同型半胱氨酸促进血管平滑肌细胞增生的实验研究

目的 :　研究同型半胱氨酸 (homocysteine,Hcy)是否促进平滑肌细胞增生。方法 :　SD大鼠主动脉平滑肌细胞体外培养 ,随机分为 5组 :1 .正常对照组 ,2 .1 .0 mmol/L Hcy组 ,3 .2 .5 mmol/L Hcy组 ,4.5 .0 mmol/L Hcy组 ,5 .1 0 .0 mmol/L Hcy组。培养 72 h后 ,采用细胞毒试验、流式细胞仪检测细胞生长情况。 2 0只 SD大鼠进行体内观察 ,随机分为高蛋氨酸组 (M组 )和对照组 (C组 ) ,M组每日给予含蛋氨酸 3 %的饮食 ,在 1 2 w进行主动脉病理学光镜和电镜检查。结果 :　 1 .细胞毒试验观察到 Hcy促进平滑肌细胞生长与增殖 ;2 .流式细胞仪检测可见 Hcy促进平滑肌细胞由 G1期进入合成的 S期 ;3 .在 4w时 ,高蛋氨酸组大鼠即出现高同型半胱氨酸血症 ,高蛋氨酸血症 ;4.病理检查光镜下可见高蛋氨酸组大鼠主动脉有明显中膜增厚 ,平滑肌细胞增生 ;5 .电镜检查可见平滑肌细胞肿胀 ,内质网扩张 ,线粒体水肿 ,溶酶体增多。结论 :　同型半胱氨酸促进大鼠血管平滑肌细胞增生     

妊娠期和哺乳期母鼠高蛋氨酸饮食对子代大鼠的影响

目的:观察妊娠期和哺乳期母鼠在长期高蛋氨酸饮食情况下,对子代大鼠围生期及离乳后子代大鼠心血管的影响。方法:选取SPF级Wistar孕鼠10只,随机分为观察组和对照组,每组各5只。观察组以添加1.8%蛋氨酸的标准AIN-93饲料喂食,直至产后第25天,对照组以普通饲料喂食。记录大鼠分娩的仔鼠数量和体重;子代大鼠出生第25天离乳,次日记录大鼠肢体导联心电图,计算心率后处死,取血、心脏、主动脉,动物血球仪检测血常规,酶联免疫吸附法检测血清同型半胱氨酸(Hcy)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平,HE染色观察心脏、主动脉的病理改变。结果:妊娠期和哺乳期母鼠在长期高蛋氨酸饮食后,孕鼠产仔数量减少,并有分娩低体重鼠的倾向,子代大鼠心电图正常,但红细胞压积、血小板数量、血清Hcy、AngⅡ、VCAM-1水平均明显升高,子代大鼠心脏、主动脉呈现轻度增生、肥厚现象。结论:妊娠期和哺乳期母鼠在长期进食高蛋氨酸后,可导致产仔数量减少,同时子代发生心脑血管意外的风险显著高于正常大鼠。     

高脂饮食对模拟低氧环境SD大鼠主动脉的影响

目的：研究高脂饮食对模拟低氧环境SD大鼠主动脉的影响及其可能机制。方法20只雄性SD大鼠随机分为低氧组和低氧联合高脂饮食组,普通饮食或高脂饮食,4周后留取外周血及主动脉标本,采用TBA比色法检测血浆丙二醛（MDA）含量、WST-1法检测超氧化物歧化酶（SOD）活力、硝酸还原酶法检测硝酸盐/亚硝酸盐（NOx）水平、终点法和直接检测法检测血脂含量,HE染色观察主动脉病理形态改变,Western blot法检测主动脉内皮型一氧化氮合酶（eNOS）蛋白表达水平。结果病理切片显示低氧组大鼠主动脉内皮细胞肿胀,局部内膜脱落,平滑肌细胞增生,低氧联合高脂饮食组主动脉局部内膜大片脱落,平滑肌细胞明显增生,核变圆,胞浆空泡变明显,细胞排列紊乱。低氧联合高脂饮食组与低氧组主动脉蛋白表达水平无明显变化。与低氧组（75.95±12.48）μmol/L,（0.26±0.0）4mmol/L,（1.55±0.10）mmol/L,（178.79±16.85）U/mL,（6.49±0.87）nmol/mL比较,血浆NOX含量（23.19±7.10）μmol/L明显降低,低密度脂蛋白（0.91±0.04）mmol/L与总胆固醇（2.36±0.22）mmol/L水平明显升高;低氧联合高脂饮食组大鼠血浆SOD活力（163.89±8.16）U/mL与MDA含量（4.31±1.10）nmol/mL显著低于低氧组（P〈0.05）。结论低氧环境下,高脂饮食加重了SD大鼠主动脉损伤,其机制可能与抗氧化能力不足及血脂异常引起血浆NOX水平降低有关。     

高同型半胱氨酸血症对大鼠血管内皮功能和抗氧化系统的损伤作用

目的:研究高同型半胱氨酸血症(HHey)致大鼠动脉粥样硬化的作用机制. 方法:20只大鼠平均分为对照组和HHcy组.对照组给予分析化学家协会(AOAC)推荐的配方饲料,HHcy组则给予在AOAC配方基础上添加3%L-蛋氨酸的饲料.用高效液相色谱法测定血清同型半胱氨酸(Hcy)含量,分析血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、内皮素-1(ET-1),丙二醛(MDA)、羟自由基(OH-)、过氧化氢(H2O2)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和乳酸脱氢酶(LDH)等.取人鼠腹主动脉作病理学检查和电镜观察. 结果:HHey组大鼠血清Hcy含量均随时间的延长而显著提高,NO含量显著低于对照组,而ET-1含量显著高于对照组(P<0.01),两组间NOS含量无明显差异.病理学检查显示,对照组主动脉内膜完整,无脂肪颗粒沉着;HHcy组主动脉内膜中有泡沫细胞聚集,有脂肪颗粒沉着.HHcy组MDA和H2O2含量显著高于对照组(P<0.01).OH一含量也明显高于对照组(P<0.05),而T-AOC含量较对照组显著降低(P<0.01).HHcv组SOD和GSH-Px活性较对照组显著降低(P<0.01),LDH较对照组显著提高.两组间CAT无显著差异.结论:Hcy可通过氧化应激机制损伤血管内皮细胞,促进动脉粥样硬化的形成.     

高蛋氨酸饮食对大鼠生长及氨基酸代谢的影响

目的 研究高蛋氨酸饮食对大鼠生长及蛋白质。氨基酸代谢的影响。方法 SD大鼠20只，随机分为高蛋氨酸组（M组）和对照组（C组），M组每日给予含3%蛋氨酸的饲料。定期检测体重，分别在4，8，12周检测血清氨基酸。蛋白质，脂肪含量。结果 与C组相比，M组大鼠体重，血清白蛋白偏低，血清蛋氨酸，同型半胱氨酸。甘油三酯升高，结论 高蛋氨酸饮食抑制大鼠生长，影响血清脂肪，蛋白质和氨基酸含量。     

低分子量肝素抑制球囊损伤后兔血管内膜增生的实验研究

目的:探讨不同剂量、不同给药时间低分子量肝素(LMWH)对兔髂动脉内膜损伤后内膜增生和血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:将96只纯种雌性家兔分为空白对照组6只(A),实验对照组18只(B)、小剂量(60u/Kg)LMWH组36只(C)、大剂量(120u/Kg)LMWH组36只(D).根据不同给药时间,C、D组分别分成三个亚组.三组均经左侧股动脉,近心端插入3FFogarty球囊导管,反复拉动导管制备髂动脉内膜损伤模型.分三批于用药后72h、14d和28d提取髂动脉标本;利用计算机成像系统测量内膜厚度,抗SMCα-ActinABC免疫组织化学方法行5-BrdU单抗标记和verhoff方法联合测定SMC增殖指数.结果:A组内膜厚度平均41.35±7.06μm;未见5-BrdU标记的阳性细胞.B、C、D组内膜厚度均明显高于A组(P＜0.01).C、D组的内膜厚度和SMC增殖指数高于B组,有显著性差异(P＜0.05),并可见5-BrdU标记的阳性细胞.C和D组比较,前者的内膜厚度和SMC增殖指数均小于后者,但两者间无统计学差异,P＞0.05.结论:兔髂动膜球囊导管损伤后,内膜明显增生,平滑肌细胞增殖;LMWH可抑制其血管内膜增生和平滑肌细胞增殖,尤其是小剂量、损伤后早期用药.     

高甲硫氨酸饮食对动脉损伤的实验研究

目的　观察甲硫氨酸诱发高同型半胱氨酸血症对动脉的损伤作用。方法　新西兰白兔 1 8只 ,随机分为甲硫氨酸组 (M组 )和对照组 (C组 )各 9只。 M组每日先喂含 3%甲硫氨酸饲料 2 0 g后 ,再喂予与 C组相同的饲料 ,不限量。1 6wk末处死留血测甲硫氨酸、同型半胱氨酸和其他生化指标 ,同时留主动脉进行病理学检查。结果　两组血浆蛋白、血糖和血脂无显著性差异 (P>0 .0 5)、M组甲硫氨酸和同型半胱氨酸分别为 2 9.97± 5.34μ mol/L和 1 3.30± 2 .1 9μ mol/L,显著高于 C组的 1 9.78± 1 .97μmol/L和 5.36± 1 .1 9μ mol/L(P<0 .0 1 )。光镜检查显示 M组主动脉内膜剥脱、内弹力膜断裂、内膜下胶原纤维增生且暴露、中膜弹力纤维断裂。结论　甲硫氨酸诱发的同型半胱氨酸血症对动脉具有显著的损伤作用     

叶酸对大鼠蛋氨酸诱发高同型半胱氨酸水平的影响

目的探讨叶酸对高同型半胱氨酸(HCY)血症血浆HCY水平及SOD、M DA、血脂的影响。方法采用高蛋氨酸饮食复制高HCY模型,大鼠30只,雄性,平均体重(150±50)g。随机分为三组:正常对照组,不作任何处理;蛋氨酸组与叶酸处理组,共同喂养6周后,心脏取血。分别测定各组血浆HCY、SOD、M DA、血脂的水平。结果蛋氨酸组、叶酸处理组与对照组相比,HCY、M DA含量均显著升高,SOD水平降低,差异有极显著性(P<0.01);叶酸处理组与蛋氨酸组相比,HCY、M DA含量明显下降,SOD水平升高,差异也有显著性(P<0.05)。而TC、TG、HDL在蛋氨酸组、叶酸处理组和对照组间均无显著性差异(P>0.05)。结论高同型半胱氨酸能增强脂质过氧化的作用,叶酸可抵抗高同型半胱氨酸引起的脂质过氧化作用及对其引起血管损伤可能有预防作用。     

高温高湿环境对自发性高血压大鼠胸主动脉血管反应性的影响

目的探讨高温高湿环境对自发性高血压大鼠(SHR)胸主动脉血管反应性的影响,为防控炎热环境下心血管病的发病提供科学依据。方法将7周龄雄性WKY大鼠和SHR各16只随机分为4组,分别为正常血压对照组(WKY对照组)、正常血压热应激组(WKY实验组)、高血压对照组(SHR对照组)、高血压热应激组(SHR实验组),每组8只。对照组饲养室温为24℃,相对湿度为50%;实验组饲养室温为32℃,相对湿度为65%。高温高湿应激时间为8 h/d,持续7 d。实验前后分别测定大鼠体重、血压,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定大鼠血清内皮型一氧化氮合酶(eNOS)含量变化,采用组织器官浴槽测定胸主动脉血管环对去甲肾上腺素(NE)的反应性,采用HE染色观察胸主动脉血管组织形态学变化。结果高温高湿应激后,SHR实验组大鼠收缩压和舒张压均高于WKY实验组,WKY实验组和SHR实验组大鼠胸主动脉血管反应性均高于相应对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。与WKY对照组比较,WKY实验组和SHR对照组大鼠血清eNOS含量降低,差异有统计学意义(P0.05);与SHR对照组比较,SHR实验组大鼠血清eNOS含量略有下降,但差异无统计学意义(P0.05)。形态学观察结果显示,WKY实验组和SHR实验组大鼠的血管内膜细胞均有不同程度损伤。结论高温高湿环境可增加SHR胸主动脉血管对NE诱发的收缩反应,其机制可能与血管内皮细胞损伤等有关。     

多重危险因素致小鼠动脉粥样硬化协同作用

目的 探讨多重危险因素对小鼠动脉粥样硬化发生发展的影响.方法 小鼠随机分为6组:空白对照组(A)、高脂组(B)、普食+CPn组(C)、高脂+CPn组(D)、普食+Cpn+蛋氨酸组(E)、高脂+CPn+蛋氨酸组(F),分别饲以相应饲料或接种CPn;采血检测血脂、取胸主动脉检测超微结构变化.结果 其他各组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血浆动脉硬化指数(AIP)明显高于A组(均P＜0.01),内皮细胞和平滑肌细胞不同程度受损伤;D组TC、LDL-C、ox-LDL明显高于B组(P＜0.05或P＜0.01);F组TC、ox-LDL明显高于B组(P＜0.05或P＜0.01);C组LDL-C明显高于A组(P＜0.05).结论 CPn感染促使正常饮食小鼠血脂代谢紊乱,加重高脂饮食所致的血脂代谢紊乱;高脂、CPn、蛋氨酸可能协同促进动脉粥样硬化发生.     

高蛋氨酸饲料对大鼠氨基酸代谢的影响

目的：研究高蛋氨酸饲料对大鼠生长及体内蛋白质、氨基酸代谢的影响。方法：SD大鼠20只，随机分为两组，即高蛋氨酸组（M组）和对照组（C组）各10只。M组每天给予含3％蛋氨酸的饲料，动态测量体重，分别在0、4、8、12周眼眶取血测血清氨基酸，并在12周处死动物，测肝的游离氨基酸含量。结果：高蛋氨酸在4周时，即出现高同型半胱氨酸血症、高蛋氨酸血症；12周时血清苏氨酸、缬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸含量明显下降，脯氨酸、 精氨酸和丙氨酸血清含量均有显著增高。肝内七种必需氨基酸含量实验组均显著高于对照组，而非必需氨基酸则实验组含量明显低于对照组。同时，实验组大鼠体重增长缓慢。结论：高蛋氨酸饲料能影响血清、肝的游离氨基酸含量，抑制大鼠生长。     

益肾活血胶囊对高同型半胱氨酸血症兔血液ET、NO、NOS的影响

[目的]探讨益肾活血胶囊对高同型半胱氨酸(Hcy)血症兔血液内皮素(ET)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)的影响。[方法]40只新西兰兔,随机平分为正常组、模型组、益肾活血胶囊小剂量组、益肾活血胶囊大剂量组及西药组(叶酸、维生素B6、维生素B12),除正常组外,其他组建立高Hcy血症及动脉粥样硬化(AS)动物模型,然后分别给予相应的药物治疗。高效液相色谱技术检测血浆Hcy浓度,放免法测定血浆ET浓度,硝酸还原酶法测定血清NO含量及总NOS活力。[结果]益肾活血胶囊大剂量组与模型组对照,血浆Hcy为(19.76±1.74)μmol/L、(32.12±5.29)μmol/L,血浆ET为(188.41±4.94)pg/ml、(280.41±17.490)pg/ml,血清NOS为(10.90±0.71)U/ml、(5.32±0.96)U/ml,血清NO为(126.39±15.99)μmol/L、(55.81±4.95)μmol/L)。[结论]益肾活血胶囊可明显降低血浆Hcy水平,抑制Hcy诱导的动脉粥样硬化形成,其机制可能与减轻血管内皮功能损伤有关。     

高胆固醇膳食对兔动脉壁一氧化氮合成的影响

动脉内皮及其一氧化氮（NO）代谢正常与否，对维持正常的血管功能至关重要。高脂高胆固醇膳食对动脉壁内皮一氧化氮（NO）合成的影响尚无定论。本研究在雄性纯种新西兰兔中，观察高脂高胆固醇膳食对动脉内皮壁一氧化氮合成影响。结果表明：高脂高胆固醇膳食8周后，内皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA表达下降、总NOS活力减弱、血浆一氧化氮代谢产物（NOP）水平降低（P＜0．05）；血浆超氧歧化酶（SOD）减低，内皮素（ET）水平上升。结果提示：高脂高胆固醇膳食引起高脂血症，可损害动脉内皮，降低NO合成酶的基因表达，抑制NO的合成。     

慢性轻度高同型半胱氨酸血症对大鼠NO影响

目的观察蛋氨酸强化或叶酸缺乏膳食诱导的慢性高同型半胱氨酸血症(HHcy)大鼠体内一氧化氮(NO)的生成和代谢转化情况,从而探讨同型半胱氨酸(Hcy)致动脉粥样硬化(AS)中NO的可能作用。方法36只SD大鼠,按体重随机分为3组;对照组、高蛋氨酸组和叶酸缺乏组,分别饲以美国营养学会1993年公布的生长期啮齿类动物纯化配方饲料(AIN-93 G饲料)及强化1%L-蛋氨酸或不含叶酸的AIN-93 G饲料。14周后测定血浆总Hcy,血清NO、丙二醛(MDA)等含量,主动脉一氧化氮合酶(NOS)活性及主动脉硝基化酪氨酸(NT)含量。结果高蛋氨酸和叶酸缺乏膳食均可升高血浆Hcy水平,各组的NO含量及NOS活性差异无统计学意义,但2个HHcy实验组的MDA含量和主动脉NT表达量均高于对照组。结论膳食诱导的慢性HHcy大鼠体内NO总量及主动脉NOS活性并没有变化;氧化应激生成过氧化亚硝基阴离子(ONOO-)等反应使NO的生物可用性降低。     

茶多酚影响同型半胱氨酸对内皮细胞的作用

目的:探讨茶多酚能否减弱同型半胱氨酸(HCY)对内皮细胞(EC)的损伤作用。方法:体外培养牛主动脉内皮细胞,随机分为5组,正常对照组,用含20%小牛血清DMEM培养液培养;0.25 mmol/L HCY组,培养液中加入HCY使其终浓度为0.25 mmol/L;1 mg/L茶多酚 +0.25 mmol/L HCY组;2 mg/L茶多酚 +0.25 mmol/L HCY组;4 mg/L茶多酚 +0.25 mmol/L HCY组。培养72h后,用流式细胞仪检测细胞周期,观察细胞生长情况,同时检测培养液中的一氧化氮(NO)、 一氧化氮合酶(NOS)、内皮素(ET)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)浓度或活性。结果:浓度为1、2、4、8 mg/L茶多酚组与HCY组相比,(1)细胞形态规则性增强,立体感增加,细胞内颗粒减少;(2)细胞周期检测提示茶多酚组细胞S期比例增多;(3)功能实验提示,茶多酚组EC释放的血管舒张因子NO浓度较HCY组高;而血管收缩因子ET低;(4)MDA含量和GS H-Px活性无明显改变。结论:茶多酚有抑制HCY对EC的损伤作用。     

同型半胱氨酸对大鼠主动脉内皮细胞生长和功能的影响

Objective To study the possible mechanism of the effects ofhomocysteine on the formation of atherosclerosis (AS). Methods Aortic endothelial cells of SD rat were cultured and treated with a concentrated homocysteine for 24h,the cultured cells and the contents in the medium were studied by MTT colorimetric assay,flow cytometric method (FCM),PGI２,thromboxane A2,(TXA２),nitric oxide (NO),endothelin(ET) in the contents were examined. Results (1)homocysteine had an inhibitory effect on the proliferation of rat aortic endothelial cells;(2)homocysteine prevented rat aortic endothelial cell form G1-phase into S-phase in DNA synthesis;(3)vascular relaxing factor NO,PGI2 content in culture media in homocysteine group was significantly lower than that of control group;(4)vasoconstrictors-TXA2,ET were markedly higher than that of control group;(5)ox-LDL which had a bad effect on endothelial was higher than that of control group. Conclusions In the experimental model study,homocysteine was proved having a definite harmful effect on the aortic endothelial cells and this initial damage might play a very important role in the process of AS formation.     

月见草油对实验性高脂血症脂质过氧化、血浆TXA2、PGI2及ET水平的影响

用含２％月见草油的高脂饲料喂饲实验性高脂血症大鼠４周，分别对血脂、血清脂质过氧化物（ＬＰＯ）、血浆超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、血栓素（ＴＸＡ２）、前列腺素（ＰＧＩ２）及内皮素（ＥＴ）进行了检测，并用扫描电镜对动脉内皮进行了观察。结果发现：月见草油能降低血清总胆固醇（ＴＣ）及甘油三酯（ＴＧ）含量，提高高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）含量；月见草油能显著降低血清ＬＰＯ水平，提高血浆ＳＯＤ活力；月见草油组大鼠血浆ＰＧＩ２水平明显增高，而ＴＸＡ２／ＰＧＩ２比值及血浆ＥＴ水平明显下降；月见草油组大鼠肝脏脂肪蓄积稍轻于高脂对照组；扫描电镜观察亦发现月见草油组大鼠动脉内皮损伤明显轻于高脂对照组。结果提示月见草油具有良好的降脂、保护内皮细胞及预防动脉粥样硬化形成的作用     

桂枝茯苓胶囊对药物流产后大鼠子宫血管系统的影响

目的:观察桂枝茯苓胶囊对药物流产后大鼠子宫血管系统的影响。方法:将早孕大鼠分为对照组(0.9%生理盐水)、药物流产组(米非司酮配伍米索前列醇)、生化汤组(生化汤)、实验组(桂枝茯苓),通过检测和比较药物流产后各组大鼠子宫匀浆中一氧化氮(NO)和内皮素(ET)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性,观察桂枝茯苓胶囊对药物流产的影响。结果:实验组子宫匀浆中ET含量明显高于对照组,NO含量明显低于对照组;ET、NO含量和ET/NO与药物流产组比较无明显差异。实验组子宫匀浆中NOS含量明显低于对照组和药物流产组,均P<0.001。生化汤组ET、NO、ET/NO与药物流产组无明显差异(P>0.05)。结论:桂枝茯苓胶囊可减少药物流产后大鼠子宫匀浆中NOS含量,对NO和ET含量无明显影响。