Effect of CTGF siRNA plasmid on renal interstitial fibrosis in mice with UUO

目的 利用单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾纤维化模型,采用尾静脉注射的方法整体转染CTGF-siRNA质粒抑制肾脏结缔组织生长因子(CTGF)的表达,观察敲低CTGF表达对肾脏间质纤维化的影响.方法 制备UUO模型及活体CTGF基因转染;应用免疫组织化学染色法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;Western blot检测CTGF及α-SMA蛋白的表达;半定量RT-PCR检测α-SMA mRNA的表达.结果 转染CTGF-siRNA质粒的UUO小鼠CTGF及α-SMA的基因表达明显下降(P<0.05).结论 经小鼠尾静脉注射CTGF siRNA质粒能显著抑制小鼠肾CTGF和α-SMA基因表达并能有效抑制小鼠肾脏间质纤维化,提示CTGF siRNA有潜力成为防治肾脏间质纤维化的一种新策略.     

大黄酚对单侧输尿管梗阻模型大鼠肾组织CTGF、α-SMA和FN的影响

目的探讨大黄酚对大鼠单侧输尿管梗阻模型(UUO)肾间质纤维化的影响。方法 27只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、大黄酚组。用单侧输尿管梗阻术建立肾间质纤维化模型,大黄酚治疗14 d后检测血肌酐、尿素氮水平;采用免疫组织化学方法观察肾组织结缔组织生长因子(CTGF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)的表达情况。结果与假手术组相比,模型组血肌酐、尿素氮的水平以及CTGF、α-SMA、FN的表达均显著增高。与模型组相比,大黄酚组血肌酐、尿素氮水平降低,CTGF、α-SMA、FN的阳性表达显著下调。结论大黄酚可能通过抑制UUO大鼠肾组织CTGF、α-SMA、FN的表达,从而缓解肾间质纤维化的发生发展。     

CGRP对UUO小鼠肾组织间质纤维化与炎性因子表达的干预作用

目的 探讨CGRP对小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化的影响.方法 选择雄性小鼠36只,建立小鼠UUO模型,前2 d治疗组和模型组分别每天给予CGRP 1 R.0 nmol·kg-1·d-1和同等量0.9%氯化钠溶液静脉注射.观察模型第14天肾小管损害百分比、肾间质纤维化程度、肾间质α-SMA平滑肌肌动蛋白、肾间质巨噬细胞数,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)以及F4/80 mRNA的表达.结果 CGRP显著减轻肾小管损害和肾间质纤维化(P<0.05);治疗组肾间质巨噬细胞数F4/80和肾间质α-SMA表达显著低于模型组(P<0.05);CGRP显著抑制MCP-1以及F4/80 mRNA的表达(P<0.05).结论 CGRP减少小鼠UUO模型肾间质巨噬细胞浸润、降低MCP-1以及F4/80 mRNA表达、抑制α-SMA的表达,从而减轻肾间质纤维化.     

复方积雪草煎剂对单侧输尿管结扎小鼠肾小管间质骨架蛋白α-SMA、vimentin表达的影响

目的：通过对复方积雪草煎剂对单侧输尿管结扎（unilateral ureteral occlusion，UUO）小鼠模型肾小管间质骨架蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、波形蛋白（vimentin）表达影响的研究，探讨其防治肾间质纤维化的作用和机理。方法：采用小鼠UUO模型，用复方积雪草水煎剂进行灌胃干预，血管紧张素转化酶抑制剂（angiotensin-converting enzyme inhibitor，ACEI）福辛普利作为对照。MASSON染色观察肾组织病理及间质纤维化；肾组织中α-SMA、vimentin表达采用免疫组化和Westem-blotting方法检测；基因表达采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法。结果：UUO模型组和治疗组小鼠肾间质纤维化程度以及α-SMA、vimentin蛋白表达和基因表达水平均较假手术组显著增高，而复方积雪草煎剂、福辛普利治疗组肾间质纤维化和间质骨架蛋白的表达均较模型组显著降低。结论：复方积雪草可显著抑制肾小管上皮细胞或间质细胞的表型转化，提示降低肌成纤维细胞的积聚是其防治肾间质纤维化的重要机制之一。     

活性维生素D3抑制UUO模型大鼠肾间质纤维化作用的研究及其对TGF-β1,α-SMA表达的影响

目的:探讨活性维生素D3对单侧输尿管梗阻模型(UUO)大鼠肾小管间质纤维化的抑制作用,研究该病理过程中转化生长因子β1(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化。方法:36只雄性Wistar大鼠,随机分为三组,活性维生素D3组、假手术组、模型组,每组12只。造模后活性维生素D3组给予罗盖全(骨化三醇)灌胃(3ng/100g),假手术组及UUO模型组给予等量生理盐水灌胃。三组大鼠于给药后第14天,28d分批(n=6)处死,留取造模侧肾脏。用HE染色及Masson染色法观察肾小管间质纤维化程度,用免疫组化法测定TGF-β1,α-SMA在各组大鼠造模侧肾脏的表达情况。结果:免疫组织化学显示:UUO模型组大鼠的肾脏组织中TGF-β1及α-SMA的表达显著高于假手术组(P<0.05),而在活性维生素D3治疗组中,TGF-β1及的α-SMA表达低于UUO模型组(P<0.05),肾脏组织形态学显示:模型组肾间质纤维化程度明显高于假手术组,活性维生素D3组肾间质纤维化程度明显小于模型组(P<0.05)。结论:活性维生素D3能有效抑制UUO大鼠肾间质中TGF-β1及α-SMA的表达,从而减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度。     

转化生长因子β1和α-平滑肌肌动蛋白在肾间质纤维化小鼠肾组织的表达

目的观察转化生长因子β1(TGF-β1)与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化模型中肾组织的表达。方法 36只小鼠平均分为假手术组与模型组,术后3、7、14d处死小鼠,取梗阻侧肾组织行HE、Masson染色、免疫组化与RT-PCR检测。结果与假手术组比,模型组TGF-β1及α-SMA表达呈进行性升高,肾间质纤维化程度明显增高(P<0.O1)。结论 TGF-β1及α-SMA在肾间质纤维化过程中发挥重要作用。     

红景天在肾间质纤维化大鼠模型中的作用及对CTGF、PDGF-B表达的影响

目的:探讨红景天提取物(rhodiola)在肾间质纤维化中的保护作用及其机制。方法:采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型。将大鼠随机分成4组:假手术组、模型组、依那普利组、红景天组。术后第10天处死各组大鼠,经Western蛋白印迹分析方法检测各组结缔组织生长因子(CTGF)、血小板源性生长因子B(PDGF-B)的蛋白表达水平。用免疫组化半定量检测各组肾间质的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,Masson染色评定各组肾小管间质损害程度。结果:模型组CTGF、PDGF-B、α-SMA的表达及肾小管间质损伤指数明显高于假手术组(P<0.01),红景天及依那普利治疗组明显低于模型组(P<0.01)。组间比较,CTGF、PDGF-B差异有极显著性(P<0.01),α-SMA、肾小管间质损伤指数无显著性差异(P>0.05)。各项指标作相关分析,CTGF与PDGF-B,α-SMA的表达及肾小管间质损伤指数为正相关关系。结论:红景天可抑制肾间质纤维化,其作用可能与下调CTGF、PDGF-B的表达有关。     

小鼠内皮型一氧化氮合酶表达的变化与肾间质纤维化的关系

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾组织中的变化及其与肾间质纤维化的关系。方法 48只小鼠随机均分为UUO模型组和假手术组,每组术后第1、3、7、14天分别处死6只小鼠,观察肾组织的病理改变,检测eNOS和结缔组织生长因子(CTGF)表达,计算管周毛细血管(PTC)密度。结果模型组术后第7天部分肾小管萎缩,纤维化形成;术后第14天肾小管间质纤维化更加明显。假手术组eNOS表达较多,CTGF低表达。与假手术组相比,模型组第7、14天eNOS表达减少(P<0.05),CTGF表达增多(P<0.05),第3-14天PTC密度下降(P<0.05)。结论小鼠UUO肾组织eNOS表达下降参与了肾间质纤维化的进展。     

结缔组织生长因子在单侧肾静脉结扎大鼠肾组织中的表达

目的:探讨结缔组织生长因子(CTGF)在单侧肾静脉结扎大鼠肾组织中的表达及与肾小管上皮细胞表型转化的关系.方法:雄性Wistar大鼠50只,随机均分为模型组和对照组,模型组25只行左侧肾静脉结扎术,分别于术后5、10、15、20、25d处死大鼠(每组5只).对照组只分离但不结扎.模型组大鼠取双侧肾脏行HE和Masson染色,观察各时间点肾小管间质的改变;采用免疫组化SABC法检测角蛋白(CK)、CTGF和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肾组织内的表达和分布;应用计算机图像分析系统对各项结果进行半定量分析.结果:随结扎时间的延长,模型组大鼠小管间质纤维化逐渐加重,且CTGF、α-SMA的表达逐渐增加;CTGF与α-SMA的表达呈正相关;二者与胶原蛋白的表达均呈正相关.结论:肾静脉结扎导致CTGF的表达增加,CTGF可能通过促进间质中肌成纤维细胞的形成而参与肾间质纤维化.     

血小板衍生生长因子及其受体在梗阻性肾病大鼠肾间质中的表达

目的 研究血小板衍生生长因子(PDGF-BB)及受体(PDGFR-β)在单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾间质中的表达、分布和意义.方法 用免疫组化方法检测UUO大鼠肾间质中PDGF-BB、PDGFR-β和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达、分布状况和相关性分析.结果 与假手术组相比,模型组肾间质中PDGF-BB、PDGFR-β和α-SMA的表达水平明显提高(P＜0.05).α-SMA与PDGF-BB、PDGFR-β的表达呈正相关(r1=0.92,P＜0.01,r2=0.98,P＜0.01).结论 PDGF-BB、PDGFR-β参与肾间质纤维化发生、发展,抑制PDGF及其受体的产生是防治肾间质纤维化的新途径.     

单侧输尿管结扎幼鼠肾间质纤维化中周细胞转分化趋势及意义

目的本实验旨在通过观察单侧输尿管结扎(UUO)幼鼠模型中周细胞标志物胶原Ⅰ型蛋白(coll1α1)、血小板源性生长因子β(PDGFRβ)、神经生长因子2(NG2)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平的变化,进而探讨周细胞转分化趋势,以及用雷公藤多苷治疗后的干预效果。方法采用UUO模型,将5⁶周龄90只雄性幼年SD大鼠,按随机数表法平均分为3组,即假手术组(行手术分离但不结扎左侧输尿管)、模型组(手术结扎左侧输尿管近肾盂段)和雷公藤多苷干预组。分别在术后1、2、3、7、14 d每组各取6只小鼠处死,留取左肾,采用免疫组织化学法检测周细胞标志物coll1α1、PDGFRβ、NG2、α-SMA在肾间质纤维化过程中的表达水平的变化,同时利用Masson染色观测绿染面积(胶原纤维)的大小变化。结果 UUO模型组中coll1α1、PDGFRβ、NG2、α-SMA的表达水平显著高于假手术组(P<0.01),随着梗阻时间的延长,其表达水平均呈增高的趋势,纤维化程度逐渐加重;UUO模型组中Masson染色蓝染面积随着实验时间的增加而增大;雷公藤多苷干预组各时间点coll1α1、PDGFRβ、NG2、α-SMA的表达水平均低于模型组(P<0.01),纤维化程度较其减轻,但仍高于假手术组(P<0.01)。结论肾间质纤维化过程中,周细胞发生了转分化,治疗组雷公藤多苷可能有一定的抑制周细胞转分化作用,从而延缓纤维化的进程。     

黄芪当归合剂对肾间质纤维化的多靶点抑制作用

目的动态观察复方中药黄芪当归合剂(A&A)对肾间质纤维化大鼠的抗纤维化治疗作用,了解A&A在疾病过程中的起效时间及不同阶段的主要作用环节。方法♂W istar大鼠随机分为对照(Control)、假手术(Sham)、单侧输尿管结扎(UUO)和UUO+A&A治疗组(UAA)。在给药(A&A 12 g.kg-1.d-1)后d 0、3、7、10处死动物,观察肾功能变化,对肾间质细胞浸润、肾小管萎缩和肾间质纤维化情况进行半定量评分。采用免疫组化、ELISA和W estern B lot分别分析肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA),转化生长因子β1(TGF-β1),纤粘连蛋白(FN)表达。结果与假手术组相比,各时间点的UUO大鼠肾功能受损、病理损害进行性加重,肾小管间质中TGF-β1、α-SMA、FN表达均增高(P<0.01)。A&A治疗后d 3,可观察到其明显减轻UUO大鼠的肾间质炎性细胞浸润、肾小管萎缩及肾间质纤维化(P<0.05),同时可使肾组织中的TGF-β1表达减少(P<0.05),但此时并不影响α-SMA和FN表达。治疗后d 7,A&A的上述治疗作用持续存在,同时进一步使UUO大鼠肾间质的α-SMA表达减少(P<0.05)、FN表达下降(P<0.05)。治疗10 d后,UAA组肾小管萎缩和肾间质纤维化程度、TGF-β1、α-SMA、FN的表达仍较UUO组分别减轻18.95%,28.7%,39.6%,26%。结论在UUO模型中,A&A的肾保护作用从病变早期开始,主要表现为减少炎症细胞反应和TGF-β1表达分泌,随后可减少肾脏固有细胞转化、分化及细胞外基质成分沉积,其作用的高峰时间是在造模后d 3~7,并持续存在至d10,特征是通过减轻肾间质纤维化而改善肾功能。     

沙利度胺对单侧输尿管梗阻后大鼠肾间质纤维化的影响

目的研究沙利度胺(Thd)对单侧输尿管梗阻(UUO)后大鼠肾间质纤维化的作用。方法 48只SD大鼠随机均分为四组,每组12只:假手术组(Sham组)、UUO模型组(UUO组)、Thd200mg.kg-1.d-1治疗组(Thd组)和洛丁新10mg.kg-1.d-1治疗组(Lot组)。术后7、14d取血检测肾功能,Masson染色观察肾间质病变,免疫组织化学和RT-PCR检测肾组织缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果与Sham组比较,UUO组血尿素氮和肌酐水平、肾间质纤维化程度以及HIF-1α、α-SMA、ColⅠ蛋白及mRNA表达均明显增加(P<0.01);Thd组上述各观察指标均较UUO组减少(P<0.01);除HIF-1α表达外,Lot组其余指标均较UUO组下降(P<0.01),且与Thd组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Thd可改善肾功能,并可能通过下调HIF-1α表达而抑制肾小管上皮细胞转分化和肾间质细胞外基质积聚,进而发挥肾保护作用。     

丹参注射液对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护

目的探讨丹参注射液对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。方法采用UUO致肾间质纤维化大鼠模型。24只雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组、模型组和丹参组。术后第10天取术侧肾组织做HE,Masson染色及转化生长因子(TGF)β-1,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学检测。结果丹参组显著改善梗阻侧肾组织病理变化,下调TGFβ-1和α-SMA蛋白表达。结论丹参注射液对梗阻性大鼠肾间质纤维化有保护作用。     

阿魏酸钠对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的研究阿魏酸钠（SF）对梗阻性肾病大鼠肾小管间质纤维化的防治作用,探讨其抗纤维化作用的可能机制。方法采用单侧输尿管梗阻（UUO）诱导肾间质纤维化的动物模型,以血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）作为阳性对照,将大鼠随机分为假手术组（SHAM组）、模型组（UUO组）、阿魏酸钠组（SF组）、洛汀新组（ACEI组）。术后第9天处死大鼠,肾组织用Masson染色后进行图像分析以评定各组肾小管间质损害程度,免疫组化半定量法检测各组肾间质的α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、肝细胞生长因子（HGF）的表达。结果在肾小管间质损伤指数、α—SMA及HGF的表达方面,UUO组明显高于SHAM组,SF组、ACEI组均明显低于UUO组,且两治疗组间差异无显著性;肾小管间质损伤指数与肾间质的α—SMA、HGF的表达均呈正相关。HGF的表达在SF组和ACEI组较高,与UUO组比较有显著差异。结论在单侧输尿管梗阻诱导的肾间质纤维化大鼠模型中,SF的防治作用与ACEI相似,可能是通过减少肾间质肌成纤维细胞（MyoF）的数量、上调HGF的表达,进而减少细胞外基质合成,从而减轻肾间质纤维化。     

波形蛋白在肾间质纤维化大鼠肾组织中表达趋势及螺内酯干预的研究

目的探讨幼年大鼠单侧输尿管结扎所致肾间质纤维化模型中,波形蛋白和α-SMA的表达趋势及其与肾间质纤维化的相关性,同时观察螺内酯干预治疗后的效果。方法采用单侧输尿管结扎的方法制备肾间质纤维化大鼠模型(UUO模型),将96只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、螺内酯治疗组。造模成功后分别在7、14、21、28d每组各取8只大鼠处死,左肾组织行Masson染色,动态观察各组肾间质损伤程度,并用免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法检测各组Vimentin和α-SMA的表达水平。结果 随着时间的推移,模型组和治疗组肾间质损伤程度逐渐增强,但治疗组损伤较模型组轻微,二者的差异有统计学意义(P<0.01);在模型组中,波形蛋白和α-SMA的表达水平随肾间质损伤程度的加重而逐渐增强,波形蛋白各时间点之间差异有统计学意义(P<0.01),肾间质纤维化程度与波形蛋白和α-SMA的表达水平呈正相关(r=0.647,P<0.01);模型组中波形蛋白和α-SMA的表达水平高于治疗组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论波形蛋白和α-SMA的异常表达可能参与了肾间质纤维化过程;螺内酯在改善肾间质纤维化的过程中起着一定作用,其机制中可能有波形蛋白和α-SMA的参与。     

VEGF ameliorates tubulointerstitial fibrosis in unilateral ureteral obstruction mice via inhibition of epithelial-mesenchymal transition

Aim:

Vascular endothelial growth factor (VEGF) has been shown to be a survival factor for renal tubular epithelial cells. In the present study, we investigated whether administration of VEGF ameliorates tubulointerstitial fibrosis in a mouse model of unilateral ureteral obstruction (UUO).

Methods:

Thirty-six male CD-1 mice were randomly divided into three groups: sham-operation, UUO and UUO+VEGF group. VEGF (50 μg/kg) was subcutaneously injected twice daily from d 1 to d 14. Mice in each group were killed at d 3, 7, or 14 after the operation, and the tubulointerstitial fibrosis was histopathologically evaluated. Human proximal tubular epithelial cells (HK-2) were used for in vitro study. The expression levels of α-SMA, E-cadherin, TGF-β1, CTGF, and BMP-7 in the kidney were determined using Western blot and RT-PCR.

Results:

In the UUO mice, the degree of interstitial fibrosis was dramatically increased in a time-dependent manner. At d 3, 7, and 14, both the mRNA and protein expression levels for α-SMA, TGF-β1, and CTGF were significantly upregulated, whereas those for E-cadherin and BMP-7 were significantly downregulated. At d 3 and 7, VEGF treatment significantly reduced interstitial fibrosis and the expression levels for α-SMA, TGF-β1, and CTGF, while significantly increased the expression of E-cadherin and BMP-7, as compared with the UUO mice. At d 14 after operation, no significant differences were observed in the expression of the examined markers between VEGF-treated mice and UUO mice, with the exception of CTGF. In HK-2 cells, VEGF blocked TGF-β1-induced α-SMA and vimentin expression and restored E-cadherin expression in a dose-dependent manner.

Conclusion:

VEGF may ameliorate renal tubulointerstitial fibrosis at the early stage in UUO mice. This effect may be related to inhibition of VEGF on renal tubular epithelial-mesenchymal transition (EMT).