聚桂醇对人肝癌HepG2细胞增殖及迁移影响的体外研究

目的体外探讨聚桂醇对人肝癌HepG2细胞的生长、迁移影响及血管内皮生长因子(VEGF)的表达调控。方法应用MTS比色法观察不同浓度的聚桂醇对人肝癌细胞系细胞的生长抑制作用,并观察细胞在各时间点的抑制率;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力的变化;用细胞划痕实验观察对肝癌细胞迁移的影响;Western blot检测VEGF蛋白的表达变化。结果聚桂醇以剂量依赖的方式抑制HepG2细胞生长,0、20、40、60及80μg/ml聚桂醇对肝癌细胞的生长抑制率分别为0、26.78%、35.37%、51.52%和67.15%(P<0.05);聚桂醇能抑制肝癌细胞的克隆形成、迁移及VEGF蛋白表达,且抑制VEGF蛋白表达跟作用时间呈正相关。结论聚桂醇能抑制肝癌细胞增殖及迁移,影响VEGF蛋白表达。     

中药姜黄的两种提取物对肝癌细胞生长抑制的比较

目的:比较传统中药姜黄的两种提取物姜黄素(Curcumin)和Calebin·A对肝癌细胞(HepG2)的生长抑制作用.方法:应用MTT比色法检测姜黄素和Calebin-A对肝癌细胞体外生长的抑制作用;平板克隆检测两种提取物处理前后HepG2细胞的克隆形成能力;TUNEL法测定两种药物诱导肝癌细胞凋亡的作用.结果:姜黄素和Calebin-A对肝癌细胞的生长均有抑制作用,且随药物作用的浓度升高和时间延长,抑制效果增强.同一浓度下Calebin-A对细胞生长的抑制作用大于姜黄素,姜黄素和Cahbin-A作用肝癌细胞48 h后,半数细胞抑制作用所需浓度(IC50)分别约为25 μmol/L和10μmol/L.相同浓度时(25 μmol/L)两种提取物均可使肝癌细胞的克隆形成能力明显下降,且Calebin-A对细胞克隆形成能力影响更大.25 μmol/L姜黄素及Calebin-A作用肝癌细胞48h后,Cahbin-A诱导细胞发生凋亡的比例明显大于姜黄素.结论:姜黄素和Calebin-A对肝癌细胞的生长均有抑制作用,而且Calebin-A这种新的植物姜黄提取物对细胞的抑制作用更强.     

抗肿瘤血管生成药bevacizumab对VEGF促人肝癌细胞株HepG2增殖的阻断作用

目的:观察bevacizumab对肝癌细胞株HepG2增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:应用免疫细胞化学法和RT-PCR分别从蛋白和基因水平检测肝癌细胞株HepG2中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt-1、KDR的表达;ELISA检测HepG2培养上清液中VEGF蛋白的浓度;人重组VEGF(rhVEGF)和bevacizumab分别处理HepG2细胞后,MTT法检测细胞增殖活性,应用RT-PCR和Western印迹分别从基因和蛋白水平检测VEGF表达量的变化.结果:HepG2细胞中VEGF、Flt-1和KDR蛋白均呈阳性表达.rhVEGF可促进HepG2细胞的增殖,在0~100 ng/ml区间其促进增殖的作用呈剂量依赖性;而bevacizumab可抑制HepG2细胞的增殖,浓度为0.1、1、10、20 μg/ml时细胞增殖抑制率分别为(8.76%±1.15)%、(26.83±1.20)%、(31.87±1.30)%、(28.20±1.28)%.rhVEGF可促进HepG2细胞中VEGF的表达,而bevacizumab能抑制VEGF的表达.结论:Bevacizumab可能通过阻断VEGF的促增殖作用而抑制HepG2细胞增殖.     

E2F-1基因对HepG2肝癌细胞增殖影响的研究

目的了解转录因子E2F-1对肝癌细胞HepG2增殖的影响。方法脂质体Lipofectami-neTM2000将pCMV-E2F-1-HA2载体转染HepG2肝癌细胞,然后用含G418的培养液筛选获得具有Genectin抗性的过表达E2F-1的肝癌细胞株。通过MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖的变化。结果 MTT和克隆形成实验结果显示,过表达E2F-1的HepG2/E2F-1细胞组与HepG2/EV细胞组和HepG2细胞组相比,其增殖速度明显减慢(P<0.01)。结论 E2F-1基因过表达可抑制HepG2肝癌细胞的增殖。     

灵芝多糖对肝癌细胞株HepG2的PTEN活性的影响

目的探讨灵芝多糖对肝癌细胞株HepG2的PTEN蛋白的影响。方法以肝癌细胞株HepG2为供体,氟尿嘧啶作为阳性对照,采用MTT法检测不同浓度和时间灵芝多糖对肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用PTEN试剂盒检测PTEN蛋白的活性。结果灵芝多糖对人肝癌细胞24h的抑制率为60%,48h的抑制率为100%,6h凋亡率为63.3%,PTEN蛋白表达下降。结论灵芝多糖对肝癌细胞株HepG2的增殖有明显抑制作用,其凋亡机制可能与PTEN下调有关。     

CHFR基因在人肝癌HepG2细胞中的表达与作用

目的:研究CHFR基因在人肝癌细胞株HepG2中的表达,以及CHFR基因甲基化对HepG2细胞生长与集落形成的影响。方法:采用去甲基化剂5-氮-2-脱氧胞苷处理人肝癌细胞株HepG2,半定量RT-PCR检测CHFR在HepG2细胞中的表达变化,CCK法和平板集落形成试验分析HepG2细胞生长增殖情况的改变。结果:CHFR在HepG2细胞中表达缺失;经Aza去甲基化处理后,CHFR在HepG2细胞中逐渐恢复表达,肿瘤细胞抑制率和集落形成抑制率都逐渐增高,均存在剂量-反应关系;且CHFR表达水平与HepG2细胞抑制率、集落形成抑制率均呈正相关。结论:CHFR对于肝癌细胞的生长增殖能力发挥负向调控作用。     

白花丹醌对CIA大鼠滑膜细胞增殖及TNF-α、IL-1β和MMP-3表达的影响

目的 研究白花丹醌对脂多糖(LPS)诱导的体外培养CIA大鼠成纤维样滑膜细胞(CIA-FLS)的增殖及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达的影响.方法 采用Ⅱ型胶原蛋白+弗氏完全佐剂建立大鼠关节炎模型(CIA);原代培养CIA-FLS,MTT法检测药物对CIA-FLS增殖的影响;随机设立CIA对照组、 LPS对照组、甲氨蝶呤组、白花丹醌1.0 μmol/L组、白花丹醌1.5 μmol/L组、白花丹醌2.0 μmol/L组;各药物与细胞共同孵育48 h后,ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-a、 IL-1β和MMP-3的含量;Western blot检测细胞内MMP-3的蛋白含量.结果 MTT显示,白花丹醌能不同程度抑制 CIA-FLS的增殖,呈浓度和时间依赖性;与LPS对照组比较,甲氨蝶呤或白花丹醌均能明显下调细胞培养上清液中TNF-α、 IL-1β和MMP-3的含量(P<0. 001),明显降低细胞中 MMP-3的蛋白含量(P<0.001).结论 白花丹醌能抑制 CIA-FLS的增殖,并能通过下调TNF-α、IL-1β和MMP-3的表达而抑制LPS诱导CIA-FLS的炎症反应.     

普乐可复对肝癌细胞株HepG2增殖的影响

目的:研究普乐可复(即FK506)对肝癌肝移植术后体内可能残存肿瘤细胞的影响,从而对肝癌患者肝移植术后抗排异药物的选择起一定的指导作用.方法:在体外细胞培养条件下,通过MTT、RT-PCR、Western blot方法,研究普乐可复对肝癌细胞株HepG2增殖及其肿瘤相关细胞因子TGF-α和C-met的特异性表达的影响.结果:普乐可复组(5μg/L)对肝癌细胞株HepG2增殖及TGF-α及C-Met特异mRNA及蛋白的表达有抑制作用.与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:FK-506对肝癌细胞生长有一定的抑制作用.     

瑶药苦赖咪总醌提取物的制备及其抗肝癌活性研究

目的 研究瑶药苦赖咪总醌提取物的制备方法,并分析该提取物对人肝癌细胞的抑制作用.方法 采用醇提再酸碱处理及有机溶剂萃取的方法获得瑶药苦赖咪的醌类提取物,采用分光光度法对提取物中总醌的含量进行测定.使用不同浓度苦赖咪总醌提取物干预人肝癌HepG2细胞后,采用细胞计数检测法检测细胞增殖抑制率,通过细胞克隆形成实验、划痕实验...     

Bevacizumab对肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的探讨Bevacizumab对肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响。方法应用免疫细胞化学法检测肝癌细胞株HepG2中血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFRs）蛋白的表达；ELISA法检测HepG2细胞培养上清液中VEGF蛋白的表达；Bevacizumab处理HepG2细胞48h后，MTT法检测Bevacizumab对细胞增殖的抑制作用，用流式细胞仪检测并分析细胞凋亡变化。设不加药物的HepG2细胞为对照组。结果HepG2细胞中VEGF和VEGFR蛋白呈阳性表达，其细胞培养上清液中存在VEGF蛋白分泌；Bevacizumab可抑制HepG2细胞增殖；并可诱导HeF，G2细胞的凋亡，凋亡率为（17．04±0．14）％，明显高于对照组（2．85±0．08）％（P〈0．05）。结论Bevacizumab町直接抑制肝癌细胞株HepG2的增殖，并诱导其凋亡；为Bevacizumab除抗血管生成之外的抗肿瘤作用机制提供新的研究依据；为Bevacizumab在肝细胞癌治疗的应用提供理论依据。     

ErbB-3结合蛋白Ebp1基因过表达对人肝癌HepG2细胞生长增殖的影响

[目的]探讨ErbB-3结合蛋白Ebp1基因对肝癌细胞生长增殖的影响.[方法]利用脂质体法将pEGFPC1-Ebp1融合质粒转染到人肝癌细胞HepG2中,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白融合基因的表达并建立稳定表达Ebp1基因细胞系,应用Western blot检测转染后目的蛋白的表达,利用平板克隆集落形成观察细胞生长增殖能力的改变.[结果]在荧光显微镜下可见绿色荧光,Ebp1融合蛋白主要表达于胞质,转染pEGFPC1-Ebp1质粒后HepG2细胞中蛋白明显呈高表达;克隆集落形成实验结果表明,pEGFPC1空载体转染组和未转染细胞组相比较,Ebp1过表达细胞克隆集落形成显著增多.[结论]Ebp1过表达可增强人肝癌HepG2细胞增殖.     

EB1089对肝癌HepG2细胞的抑制作用

目的:探讨EB1089对体外培养的肝癌HepG2细胞增殖的影响.方法:以1,10,100nmol/LEB1089分别作用2,4,6和8d,采用平板克隆形成实验、细胞计数法及MTT法测定EB1089对HepG2细胞生长增殖的抑制作用,并绘制生长曲线.流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡.结果:平板克隆形成试验及MTT提示,EB1089对HepG2细胞的增殖有显著抑制作用,抑制率为16.9%～74.3%,EB1089的IC50为8.2nmol/L;细胞计数法的结果提示与平板克隆形成试验结果一致.流式细胞仪检测结果显示,10nmol/LEB1089处理HepG2细胞4d,G1期细胞占71.0%,对照组G1期细胞为63.2%,呈降低趋势;处理组与对照组S期及G2期分别占28.9%和36.8%,呈增加趋势,且处理组有凋亡峰出现,凋亡细胞占21.4%.结论:EB1089能够显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖,其机制可能与诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡有关.     

低剂量阿司匹林诱导产生的自噬减弱其对人肝癌HepG2细胞系的抑制作用

目的 研究一定浓度的阿司匹林对人肝癌HepG2细胞系的增殖抑制作用及产生抑制作用可能的原因.方法 采用MTT法和平板克隆实验研究阿司匹林对人肝癌HepG2细胞增殖活力的影响.吖啶橙荧光染色法观察阿司匹林对人肝癌HepG2细胞内自噬小体的影响.Western blot法检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在人肝癌HepG2细胞中的表达.结果 10 mmol/L浓度的阿司匹林能抑制人肝癌HepG2细胞的增殖活力,但增加HepG2细胞中自噬小体的数量,增加AMPK表达,降低 mTOR的表达,且和40 μm自噬抑制剂氯喹(CQ)联合使用时,CQ能够增强10 mmol/L浓度阿司匹林对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用.结论 联合自噬抑制剂CQ减弱浓度为10 mmol/L的阿司匹林诱导产生的自噬从而明显增强其抗HepG2作用.     

斑蝥酸钠对人肝癌细胞HepG2的增殖作用及血管内皮生长因子表达的影响

目的研究斑蝥酸钠对人肝癌细胞的增殖作用及其对血管内皮生长因子(VEGF)的表达的影响,探讨斑蝥酸钠抗肿瘤的作用机制。方法体外培养人肝癌细胞株(HepG2),用不同浓度的斑蝥酸钠作用于肝癌细胞,采用MTT法观察不同浓度和作用时间下斑蝥酸钠对细胞增殖的影响,采用免疫组化法检测血管内皮生长因子的表达情况。结果在一定浓度范围内斑蝥酸钠对肝癌细胞有明显增殖抑制作用,且降低了VEGF的分泌水平,并呈时间-剂量依赖关系。结论斑蝥酸钠对肝癌细胞的增殖有抑制作用,且减低了细胞内血管内皮生长因子蛋白的表达,表明斑蝥酸钠在抑制肝癌生长的作用机制之一是通过抑制肿瘤血管生成发挥作用的。     

民族药材白花丹体外抗肿瘤活性研究

目的 探讨白花丹体外抗肿瘤作用的活性部位.方法 MTT染色法对白花丹五种溶剂提取物体外抗肿瘤活性进行了初步的研究.结果 氯仿提取物对乳腺癌细胞(Bre-04)、神经癌细胞(N-04)、肺癌细胞(LU-04)有较好的抑制生长作用,IC50分别为0.269 9 mg/ml、0.263 4 mg/ml、0.496 1 mg/ml,对肝癌细胞HepG2抑制作用差,IC50为0.937 9 mg/ml;白花丹石油醚提取部位对乳腺癌细胞(Bre-04)、神经癌细胞(N-04)、肺癌细胞(Lu-04)、肝癌细胞HepG2的IC50分别为0.590 2 mg/ml、0.572 5 mg/ml、0.793 8 ms/ml、0.637 4 mg/ml;乙酸乙酯提取物对肺癌细胞(Lu-04)有一定的抑制作用,IC50为0.734 3 mg/ml;水溶性提取物以及正丁醇提取物无明显抑制肿瘤作用.结论 白花丹氯仿提取部位、石油醚提取部位体外抗肿瘤作用较好,值得对其提取部位进一步分离纯化并研究其抗肿瘤作用机制.     

生长抑素类似物对肝癌细胞的抑制作用及对CDK5表达的影响

目的探讨生长抑素及其类似物对人肝癌细胞的抑制作用及其对周期素依赖性蛋白激酶5（CDK5）的表达的影响。方法体外培养人肝癌细胞株（HepG2）,在倒置显微镜下观察不同浓度组肝癌细胞的形态变化。MTT比色实验观察不同浓度的奥曲肽（Octreotide）对细胞增殖的影响。细胞爬片,免疫细胞化学法检测CDK5的表达情况。结果不同浓度的奥曲肽对肝癌细胞增殖的抑制作用有差异,高剂量组的抑制作用最强。药物作用48h后,药物组CDK5的表达较对照组明显减少,着色程度随药物浓度增高而逐渐减弱。结论奥曲肽对肝癌细胞的增殖有抑制作用,可下调肝癌细胞中CDK5的表达,CDK5在奥曲肽抑制肝癌细胞增殖的过程中发挥作用。     

FOLFOX方案联合沙利度胺体外抑制人肝癌HepG2细胞VEGF、Caspase-3基因表达的研究

目的研究沙利度胺联合FOLFOX(folinic acid fluorouracil oxaliplatin)作用肝癌细胞HepG2后VEGF、Caspase-3的表达,以及探讨沙利度胺联合FOLFOX诱导HepG2细胞凋亡的机制。方法应用MTT法和流式细胞仪体外研究沙利度胺对HepG2细胞增殖的影响;采用western blot法,观察沙利度胺联合FOLFOX作用HepG2细胞48h后VEGF、Caspase-3的表达情况。结果沙利度胺对肝癌HepG2细胞有抑制作用,且沙利度胺联合FOLFOX显著提高了对肝癌细胞生长的抑制作用,沙利度胺联合FOLFOX作用于HepG2细胞48h后,细胞表面Caspase-3的表达均增强,VEGF的表达均降低。结论沙利度胺联合FOLFOX诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制可能可能通过调节VEGF蛋白表达激活caspase-3,从而诱导HepG2细胞凋亡。     

siRNA抑制人前列腺癌PC-3细胞株VEGF的表达及细胞增殖

目的:研究小干扰RNA(siRNA)对PC-3人前列腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的抑制作用及抑制癌细胞增殖和诱导凋亡的作用。方法:体外合成特异性靶向人VEGF基因的siRNA，并转染到PC-3细胞中;RT-PCR和Western blotting检测siVEGF对VEGF基因和蛋白表达的抑制作用;MTT法检测siVEGF对癌细胞增殖抑制作用，流式细胞术检测siVEGF诱导细胞凋亡的作用。结果:转染siVEGF1和siVEGF2组VEGF mRNA 表达水平与空白对照组比较分别下调了60.32%和70.73%；VEGF蛋白表达水平与空白对照组比较明显受到抑制，最高抑制率达72％；转染阴性对照质粒组VEGF基因和蛋白表达水平都无明显改变。转染siVEGF1和siVEGF2的细胞增殖受到抑制，增殖抑制率分别为49.5%和55.3 %，细胞的凋亡率分别为33.9%和42.0%。结论:构建的siRNA VEGF能特异有效下调VEGF基因的表达,瞬时转染siRNA VEGF能有效抑制人前列腺癌细胞PC-3增殖并诱导其凋亡。     

白术多糖对肝癌细胞增殖及侵袭的抑制作用及其机制

目的探讨白术多糖（PAM）对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制。方法体外培养肝癌细胞HepG2分别给予不同 浓度的PAM处理,通过CCK-8和Transwell实验检测肝癌细胞的增殖、侵袭能力。采用免疫荧光技术检测肝癌细胞中β-catenin 蛋白表达水平,采用RT-PCR技术和免疫印迹法检测AKT、GSK-3β的基因和蛋白表达水平及其磷酸化表达,检测MMP-2的基 因和蛋白表达水平。HepG2 细胞给予LiCl/PAM/LiCl 联合PAM处理,检测细胞增殖、侵袭能力改变,检测GSK-3β磷酸化和 MMP2的蛋白水平。结果与空白对照组相比,PAM处理后肝癌细胞体外增殖能力下降、侵袭能力下降（P<0.05）;PAM处理可 以下调β-catenin蛋白表达、下调MMP-2基因与蛋白表达水平,同时抑制AKT与GSK-3β的磷酸化（P<0.05）。PAM对肝癌细胞 体外增殖、侵袭及AKT/GSK-3β/β-catenin通路的影响呈浓度依赖性：PAM的浓度越高,对肝癌细胞体外增殖、侵袭的抑制作用 越强;对AKT与GSK-3β的磷酸化的抑制作用越强,对β-catenin表达的抑制作用也越强。LiCl可以逆转PAM对肝癌细胞增殖、 侵袭的抑制作用,同时可以逆转PAM对GSK-3β磷酸化和MMP2的蛋白表达的抑制。结论PAM对肝癌细胞的体外增殖和侵 袭能力具有抑制作用,PAM可能通过影响Wnt/β-catenin 信号通路发挥作用。     

Hepsin蛋白对肝癌细胞生长的影响

目的:探讨Hepsin蛋白对肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法:运用RT-PCR技术检测肝癌组织样品肝癌细胞系中Hepsin基因的表达水平,并从原发性肝癌患者的癌组织中扩增Hepsin基因编码区序列,该序列被克隆并构建pCMV-tag-HS表达质粒。将pCMV-tag-HS表达质粒转染人肝癌细胞系HepG2细胞、Bel-7402细胞,观察Hepsin蛋白对肝癌细胞的增殖能力和细胞凋亡效应的影响。结果:Hepsin基因在临床肝癌组织和人正常肝细胞L-02细胞中高表达,在人肝癌细胞系Bel-7402细胞、HepG2细胞和临床肝癌癌旁组织不表达或低表达,Hepsin蛋白可以增强肝癌细胞系的增殖能力,同时抑制肝癌细胞凋亡。结论:Hepsin蛋白促进肝癌细胞生长并抑制肝癌细胞凋亡。