骨组织快速脱钙法

在外检、教学、科研工作中,对骨组织进行镜下观察,必须脱去钙盐,才能制成切片进行镜检。一般使用的脱钙剂为强酸(如硝酸、盐酸)、有机酸(如甲酸、三氯醋酸等)或为混合液。但是不管使用何种脱钙剂,都必须保证彻底脱钙,如有钙盐残留,会影响切片的完整和损伤切片刀刃。一般骨组织脱钙法需时间较长,酸液致细胞核结构破坏,因而影响病理诊断,所以改进常规脱钙方法,缩短骨组织     

双向电泳中人血清蛋白样品不同处理方法的比较

目的针对人血清双向电泳流程中样品制备的不同方法,本研究进行了系统的比较和分析。方法采用丙酮沉淀法,三氯醋酸沉淀法,三氯醋酸/丙酮沉淀法,蛋白纯化试剂盒,去白蛋白及免疫球蛋白试剂盒预处理血清样品;双向电泳分离;硝酸银染色;软件分析所得蛋白质斑点。结果对丙酮沉淀法,三氯醋酸沉淀法,三氯醋酸/丙酮沉淀法,蛋白纯化试剂盒处理血清所得到的2 DE图谱统计分析,得到平均蛋白质点数分别为1?802±12,1?648±10,1?727±13,1?670±14;对去除白蛋白及免疫球蛋白血清所得到的双向电泳（2 DE）图谱与丙酮沉淀血清所得到的图谱进行统计,得到平均蛋白质点数分别为1?212±16,1?258±12,并对其中差异蛋白进行了质谱鉴定。结论结果表明不同血清沉淀方法对血清的双向电泳各有优劣;血清去除白蛋白及免疫球蛋白之后,可以提高一些低丰度蛋白的检出,但会导致部分蛋白的丢失。     

临床病理检验常用骨组织脱钙液效果的比较

目的 比较几种骨组织的脱钙溶液与脱钙方法 的效果,获得快捷、简便、适用于临床病理检验的脱钙技术.方法 考察在常温、恒温、搅拌状态下,几种常用的脱钙液对猪干骨中段脱钙、染色效果.结果 40℃恒温搅拌条件下,盐酸一氯化钠脱钙液(脱钙液I)、高浓度盐酸-甲酸-氯化钠脱钙液(脱钙液Ⅳ)、低浓度盐酸-甲酸-氧化钠脱钙液(脱钙液Ⅶ)、Plank-Rycho脱钙液(脱钙液Ⅸ),都具有脱钙时间短、组织损伤小、不影响染色效果.结论 恒温搅拌条件下,脱钙液I是最适合于临床病理检验的脱钙溶液.     

临床病理检验中不同骨组织脱钙液效果的比较

目的 对两种脱钙方法进行比较,获得简单、便捷、快速适用于临床病理制片的脱钙方法. 方法 观察两种脱钙液:5％硝酸脱钙液(硝酸5ml加入95 ml蒸馏水)和快速脱钙液(含36％-38％盐酸8ml、冰醋酸5ml、水杨酸10 g、蒸馏水87ml),在常温及微波条件下对骨组织脱钙及HE切片染色效果的影响. 结果 常温条件下,5％硝酸使组织结构有些破坏,染色效果不佳.微波条件下,使用快速脱钙液对骨组织结构损伤小,染色效果佳,适合于临床病理的骨组织制片. 结论 标本经快速脱钙液处理后,其切片质量大大提高并远远优于普通脱钙液.     

阳春砂种子蛋白质提取方法的探索

【目的】探索适用于阳春砂种子蛋白质的提取方法,为研究阳春砂种子休眠与萌发过程中的差异蛋白质组学奠定基础。【方法】分别采用4种较常用的蛋白质提取方法[Tris-HCl提取法、三氯乙酸（TCA）-丙酮沉淀法、直接裂解法以及改良Tris-饱和酚法]提取,对得到的蛋白质提取液进行定量及十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳分析。【结果】直接裂解法蛋白质提取率最大,小分子蛋白较多; Tris-HCl法提取率最小,且条带扩散; TCA-丙酮沉淀法和改良Tris-饱和酚法提取率居中,但是TCA-丙酮沉淀法条带少,饱和酚法条带多,且可以得到大分子蛋白。【结论】可以综合直接裂解法和改良Tris-饱和酚法,为阳春砂种子双向电泳的蛋白质提取方法提供参考。     

鼻咽癌原发病灶肿瘤细胞核蛋白提取方法的建立和优化

目的鼻咽癌细胞蛋白组分复杂,分离并分析其细胞核蛋白有助于进行肿瘤细胞蛋白质组学研究。文中建立并优化从原发鼻咽癌活检组织标本中提取肿瘤细胞核蛋白的方法。方法采用差速离心结合蔗糖密度梯度离心方法分离和富集鼻咽癌患者活检组织中肿瘤细胞的细胞核,用甲醇/三氯甲烷法和丙酮沉淀法提取核蛋白,用Western blot方法鉴定细胞核蛋白。结果分离细胞核和提取核蛋白至少需要200mg鼻咽癌组织。用差速离心和蔗糖密度梯度离心方法进行细胞核抽提,用甲醇/三氯甲烷和丙酮沉淀法提取的细胞核蛋白具有较高纯度,基本无其他细胞器污染,可用于鼻咽癌原发病灶中细胞核蛋白的提取分离。结论建立了从鼻咽癌原发病灶中提取细胞核蛋白的方法,用于鼻咽癌细胞核蛋白质组学研究。     

EDTA微波脱钙骨的免疫组化染色

目的：改进传统骨组织的脱钙方法，改善免疫组化效果。方法：采用20％EDTA微波脱钙法对兔骨组织进行脱钙。结果：EDTA微波脱钙法能够更好的保持骨组织结构和组织中的抗原物质，得到更好的免疫组化切片。结论：EDTA微波脱钙法优于传统脱钙法，更适合于骨组织脱钙和免疫组化制片。     

不同样品制备方法对双向电泳图谱的影响

【目的】探索体外培养星形胶质细胞双向电泳样品制备方法,提高电泳分辨率和重复性。【方法】分别应用直接裂解法和TCA-丙酮沉淀法制备蛋白样品,比较各提取方法对电泳图谱的影响。【结果】TCA-丙酮沉淀法所制备的蛋白样品,电泳图谱所获蛋白斑点数目较多,斑点较清晰,分辨率较高,重复性较好。【结论】TCA-丙酮沉淀法更适于制备体外培养星形胶质细胞双向电泳蛋白样品。     

TCA/丙酮沉淀对尿液标本中微量蛋白效果分析

目的:探讨研究TCA/丙酮沉淀法在尿液蛋白提取中的效果。方法:采用丙酮沉淀法、ACN/0.1%TFA沉淀法、TCA/丙酮沉淀法三种不同方法沉淀尿液蛋白,并经对双向电泳(2-DE)图谱,对比三种方法对尿液蛋白2-DE结果的影响。结果:尿液样本经20%TCA/丙酮沉淀法沉淀后所得的蛋白点数及蛋白回收率分别为(392±14)%与(69.4±7.8)%,较ACN/0.1%TFA沉淀法与丙酮沉淀法的蛋白点数及蛋白回收率均有显著优势。TCA方法得到的双向电泳图谱背景清晰,蛋白点分辨率高。结论:TCA/丙酮沉淀法作为较为理想的蛋白沉淀提取方法,具有高效、简便的显著优势。     

骨组织电镜脱钙技术在免疫组化中的应用

骨组织的免疫组化一直是病理技术中的一大难题。由于骨组织中60％以上为钙盐组成的羟基磷灰石结晶，因而骨组织固定、脱钙都是制备标本的重要环节。一些强酸如盐酸、硝酸等虽能快速有效除去骨组织中的钙盐，但对其中的抗原蛋白也产生了致命性破坏；近几年发展的微波辅助EDTA脱钙技术，虽然可实现较好地保护组织抗原性且快速的效果，但操作程序复杂。骨组织的电镜制片技术对组织固定与脱钙要求均远高于常规染色与免疫组化，其脱钙液与固定液均与其他方法有较大差别，本实验用该方法进行骨组织免疫组化，取得了较理想的效果，现报道如下。     

半夏总蛋白提取及其动态变化研究

目的 优选出半夏总蛋白提取的最适方法并研究不同生长时期总蛋白量及成分的变化,为半夏药用成分的监控及合理采收提供科学依据。方法 采用丙酮沉淀法、95% (NH₄)₂SO₄盐析法、TCA-丙酮法和Tris-饱和酚法提取半夏总蛋白,筛选半夏总蛋白提取的最佳方法。分别于半夏出芽期、全苗期、珠芽期、佛焰苞期及倒苗期采集样品,分为新鲜组和干燥处理组,提取样品总蛋白,进行SDS-PAGE电泳检测及Bradford浓度测定。结果 丙酮沉淀法、95% (NH₄)₂SO₄盐析法、TCA-丙酮法和Tris-饱和酚法提取的半夏总蛋白量分别为0.369、0.678、1.082、0.493 mg/mL;新鲜半夏5个不同生长时期总蛋白量占块茎的质量分数分别为出芽期4.53 mg/g、全苗期2.28 mg/g、珠芽期2.79 mg/g、佛焰苞期7.61 mg/g、倒苗期10.21 mg/g;干燥半夏5个不同生长时期总蛋白量占块茎的质量分数分别为出芽期31.85 mg/g、全苗期18.52 mg/g、珠芽期42.08 mg/g、佛焰苞期28.56 mg/g、倒苗期56.84 mg/g;新鲜半夏块茎中蛋白含有15条蛋白带,干燥处理半夏块茎中蛋白含有5条蛋白带。结论 TCA-丙酮法是半夏总蛋白提取的最佳方法,不同生长时期的半夏块茎中蛋白成分各异,倒苗期总蛋白量最高。     

TCA-丙酮沉淀法提取聚合草叶蛋白的研究

目的本研究旨在用TCA-丙酮沉淀法对聚合草叶蛋白进行提取,为聚合草叶蛋白的大规模制备奠定基础。方法测定聚合草干叶、鲜叶中的蛋白含量,提取的蛋白经真空冷冻干燥后称重,确定所提蛋白的纯度并计算蛋白提取率。结果以鲜叶为原料时的提取率为51.76%,所得蛋白的纯度为54.2%;以干叶为原料时,蛋白提取率为46.45%,蛋白纯度为48.3%。结论利用TCA-丙酮沉淀法从聚合草鲜叶中提取粗蛋白优于干叶。     

骨及钙化组织脱钙法的比较

目的：探讨骨及钙化组织的脱钙方法。方法采用三种不同方法处理相同的骨及钙化组织,甲组先将骨及钙化组织切成薄片,用甲酸氯化铝脱钙固定液彻底脱钙,流水冲洗,碳酸铝饱和溶液中和酸;乙组先用甲酸氯化铝脱钙固定液处理大块骨及钙化组织至彻底脱钙,再将骨及钙化组织切成薄片,碳酸铝饱和溶液中和酸;丙组按传统方法脱钙。三组组织脱钙后均常规制作HE切片,并行CD68和TTF-1免疫组化检测,比较三种方法的脱钙时间、HE染色和免疫组化检测结果。结果甲组脱钙时间短、切片完整、组织结构清晰、染色对比鲜明、长期保存不易褪色、免疫组化阳性信号正常,各项结果均优于乙组和丙组。结论甲酸氯化铝脱钙固定液处理骨及钙化组织,脱钙时间短,切片质量、染色质量、免疫组化质量好,切片长期保存不易褪色,值得推广。     

马齿苋多糖脱蛋白工艺的研究

目的研究马齿苋多糖的脱蛋白工艺。方法采用Sevage法、三氯乙酸法及盐酸法对马齿苋多糖进行脱蛋白处理。结果Sevage法、三氯乙酸法及盐酸法的多糖损失率分别为12．9％、6．7％、14．6％。结论盐酸法脱蛋白效果明显，但多糖损失率较高，Sevage法的脱蛋白效果次之，三氯乙酸法多糖损失率较低，但脱蛋白效果较差。     

人工骨成骨模型免疫组织化学染色方法的构建

目的以大鼠单纯胫骨骨折后加入骨粉复合物为模型,观察乙二胺四乙酸(EDTA)-2Na脱钙和混合酸脱钙后免疫组织化学检测的效果。方法将骨粉复合物放置于大鼠左侧胫骨的骨块缺损中建立人工骨成骨模型,将模型分为两组(每组标本10例),实验组用EDTA-2Na脱钙,对照组采取混合酸脱钙后分别观察两组的免疫组织化学检测效果。结果EDTA脱钙组骨小梁结构保存完整,阳性表达较多。混合酸脱钙后,骨结构破坏较多,抗原破坏较严重,阳性表达明显减少。结论EDTA脱钙优于传统的脱钙方法,更适合于骨组织脱钙和免疫组织学化制片。     

骨组织病理制片三种脱钙液的比较

目的比较三种文献报道的改良脱钙液的效果,获得简单、便捷、适用于临床病理制片的脱钙液。方法考察在常温及37℃恒温条件下,三种改良脱钙液对骨组织的脱钙及染色效果。结果常温条件下,三种改良脱钙液的脱钙时间为72h左右,组织结构损伤小,改良脱钙液Ⅰ、Ⅲ染色效果佳;37℃恒温条件下,三种改良脱钙液的脱钙时间为8—14h,改良脱钙液Ⅰ镜下组织结构破坏,改良脱钙液Ⅱ组织结构破坏且染色效果不佳,改良脱钙液Ⅲ组织结构损伤小,染色效果佳。结论37℃恒温条件下,改良脱钙液Ⅲ是较适合于临床病理制片的脱钙溶液。     

改良硝酸脱钙方法的研究及应用

目的探讨低温微波-硝酸快速脱钙方法对骨、牙齿及其他钙化组织的脱钙效果。方法实验组采用＂低温微波-硝酸快速脱钙＂方法脱钙,对照组采用室温（20℃）硝酸脱钙液脱钙,硝酸脱钙液的浓度均为10%。应用HE染色,显微镜下观察染色效果。结果低温微波-硝酸快速脱钙方法与室温（20℃）硝酸脱钙液脱钙比较,前者能得到一张高质量的HE切片。结论低温微波-硝酸快速脱钙能在短时间内获得满意的染色效果。     

Establishment of a Simple and Useful Way for Preimplantation Genetic Diagnosis of Chromosomal Diseases

In order to establish a simple and useful way for preimplantation genetic diagnosis (PGD) of chromosomal diseases in general IVF laboratory, the methods that are most commonly used in the embryo biopsy, fixation of blastomere and fluorescence in situ hybridization were compared. The three aspects of PGD were analyzed respectively. There was no significant difference in further de- velopment capacity of embryos between mechanical (79.7%) and chemical biopsy group (78.6%) (P>0.05). In this study, more cells were successfully fixed with the Tween/HCL method (93.8%) than with the methanol/acetic acid method (80.5%, P<0.05). There was no significant difference in cyto- plasm remains between methanol/acetic acid method and Tween/HCL method (P>0.05). The hy- bridization efficiency of fluorescence in situ hybridization was 89.5% in successive denaturation method and 90.9% in codenaturation method with the difference being not significant (P>0.05). In conclusion, the mechanical or chemical method, Tween/HCL fixation method and codenaturation fluorescence in situ hybridization method can constitute a simple and useful way for PGD of chro- mosomal diseases.     

白芨多糖的提取与除蛋白研究

目的考察中药白芨的多糖含量与提取工艺,为其开发利用奠定基础。方法运用水提醇沉法提取白芨粗多糖,三氯乙酸法除去粗多糖中的蛋白。分别运用苯酚-硫酸法和Bradford法测定多糖和蛋白的含量。结果测得白芨粗多糖提取率34.70%,所得提取物多糖含量为67.61%,三氯乙酸法的脱蛋白率为75.86%,多糖损失率为0.015%。结论白芨中含有大量多糖,值得深入研究开发。     

骨水泥强化骨折与非骨折脱钙羊椎骨的生物力学比较

目的通过建立脱钙的羊椎骨模型,比较骨水泥强化骨折与非骨折的脱钙羊椎骨的生物力学,以助于分析骨水泥椎体强化术后临近椎体再发骨折原因及采取预防措施。方法将75个山羊腰椎骨,随机分成3组,A组不脱钙,B组脱钙并骨折椎体强化,C组脱钙非骨折椎体强化,每组25个,记录脱钙前后椎体重量、体积及骨密度,使用力学试验机对B组进行轴向压缩至骨折,记录失效强度、失效位移及刚度,对骨折后B组椎体注射骨水泥强化,C组脱钙后直接骨水泥强化,对两组强化后的椎体进行轴向压缩至骨折,记录失效强度、失效位移及刚度。结果3组椎体的体积、脱钙前的重量、骨密度差异无统计学意义（P>0.05）,B组、C组脱钙前后的骨密度下降比分别达32.6%、31.9%,与脱钙前比较差异有统计学意义（P<0.01）。两组脱钙后重量、骨密度差异无统计学意义（P>0.05）。B组脱钙后的失效强度及刚度分别比A组下降约123%及102.6%,差异有统计学意义（P<0.01）。B组骨折强化后的失效强度及刚度分别是强化前的2.5倍和5倍,是C组失效强度的1.7倍,刚度的4.8倍,C组失效强度比强化前的B组增加48.6%,差异有统计学意义（P<0.01）,刚度稍增加3.3%,但差异无统计学意义（P>0.05）。失效位移无明显差异（P>0.05）。结论利用脱钙方法建立的羊椎骨模型失效强度及刚度均明显下降,在轴向的加载条件下,经骨水泥强化的骨折与非骨折脱钙羊椎骨的失效强度及刚度均有增高,其中骨折椎体增加更加明显。