黄碱使TNF-α诱导下的HaCaT细胞G1期明显延长,但对细胞凋亡未产生影响。结论一定浓度的麻黄碱可以抑制TNF-α对HaCaT细胞的促增殖作用,并使诱导后的细胞停滞在G1期。     

江苏地产自首乌C21甾苷抗炎作用及其机制研究

目的：研究自首乌C22甾苷（CSG）的抗炎作用及其机制。方法：以阿司匹林、英太青、环磷酰胺作阳性对照药，观察CSG对醋酸致小鼠毛细血管通透性增高、二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀、棉球诱导的大鼠肉芽肿和弗氏完全佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎模型的抗炎作用；测定AA大鼠血清IL-6、TNF-α含量，关节NO、PGE，含量，探讨CSG抗炎作用机制。结果：CSG对急慢性、免疫性炎症反应有明显抑制作用，对AA大鼠血清IL-6、TNF-α、关节组织中NO、PGE，的生成有抑制作用。结论：CSG具有较强的抗炎作用，抗炎机制与抑制细胞因子TNF-α、IL-6和炎症因子NO、PGE，的生成有关。     

山茱萸羟甲基糠醛对肿瘤坏死因子α致肝细胞凋亡的保护作用研究

目的从线粒体途径探讨山茱萸活性成分5-羟甲基糠醛对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和D-氨基半乳糖(DGal N)所致肝细胞凋亡的保护作用。方法体外培养人正常肝L02细胞,用TNF-α(100μg/L)和D-Gal N(44 mg/L)诱导肝细胞损伤模型,采用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测细胞活力;流式细胞仪检测5-羟甲基糠醛对细胞凋亡的影响;Western-blot检测线粒体途径凋亡标志蛋白Apaf-1、AIF、cytochrome C、Bcl-2、Bcl-XL、Bax表达水平的变化;分光光度法检测Caspase-3、Caspase-9的活性。结果与TNF-α和D-Gal N模型组相比,不同浓度的5-羟甲基糠醛作用后,可显著减轻L02肝细胞的增殖抑制、降低细胞的凋亡率,并使促凋亡蛋白Apaf-1、AIF、cytochrome C、Bax的表达量明显下降,而使抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL的表达量显著上升,同时使细胞凋亡的关键蛋白酶Caspase-3、Caspase-9的活性显著降低。结论山茱萸羟甲基糠醛对TNF-α和D-Gal N所诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与线粒体介导的凋亡通路以及BCL-2家族成员的表达调控有关。     

大黄对多器官功能障碍综合征大鼠中性粒细胞凋亡的调节作用

目的探讨大黄对多器官功能障碍综合征(MODS)大鼠中性粒细胞(PMN)凋亡的调节作用及意义。方法纯种SD大鼠随机分成对照组、模型组及治疗组,模型组及治疗组分别于造模后2、6、12h处死动物行支气管肺泡灌洗,分离PMN检测细胞凋亡和TNF-α含量,并与对照组进行比较。结果与对照组相比,模型组及治疗组PMN凋亡下降,TNF-α含量升高;与相同时点模型组相比,治疗组PMN凋亡升高,TNF-α含量下降。结论MODS大鼠肺泡灌洗液PMN凋亡延迟。大黄能抑制MODS大鼠TNF-α释放,并对PMN凋亡延迟有改善作用。     

黄芩苷对TNF-α诱导血管内皮细胞损伤的影响

目的：研究黄芩苷对肿瘤坏死因子（TNF-α）诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用。方法：取对数生长期的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,比较有无TNF-α（50ng/ml）诱导时黄芩苷（120、60、30μg/ml）对HUVEC增殖的影响;采用流式细胞仪,分别检测不同浓度的脂多糖（LPS）、佛波酯（PMA）对HUVEC表达CD106的影响,黄芩苷对HUVEC表面CD54、CD106表达的影响、不同浓度的TNF-α对HUVEC凋亡的诱导作用,以及黄芩苷对TNF-α诱导的HUVEC凋亡率的影响。结果：120μg/ml黄芩苷对正常细胞的增殖无显著性影响,但可改善TNF-α对HUVEC细胞增殖的抑制作用;不同浓度LPS、PMA刺激24h、TNF-α诱导以及黄芩苷对HUVEC表面黏附因子CD106的表达均无显著性影响,但120μg/ml、60μg/ml黄芩苷可有效降低TNF-α诱导的CD54的表达,抑制率分别为41%、15%;100 ng/ml TNF-α作用24h诱导的早期凋亡率最高,120μg/ml黄芩苷可抑制TNF-α诱导的凋亡率的增加,抑制率为38%。结论：黄芩苷对TNF-诱导的血管内皮细胞损伤的保护机制与其能抑制黏附因子表达与细胞凋亡有关。     

原花青素对肿瘤坏死因子-α诱导HeLa细胞凋亡和caspase-8活化的影响

目的研究原花青素对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HeLa细胞凋亡和caspase-8活化的影响。方法采用流式细胞术检测细胞凋亡,荧光检测试剂盒测定caspase-8活性,Westernblot检测caspase-8酶原表达水平。结果原花青素(5、10、20mg/L)对重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α,100μg/L)诱导的HeLa细胞凋亡均有显著的抑制作用(P<0.01),呈剂量依赖关系;原花青素(5、10、20mg/L)对rhTNF-α(100μg/L)诱导的HeLa细胞caspase-8活化均有显著抑制作用(P<0.01),呈剂量依赖关系;原花青素(5、10、20mg/L)对HeLa细胞caspase-8酶原表达无明显影响。结论原花青素抑制TNF-α诱导HeLa细胞凋亡可能与其抑制caspase-8活化有关。     

理气化痰祛瘀方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠血清TNF-αCRP的影响

目的：观察理气化痰祛瘀方对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠血清肿瘤坏死因子（TNF-α）、C-反应蛋白（CRP）的影响，探讨其可能作用机制。方法：以高脂饮食喂养SD大鼠12周，建立大鼠NASH模型，用不同剂量的理气化痰祛瘀中药干预，检测肝组织匀浆TC、TG的含量和血清ALT、AST水平，常规HE染色观察肝组织的病理改变，放免法和免疫比浊法分别检测血清TNF-α和CRP的水平。结果：模型组大鼠肝组织出现明显的脂肪变和炎症细胞浸润，其肝组织匀浆中TC、TG的含量及血清ALT、AST、TNF-α、CRP水平均明显高于正常对照组，血清CRP浓度和肝脏炎症活动度计分呈明显的正相关；应用理气化痰祛瘀方干预可改善NASH大鼠炎症活动程度，同时血清ALT、AST、TNF-α、CRP水平也显著降低。结论：TNF-α、CRP参与高脂饮食诱导的大鼠非酒精性脂肪性肝炎的发生，理气化痰祛瘀中药能显著降低大鼠血清TNF-α、CRP水平，控制NASH的发展。     

何首乌对于肾虚模型大鼠肝毒性机制的实验研究

目的:探讨何首乌致大鼠肝脏损害的毒性机制。方法:SD大鼠分成两组分别造肾阳虚、肾阴虚模型,两模型组大鼠随机分为制首乌高剂量组(24 g/kg)、中剂量组(12 g/kg)、低剂量组(6 g/kg)、生首乌组(12 g/kg)和正常组,连续灌胃给药或蒸馏水3个月后,腹主动脉取血,离心,取血清检测AST(谷草转氨酶)、ALT(谷丙转氨酶)、ALP(碱性磷酸酶)、TBIL(总胆红素)、IBIL(间接胆红素)。取肝脏观察肝细胞形态学改变。采用ELISA法测定肝组织中炎症介质肿瘤坏死因子TNF-α水平。检测肝线粒体Na~+K~+-ATP酶、Ca~(2+)Mg~(2+)-ATP酶活性。结果:肾阳虚模型大鼠血清5个生化指标有不同程度的变化,而肾阴虚组除生首乌灌胃的大鼠之外未见显著改变。炎症介质TNF-α含量明显升高。Na~+K~+-ATPase、Ca~(2+)Mg~(2+)-ATPase水平下降。结论:生首乌对大鼠有肝毒性,制首乌对肾阳虚模型有一定的肝损伤,何首乌致大鼠肝毒性的机制可能与炎症因子的增加导致线粒体功能障碍有关。     

复方茵柏颗粒对四氯化碳致急性肝损伤大鼠TNF-α及细胞凋亡的影响

目的：探讨复方茵柏颗粒对四氯化碳（CCl4）致肝损伤大鼠TNF-α及细胞凋亡的影响。方法：大鼠腹腔单次注射40%CCl4玉米油制备急性肝损伤模型,将大鼠随机分为6组：正常对照组、模型组、复方茵柏颗粒低、中、高剂量组（2.16 g·kg^-1、4.32 g·kg^-1、8.64 g·kg^-1）、阳性对照组（复方茵柏合剂8.64 g·kg^-1）,用酶联免疫吸附法测定血清TNF-α水平,用TUNEL法检测组织凋亡细胞,用酶联免疫吸附法检测肝匀浆Caspase-3的活性。结果：复方茵柏方能明显降低肝损伤组大鼠血清TNF-α水平,抑制细胞凋亡,并明显降低肝匀浆Caspase-3的蛋白表达量,与模型组比较有显著差异（P〈0.01,P〈0.05）。结论：复方茵柏颗粒抗CCl4所致肝损伤的作用与抑制TNF-α分泌、抑制细胞凋亡有关。     

黄芩苷对体外肿瘤坏死因子α诱导培养人早孕绒毛细胞滋养层细胞凋亡的影响

目的：研究肿瘤坏死因子α（TNF-α）对人早孕绒毛细胞滋养层细胞（CTB）细胞活力的影响及黄芩苷对体外TNF-α诱导培养CTB凋亡的影响。方法：选取不同浓度的TNF-α作用于CTB,四甲基偶氮唑盐（MTT）比色实验分析TNF-α对CTB细胞活力的影响。选取TNF-α作用浓度10ng/ml造模及0.04ng/ml的黄芩苷浓度作用于CTB,MTT和流式细胞术分析黄芩苷对CTB凋亡的影响荧光显微镜进行CTB凋亡的形态学观察。结果：TNF-α作用后的CTB活性（A值）均低于空白对照组,并且随着TNF-α浓度越大,A值越小。10、20ng/ml浓度TNF-α作用后CTB与空白对照组比较差异有显著性,P〈0.05。经TNF-α诱导培养24 h的CTB加入黄芩苷后的细胞活性均高于凋亡模型组,差异具有显著性,P〈0.05。流式细胞术示黄芩苷作用后的CTB凋亡率低于凋亡模型组。在荧光显微镜下,凋亡的CTB细胞核变小皱缩,可见致密强荧光。结论：TNF-α明显抑制细胞增殖分裂的过程。黄芩苷对TNF-α诱导培养的CTB凋亡有抑制作用。     

抗纤灵冲剂对慢性肾衰模型肾组织TNF-mRNA、PDGF-mRNA的影响

目的：观察抗纤灵冲剂对5／6肾切除慢性肾衰(CRF)大鼠肾组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血小板源性生长因子(PDGF)的影响。方法：用RT-PCR法检测CRF大鼠肾组织TNFα-mRNA及PDGF-mRNA表达及应用ELISA法检测实验后各组大鼠血液TNF-α含量。结果：正常组大鼠肾组织仅微弱表达：PDGF-mRNA、TNFα-mRNA，模型大鼠残肾组织有高表达，抗纤灵冲剂有较强的抑制作用，丹参、制大黄作用次之，蒙诺亦有一定的抑制作用。结论：抗纤灵冲剂通过抑制肾组织TNFα-mRNA、PDGF-mRNA表达、降低血清TNF-α含量，从而减轻了在肾小球和间质ECM的沉积，改善了肾脏纤维化，延缓了肾功能的恶化。     

茵陈蒿汤与栀子肝毒性的比较研究

目的:比较茵陈蒿汤中其他药物与栀子合用对其肝毒性及作用环节的影响。方法:大鼠分别灌胃给予栀子及茵陈蒿汤水煎液,栀子的剂量为12g/kg,茵陈蒿汤的剂量为茵陈蒿18g/kg、栀子12g/kg、大黄6g/kg,方中所含各药量均扩大为临床用药等效量的10倍。每天给药1次,3天后检测血清中ALT、AST、ALP、TBA,取肝脏计算肝脏指数。测定肝组织中SOD活性、MDA含量、GSH-PX活性、TNF-α的含量,TUNEL法测肝组织中的细胞凋亡;免疫组化法测肝组织中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果:栀子组(生药12g/kg)与正常对照组相比,肝脏指数显著升高;ALT、AST、ALP、TBA均极显著升高;大鼠肝组织中SOD、SOD/MDA及GSH-PX极显著降低,MDA显著升高;TNF-α的含量极显著升高;累积光密度与凋亡指数显著升高;Bax、Bax/Bcl-2与正常对照组相比显著升高,Bcl-2显著降低;茵陈蒿汤组与栀子组相比,ALT、ALP、TBA均显著降低;SOD、SOD/MDA极显著升高,GSH-PX无明显差异;大鼠肝组织中TNF-α的含量无明显差异;凋亡指数显著降低;Bax、Bax、Bax/Bcl-2均没有明显差异。结论:栀子肝毒性的机制与氧化应激、炎症反应诱导肝细胞的坏死及凋亡有关;茵陈蒿汤中的其他中药组方使用可减轻栀子的肝毒性。     

生大黄对肝性脑病大鼠肿瘤坏死因子-α和血氨水平的影响

目的观察生大黄对肝性脑病（HE）大鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和血氨（BA）水平的影响。方法采用药物诱导加结扎、切除2/3肝脏的方法建立大鼠HE模型,治疗组用生大黄水煎液5g/100g灌胃,对照组乳果糖溶液0.5g/100g灌胃。观察大鼠脑电图、血清TNF-α、BA水平和肝功能[丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）]变化。结果治疗后,与模型组比较,生大黄组和乳果糖组大鼠脑电图有改善,血清TNF-α、BA、ALT、AST水平显著降低,并且治疗组血清TNF-α、BA水平低于乳果糖组,差异有统计学意义。结论生大黄可降低HE大鼠血清TNF-α和BA水平,对大鼠HE有治疗作用。     

虎杖方剂对CCl4致肝损伤大鼠TNF-α及细胞凋亡的影响

目的:观察虎杖方剂(虎杖、地榆、三白草等)对CCl4致肝损伤大鼠TNF-α及细胞凋亡的影响.方法:采用CCl4致大鼠肝损伤模型,用酶联免疫吸附法测定血清TNF-α水平,用TUNEL法检测组织凋亡细胞,用SABC免疫组化检测凋亡相关基因bcl-2与bax的蛋白表达.结果:虎杖方剂能明显降低肝损伤组大鼠血清TNF-α水平,抑制细胞凋亡,并提高bcl-2/bax值,与模型组比较有显著差异(P＜0.01),而虎杖方剂对正常肝组织无明显影响.结论:虎杖方剂抗CCl4所致肝损伤的作用与抑制TNF-α分泌、抑制细胞凋亡有关.     

首乌丸对卵巢早衰模型大鼠SIRT1/PGC-1α/Cytochrome C通路的影响

目的 探讨首乌丸是否通过调控线粒体介导的细胞凋亡通路抑制卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)进展。方法 60只SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、首乌丸4周组、首乌丸6周组、首乌丸预防组、补佳乐组。腹腔注射去氧乙烯基环己烯(deoxyvinylcyclohexene, VCD)建立POF大鼠模型,予相应药物灌胃治疗后,采用Elisa法检测各组大鼠血清性激素水平,HE染色观察卵巢组织结构变化,电镜观察卵巢超微结构变化,荧光标记TUNEL法检测卵巢细胞凋亡水平,荧光定量PCR及Western blot检测大鼠卵巢组织中沉默信息调节因子2相关酶1(silent mating type information regulation 2 homolog 1, SIRT1)、过氧化物酶增殖活化受体γ辅助活化因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator1α,PGC-1α)、抑凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(bcell lymphoma-2,Bcl-2)、促凋亡因子细胞色素C(cytochrome...     

毛蕊花糖苷通过Wnt/β-catenin信号通路对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤的改善作用

目的：探究毛蕊花糖苷通过调控Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路对缺血缺氧性脑损伤（HIE）新生大鼠的作用。方法：将72只新生SD雄性大鼠随机分为6组：假手术组、模型组、阳性药物组、毛蕊花糖苷高剂量组、毛蕊花糖苷低剂量组、毛蕊花糖苷+通路抑制组,每组12只,按组分别给予相应的干预。神经学评分评估大鼠神经行为学功能;TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测大鼠海马组织细胞凋亡率;干湿重法检测脑组织含水量;采用ELISA检测海马组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;荧光定量PCR法检测海马组织中Wnt1、Wnt3a、β-catenin mRNA表达水平;Western Blot法检测海马组织中Bcl-2相关x蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Wnt1、Wnt3a、β-catenin蛋白的表达水平。结果：与模型组比较,毛蕊花糖苷高剂量组、毛蕊花糖苷低剂量组大鼠神经学评分,脑组织含水量,细胞凋亡率,凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3及炎症因子TNF-α、IL-1β含量均显著降低（P<0.05）,Wnt1、Wnt3a、...     

柿叶黄酮对肿瘤坏死因子α诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡信号调节激酶1表达的影响

目的:观察柿叶黄酮对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的大鼠血管平滑肌细胞凋亡信号调节激酶1的影响。方法:体外培养SD大鼠血管平滑肌细胞,应用柿叶黄酮与TNF-α共同进行作用并设立对照进行比较,采用非放射性的MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。利用Western blotting蛋白免疫印迹法测定血管平滑肌细胞凋亡信号调节激酶1蛋白的表达情况。结果:各组的细胞增殖率分别为对照组0.817±0.074;TNF-α20 ng/ml组1.865±0.093;柿叶黄酮50μg/ml组0.905±0.044;TNF-α20 ng/ml联用柿叶黄酮50μg/ml组1.247±0.061。统计分析显示TNF-α20 ng/ml能明显刺激血管平滑肌细胞的增殖。柿叶黄酮单独作用对血管平滑肌细胞细胞增殖率无影响;柿叶黄酮对TNF-α诱导血管平滑肌细胞增于有明显的抑制作用,TNF-α对血管平滑肌细胞的凋亡信号调节激酶1蛋白的表达有显著的增强作用,这种作用部分可以被柿叶黄酮所抑制。结论:柿叶黄酮能明显抑制由TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞凋亡信号调节激酶1蛋白的表达。