负载腮腺腺样囊性癌抗原的树突状细胞诱导的抗肿瘤效应

目的:探讨腺样囊性癌肿瘤抗原负载的树突状细胞通过淋巴细胞介导的免疫反应,体外杀伤腺样囊性癌细胞的细胞毒性效应.方法:外周血单核细胞在GM-CSF + IL-4 的诱导下体外培养,用肿瘤细胞抗原冲击后,流式细胞仪检测树突状细胞抗原负载前后CD1a、CD83表达量的变化.MTT比色法检测同种异体的混合淋巴细胞反应和诱导细胞毒淋巴细胞CTL杀伤肿瘤细胞.结果:凋亡肿瘤抗原刺激后,CD83 表达增加﹙P<0.01﹚,而CD1a表达量下调﹙P<0.05).负荷肿瘤抗原树突状细胞体外诱导出明显的细胞不良反应,并刺激同种T淋巴细胞增殖.结论:GM-CSF + IL-4 诱导的单核细胞来源的树突状细胞,能在体外摄取肿瘤抗原而进一步成熟,通过激活淋巴细胞杀伤癌细胞.     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因修饰的树突状细胞疫苗增强体外抗肿瘤免疫效应

目的 研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因修饰树突状细胞(DC)后形态、表型及功能的变化,以及增强DC疫苗对肿瘤细胞的体外杀伤作用.方法 小鼠尾静脉注射趋化因子配体3(CCL3),分选得到B220- CDllc+细胞,经细胞因子培养诱导分化DC.在体外用含GM-CSF基因的重组腺病毒(AdGM-CSF)转染DC,酶联免疫吸附试验(ELJSA)检测转染后GM-CSF的水平.通过细胞形态学观察、表型分析及混合淋巴细胞反应(MLR),检测GM-CSF基因修饰前后DC的变化.反复冻融法制备胃癌可溶性抗原,将其与GM-CSF基因修饰的DC共同培养,制备DC疫苗,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测活化的T淋巴细胞在体外对小鼠前胃癌细胞(MFC)的杀伤作用,ELISA法检测干扰素γ(INF-γ)的分泌情况.结果 CCL3注射后,外周血中B220- CD11c+细胞明显增加,48 h达到高峰[占外周血单个核细胞的(13.88±1.10)%].AdGM-CSF转染后,培养液上清中GM-CSF浓度升高,当感染复数(MOI)为1:100时达到高峰[(130.00±12.61)pg/m1].经GM-CSF.基因修饰的DC在形态上更趋成熟,MHCⅡ类分子、CD80、CD86等细胞表型明显上调,具有更强的刺激T细胞增殖的能力.荷载胃癌抗原的DC激活的T淋巴细胞对MFC细胞具有特异性杀伤作用,并产生高水平的INF-γ[(1245.00±13.75)pg/ml].结论 GM-CSF转染DC后,能大量表达GM-CSF,DC形态及细胞表型更趋成熟,刺激T细胞增殖能力明显增强.GM-CSF基因修饰的DC在体外可诱导出针对靶肿瘤细胞的特异性杀伤作用.     

人外周血树突状细胞的体外扩增及鉴定

树突状细胞(DC)作为抗原提呈细胞,在激发T细胞免疫应答及T细胞依赖性抗体生成中起重要作用,骨髓及外周血的CD34造血前体细胞在GM-CSF和TNF-α的作用下,可在体外分化发育,生成树突状细胞.本研究从正常人外周血分离获得单核细胞,加入100ng/ml hGM-CSF、500U/ml hIL-4,体外培养1周后,获得大量高纯度的树突状细胞,其高表达MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子及共刺激分子B7-1和CD40,能强烈激发同种异体T淋巴细胞增殖,培养条件以应用自体血清或胎牛血清为最佳;单独应用hGM-CSF只能生成巨噬细胞;在培养末期加入TNFα可促进DC进一步成熟.本研究为DC的深入研究与临床应用奠定了基础.     

CpG-ODN持续刺激对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响

目的〖HT5"SS〗：研究CpGODN持续刺激对小鼠骨髓树突状细胞（DC）成熟的影响。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 小鼠骨髓细胞用GMCSF培养7 d,持续刺激组全程加入CpGODN,短期刺激组在培养的最后36 h加入CpGODN,对照组不加CpGODN。流式细胞仪检测细胞表型和细胞摄取抗原的能力,ELISA检测细胞产生的细胞因子,混合淋巴细胞培养检测细胞提呈抗原的能力。〖HT5W〗结果〖HT5"SS〗： 用CpGODN持续刺激的小鼠骨髓DC表达MHCⅡ、CD86和CD40等分子和分泌IL12 p70的能力并未增加,吞噬FITCOVA的能力显著升高,刺激同种异基因T细胞和刺激同种同基因T细胞增殖的能力显著低于CpGODN短期刺激组。〖HT5W〗结论〖HT5"SS〗：CpGODN持续刺激可抑制DC的发育成熟,可能是持续严重感染时免疫功能低下的原因。     

脐血来源树突状细胞体外诱导抗卵巢癌免疫特异性

[目的]研究脐血来源树突状细胞(DC)体外诱导特异性抗卵巢癌细胞的免疫效应.[方法]①从脐血中分离单个核细胞(MNCs)后,获得单核细胞(Mo).粒单集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)诱导分化,培养7天后应用流式细胞仪进行细胞表型分析.②诱导单核细胞分化的第3天加入人卵巢癌细胞株3AO的冻融抗原,共培养4天后获得负载肿瘤抗原的成熟DC;将致敏DC与从脐血中分离的同种异体T淋巴细胞共培养3天,获得细胞毒T淋巴细胞(CTL);四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL及上清对人卵巢癌细胞株3AO、人胚肾细胞株293T(对照细胞)、人肝癌细胞株HCCC-9810的细胞毒作用.[结果]①脐血来源单核细胞(Mo)在GM-CSF和IL-4作用下,7天后可分化生成成熟的DC,高表达DC特异性抗原CDla、CD80(B7-1)、CD86(B7-2)、HLA-DR、CD83.②DC可负载并递呈肿瘤抗原,激活同种异体T淋巴细胞,诱导肿瘤特异性CTL产生.不同浓度CTL及上清对卵巢癌细胞3AO有特异性杀伤、抑制作用(P＜0.05).[结论]脐血中单核细胞可体外分化扩增为成熟的功能性DC,并诱导出特异性杀伤卵巢癌细胞的免疫效应.     

负载腮腺腺样囊性癌抗原的树突状细胞诱导的抗肿瘤效应

目的：探讨腺样囊性癌肿瘤抗原负载的树突状细胞通过淋巴细胞介导的免疫反应,体外杀伤腺样囊性癌细胞的细胞毒性效应。方法：外周血单核细胞在GM—CSF＋IL-4的诱导下体外培养,用肿瘤细胞抗原冲击后,流式细胞仪检测树突状细胞抗原负载前后CD1a、CD83表达量的变化。MTT比色法检测同种异体的混合淋巴细胞反应和诱导细胞毒淋巴细胞CTL杀伤肿瘤细胞。结果：凋亡肿瘤抗原刺激后,CD83表达增加（P〈0．01）,而CD1a表达量下调（P〈0．05）。负荷肿瘤抗原树突状细胞体外诱导出明显的细胞不良反应,并刺激同种T淋巴细胞增殖。结论：GM—CSF＋IL-4诱导的单核细胞来源的树突状细胞,能在体外摄取肿瘤抗原而进一步成熟,通过激活淋巴细胞杀伤癌细胞。     

粒-巨噬细胞集落刺激因子剂量对小鼠骨髓源性树突状细胞成熟状态的影响

 目的　观察不同剂量粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）对小鼠树突状细胞（DC）形态、纯度、成熟程度的影响,为不同用途的DC疫苗制备选择合适的GM-CSF质量浓度提供理论依据。方法　用低剂量（5 ng／ml）、常规剂量（20 ng／ml）、高剂量（50 ng／ml）GM-CSF联合重组小鼠白细胞介素-4（mIL-4）诱导小鼠骨髓细胞体外分化为DC,流式细胞术测定CD11c、CD80和CD86表达率。结果　低剂量GM-CSF组诱导的DC不具有典型的DC形态,低表达CD11c、CD80和CD86。常规剂量GM-CSF组诱导的DC高表达CD11c、CD80和CD86,具有更强的刺激同种异体淋巴细胞增殖能力。高剂量GM-CSF组CD11c、CD80和CD86表达率最高,并具有最强的刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。结论　GM-CSF剂量影响诱导分化的DC成熟程度。低剂量的GM-CSF诱导的DC为不成熟的DC,常规剂量和高剂量GM-CSF诱导分化的DC为细胞表型和功能成熟的DC。高剂量GM-CSF诱导的DC细胞表型和功能最成熟。     

人脐血树突状细胞抗神经胶质瘤的体外免疫效应研究

目的　研究肿瘤抗原致敏的树突状细胞 (DC)对神经胶质瘤细胞的免疫杀伤效应。方法　应用免疫磁珠分选脐血 CD34细胞 ,经 SCF FL3 GM- CSF IL- 4 TNF- α的联合诱导培养 DC,采用相差显微镜观察树突状细胞的形态 ;流式细胞仪作 DC的表面标志检测 ;MTT比色法测定同种异型的混合淋巴细胞反应能力和诱导CTL 毒性的检测。结果　 (1)脐血 CD34细胞在体外经细胞因子联合刺激后呈典型的 DC形态 ;(2 )流式检测 CD4 0、CD80和 CD86等成熟 DC特异性表面标志呈高表达 ,分别与诱导前比较 ,差异均有显著性 ;(3) MTT法测得脐血来源的 DC较外周血 DC刺激同种异体 T淋巴细胞增殖能力弱 ;经肿瘤抗原负载的 DC体外诱导出较强 CTL 毒性。结论　脐血 CD34细胞经体外扩增诱导的 DC具有典型的 CTL 毒性 ,为临床应用脐血来源 DC抗神经胶质瘤的生物治疗提供了理论依据     

人外周血树突状细胞诱导及免疫学特性研究

[目的]从人外周血分离、纯化、扩增树突状细胞(DC),并对其形态学和免疫学特性进行初步探讨.[方法]从人外周血分离DC前体细胞(主要为CD14 细胞)用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素-4(rhIL-4)联合培养,诱导扩增成熟DC.观察DC形态、分析DC表型、核型及检测DC激发同种异体淋巴细胞增殖能力.[结果]分离的DC前体经rhGM-CSF和rhIL-4共同培养1周后,可获得大量成熟DC,扩增了24.5倍,纯度达90%以上.DC高表达分化抗原CD86、CD40、HLA-DR、CD83、CDIa,能强烈激活同种异体T淋巴细胞增殖.[结论]人外周血CD14 细胞经体外诱导培养,可以生成大量功能成熟的DC,从而为进一步开展DC的基础研究和临床应用打下基础.     

四种不同来源的树突状细胞的性能比较研究

目的:探讨正常人外周血单按细胞、肿瘤患者外周血单按细胞、脐带血CD34^ 细胞、非淋巴细胞白血病细胞来源的树突状细胞性能差异。方法：分别利用正常人及肿瘤患者的外周血分离单个核细胞，黏附贴壁法收集单核细胞，在GM-CSF、IL-4及TNF-α细胞因子组合下诱导树突状细胞；脐带血细胞则利用MACS系统分离纯化CD34^ 细胞作为树突状细胞的前体细胞，培养体系为FL SCF GM-CSF IL-4 TNF-α；非淋巴细胞白血病细胞作为树突状细胞的前体细胞培养条件同CD34^ 细胞。流式细胞仅分析诱导细胞的表型，电镜分析细胞形态。结果：利用4种不同来源的前体细胞在不同细胞因子组合下可分别诱导出DC细胞，细胞CD1a，CD80，HLA-DR的表达较诱导分化前明显上调．细胞形态学表明4种细胞来源的DC均有较典型的DC细胞形态，并均可刺激同种异体T细胞的增生。结论：利用健康人或肿瘤患者外周血可成功诱导出树突状细胞，利用脐血CD34^ 细胞及部分非淋巴细胞白血病原代细胞也可体外诱生出树突状细胞，不同来源的树突状细胞在形态及初步功能上无明显区别。     

CpG ODN加强树突状细胞疫苗抗Lewis肺癌的研究

目的　探讨CpGODN对树突状细胞 (DC)疫苗抗肿瘤作用的影响。方法　应用ODN182 6作为DC的成熟刺激信号 ,体外控制DC充分成熟 ,以混合或融合的方式将肿瘤抗原负载于DC制备DC疫苗。以特异性杀伤细胞活性和淋巴细胞增殖反应测定疫苗的体外免疫活性 ,并将疫苗经小鼠腹腔注射 ,观察治疗和预防实验肿瘤的生长情况。结果　经ODN 182 6刺激后的DC细胞形态呈成熟状态 ,流式细胞仪分析检测刺激前后DC细胞表面分子CD4 0的表达分别为 11和 2 4 (MFI) ,CD86的表达分别为 33和 75 (MFI) ,刺激后的DC培养上清中IL 12的分泌水平为刺激前的 10倍。刺激后DC融合疫苗组CTL活性、T淋巴细胞增殖活性及体内Lewis肺癌移植瘤的抑瘤率均明显高于未刺激的DC融合组 (P <0 .0 5 )。结论　CpGODN能通过诱导DC成熟 ,增强DC疫苗的抗肿瘤作用 ,有效诱导机体产生特异的抗肿瘤反应。未成熟的DC可通过与肿瘤细胞混合的方式 ,获得较好的抗原捕获效果 ,产生一定的抗肿瘤效应 ,而对于刺激成熟的DC则需通过融合手段负载抗原 ,达到有效的抗肿瘤活性。     

CpG联合MUC1增强人外周血树突状细胞功能的实验研究

目的：观察CpG联合黏蛋白1（MUC1）应用对树突状细胞（DC）刺激T细胞增殖作用的影响。方法：应用淋巴细胞分离液分离人外周血单核细胞,体外培养应用GM－CSF、IL－4、TNF－α等细胞因子诱导DC,观察细胞形态,并通过流式细胞术检测细胞标志物CD80、CD86。收获DC按如下分组：A：DC;B：DC＋CpG;C：DC＋MUC1;D：DC＋CpG＋MUC1;E：CpG＋MUC1,分别与T淋巴细胞混合培养,通过MTT法检测T细胞增殖情况。结果：DC表型检测结果为：CD80＋细胞占70．4％,CD86＋细胞占72．0％,呈现成熟DC表型。MUC1与DC联合疫苗与淋巴细胞混合培养显示：DC具有刺激T细胞增殖的作用,CpG＋DC组和MUC1＋DC组,分别较单纯DC组对T细胞的刺激增殖作用明显增强（P＜0．01）,DC＋CpG＋MUC1组又明显高于单用MUC1或CpG＋DC组,差别显著（P＜0．01）,单纯加CpG和MUC1（无DC组）则基本无明显刺激T细胞增殖作用。结论：CpG联合MUC1能明显提高DC促T细胞增殖的功能。     

Enhancing radiosensitivity of human pulmonary adenocarcinoma cell line A549 by CpG ODN1826

Preclinical and early clinical trials indicate that synthetic oligodeoxynucleotides containing unmethylated CpG dinucleotides (CpG ODN) have potent immunostimulatory effects and can enhance the anticancer activity of a variety of cancer treatments. In this study, CpG ODN1826 was used to increase the radiosensitivity of human pulmonary adenocarcinoma cell line A549, and some underlying mechanisms were also detected. With the treatment of CpG ODN on A549 cells, there was an upregulation of CD40, CD80, CD86, and MHC-II on A549 cells in association with Th1 cytokine production. Further, the protein level of toll-like receptor (TLR)-4 was decreased, whereas TLR-9 was enhanced. Flow cytometry results showed that CpG ODN could increase mitochondrial membrane potential and subsequently promote the apoptosis of A549 cells, resulting in increased radiosensitivity. These results suggest a regulatory role of CpG ODN1826 in enhancing the radiosensitivity of A549 cells by activating the adaptive and innate immune responses, thereby providing a new potential strategy to the treatment of malignant tumors.     

Dendritic cells stimulated with cytidine-phosphate-guanosine oligodeoxynucleotides and interferon-alpha-expressing tumor cells effectively reduce outgrowth of established tumors in vivo

Dendritic cells (DC) are potent antigen-presenting cells that elicit immune responses to foreign antigens. We have previously demonstrated the synergistic effects of cytidine-phosphate-guanosine (CpG) oligodeoxynucleotides (ODN) and interferon (IFN)-alpha on DC maturation in vitro. In the present study, the antitumor effects of DC preincubated with IFN-alpha gene-overexpressing murine colorectal cancer MC38 cells (MC38-IFN-alpha) and CpG ODN were evaluated in a poorly immunogenic murine cancer system. When we injected DC preincubated with MC38-IFNalpha and CpG ODN subcutaneously to mice bearing MC38 wild-type tumors, the outgrowth of the established parental tumors was suppressed significantly compared with that following administration of DC with MC38-IFN-alpha (P = 0.008). All mice injected with DC preincubated with MC38-IFN-alpha and CpG ODN rejected a subsequent parental tumor challenge. Immunohistochemical and flow cytometric analyses showed that CD4(+), CD8(+), and NK1.1(+) cells markedly infiltrated the established tumors of mice treated with DC preincubated with MC38-IFN-alpha and CpG ODN. From the results in immune cell-depleted mice, CD4(+) and asialo-GM-1(+) cells seemed to contribute to the antitumor effects induced by the combination DC therapy. Furthermore, non-specific cytolysis was detected when splenocytes of mice inoculated with DC preincubated with MC38-IFNalpha and CpG ODN were used as effector cells. Using an interleukin (IL)-12-neutralizing antibody it was suggested that IL-12 stimulates natural killer cells and contributes in part to the antitumor effects induced by DC incubated with CpG ODN and IFN-alpha. As DC-based immunotherapy with CpG ODN and IFN-alpha-expressing tumor cells induces a potent antitumor immune response, it should be considered for clinical application.     

含甲胎蛋白肽段的重组腺病毒转染树突状细胞诱导细胞毒性T细胞对肝癌细胞的体外杀伤效应

目的 研究人外周血单核细胞来源的树突状细胞(DC)转染含甲胎蛋白(AFP,137-145)片段的重组腺相关病毒后所诱导的特异性T细胞对肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721的体外杀伤作用.方法 抽取健康志愿者外周血,分离单核细胞,体外培养,使用含AFP片断的重组腺相关病毒转染未成熟DC,诱导特异性T细胞.检测体外培养的DC和细胞毒性T细胞(CTL)活性,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对HepG2和SMMC-7721细胞的杀伤作用.结果 转染或未转染的体外培养的成熟DC高表达CD40、CD86和IL12,成熟DC诱导的CTL高表达IFNγ;修饰成熟后的DC后体外能诱导特异性CTL,该CTL在休外对肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721均有杀伤作用.结论 重组腺相关病毒转染DC,不明显改变DC表型和刺激淋巴细胞增殖和分化功能,可诱导自体CTL增殖,含AFP(137～145)片断的腺相关病毒转染DC诱导自体CTL对肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721细胞有明显杀伤作用,DC疫苗可以作为肝癌患者免疫治疗的有效补充.     

负载肺癌干细胞膜微粒的 DC －CIK 对耐药肺癌细胞的靶向杀伤作用及对肺癌干细胞凋亡的影响

目的：探讨负载肺癌干细胞膜微粒的 DC －CIK 细胞对 EGFR －TKI 耐药肺癌细胞的杀伤作用及对肺癌干细胞凋亡的影响机制。方法：无血清悬浮细胞培养法富集 EGFR －TKI 耐药肺癌细胞 A549、H292干细胞样细胞,RT －PCR 检测干细胞标志物,裸鼠成瘤实验鉴定致瘤性。超滤和差速离心法获取肺癌干细胞膜微粒。流式细胞术分别测定共孵育组和常规培养组 DC 成熟标志 CD86和 CD83,测定两组 DC －CIK 细胞表型CD3＋、CD3＋CD8＋、CD3＋CD56＋、CD3＋CD4＋;形态观察及 MTT 法分别测定不同效靶比两组 DC －CIK 对A549、H292的杀伤效应;ELISA 法分别检测两组 DC －CIK 上清中 IL －2、IFN －γ、TNF －α分泌水平;流式细胞术分别测定两组 DC －CIK 对肺癌干细胞凋亡的影响。结果：富集培养获得的 EGFR －TKI 耐药肺癌干细胞样细胞高表达干细胞标志物 Sox2和 Oct4,并具较强裸鼠致瘤性。负载膜微粒的 DC 成熟标志 CD86和 CD83较常规 DC 表达显著升高;负载膜微粒的 DC －CIK 较常规 DC －CIK 细胞表型 CD3＋、CD3＋CD8＋、CD3＋CD56＋、CD3＋CD4＋升高,对 EGFR －TKI 耐药肺癌细胞杀伤效应高于常规 DC －CIK,并具有显著提高的靶向趋向性;负载膜微粒的 DC －CIK 分泌因子对 EGFR －TKI 耐药肺癌干细胞样细胞凋亡的影响与常规 DC －CIK 不同。结论：与常规培养 DC －CIK 相比,负载膜微粒的 DC －CIK 活性提高,对 EGFR －TKI 耐药肺癌细胞的体外特异靶向杀伤效应显著提高。细胞分泌因子可显著上调耐药肺癌干细胞的细胞凋亡率。     

DC与CIK共培养对骨肉瘤细胞的杀伤作用

目的探讨树突状细胞(dendritic cells,DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)共培养对人骨肉瘤细胞的杀伤效应。方法从健康志愿者中分离外周血单个核细胞,制备DC和CIK,并以5∶1比例混合培养。采用CCK-8法和流式细胞术检测DC-CIK共培养对人骨肉瘤HOS细胞增殖和凋亡的影响;构建裸鼠移植瘤模型,观察DC-CIK共培养对裸鼠体内移植瘤生长的影响。结果流式细胞术检测结果显示,分化成熟的DC中CD83+和CD86+阳性细胞比例均高于未成熟的DC(P=0.009,0.006);DC-CIK共培养后,CD3+CD8+和CD3+CD56+阳性细胞比例均高于CIK单独培养组(P=0.004,0.004)。与DC-CIK共培养后,HOS细胞增殖能力受抑制,细胞凋亡能力增强(P<0.05);PD-L1的表达水平明显下调(P=0.006)。裸鼠移植瘤模型中,DC-CIK共培养可抑制HOS细胞诱导的移植瘤生长(P=0.008)。结论DC-CIK共培养能抑制人骨肉瘤HOS细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控PD-1/PD-L1信号通路有关。     

Stimulatory effects of CpG oligodeoxynucleotide on dendritic cell‐based immunotherapy of colon cancer in CEA/HLA‐A2 transgenic mice

Immunostimulatory DNA containing unmethylated cytosine‐guanine (CpG) motifs have been successfully used as adjuvants to enhance the immunity of vaccines designed to trigger antitumor T‐cell responses. We examined the effect of a CpG oligodeoxynucleotide (CpG ODN) for its ability to potentiate the activity of tumor antigen‐pulsed dendritic cells (DC) in a clinically relevant mouse model, which is transgenic for both carcinoembryonic antigen (CEA) and HLA‐A2 for the treatment of colon carcinoma in a therapeutic setting. The systemic administration of CpG ODN 1826 alone had modest effect on tumor growth when tumors were palpable and had no effect with larger tumor burden. However, coadministration of CpG ODN 1826 with the vaccine provided significant increase in tumor‐free survival compared with mice immunized with DC‐based vaccines alone. The DC/CpG combined vaccination strategy resulted in increased secretion of Th1 cytokines and HLA‐A2‐restricted CEA‐specific CTL responses were also enhanced. Both tumor regression and extended tumor‐free survival resulting from DC/CpG combination therapy required the participation of T cells. Tumor‐free mice were resistant to tumor rechallenge and immunity conferred by the vaccine was transferable in athymic nude mice. These results provide evidence that vaccination with antigen‐pulsed DC with CpG ODN as adjuvant can lead to effective tumor regression and long‐term survival in a murine model of colon carcinoma. © 2008 Wiley‐Liss, Inc.     

IL-12与IL-18联合刺激对树突状细胞分泌的exosome活性的影响

目的:观察IL-12与IL-18联合刺激对树突状细胞(dendritic cell,DC)分泌的exosome(DC derived exosome,Dex)活性的影响,为探索高效的exosome肿瘤疫苗奠定基础。方法:取正常健康人外周血单个核细胞诱导培养DCs,分别以IL-12、IL-18或IL-12+IL-18联合刺激DC,并设空白对照组、T细胞对照组,分别提取各组的Dex,Western blotting检测Dex中HLA-DR、CD83的表达,流式细胞仪检测CD54、CD80及CD86的表达;MTT法检测Dex刺激T细胞增殖的作用,ELISA法测定T细胞IFN-γ的分泌量。结果:IL-12、IL-18、联合组、空白组的Dex中均有HLA-DR、CD83蛋白表达;联合组Dex的CD54(323.67±44.06 vs 246.17±31.91、236.33±33.87、167.67±28.73,P<0.05)、CD80(406.37±39.18 vs 331.67±36.15、335.67±41.38、260.00±35.58,P<0.05)及CD86(390.50±38.06 vs 314.33±36.64、319.00±33.10、246.83±30.55,P<0.05)表达均高于IL-12组、IL-18组及空白组;联合组刺激T细胞增殖高于IL-12组、IL-18组及空白组、T细胞组(1.98±0.31vs 1.55±0.23、1.57±0.21、1.10±0.18、0.53±0.09,P<0.05);联合组刺激T细胞分泌IFN-γ水平高于IL-12组、IL-18组及空白组、T细胞组(436.67±61.80 vs 295.04±40.25、358.18±55.77、225.00±36.44、139.50±17.63,P<0.05)。结论:IL-12与IL-18联合刺激能增加Dex表达CD54、CD80及CD86,促进Dex刺激的T细胞的增殖及其IFN-γ的分泌。     

腺病毒转染黑色素瘤抗原基因3的树突状细胞疫苗抗胃癌的免疫效应

目的 研究趋化因子巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)动员的树突状细胞(DC),经黑色素瘤抗原基因3(MAGE-3)腺病毒转染后对胃癌细胞的免疫效应.方法 615小鼠尾静脉注射MIP-1α,分选得到B220-CD11c+细胞,加入细胞因子连续培养,检测其细胞表面标志和混合淋巴细胞反应(MLR).收集培养后的B220-CD11c+细胞,加入编码MAGE-3的重组腺病毒进行转染,制备表达肿瘤抗原的DC疫苗,以荷载小鼠前胃癌(MFC)全肿瘤细胞抗原制备的DC疫苗作为阳性对照.采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法,榆测活化的T淋巴细胞在体外对MFC细胞的杀伤作用.采用酶联免疫吸附试验(ELISA),检测γ干扰素(INF-γ)的分泌情况.DC疫苗皮下注射MFC荷瘤小鼠,观察小鼠瘤体生长情况和存活时间.结果 MIP-1α注射后,外周血中B220-CD11c+细胞明显升高.新鲜分离的B220-CD11c+细胞在体外经过细胞因子诱导分化后具有典型的DC表面标志,并在MLR中具有极强的刺激T淋巴细胞增殖的能力.腺病毒转染MAGE-3的DC激活的T淋巴细胞表现出对MFC细胞的特异性杀伤作用,产牛高水平的INF-γ[(1460.00±16.82)ps/ml].实验组荷瘤小鼠接受DC疫苗治疗后,肿瘤牛长缓慢,观察至MFC细胞接种后的第27天,其肿瘤体积仅为(3.46±1.12)cm3;实验组小鼠的肿瘤体积与对照组之间的差异有统计学意义(P<0.01).实验组小鼠存活时间明显延长,与对照组之间的差异有统计学意义(P<0.01).结论 注射趋化因子MIP-1α可快速动员并诱导分化为成熟DC.肿瘤抗原基因MAGE-3经腺病毒转染制备的DC疫苗,在体外可以诱导出针对胃癌细胞的特异性杀伤作用,在体内对MFC荷瘤小鼠有明显的免疫治疗作用.